新型维甲酸衍生物诱导NB4细胞分化的初步研究

目的:本研究探讨10种新型维甲酸衍生物对白血病细胞株NB4的抑制增殖和诱导分化活性。方法:维甲酸类衍生物作用于NB4细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖。瑞氏染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化。NBT还原实验法分析细胞的分化指标。FCM检测分析细胞周期和细胞表面分化抗原变化。结果:维甲酸衍生物作用3 d后,抑制细胞增殖作用呈剂量依赖效应。10种维甲酸衍生物(10-5mol/L)的诱导分化活性表现在油镜下观察NB4细胞向粒系分化成熟的改变,NBT阳性细胞率增加,细胞表面分化抗原CD11b表达量增加,CD13表达则减少。通过对细胞周期的分析,发现G0/G1期细胞表达量增加,呈G1期阻滞。结论:维甲酸衍生物2a-03,4a-02和5a-02显示有较强的诱导NB4细胞分化的活性。     

全反式维甲酸联合丙戊酸钠诱导白血病细胞分化过程中BRD4表达变化及其作用的研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)联合丙戊酸钠(VPA)诱导HL-60细胞分化过程中BRD4表达调控的分子机制。方法建立ATRA联合VPA诱导白血病细胞株HL-60的分化模型,瑞氏-吉姆萨(Wright-Gimesa)染色观察HL-60细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分化抗原的表达,蛋白质印记从蛋白水平检测HL-60细胞经药物诱导24、48、72h后BRD4表达的变化。结果单独应用ATRA或VPA均能够明显抑制白血病细胞生长,诱导细胞分化,倒置显微镜下可观察到HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化,细胞表面的分化抗原表达升高,联合诱导分化模型中细胞表面分化抗原表达升高更明显,两者均有统计学意义,在蛋白水平BRD4的表达逐渐降低,联合诱导分化模型中降低更明显,两者有统计学意义。结论 VPA可以明显的促进ATRA诱导白血病细胞的分化作用,BRD4基因的表达在随着分化程度的加强出现逐渐降低的趋势。     

葛根总黄酮诱导NB4细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨葛根总黄酮(PR)对人早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞株的影响.方法 MTT法检测NB4细胞增殖抑制率;FITC-Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot检测c-Jun氨基端激酶(JNK)、Bcl-2、PARP、半胱天冬酶(Caspase)3蛋白表达的变化.结果 PR呈时间-剂量依赖性抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡;JNK、PARP及Caspase 3的表达与PR浓度呈正相关,而与凋亡抑制蛋白Bcl-2呈负相关.结论 PR可有效诱导NB4细胞凋亡,其作用与JNK信号途径的活化有关.     

柠檬醛抑制NB4细胞生长并诱导凋亡机制的研究

目的研究柠檬醛（Citral）对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株生长抑制和诱导凋亡作用;研究柠檬醛诱导NB4细胞凋亡可能的机制。方法采用台盼蓝拒染法测定细胞活力;采用CCK-8比色法检测柠檬醛对细胞增殖的影响;形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）改变情况。结果 2～20 mg·L^-1柠檬醛具有时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显降低细胞线粒体膜电位。结论柠檬醛诱导NB4细胞内线粒体膜电位崩溃可能是引起细胞凋亡的机制之一。     

Hsp90抑制剂HDN-1诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡的研究

目的：探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人急性粒细胞白血病NB4细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法：采用MTT法检测HDN-1对NB4细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33324染色,Western Blot实验,流式细胞仪检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果：HDN-1能显著抑制NB4细胞的增殖,并呈剂量－时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化且流式细胞仪分析表明NB4细胞凋亡数量明显增加;HDN-1可引起Caspase-3, 8, 9激活,bid减少,线粒体中凋亡蛋白Bcl-2, Mcl-1的表达降低,以及γ-H2AX、Parp剪切带增加。但是NB4细胞中融合蛋白PML-RARα的表达不能被HDN-1所抑制。结论：HDN-1诱导凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导的,PML-RARα不是Hsp90的客户蛋白,其诱导凋亡机制可能是通过抑制Hsp90的其它蛋白表达进行的。     

褪黑素诱导NB4细胞凋亡及机制的研究

目的探讨褪黑素对NB4细胞凋亡的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法将0、10~(-8)、10~(-6)、10~(-4)mol/L褪黑素在体外与NB4细胞共同培养,应用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性,Hoechst荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞技术检测凋亡细胞比例,分光光度计检测上清液中Caspase-3及Caspase-9含量。结果褪黑素能显著抑制NB4细胞增殖,促进细胞凋亡,增加凋亡因子的表达。结论褪黑素促进NB4细胞凋亡的机制可能与增加Caspase-3及Caspase-9表达有关。     

全反式维甲酸对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用。方法选择NCI-H446细胞株MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜下观察形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。RT-PCR法分析维甲酸受体亚型基因。结果全反式维甲酸诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期。结论全反式维甲酸诱导分化能有效抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖,促进凋亡。     

青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡机制的研究

目的:研究青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡的机制。方法:通过细胞形态学、流式细胞仪检测青蒿琥酯对NB4细胞凋亡的影响,采用ELISA法检测半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性。结果:青蒿琥酯可诱导NB4细胞凋亡,并伴有Caspase-3活性增高。结论:青蒿琥酯诱导NB4细胞凋亡可通过激活Caspase-3而实现。     

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的凋亡作用

目的　研究四硫化四砷对NB4细胞的促凋亡作用及这一过程中早幼粒细胞白血病 维甲酸受体α(PML RARα)融合基因及其表达产物的变化。方法通过细胞形态学观察 ,流式细胞仪检测及DNA电泳等方法观察四硫化四砷对NB4细胞的诱导凋亡作用 ,用荧光染色体原位杂交技术 ,反转录PCR及Western印迹技术测定这一过程中PML RARα融合基因及其表达产物的改变。结果　四硫化四砷在 0 .5～ 3μmol·L- 1之间能诱导NB4细胞凋亡 ,在此过程中 ,PML RARα融合基因无明显变化 ,但PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的表达明显减少。结论　四硫化四砷能诱导NB4细胞凋亡 ,其作用靶点可能在PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白。     

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的凋亡作用

目的 研究四硫化四砷对NB4细胞的促凋亡作用及这一过程中早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα) 融合基因及其表达产物的变化。方法 通过细胞形态学观察, 流式细胞仪检测及DNA电泳等方法观察四硫化四砷对NB4细胞的诱导凋亡作用，用荧光染色体原位杂交技术, 反转录PCR及Western印迹技术测定这一过程中PML-RARα融合基因及其表达产物的改变。结果 四硫化四砷在0.5～3 μmol·L^-1之间能诱导NB4细胞凋亡，在此过程中，PML-RARα融合基因无明显变化，但PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的表达明显减少。结论 四硫化四砷能诱导NB4细胞凋亡，其作用靶点可能在PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白。     

小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究

二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抑制肿瘤细胞增殖,调控细胞周期依赖素激酶、信号转导,诱导肿瘤细胞分化、凋亡及影响癌基因与抑癌基因表达的作用。小剂量DADS(1·25mg·L-1)可以抑制JAK1/STAT3信号通路,将HL-60细胞阻滞在G0/G1期,诱导HL-60细胞向粒系分化,其作用与全反式维甲酸(ATRA)相当[1~3]。本实验将探讨小剂量DADS与ATRA联合应用对HL-60细胞的生长抑制及诱导分化效应。1材料和方法参见文献2。2结果2.1DADS与ATRA单独或联合用药对HL-60细胞生长的影响1·25mg·L-1DADS或ATRA对体外培养的HL-60细胞均…     

Sema4D介导的IRS-1信号通路在抑制成骨细胞分化中的作用机制研究

目的 通过siRNA干扰技术沉默轴突导向因子4D (Sema4D)基因,探讨Sema4D基因对成骨细胞分化的影响.方法 采用RT-PCR、细胞免疫荧光法和Western blot测定Sema4D基因表达情况,分析沉默效率;采用ALP染色、VonKossa染色及ALP活性观测成骨细胞分化.结果 siRNA干扰技术下调了Sema4D的表达,成功构建了Sema4D基因沉默体系;Sema4D siRNA中成骨细胞的分化明显增强,出现了一定程度的钙化.结论 沉默Sema4D基因与成骨细胞的分化有关.     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6mol·L-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48 h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer 1.2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制。     

基于TLR4-NF-κB的柴胡黄芩水煎液抑制CCl_4诱导大鼠肝星状细胞激活作用机制研究

目的探讨柴胡黄芩水煎液(CQ)对CCl_4诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活的作用及机制。方法取对数生长的HSC,在无血清培养基中培养24 h后,以1.5×10~9·L~(-1)浓度接种到培养板中过夜。实验分组如下:空白对照组(无药物处理),CCl_4诱导组(6 mmol·L~(-1)CCl_4作用6 h),给药组(6 mmol·L~(-1)CCl_4作用6 h后,再用400、500、600 mg·L~(-1)的CQ作用24 h),TLR4阻断剂TAK-242、NF-κB阻断剂BAY 11-7082组(6 mmol·L~(-1)CCl_4作用6 h后,再用TAK-242 10 mol·L~(-1)、BAY 11-7082 2 mol·L~(-1)作用24h)。处理之后,应用ELISA法检测培养基中透明质酸酶(hyaluronidase,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)浓度,RT-PCR方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)基因的表达,应用Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果研究发现,与CCl_4干预组比较,CQ量效相关性降低CCl_4诱导的HSC增殖。600 mg·L~(-1)的CQ可以明显降低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及TLR4、NF-κB基因、蛋白的表达。NF-κB抑制剂TAK-242、BAY 11-7082也可降低CCl_4造成的HSC增殖,HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白表达,不能下调TLR4基因、蛋白表达。结论 CQ可以抑制CCl_4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,减轻肝纤维化相关指标的含量,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关,提示其在抗肝纤维中的作用及机制。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR)RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体(retinoid X receptors,RXR)RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度;流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。q-RT-PCR和Western blot结果显示,ATPR作用后,RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低,RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。     

白细胞介素-4负调控NF-κB通路抑制炎症反应的机制研究

摘要：目的 探讨白细胞介素（IL）-4 对于脂多糖（LPS）诱导的 Ana-1 细胞髓样分化因子 88（MyD88）/核因子 （NF）-κB信号通路的影响。方法 将小鼠巨噬细胞Ana-1分为LPS组（给予50 μg/L LPS刺激）和LPS+IL-4组（10 μg/L IL-4预培养1 h后,给予LPS 刺激）。在0、0.5、1和2 h时收集细胞培养上清液。采用RT-PCR 检测MyD88和 NF-κB mRNA的相对表达水平;Western blot法检测MyD88、NF-κB总蛋白、NF-κB p65蛋白表达水平;ELISA法检测 NF-κB p65胞核/胞浆比例,以及细胞培养上清液中IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α含量。结果 随着细胞培养时间 的延长,LPS组MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平,NF-κB p65胞核/胞浆比例,IL-6和TNF-α水平均呈逐渐升高 的趋势（P＜0.05）;而 LPS+IL-4 组 MyD88 mRNA 表达水平无明显变化（P＞0.05）,MyD88 蛋白表达水平、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、NF-κB p65胞核/胞浆比例、IL-6和TNF-α水平则均呈先升高后降低的趋势（P＜0.05）;LPS+ IL-4组MyD88 mRNA和蛋白表达水平、NF-κB p65胞核/胞浆比例、IL-6和TNF-α水平在1 h和2 h时显著低于LPS组 （P＜0.05）,而2组不同时间点NF-κB mRNA和蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 IL-4发挥 抗炎作用可能与抑制MyD88/NF-κB信号通路活化有关,IL-4可下调促炎细胞因子IL-6和TNF-α的表达。