整合子及其相关基因盒在临床产ESBLs肺炎克雷伯菌的分布

目的检测Ⅰ~Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用K-B纸片扩散法对108株产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)分析108株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的Ⅰ~Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果108株菌中有58株(53.70%)含有Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类整合子及Ⅲ类整合子阳性菌;在Ⅰ类整合子阳性菌中,有52株携带Ⅰ类整合子相关基因盒,占89.66%;分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌中整合子及相关基因盒的分布

目的 了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌多药耐药的关系.方法 采用革兰阴性杆菌药敏卡检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因(intⅠ1、intⅡ2、intⅢ3)及Ⅰ类整合子可变医基因盒,并分析可变区上游启动子的类型.结果 74株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中有67株检测到Ⅰ类整合酶基因,检出率为90.5％,2株检测到Ⅱ类整合酶基因,检出率为2.7％,未检测到Ⅲ类整合酶基因阳性菌株;55株(74.3％)成功扩增出Ⅰ类整合子可变区,主要携带甲氧苄啶及早期使用的氨基糖苷类抗菌药物耐药基因,可变区启动子大多为弱启动子;携带Ⅰ类整合子菌株对常用抗菌药物的耐药率与Ⅰ类整合子阴性菌株之间的差异无统计学意义.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中分布广泛.所携带的整合子具有非常强的从周围环境中捕获耐药性基因盒的能力.     

肺炎克雷伯菌整合子携带情况及与毒力基因和耐药性的关系

目的分析安徽医科大学第一附属医院临床分离肺炎克雷伯菌的耐药性,毒力基因、整合子携带情况,并重点比较分析整合子阳性和阴性菌株之间耐药性和毒力基因的差异性,探讨整合子在菌株耐药性以及整合毒力基因中的作用。方法收集临床分离保存的肺炎克雷伯菌72株,运用纸片扩散法和Vitek-2 compact仪器进行药物敏感性试验,聚合酶链式反应(PCR)技术扩增整合子基因(IntI1、IntI2、IntI3)、毒力基因(rmpA、aerobactin、alls、kfu、wcaG、magA、fimH、mrkD)。同时分析整合子阳性肺炎克雷伯菌和整合子阴性肺炎克雷伯菌之间毒力基因和耐药性的差异性。结果药敏试验结果表明72株肺炎克雷伯菌除对米诺还素、多黏菌素B、替加环素具有较高的敏感性外,对头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药率均30%,PCR技术检出整合子IntI1型共40株,未检出IntI2、IntI3型。毒力基因aerobactin、rmpA、wcaG、alls、kfu、fimH、mrkD、magA检出率分别为25.00%、44.44%、23.61%、19.44%、40.28%、98.61%、98.61%、12.50%。整合子阳性菌株和阴性菌株相比,对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物具有较高的耐药性,且差异有统计学意义(P0.05)。但是整合子阳性菌株和整合子阴性菌株毒力基因携带情况相比,除aerobactin及kfu基因具有统计学差异外,其他六种毒力基因在两者之间无统计学意义。结论医院肺炎克雷伯菌以携带整合子IntI1型为主,整合子阳性菌株对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药性更高,但对毒力基因的携带情况无差异。     

整合子的临床分布及其与细菌耐药表型相关性分析

目的了解整合子阳性菌株在临床分离的常见病原菌中的分布情况,及其与细菌耐药表型的相关性,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,对宁波市李惠利医院2018年临床分离的400株常见病原菌进行第1、2和3类整合子筛查,并对整合子阳性和阴性菌株的耐药表型进行对比分析。结果 400株临床菌株中整合子阳性菌株为112例,阳性率为28%。其中第1、2类及同时阳性菌株分别为17.50%、4.75%和5.75%,没有筛选到第3类整合子;112株阳性菌株主要分布于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌;可变区测序结果显示,大肠埃希菌携带耐药基因主要为aadA5和aacA4,肺炎克雷伯菌携带耐药基因主要为aadA2、blaOXA-30和dfrA17,铜绿假单胞菌携带基因主要为aadA5和aacA8;鲍氏不动杆菌主要携带基因为afrA12;37株整合子阳性肺炎克雷伯菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、庆大霉素、左氧氟沙星、妥布霉素的耐药性均高于整合子阴性菌株(P0.05),16株整合子阳性的铜绿假单胞菌对妥布霉素的耐药性高于整合子阴性菌株(P0.05),10株整合子阳性的鲍氏不动杆菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药性高于整合子阴性菌株(P0.05)。结论本地区临床菌株中整合子分离率较高,其中以第1和2类为主,主要分布于革兰阴性菌中,来源于呼吸和重症监护室(ICU)等院感易发科室,整合子的携带与宿主菌的耐药表型有着密切联系。     

鸡来源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌携带整合子基因的研究

目的 分析鸡肠道内共生的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌整合子携带状况以及其与多重耐药性的关系.方法 从甘肃、湖北、北京、四川地区养殖场鸡粪便标本中分离的大肠埃希菌,肉汤稀释法检测菌株的耐药性,WHONET软件进行耐药性分析;筛选出的ESBLs菌株进行整合子的PCR检测和基因测序. 结果 通过药敏试验从鸡粪中分离的224株大肠埃希菌中共检出产ESBLs的菌株54株,分离率为24.1%.产ESBLs的菌株中I类整合子的携带率为63.0%,I类整合子可变区发现的耐药基因有addA1、aadA2、aadA5、aadA22,dfrA12、dfrA17、dfrI,aar-3,分别介导氨基糖苷类、磺胺类抗生素以及利福平的耐药性.aadA22是在国内菌株中首次报道.Ⅱ类整合子携带率为5.6%,携带的耐药基因包括sat、ereA、aadA1.Ⅲ类整合子酶阳性的有3株菌,但其可变区未检出任何耐药基因. 结论 I类整合子主要介导氨基精苷类抗生素和甲氧嘧啶的耐药性,在大肠埃希菌ESBLs菌株的多重耐药性中具有重要的作用,加强养殖动物大肠埃希菌耐药性以及整合子携带状况的监测,对防止耐药菌株的广泛传播,改善临床抗生素的疗效具有重要意义.     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

健康人肠道大肠埃希菌整合子和耐药基因盒的研究

目的：研究健康人肠道大肠埃希菌的整合子携带情况与整合子携带的基因盒种类及其与耐药性之间关系.方法：PCR检测Ⅰ类整合子,确定细菌携带整合子的情况.整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列.结果：150株大肠埃希菌中有38株携带Ⅰ类整合子,集中分布在对3种以上抗生素耐药的菌株中.插入基因盒集中在甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfr）和氨基糖甙类抗生素耐药基因（aadA）.结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是细菌耐药谱和其整合子无对应关系.     

多重耐药铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子基因盒的检测与耐药机制研究

目的对某校附属医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌进行Ⅰ类整合子基因盒检测,分析其与细菌耐药性的关系。方法应用PCR方法对临床分离的50株多重耐药铜绿假单胞菌进行Ⅰ类整合子检测,并对整合子阳性株进行耐药基因盒的扩增与测序。结果 50株多重耐药铜绿假单胞菌中21株检出I类整合子(42.0%),对整合子阳性菌株可变区进行扩增得到5种不同大小的基因片段,片段大小在730~2 550 bp,片段包含编码氨基糖苷类抗生素腺苷酰基转移酶的aadB、aadA6、aadA2基因盒,编码氨基糖苷类抗生素乙酰基转移酶的aac-6Ⅱ基因盒,编码PSE-1蛋白PSE-1基因,编码二氢叶酸还原酶的dfrA1基因。结论多重耐药铜绿假单胞菌中检测出I类整合子,整合子可变区携带多种耐药基因盒,耐药基因盒与其耐药表型有相关性。     

产志贺样毒素大肠埃希菌Ⅰ类整合子的鉴定和分析

目的阐明各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing E. coli,STEC)中I类耐药整合子的分布、特征、所含基因盒的状况以及所表达的耐药信息.方法常规分离出大肠埃希菌、血清学分型,PCR法鉴定产stx1-2毒素性菌株;纸片扩散法对17种抗菌药物进行耐药性监测和分析;PCR法鉴定I类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析.结果各种标本中共鉴定出46株产志贺样毒素大肠埃希菌,其中23株为O157:H7;全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%,氨苄西林为30.4%,而且有5株对至少＞4种抗菌药物多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-氨苄西林-庆大霉素;46株分离株中有11株(23.9%)鉴定出I类整合子,PCR产物测序得知9株携带aadA1基因盒,2株携带aadA2基因盒,均来自氨基糖苷类抗菌药物耐药菌株(39.3%),传递对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.结论I类整合子存在于各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌中,并携带相应的基因盒,决定着对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子检测与耐药性分析

目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中整合子的分布及可变区中基因盒的类型与细菌耐药性的关系,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法对宁波市医疗中心李惠利医院2012-2014年临床分离的336株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌第1、2类整合子进行筛查,并对整合子阳性菌株的可变区序列进行测序分析;采用WHONET5.6和SPSS18.0软件对数据进行统计分析。结果 336株临床菌株中第1类整合子阳性菌株共有42株,阳性率为12.5%;没有筛选到第2类整合子阳性菌株;42株整合子阳性菌株中,23株可变区基因盒为aadA6△-orfd,10株可变区基因盒为aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd,为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,其余9株可变区未整合基因盒;整合基因盒aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率均明显高于未整合基因盒菌株组(P0.05);而整合基因盒aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率介于上述两组之间;42株整合子阳性菌株对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率分别为57.1%、73.8%、85.7%、80.9%、95.2%、83.3%和88.1%,均显著高于整合子阴性菌株(P0.01)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子的携带率相对较低,可变区所携带的耐药基因主要为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,基因盒与菌株的耐药性呈高度相关,整合子可能还存在着其他机制参与耐药表型的产生。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系

目的 研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1，2，3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果69株沙门菌中25株携带1类整合子。集中分布在对4种以上抗生索耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr（甲氧氨嘧啶）和aadA（氨基糖甙类）基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfrl-aadA1。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

肺炎克雷伯菌的耐药性与整合子基因相关性分析

目的研究肺炎克雷伯菌的整合子流行现状,探讨其与耐药性的相关性。方法常规方法收集肺炎克雷伯菌,用K-B法测定其对13种常用抗菌药物的耐药性;采用PCR扩增肺炎克雷伯菌整合子基因,产物用琼脂糖凝胶电泳法检测,判断整合子基因与敏感耐药之间的关系。结果 115株肺炎克雷伯菌检出整合子49株,检出率42.6%;整合子阳性的菌株耐药性较高,特别是对阿米卡星、头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及左氧氟沙星等8种抗菌药物的耐药较为明显。结论肺炎克雷伯菌的耐药性与整合子基因密切相关,整合子对细菌的耐药起着重要作用。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系研究

目的：研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌档进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：69株大肠菌中25株携带1类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr(甲氧苄氨嘧啶)和aadA(氨基糖甙类)基因盒，各种基因盒组合中最常见的是difrl—aadA1。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

江苏省2010年宋内志贺菌耐药相关整合子分析及分子分型研究

目的分析江苏省2010年宋内志贺菌的整合子分布及分子分型特征。方法对江苏省2010年分离的33株宋内志贺菌采用K-B纸片法检测抗菌药物敏感性,联合PCR和限制性片段多态性(RFLP)进行整合子分类和可变区检测,利用测序技术判断整合子可变区耐药基因,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性分析。结果宋内志贺菌多重耐药率为63.64%,对复方新诺明、四环素、萘啶酸和氨苄西林耐药率较高,分别为84.85%、75.76%、66.67%和63.64%。33株宋内志贺菌中51.52%的菌株检出I类整合子,其中4株可变区阳性,携带dfrA17-aadA5基因盒;81.82%的菌株检出II类整合子,携带dfrA1-sat1-aadA1基因盒;两类整合子同时存在时耐药性更为显著。PFGE图谱分为13个不同带型,同一带型菌株大多分散于江苏各地。结论整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与其多重耐药机制。多重耐药性在不同地区、不同克隆的菌株间扩散传播。     

健康人群大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性关系

目的 研究健康人群大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况及分子特征,分析其与细菌耐药性关系.方法 采用Vitek32细菌分析仪和纸片扩散法,检测150株大肠埃希菌抗生素敏感性,PCR检测总DNA中Ⅰ类整合子,扩增产物进行限制性核酸内切酶分析,测序确定携带基因盒种类,脉冲场凝胶电泳对整合子阳性菌株分子分型.结果 150株大肠埃希菌中,83株菌耐受>3种抗生素,耐多药率55.3%;超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性5株,阳性率3.3%;携带Ⅰ类整合子42株,扩增子150～3 000 bp,,有8种带型;耐药基因盒主要是dfr和aadA类,最常见基因盒排列dfr17～aadA5;整合子分布在不同基因型菌株中.结论 健康人携带的大肠埃希菌中广泛存在Ⅰ类整合子,与细菌耐多药性密切相关;分子分型结果提示整合子能在细菌种内水平传播,整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制.     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

ICU多耐药肺炎克雷伯菌整合子及耐药基因研究

目的 研究ICU多耐药肺炎克雷伯菌的整合子及其耐药基因情况.方法 收集宁波市医疗中心李惠利医院2019年ICU来源多耐药肺炎克雷伯菌30株,统计分析药敏结果;多重PCR检测Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类整合酶基因及整合子可变区,进一步对整合子阳性菌株的可变区进行测序分析.结果 30株多耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物(头孢类头孢唑林、...     

尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征及其与耐药性的关系

目的 了解尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与细菌耐药性的关系.方法 选取108株临床非重复分离自尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类及可变区启动子类型.结果 108株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有60株占56.0％检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出5种不同长度的可变区片段:8株750 bp片段不含基因盒,2株1500 bp片段为aadA2,34株2200 bp片段为dfrA 17-aadA5,4株2500 bp片段为dfrA 12-orfF-aa dA2,2株2800 bp片段为aacA4-cmlA1,其中1株大肠埃希菌同时扩增出2200、2500 bp的可变区片段,有11株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;可变区启动子大多为相对较弱的启动子PcH1、PcW;Ⅰ类整合子阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在尿液分离大肠埃希菌中分布广泛,与细菌耐药性关系密切,所携带的整合子具有较强的捕获外源性耐药基因盒的能力.     

多重耐药志贺菌整合子的序列分析

志贺菌属(Shigella)频繁出现耐药菌株,严重影响临床治疗的疗效.近年研究发现整合子-耐药基因盒与志贺菌属的耐药性有关[1],为探索志贺菌属多重耐药株携带整合子的序列结构特点,本研究对多重耐药志贺菌株的1类和2类整合子-耐药基因盒进行PCR扩增和序列分析.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子及其与ESBLs基因关系的研究

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布及其在ESBLs基因水平转移中的作用。方法采用PCR方法检测230株产ESBLs和197株非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因intⅠ,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系,与blaSHV、blaCTX和blaTEM编码基因的关联及经质粒转移的情况。结果产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是137例(59.6%)和48例(24.4%),两组整合子阳性率差异有统计学意义(P<0.01);整合子阳性株对喹喏酮类、氨基糖苷类以及二者同时耐药的比率较高,依次为82.5%、81.8%和71.5%;产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是59.5%、95.5%和69.5%。结论Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株,并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成;整合子与blaCTX经质粒共同转移的频率高于其他两类基因,提示CTX型酶具有更强的扩散优势。