人α防御素3前体蛋白对克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌作用

目的：分析α防御素3前体蛋白对于克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌效果，为进一步研究人类α防御素3的杀菌机制提供依据。方法：实验于2005—11／2006—09在上海交通大学生命科学技术学院刘建华实验室完成。将α防御素3前体的编码基因克隆到载体pDEST17中，载体转化入大肠杆菌DE3细胞，通过体外诱导及亲和纯化的方法获得α防御素3前体蛋白。根据在不同蛋白浓度下生存下来大肠杆菌和克雷伯菌所占的比例以及导致50％，90％和99％细菌死亡（LD50，LD90和LD99）时人α防御素3前体蛋白浓度来判断前体蛋白的杀菌作用。结果：①在1L培养基培养条件下，可获得纯化后α防御素3前体蛋白12mg，复性效率为15％-20％。②蛋白浓度为5，10，15和30mg／L时，克雷伯菌存活率分别为50％，33％，10％和4％。蛋白浓度为10，20，30和45mg／L时，大肠杆菌存活率分别为50％，10％，5％和1％。③克雷伯菌50％和99％致死率的蛋白质浓度为5和35mg／L。大肠杆菌50％和99％致死率的蛋白质浓度为10mg／L和45mg／L。结论：重组纯化的人α防御素3前体蛋白具有有效杀灭大肠杆菌和克雷伯菌的作用。     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的:超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性调查,更好的指导临床用药。方法:应用双纸片协同试验法检测38株产ESBLs的肺炎克雷伯菌的体外抗生素耐药性。结果:ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率为10.3％,产ESBLs肺炎克雷伯菌对头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑琳、耐药率高达93％,所有受试菌对亚胺培南均敏感。结论:产ESBLs肺炎克雷伯菌引起的感染,治疗应首选亚胺培南、头孢西汀,其次为β-内酰胺酶抑制剂复合制剂。     

痰热清联合哌拉西林/他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的体外抑制作用

目的观察痰热清注射液及其与哌拉西林/他唑巴坦注射液(又称特治星)联合应用对体外产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的抑菌效果,为耐药菌株的防治提供新方式。方法按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的肉汤稀释法,对产ESBLs肺炎克雷伯菌进行体外抑菌试验,分析痰热清注射液单用及与特治星联合应用(间隔6h)的抑菌效果。结果痰热清注射液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)为750μL/mL;特治星对产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC为28.125μg/mL;加入痰热清作用6h后再加入特治星,当痰热清最终浓度大于450μL/mL时,特治星的用量比单用时至少减少5倍。结论痰热清与特治星间隔6h联合应用具有明显的抑菌效果,能大幅度地减少抗菌药物的用量,这对临床治疗的改善和减少耐药菌株的产生都具有积极意义。     

从肺炎克雷伯菌临床菌株中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β-内酰胺酶基因

目的　研究肺炎克雷伯菌的耐药机制 ,检测肺炎克雷伯菌中AmpC酶的基因。方法　用纸片扩散法药敏试验和三相水解试验 ,从 2 3株耐药的肺炎克雷伯菌临床菌株中初筛产AmpC酶的菌株 ;用PCR扩增耐药基因 ,将试验产物测序 ,并在Genbank中进行比对 ;用转化试验确证耐药基因是否通过质粒传播。结果　发现 3株肺炎克雷伯菌产诱导型质粒介导的DHA 1型AmpCβ 内酰胺酶。 结论　国内首次发现肺炎克雷伯菌出现质粒介导的DHA 1型AmpCβ 内酰胺酶。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌基因型研究

目的：研究医院感染超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型。方法：收集分离鉴定菌株，通过K—B法药敏实验初筛以确认产ESBLs菌株，并对ESBLs基因进行初步分型。结果：17株肺炎克雷伯菌产生的ESBLs以CTX-M-3、CTX-M-15、CTX-M-22为主要基因型，其中8株为CTX—M-3型；6株为CTX-M-22型；1株为CTX-M-15型；1株同时产CTX-M-3、CTX-M-22；1株同时产CTX-M-15、CTX-M-22型。结论：我院肺炎克雷伯菌临床分离株中的ESBLs基因型以CTX-M型酶为主。     

产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型研究

肺炎克雷伯菌是医院和社区感染的重要病原菌 ,产生超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ,对第三代头孢菌素产生耐药性。为了对我院产肺炎克雷伯菌的耐药情况和基因型特征进行调查 ,以便采取有效措施加以控制 ,我们对 1999年 8月～ 2 0 0 1年 12月临床分离的肺炎克雷伯菌 ,进行了耐药性和基因型研究。一、材料和方法1.菌株来源 :试验菌株全部为我院 1999年 8月～ 2 0 0 1年 12月从各类临床感染性标本中分离出来的肺炎克雷伯菌。2 .仪器 :生物梅里埃公司生产的VITEKAMS全自动微生物鉴定及药敏系统 ,美国BIO RAD公司产的基因扩增仪。3 .抗生素敏…     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性

目的 了解超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）肺炎克雷伯菌、大肠埃杀菌的耐药性、药特点,指导用药。方法 对应用双纸片 试验法检测６２株产ＥＳＢＬＳ的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的体外抗生素耐药性作了初步研究。结果 ＥＳＢＬＳ总阳性率为４０．３５,以重症监护病房为最高（７５．０％）。产ＦＳＢＬＳ菌对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松的耐药性高达８２．９￣１００．０％,较不产ＥＳＢＬＳ菌高７７．０％￣９４．０％。对     

肺炎克雷伯菌感染的临床分析

目的 了解该院肺炎克雷伯菌感染现状及耐药性,为临床医师合理用药提供科学依据.方法 采用回顾性调查的方法对216株肺炎克雷伯菌的标本来源及耐药性进行分析.结果 医院肺炎克雷伯菌标本主要来源依次为痰液、尿液、分泌物、血液,主要引起呼吸道感染和泌尿道感染;除亚胺培南外,产ESBLs菌株对常见抗菌剂耐药率明显高于非产ESBLs菌株.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌在医院感染中十分流行,多重耐药明显,医院应重视多重耐药菌监测,临床医师应积极开展病原学检查,合理使用抗菌剂,预防医院感染暴发流行.     

肺炎克雷伯菌对抗生素的耐药性研究

目的研究肺炎克雷伯菌对抗生素的耐药性及产ESBLs细菌感染的危险因素，指导临床合理用药。方法应用WHONET5分析我院2006年1～12月临床分离的281株肺炎克雷伯菌的药敏结果。结果肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素如头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦的耐药率分别为49．8％、49．8％、49．8％、61．0％、61．0％、53．1％和23．3％，亚胺培南和美洛培南未发生耐药；血、痰、尿三类标本间耐药率无明显差异。检出产ESBLs细菌97株，检出率34．5％。结论肺炎克雷伯菌除对亚胺培南和美洛培南未发生耐药外，对其他抗生素均已高度耐药；产ESBLs的肺炎克雷伯菌对多种抗生素耐药率明显高于非产ESBLs株。     

人β防御素2重组蛋白体外抑菌实验及抗肿瘤细胞毒性研究

目的检测重组人β-防御素2蛋白的生物活性,为今后重组人β-防御素2蛋白应用临床提供实验支持。方法将纯化和肠激酶酶切获得的HBD-2,对不同菌株和培养的口腔癌KB细胞进行活力测定,观察基因工程表达纯化获得的HBD-2对不同菌株和口腔癌KB细胞的抑制作用。结果抑菌实验结果表明,HBD-2对不同菌株有不同程度的生长抑制作用,并且抑菌环的大小与剂量有关。HBD-2对人口腔癌KB细胞的生长有明显的抑制作用。结论HBD-2对大肠杆菌BL21、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌均能形成抑菌环,并且抑菌作用与浓度相关。HBD-2对体外培养的口腔癌KB细胞有抑制作用。     

肺炎克雷伯菌对消毒剂抗性的研究

当前,细菌对消毒剂的抗性问题越来越受到关注,国内外对消毒剂抗性也作了大量的研究。该文介绍消毒剂抗性的概念以及消毒剂抗性的产生机制,探讨消毒剂抗性的研究方法,重点回顾对肺炎克雷伯菌的消毒剂抗性方面的研究成果,并进行简要分析,指出目前消毒剂研究领域存在的问题,对今后该领域研究发展的方向给出建议。     

肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析

目的 分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLS基因型，为指导临床合理用药提供依据。方法 用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLS肺炎克雷伯菌的MIC，分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果 83株产ESBLS肺炎克雷伯菌中，产TEM型75株，SHV型41株，CTX-M型25株，OXA型9株。其中，同时产3种酶有13株，占15．7％；同时产2种酶有59株，占71．1％；仅11株产单1种酶，占13．2％。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型，测序结果为CTX-M-3，TEM-1及多种SHV型（SHV-12、SHV-28）。药敏结果表明，同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论 所分离产ESBLS肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型，且同时存在产2～3种酶，应引起临床高度重视。     

肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶类型及耐药监测

目的了解肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的类型,并对其耐药性进行分析。方法采用杭州天和微生物试剂有限公司提供的肠杆菌科细菌生化编码鉴定条和药敏板在杭州天和公司HW-138半自动细菌仪上鉴定,ESBLs确证试验采用药敏纸片法。结果155株实验菌ESBLs检出率51.6%,除亚胺培南,美罗培南、舒普深、阿米卡星外,产酶菌和非产酶菌耐药性有显著差异(P<0.05)。结论本地区产ES-BLs菌流行情况严重,实验室有必要作常规检测,依据药敏结果给药。     

肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶类型及耐药监测

目的 了解肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的类型,并对其耐药性进行分析.方法 采用杭州天和微生物试剂有限公司提供的肠杆菌科细菌生化编码鉴定条和药敏板在杭州天和公司HW-138半自动细菌仪上鉴定,ESBLs确证试验采用药敏纸片法.结果 155株实验菌ESBLs检出率51.6%,除亚胺培南,美罗培南、舒普深、阿米卡星外,产酶菌和非产酶菌耐药性有显著差异(P&lt;0.05).结论 本地区产ES-BLs菌流行情况严重.实验室有必要作常规检测,依据药敏结果给药.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测

目的 选择和适用于检测产超广谱β－内酰安酶（ＥＳＢＬｓ）临床大肠埃希菌、肺炎克雷伯耐药菌株的最佳方案。方法 临床分离的１１０株大肠埃希菌和８４株肺炎克雷伯菌经初筛试验,用浓度梯度法（Ｅｔｅｓｔ）、单纸片加抑制剂舒巴坦扩散法、阿莫西林及氨苄西林双纸片协同试验,比较５种方法的检出率极度其差异。结果 Ｅｔｅｓｔ法对产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出存在明显的差异（Ｐ〈０．０１）,肺炎克雷伯菌的检出率（４／２０）有显低于大肠埃希菌（１６／２６）;单纸片扩散法加克拉维酸对两种菌的检出均较高（１６／２６、１２／２０）。检测产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌时,除氨 苄西林双纸片协同法（８／２６）检出率低以外,其他４种方法的检出率无明显差异（Ｐ〉０．０５）,５种方法有较好的一致性。检测产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌时,单纤片扩散法加克     

黄芩素对肺炎克雷伯菌生长及生物膜形成能力影响的研究

目的研究黄芩素对肺炎克雷伯菌体外生长及生物膜形成能力的影响。方法以临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌为试验菌株,肉汤二倍稀释法检测黄芩素对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（M IC ）。同时检测黄芩素对肺炎克雷伯菌体外生长、生物膜形成能力的影响。结果肉汤二倍稀释法检测黄芩素对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度为60μg/m L ,在30μg/m L浓度下肺炎克雷伯菌的生长速度明显降低,生物膜形成能力减弱。结论黄芩素可通过抑制肺炎克雷伯菌体外生长、生物膜形成而抑制其生长。     

肺炎克雷伯菌耐药基因及菌株聚类分析

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌耐药相关基因存在状况和菌株间的亲缘性。方法细菌鉴定和药敏试验用Phoe-nixTM-100系统检测。PCR扩增β-内酰胺酶、氨基糖苷类药物修饰酶、氯己定-磺胺等22种耐药基因,并用DNA测序证实。结果53株肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感,而对其余9种抗生素的耐药率均高于60%。53株肺炎克雷菌中检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75.5%、22.6%、18.9%、7.5%、11.3%、5.7%、3.8%和41.5%。aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb和ant(3″)-Ⅰ的阳性率分别为90.6%、49.1%和24.5%。而氯己定-磺胺(qacE△1-sul1)基因的阳性率达90.6%。18株肺炎克雷伯菌聚类分析显示有2株菌为同一克隆株,其耐药表型基本一致。结论常州地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶等耐药基因,同一克隆株易传播医院内感染。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶菌株的分布及药敏分析

近年来,细菌耐药性问题正日益成为全球医药界关注的焦点,随着第三代头孢菌素的广泛应用,出现了对这些新一代β-内酰胺类药物用药的细菌,导致细菌对此类药物耐药的主要原因是细菌染色体或质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生。目前,产ESBLs细菌在临床标本中的分离率有上升趋势,且不同地区,不同医院,不同科室的流行情况也存在一定程度的差异犤1犦。为了解我院产ES-BLs菌株的发生率和耐药特性,以控制其传播和流行,我们把近些年来从临床标本中分离的281株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行了ESBLs检测,并对其进行了药敏分析,现报告如下…     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶耐药性分析

超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)主要由肠杆菌科细菌产生，尤以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为代表。为了解我院ESBLs菌的发生率和耐药特点，以为临床合理选择抗生素和有效控制ESBLs的传播和流行，我们对82株肺炎克雷伯菌(K．Pn)做了ESBLs的检测，并分析其对11种抗生素的耐药性，结果如下。     

大肠埃菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的：分析我院大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBLs)的主要基因型。方法：用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌，用Etest检测其最低抑菌浓度（MIC），分别用TEM，SHV和CTX-M通用引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增并对PCR产物进行序列分析。结果：大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感，PCR扩增结果显示TEM，SHV和CTX-M的阳性率分别为68%，39%和83%，序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM-1基因，CTX-M扩增产物均属于CTX-M-3基因，而SHV扩增产物则分别属于SHV-12，SHV-11或SHV-1基因，结论：CTX-M-3和SHV-12是我院产ESBLs菌株的主要基因型；尚未发现TEM起源ESBLs。