薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制

目的：探究薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响,并探讨其相关的细胞凋亡机制。方法：不同质量浓度(0.5、1、2、4、6、8、10、12、14、16 g·L^-1 )薏苡附子败酱散干预结肠癌细胞24、48、72 h,细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测细胞体外增殖的影响;设空白组、卡培他滨组(1.8 g·L^-1 )和薏苡附子败酱散组(6、10、14 g·L^-1 ),分别处理48 h,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,Hochest 33342荧光染色观察细胞凋亡形态,线粒体红色荧光探针(Mito-Tracker Red CMXRos)分析线粒体膜电位(MMP)变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体凋亡途径相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3、活化的(cleaved) Caspase-9、cleaved Caspase-3的表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time...     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。     

芪珍胶囊抗结肠癌的作用机制研究

目的探究芪珍胶囊对人结肠癌细胞HCT116及裸鼠移植瘤模型的作用及机制。方法 HCT116细胞给予芪珍胶囊进行干预,采用MTT法和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况;采用Western blotting法考察芪珍胶囊对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、剪切型Caspase-9(cleaved Caspase-9)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、磷酸化m TOR(p-mTOR)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK、细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellular signal regulated kinase,ERK)、p-ERK、p38和p-p38蛋白表达的影响;采用qRT-PCR法检测芪珍胶囊对程序性死亡分子配体-1(prog...     

基于自噬途径观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞凋亡的影响

目的：观察飞龙掌血醇提物对NSCLCA549细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养A549细胞,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖的情况,并计算A549细胞的存活率,筛选出药物的浓度。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法检测各组及加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组及加入3-MA后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP1)及PARP1、活化的死亡激动剂(t-Bid)及Bid、泛素结合蛋白p62的表达情况。结果：与空白组比较,干预24 h,0.25 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率明显下降(P<0.05),0.5、1、2、4 g·L^-1飞龙掌血醇提物组细胞存活率显著下降(P<0.01);48 h...     

柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^-1柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响；分别设置对照组(0μmol·L^-1)、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L^-1)和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L^-1),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响；采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化；采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响；采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响；采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-...     

紫苏叶水提物对阿霉素致HK-2细胞氧化损伤的保护及机制

目的:探讨阿霉素(ADR)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物(PFAE)对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响。方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同浓度PFAE(5,15,45 g·L~(-1))干预后,采用细胞增殖/毒性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,结合光镜下细胞形态变化,筛选出PFAE保护细胞的最佳浓度。后续实验分为6组:空白组,ADR(0.05 g·L~(-1))组,PFAE(15 g·L~(-1))组,ADR+PFAE(0.05+15)g·L~(-1)组,NAC(0.81 g·L~(-1))组,ADR+NAC(0.05+81)g·L~(-1)组。检测细胞匀浆中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和细胞总抗氧化能力,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞线粒体凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3(Caspase-9,Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)包括其剪切体的表达,及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK),c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白的表达。结果:与空白组比较,ADR组的细胞活性显著降低(P0.01),与ADR组比较,5,15 g·L~(-1)的PFAE和NAC能促进细胞的增殖(P0.01)。与空白组比较,ADR组抗氧化能力和SOD水平显著降低(P0.01),MDA和ROS的水平显著增高(P0.01),与ADR组比较,ADR+PFAE组和ADR+NAC组抗氧化能力和SOD水平显著升高(P0.01),MDA和ROS的水平显著下降(P0.01)。与空白组比较,ADR组细胞凋亡率上升(P0.01),凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleaved PARP/PARP水平显著上升(P0.01),MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表达明显增高(P0.05,P0.01);与ADR组比较,PFAE或NAC干预后减轻了细胞凋亡率,降低了凋亡蛋白的相对比值,并且抑制了MAPK信号通路中p38 MAPK,ERK蛋白的磷酸化(P0.01),但对磷酸化的JNK蛋白表达无影响。结论:PFAE可以减轻ADR诱导的HK-2细胞氧化损伤,并发挥抗氧化作用,通过线粒体凋亡途径和ERK/p38 MAPK信号通路来抑制细胞凋亡。     

蛇床子素通过PI3K-AKT信号通路诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的观察蛇床子素对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和凋亡的影响并探讨其相关机制。方法采用CCK-8法检测HaCaT细胞增殖情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测HaCaT细胞周期变化及细胞凋亡水平;采用Western blotting检测蛇床子素对Ha CaT细胞磷酸肌醇3激酶(PI3K),人磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K),蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl相关X蛋白(Bax),Cleaved-caspase3表达的影响。结果在所选质量浓度范围内(20、40、60μg/mL),蛇床子素对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用且能显著促进HaCaT细胞的凋亡;其中,20、40、60μg/mL质量浓度组蛇床子素可明显抑制PI3K和AKT的磷酸化,但对PI3K和AKT的表达无明显影响;蛇床子素能促进促凋亡蛋白Bax,Cleaved-caspase3的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论蛇床子素能抑制HaCaT细胞增殖,促进细胞凋亡,可能与其能抑制PI3K和AKT的磷酸化,阻断PI3K-AKT通路,激活下游相关促凋亡蛋白有关。     

骆驼刺中的紫铆素诱导SiHa 细胞凋亡及其作用机制研究

目的分析骆驼刺中分离富集的紫铆素对人宫颈癌SiHa 细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法以CCK-8 法检测紫铆素对SiHa 细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测紫铆素对细胞凋亡水平和细胞周期影响,RT-PCR 法检测紫铆素对细胞凋亡相关基因表达的影响,Western Blot 法检测凋亡相关蛋白的表达。结果与空白对照 组比较,紫铆素可明显诱导SiHa 细胞发生凋亡（P＜0.01）,紫铆素干预SiHa 细胞可使克隆形成数量明显减 少（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05,P＜0.01）,线粒体膜电位明显下降（P＜0.01）,G0/G1 期细胞所 占的百分比增加（P＜0.01）,胱天蛋白酶3（Caspase-3）和胱天蛋白酶7（Caspase-7）的基因和蛋白表达增加（P＜ 0.05,P＜0.01）,同时Caspase-3 的底物PARP 蛋白被剪切活化（P＜0.05）,亦明显降低Bcl-2 的基因和蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）。结论紫铆素对SiHa 细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用可能与促进细胞凋亡 有关。     

黄芩素通过激活Caspases和Bcl-2家族蛋白诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡

目的研究黄芩素对卵巢癌HO-8910细胞凋亡的调控作用及其可能的作用机制。方法选取人卵巢癌细胞系HO-8910细胞,经黄芩素不同浓度及不同时间处理后,分别采用噻唑蓝(MTT)法测定对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;采用Westernblotting法检测Bcl-2家族蛋白表达情况。结果黄芩素对HO-8910细胞有明显的增殖抑制作用,呈浓度-时间依赖性。与对照组比较,黄芩素组细胞凋亡率明显升高(P0.05、0.01)。黄芩素上调Bax/Bcl-2值,上调cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9的蛋白表达量,呈浓度依赖性。结论黄芩素通过激活Caspase和Bcl-2家族蛋白对卵巢癌HO-8910细胞发挥抗增殖及诱导凋亡活性。     

从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。     

病证关系及病证的重合与分离

论述了病证关系,分析了“病”与“证”的内涵,认为疾病是决定证候的内在稳定的因素,而证候是疾病的外在综合表现。辨证论治以证候处方用药,会产生病证重合与分离两种情况,病证重合时疗效就肯定,而病证分离时则疗效就会远离预期目标,这就是辨证论治疗效重复性差的客观原因。为了提高病证的重合,避免病证的分离,应该重视方药与疾病的联系,不能只讲“方”与“证”的联系。笔者认为,方药对疾病的疗效是根本的,而方药对证候的疗效是附属的,疾病与疾病证候具有不同的治疗意义。     

神阙穴与气、脏腑经络关系及现代医学认识和穴位贴敷初探

探析神阙穴与气及脏腑经络关系及现代医学对脐中的认识,介绍临床运用。     

黄芩素与黄芩苷微生物和肝脏代谢异同研究

目的研究黄芩素和黄芩苷微生物和肝脏代谢异同。方法采用大鼠肠道菌和肝匀浆体外代谢模型,利用HPLC-Q-TOF-MS-MS技术,在正离子模式下通过分析化合物的质谱裂解规律来鉴定黄芩苷和黄芩素的代谢产物。结果在体外孵育液中共鉴定出18个黄芩素和黄芩苷的代谢物,其中4个未曾报道。在体外肝匀浆孵育液中,黄芩素的代谢途径为脱水、羟基化、脱羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、甲基化,黄芩苷的代谢途径为羟基化、脱羟基化、甲基化、脱葡萄糖醛酸化,共有的代谢物有12个,4个只存在于黄芩苷肝匀浆孵育液中,1个只存在于黄芩素肝匀浆孵育液中。在肠道菌孵育液中,黄芩苷首先发生脱糖反应生成黄芩素,然后会继续发生羟基化、脱羟基化、甲基化的代谢反应。同时,黄芩苷、黄芩素在肝脏中可以发生相互转化,但在肠道菌中黄芩苷仅能单向转化为黄芩素,黄芩素却无法转化为黄芩苷。结论本研究明确了黄芩苷和黄芩素代谢物的生成位点,可为阐释两者体内代谢行为提供科学依据。     

过度炎症反应与微观证治学

用中医药治疗全身炎症反应综合征,控制过度炎症反应.微观证治学.脏腑、神经、激素、免疫和代谢调节病机链.分析过度炎症反应.从过度炎症反应分始动、放大和损伤3个阶段,提供了证治方药.创新了全身炎症反应综合征、微观证治学的理法方药.     

非典时期的科学防治与心身调节

论述了非典发病与传播的特点。阐述遵循科学控制疫情、总结经验中西合治、心身调节防病健身在论治非典的系统性。从科学严谨的手段、积极努力的态度、正确的应对措施、适宜的心身调节等方面，说明防治的整体优势。     

食药同源健脾开胃物质及其成方制剂研究与应用进展

传统中医认为“百病皆由脾胃衰而生”,现代社会因饮食不节、嗜烟好酒、作息无序及工作和生活压力等诸多因素,造成“脾失健运”。中医药学研究结果显示,健脾开胃的食品疗法因其耐受性及依从性好,被中医医家及患者广泛接受。通过对健脾开胃中药成方制剂、食药同源中药材及饮片和国内外食药同源政策进行综述,以促进食药物质在普通食品领域的开发,为健脾开胃类保健食品、特医食品等的研发提供理论依据。     

眩晕病因及辨证分型探微

眩晕的主要病理不外虚实两端,虚者髓海不足或气血亏虚,清窍失养;实者为风、火、痰、瘀扰清空。分肝阳上亢、气血亏虚、肾精不足、痰湿中阻、瘀血阻窍五型。     

糖尿病的病因病机与护理

糖尿病的形成与素体阴虚,五脏虚弱,饮食不节,形体肥胖,精神刺激,情志失调,外感六淫,毒邪侵害,滥用丹药,化燥伤津,房劳纵欲,肾精亏耗等诸多因素有关,因此,首先要进行有效的糖尿病社会宣传与教育,防治于未然,即病之后的临床护理与药物治疗同等重要,包括生活调理,饮食调理,精神调理。