白藜芦醇对人食道癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇对人食管癌EC9706细胞生长及凋亡影响。方法:分为正常组、溶剂组(加了DM-SO)、白藜芦醇组(分为0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 mmol/L不同浓度),应用MTT比色法检测白藜芦醇对EC9706细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;电子显微镜观察细胞凋亡。结果:MTT实验观察,白藜芦醇对EC9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高,时间延长作用增强,呈剂量-时间效应关系。白藜芦醇(3.2 mmol/L)作用EC9706细胞72 h抑制率达86.73%,凋亡率达47.53%。作用24,48,72 h后,半数细胞毒性作用所需浓度(CC50)及最大无毒浓度分别为3.15,3.01,1.14 mol/L及0.32,0.08,0.09 mmol/L。从低到高浓度(0.2-3.2 mmol/L)白藜芦醇使S期细胞比例逐渐下降,G0/G1细胞的比例逐渐增加。电子显微镜观察:白藜芦醇作用的EC9706食管癌细胞,呈明显的凋亡特征。结论:白藜芦醇可抑制人食管癌细胞EC9706增殖并可诱导细胞发生凋亡。使食管癌EC9706细胞周期呈G0/G1阻滞。白藜芦醇可能为食管癌提供一种新的治疗手段。     

人脐带间充质干细胞裂解液在体外对食管癌EC9706细胞增殖与迁移的抑制作用

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)裂解液在体外对食管癌EC9706细胞增殖、迁移的抑制作用。方法用组织块培养法体外培养hUCMSCs,流式细胞仪检测细胞表型;收集hUCMSCs,并用反复冻融法制备hUCMSCs裂解液;不同浓度hUCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞一定时间,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖状况,倒置显微镜观察细胞形态。通过Tranwell迁移实验观察hUCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞迁移能力的影响。结果人脐带组织块培养7¹2 d后可见贴壁的成纤维样细胞,流式细胞仪分析显示第5代细胞均表达CD29、CD90和CD166,不表达CD34、CD45和人类白细胞抗原-DR。MTT法显示加入hUCMSCs数等于或大于食管癌细胞数的裂解液时,与对照组比较明显抑制食管癌细胞的生长(P<0.05),且实验组各组抑制食管癌细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。Tranwell迁移实验显示,实验组EC9706细胞的迁移较对照组明显受到抑制(P<0.05)。结论 hUCMSCs裂解液对食管癌细胞EC9706的增殖和迁移均有抑制作用。     

鞣酸对人食管癌细胞系EC9706的抑制作用

目的 探讨鞣酸对体外培养的人食管癌细胞EC9706的生长抑制作用。方法 不同浓度鞣酸（100、200、300、400、500μmol／L）作用EC9706细胞24、48、72、96h后，通过MTT比色法研究鞣酸对EC9706细胞增殖的影响，采用流式细胞仪观察400μmol／L鞣酸能否诱导EC9706细胞凋亡。^3HTdR、^3HLeucine掺入法研究400μmol／L鞣酸对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 鞣酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖；流式细胞术检测显示出典型的凋亡峰，细胞凋亡率为46．8％；^3H—TdR、^3H—Leucine掺入量明显减少。结论 鞣酸可以抑制食管癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能是预防和治疗食管癌的一种新型化合物。     

硒蛋氨酸对食管癌细胞株环氧合酶-2表达影响

目的:探讨硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:采用MTT比色法、细胞生长曲线描绘观察硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706增殖的影响,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA ladder,细胞免疫化学方法检测EC9706COX-2的表达。结果:硒蛋氨酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖,抑制食管癌细胞系EC9706COX-2的表达,诱导细胞凋亡。结论:硒蛋氨酸可能通过抑制食管癌细胞系EC9706COX-2的表达从而抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

血瘀证食管鳞癌患者血清对EC9706细胞增殖和细胞周期的影响

【目的】观察血瘀证食管鳞癌患者血清对食管鳞癌EC9706细胞增殖和细胞周期的影响,探讨血瘀证食管鳞癌患者血液微环境对食管癌细胞的作用。【方法】将EC9706细胞以含胎牛血清(FCS)的RPMI-1640培养液置于37℃、体积分数5%饱和湿度的CO2培养箱中孵育24 h,再以不含血清的培养液孵育24 h后,分别加入血瘀证、脾气虚证食管鳞癌患者血清和健康人血清,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,光镜下观察细胞形态变化,流式细胞术观察细胞周期变化。【结果】血瘀证、脾气虚证食管鳞癌患者血清刺激细胞增殖率为50%时的浓度(PI50)分别为71.1μL/m L和118μL/m L;2组人血清刺激细胞增殖的峰值均出现在时间点48 h。光镜观察结果显示,血瘀证组、脾气虚证组血清刺激细胞呈长梭形或多角形改变,血瘀证组细胞数目较脾虚证组增多。细胞周期结果显示,与脾气虚组比较,血瘀证组患者血清刺激的G1增殖期细胞百分率明显减少,S增殖期细胞百分率明显增高(均P<0.05)。【结论】血瘀证食管鳞癌患者血清微环境较脾气虚证食管鳞癌患者更有利于食管癌细胞的增殖,其作用机制可能与调节细胞周期有关。     

PTPN14对食管癌的抑制作用及其机制研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶14（PTPN14）对食管癌的抑癌作用及其机制。方法通过转染PTPN14质粒过表达食管癌细胞EC9706 中PTPN14 的表达,实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测其过表达效果;四甲基偶氮唑盐比色法检测过表达PTPN14对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞术检测过表达PTPN14对EC9706 细胞周期的影响;Western blot检测过表达PTPN14 对YAP 蛋白表达的影响。结果转染PTPN14质粒可上调食管癌细胞系EC9706 中PTPN14 的表达;过表达EC9706 细胞中PTPN14 可以抑制食管癌细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G1期;过表达EC9706 中PTPN14 可以下调细胞中YAP的表达水平。结论PTPN14可通过下调YAP,阻滞食管癌细胞周期,抑制细胞增殖。     

牛膝多糖联合5-氟尿嘧啶对食管癌的作用及相关机制的探讨

目的:探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)及其联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对食管癌EC9706细胞的作用及可能机制.方法:通过MTT法检测ABPS(3个浓度100、200、300μg/ml)及联合5-Fu对食管癌细胞的增殖的作用;用流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率,Westem blot检测ABPS对食管癌细胞周期相关基因p21和p27表达的影响;免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达.结果:(1)ABPS可以抑制食管癌EC9706细胞的增殖;ABPS与5-Fu联合应用对食管癌细胞的增殖抑制作用强于两者单用;(2)ABPS作用后的EC9706出现了G0/G1期的阻滞和早期凋亡;其机制可能分别涉及p21和p27基因表达的增加以及bax基因表达的增加和bcl-2基因表达的减少.结论:ABPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用;ABPS与5-Fu联合使用具有协同抗肿瘤作用.     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

沉默USP39对食管癌细胞增殖的影响

目的 探索食管癌细胞EC9706及人正常食管上皮细胞HEEC中USP39分子的表达差异及沉默USP39对食管癌细胞EC9706增殖的影响。方法 利用qRT-PCR及Western blot法检测细胞中USP39表达情况;设计并合成USP39的siRNA （USP39-siRNA）及对照（USP39-NC）转染食管癌EC9706细胞,利用qRT-PCR、Western blot法检测EC9706细胞中USP39的表达变化;MTT、平板克隆实验检测EC9706细胞的增殖。结果 USP39在EC9706细胞中的表达高于人正常食管上皮细胞HEEC的表达,USP39-siRNA下调了EC9706细胞中USP39基因水平与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖能力。结论 USP39-siRNA能够下调USP39的表达,并有效抑制食管癌EC9706细胞的增殖,为以USP39为靶点的食管癌基因治疗奠定基础。     

环巴胺对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 研究环巴胺(cyelopamine)对入食管癌EC9706细胞生长抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 培养EC9706细胞,加入不同浓度环巴胺,作用不同时间,MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪、AO/EB双荧光染色观察药物作用于细胞后的细胞凋亡情况;Western blot观察不同浓度的药物作用于细胞后对Gli-1蛋白表达的影响.结果 MTT法显示,与空白对照组和DMSO对照组相比,环巴胺对EC9706细胞有明显的生长抑制作用,且环巴胺对EC9706细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;AO/EB双荧光染色显示,细胞体积缩小,皱缩变圆,边缘毛糙,形成不规则突起,细胞核凝集、固缩;环巴胺通过促进细胞凋亡而达到对细胞的生长抑制作用,其调亡率明显高于空白对照组及DMSO组,且呈剂量依赖性.Western blot显示,环巴胺可能是通过影响Gli-1蛋白的表达来调控细胞的生长.其表达率低于空白对照组及DMSO组,呈剂量依赖性.结论 环巴胺对人食管癌细胞系EC9706的生长有明显抑制作用,提示食管鳞状细胞癌的发生和发展与Hedgehog信号转导通路的异常激活有关,且Gli-1对肿瘤的发生发展起重要作用,这对食管癌的诊断、治疗以及新药开发提供新的思路.     

RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长抑制作用的研究

目的观察RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长的抑制。方法将包含RASSF1A基因的质粒转染RASSF1A表达缺失的EC9706细胞,建立稳定转染细胞系,通过MTT法检测细胞活性和增殖能力、流式细胞仪检测其对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果稳定表达RASSF1A的EC9706细胞较对照组细胞的RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度减慢（P〈0．01）;细胞周期中G1期比例增加,S期比例减少（G1期：RASSF1A组细胞：68．53％±3．34％;空质粒组：54．25％±4．61％;未转染组：53．41％±5．60％。S期：RASSF1A组细胞：（23．19±5．04）％;空质粒组：（31．81±2．05）％;未转染组：32．09％±1．99％）（P〈0．01）;同时裸鼠致瘤能力也被抑制（P〈0．05）。结论RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,提示该基因在食管癌的发生发展中发挥重要作用。     

佛波酯对食管癌EC9706细胞NDRG_1表达及细胞增殖影响的研究

目的:探讨12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)作用于食管癌细胞EC9706后,对NDRG1mRNA表达、细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用50nmol/L的TPA作用于EC9706细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化,原位杂交法检测NDRG1mRNA水平。结果:TPA能上调NDRG1mRNA水平,抑制EC9706细胞增殖,细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:TPA可能通过上调NDRG1mRNA的表达而抑制EC9706增殖,促进其分化。     

DMSO对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响

目的　研究二甲基亚砜 (DMSO)对EC970 6细胞端粒酶活性及生长的影响。方法　用 1.3 %DMSO处理食管癌EC970 6细胞 ,TRAP -ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变 ,流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果　DMSO处理后的EC970 6细胞 ,端粒酶活性明显下降 ,且细胞周期明显改变 ,G1期细胞比率显著增高 ,S期细胞数显著降低。结论　DMSO可抑制EC970 6细胞端粒酶活性 ,使EC970 6细胞生长停滞于G1期 ,并诱导细胞凋亡。提示DMSO可用于食管癌的治疗     

奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响

目的 研究奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响。方法 将不同浓度的奥曲肽加入食管癌细胞．用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应。^3H-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入实验测定对DNA合成的影响,显微镜下观察细胞形态变化，流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果 奥曲肽对Eca9706细胞的生长及DNA合成均有抑制作用。显微镜下可见明显的细胞病变，细胞变圆、变小、脱落，FCM显示奥曲肽作用后，G0／G1期细胞增多，S期、G2／M期细胞减少。结论 奥曲肽能明显抑制食管癌细胞株Eca9706的DNA合成，并能形成G0／G1期阻滞，使细胞存活率下降，表明奥曲肽显著抑制Eca9706的增殖。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用

目的:探讨NS-398对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用。方法:采用3H-TdR掺入法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)和作用24、48、72、96h的NS-398对细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞术(FCM)及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况。结果:EC9706经不同浓度的NS-398处理后,实验组3H-TdR掺入量明显减少,具有时间和剂量依赖关系,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.001)。FCM检测发现实验组在G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞凋亡率达(45.23±1.08)%,并出现典型的细胞凋亡梯带;而对照组无凋亡峰出现,细胞凋亡率为(2.14±0.28)%,两组比较有显著性差异(P<0.001)。结论:NS398对食管癌细胞株EC9706细胞具有增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。     

叶黄素对人食管鳞癌细胞诱导分化效应与机制探讨

目的 探讨叶黄素对食管癌EC9706 细胞诱导分化的影响及其机制.方法 食管癌EC9706细胞采用开放式单层贴壁培养.实验设溶剂对照及叶黄素3个剂量组,采用MTT法及流式细胞术,对EC9706 细胞的增殖和细胞周期进行分析,HE染色对细胞的形态学进行观察,酸解DNA甲绿-派洛宁技术了解增殖与分化型细胞比例,免疫组化检测cyclin D1的表达.结果 与溶剂对照组比较,叶黄素(100 μg/mL和150 μg/mL)可明显抑制EC9706 细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期, 降低细胞增殖指数,细胞形态趋向良性分化,cyclin D1 表达水平降低.结论 叶黄素可通过抑制cyclin D1 表达而介导食管癌EC9706细胞增殖抑制和诱导成熟分化.     

上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用

目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1(+)载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长(25～28 h)、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降(34.5%±6.9%),细胞分裂阻滞于G2/M期(21.7%±3.4%),裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.