多重耐药绿脓假单胞菌β内酰胺类氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的明确广州地区临床分离的耐药绿脓假单胞菌各种β内酰胺酶编码基因、外膜通道蛋白oprD2基因、氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法采用MicroScan微生物鉴定系统微量肉汤法测定临床分离的18株绿脓假单胞菌对12种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析β内酰胺酶基因型、氨基糖苷类修饰酶基因型及外膜通道蛋白oprD2基因。结果该18株菌呈现多重耐药，对氨基糖苷类抗生素的耐药率在50．0％-72．2％之间，对其他抗绿脓假单胞菌药物耐药率在16．7％-83．3％之间；14株（77．8％）检出氨基糖苷类修饰酶基因，aac（6），-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ、ant（3”）．Ⅰ、aac（60＇）Ⅰ、ant（2”）-Ⅰ、aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅲ、aph（3’）-Ⅵ和aac（3）-Ⅳ基因的阳性率分别为50．0％、38．9％、38．9％、33．3％、27．8％、11．1％、5．6％、5．6％和0；13株（72．2％）检出β内酰胺酶编码基因，TEM、DHA、IMP和OXA基因阳性率分别为55．6％、27．8％、22．2％和11．1％，SHV、PER、VER、GES和VIM基因阴性，3株外膜通道蛋白oprD2基因缺失。结论广州地区临床分离的绿脓假单胞菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因和β内酰胺酶编码基因携带率很高。     

绿脓假单胞菌β内酰胺类和氨基糖苷类耐药基因研究

为了解我院临床分离的绿脓假单胞菌（Pa）株β内酰胺酶、oprD2、氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况，我们进行了相关耐药基因的检测。     

绿脓假单胞菌多重耐药机制的研究

目的调查我院2003-2005年临床分离多重耐药绿脓假单胞菌的氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因存在状况；并研究整合子参与绿脓假单胞菌多重耐药的机制。方法纸片扩散法测定绿脓假单胞菌对14种抗菌药物的药物敏感性，并筛选出14株多重耐药菌株；聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因；聚合酶链反应检测整合子5’保守区的整合酶基因和3’保守区的qacE△1-sulI基因。对整合酶基因的阳性扩增产物的限制性片段长度多态性分析进行整合子分类，整合子可变区扩增并测序。结果14株绿脓假单胞菌对14种抗菌药（哌拉西林等）的耐药率为14．3％-100．0％；氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ、ant（3”）-Ⅰ和aac（3）-Ⅰ检出率分别为78．6％、57．1％、57．1％、14．3％、7．1％、0；β内酰胺酶编码基因TEM和IMP的检出率分别为92．9％和42．9％，未检出VIM、OXA、PER、GES和SHV基因，1株外膜通道蛋白oprD2基因缺失；整合酶基因及qacE△1-sulI基因检出率分别为85．7％和78．6％，整合子可变区扩增有3种片段：1000、1300和1700，测序证实分别为aadA2、aadA6．odD和dfrⅫ-orfF-aadA2，其中aadA2是首次在绿脓假单胞菌的整合子中检出，aadA6-odD是一种新型的整合子可变区基因盒组合形式。Genbank号分别为DQ091178和DQ091179。结论我院多重耐药绿脓假单胞菌对B内酰胺类抗生素的耐药主要与TEM和IMP型耐药基因有关，对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、8aC（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅱ有关；整合子参与了绿脓假单胞菌的耐药和多重耐药。     

铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌，能通过不同的机制产生药物耐受性，特别是多重耐药和对临床上应用最广的β-内酰胺类抗生素的耐药，给临床抗感染治疗带来极大困难，从分子水平研究阐明其对β-内酰胺类抗生素的耐药机制具有重要临床意义。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药敏表型及耐药基因的研究

目的了解该院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类制剂的耐药情况以及相关耐药基因的携带现况。方法自临床分离的119株铜绿假单胞菌均采用PCR检测耐药基因(TEM、SHV、CTX-M、DHA-1、OXA、CARB、VEB-1、PER-1、GES-2、AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、OprD和IntⅠ)并对检出的耐药基因进行DNA测序。结果 119株铜绿假单胞菌中TEM阳性103株(86.6%),AmpC阳性77株(64.7%),IntⅠ阳性54株(45.4%),OprD缺失54株(45.4%),VIM-2阳性19株(16.0%),CARB阳性14株(11.8%),SHV阳性2株(1.7%),OXA阳性2株(1.7%),DHA-1阳性1株(0.8%),其余基因均为阴性。结论该院铜绿假单胞菌TEM、AmpC、IntⅠ、VIM-2等耐药基因的携带率及OprD缺失均较高,多重耐药严重。     

铜绿假单胞菌耐消毒剂-磺胺基因及β内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)耐消毒剂-磺胺基因(qacEΔ1-sul I)及β内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法自临床分离的40株PA,采用聚合酶链反应(PCR)检测qacEΔ-su1I基因及12种β内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2)。结果40株中qacEΔ1-su1I基因阳性19株(47.5%),CARB基因阳性18株(45.0%),oprD2基因缺失35株(87.5%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,qacEΔ1-su1I基因及CARB基因携带率高,oprD2基因缺失严重。     

儿童患者中对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶基因型研究

目的研究儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的基因型。方法本研究收集了2003年12月至2005年11月我院住院患儿中分离出的对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌59株。使用E试验法检测产金属酶的耐药表型，PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM4种基因型。PCR反应产物进行纯化后，使用双脱氧末端终止法进行DNA测序。将得到的拼接序列与GenBank中Blast进行同源分析，确定其基因亚型。结果59株对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌中，纸片法检测金属酶表型结果阳性29株，占49．2％。PCR检测金属酶基因型阳性39株，占66．1％，其中IMP型阳性35株，占89．7％，VIM型阳性4株，占10．3％。未检测出SPM和GIM型金属酶。测序结果显示，IMP型测序结果均为产IMP．1亚型金属酶的绿脓假单胞菌。VIM型测序结果均为产VIM-2亚型金属酶的绿脓假单胞菌。结论儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌，产金属酶率高于成人报道。产生的金属酶同时存在IMP-1和VIM-2两种基因型，其中以IMP-1亚型为主，少部分为VIM-2亚型。产金属酶是儿童患者对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌的重要耐药机制。在儿科进行对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的监测十分重要。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及β-内酰胺类耐药基因研究

目的分析该院2005年1～12月临床分离的34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征以及B～内酰胺类耐药相关基因存在状况。方法应用BDPhoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,头孢哌酮／舒巴坦敏感性检测采用K—B法。应用PCR方法检测12种β-内酰胺类耐药相关基因,分别为TEM、SHV、CARB、OXA-10、PER、VEB、GES、DHA、IMP、VIM、GIM、SPM。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌除对阿米卡星100．00％敏感外,对哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦敏感率为48．00％～55．00％,对第3、4代头孢菌素、氨曲南、喹诺酮类等抗生素抗菌活性差,敏感率为3．22％～29．03％。对美洛配能29．03％敏感,对氨苄西林／舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药。β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5．9％、32．4％、14．7％、17．6％,而SHV、0XA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM、SPM均为阴性。结论耐亚胺培南的铜绿假单胞菌除对阿米卡星敏感外,对其他常用抗生素耐药严重。携带TEM、CARB、DHA、IMP基因是本组试验菌株对β-内酰胺类抗生素和亚胺培南耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗生素耐药基因的研究

目的调查佛山地区铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药情况,并研究其β-内酰胺酶编码基因的存在情况。方法用法国梅里埃ATBExpression细菌分析系统鉴定微生物分析仪进行菌种鉴定和药敏试验,采用表型确证试验确认产ESBLs的菌株。应用聚合酶链式反应（PCR）技术检测耐药基因。结果50株产ESBLs铜绿假单胞菌中9株具有AmpC酶基因（18％）,TEM和VIM-1阳性菌各6株（12％）,SHV类（SHVI、SHV2、SHV3、SHV4）阳性菌3株（6％）,CTX-M9和IMP-2阳性菌各2株（4％）,其余PER、CTX-MI、CTX-M2、VEB、IMP-1和VIM-2基因检测均为阴性。结论质粒型AmpC基因、TEM、VIM-1、SHV、CTX-M9及IMP-2基因是导致本地区临床分离的铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的主要原因,且呈多重耐药。     

铜绿假单胞菌耐β—内酰胺抗生素的主要机理

铜绿假单胞菌对以β－内酰胺类为主的各种抗生素具有耐药性，并不断增强，常可引起各种难治性感染。了解其耐药机制，对控制该菌引起的感染，研制新一代抗菌药物有着重要的价值。本文将铜绿假单胞菌耐卜内欧胺抗生素的主要机理综述如下。一、外股通透性降低β－内酰胺类抗生素对革兰阴性菌作用的靶位是内膜上的青霉素结合蛋白（PBPs），但药物要到达其靶位发挥作用，首先须穿透外膜进入胞内[1]．1979年Nikaid报告铜绿假单胞菌和其他革兰明性菌一样都有外膜，外膜上具有由孔蛋白（Porin）形成的各种转移扩散通道[2]。孔蛋白是一类能形成跨…     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,VITEK 2全自动微生物鉴定及药敏系统对其进行重新鉴定,聚合酶链反应（PCR）扩增oprD2、金属酶基因、氨基糖苷类酶修饰基因。结果 40株铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素：厄它培南,亚胺培南（IPM）、头孢他啶（CAZ）、美罗培南、头孢吡肟（PEP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、环丙沙星、氨曲南（ATM）、庆大霉素（GEN）、妥布霉素、阿米卡星、多粘菌素耐药率分别为100%、96.2%、92.0%、90.1%、84.8%、83.9%、83.1%、73.7%、65.1%、60.6%、58.0%、0%。PCR结果显示oprD2缺失率65.0%,整合子阳性率22.5%,发现金属酶基因IMP-1株,氨基糖苷类修饰酶基因ant3Ⅰ、aac6Ⅱ、aac6Ⅰ、ant2Ⅰ基因阳性率分别为36.0%、35.1%、26.2%,20.1%,同时携带2种或2种以上耐药基因占55.0%,携带2种以上氨基糖苷类修饰基因的有40.0%。结论多重耐药铜绿假单胞菌耐药性高,携带多种氨基糖苷类修饰酶基因,外膜孔蛋白oprD2缺失在多药耐药铜绿假单胞很常见,另外携带多种耐药基因盒的整合子的存在也是细菌耐药的常见原因,应引起高度重视。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均〉50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均>50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和aac(3)-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

儿童临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的了解儿童临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的耐药特征。方法收集我院住院患儿中分离的120株多重耐药铜绿假单胞菌，作药敏试验，用琼脂稀释法测定抗菌药物的MIC值，按照2005年CLSI推荐标准判断结果。数据分析使用WHONET5．3软件。结果多重耐药铜绿假单胞菌对氨曲南的耐药率最高（86．7％），头孢他啶仍具较好的抗菌活性；环丙沙星耐药率最低（2．5％）。亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达到34．2％、35．8％，两者MIC50和MIC50相同，分别为4和32mg／L。59株细菌对碳青霉烯类抗生素耐药，占49．2％。碳青霉烯类抗生素耐药株与非耐药株对头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-三唑巴坦的耐药率差异有显著性（P〈0．05）。结论目前从儿科临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的多重耐药现象严重。     

广州地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学调查

目的 调查广州地区4家医院2005年3月至2007年3月泛耐药铜绿假单胞菌株之间的同源性,了解是否有该耐药株暴发流行.方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对134株泛耐药铜绿假单胞菌株进行分型,明确其是否为同一菌株的克隆.结果 134株铜绿假单胞菌PFGE图谱分为56型,其中主要流行型A型有45株,主要在医院A的中心ICU传播流行.其余3家医院也存在各自的流行株,即B、C、D医院的流行株分别为B型、C型、D型,占各医院的总分离株数的22.6%(7/31)、33.3%(6/18)、31.6%(6/19).克隆株Q型同时存在于B医院与D医院,B医院和C医院分别有1株菌与A医院的A型同源性在80%以上,其余菌株在各医院问无同源性.对A医院ICU环境、纤维支气管镜、呼吸机管道采样,未发现A型克隆株存在;但有6例携带A型克隆株的患者在调查时间里多次入住ICU的情况.耐药机制分析,42株A克隆产IMP-9金属β内酰胺酶,B、C、D克隆不产金属酶.结论 在2年的调杏中,广州地区4家大型医院均存在不同规模的泛耐药铜绿假单胞菌株克隆株传播,虽然未发现优势克隆株在4家医院大规模传播,但部分医院间已有共同的克隆株存在.加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控可能是控制克隆株继续传播的关键.     

多重耐药绿脓假单胞菌中I类整合子的研究

目的 探讨整合子介导耐药在多重耐药绿脓假单胞菌中所起的作用。方法 采用纸片扩散法进行药物敏感试验，筛选多重耐药绿脓假单胞菌；应用三维试验法区别β内酰胺酶型别；采用聚合酶链反应（PCR）技术检测耐药菌中的整合子基因，并应用DNA测序研究整合子内携带的耐药基因。结果 多重耐药绿脓假单胞菌中整合子检出率为42．4％，所检出整合子共有3种长度即750、1000、2500bp，它们分别携带了aadB、aadA2、aadB、aac6-Ⅱ和PSE-1基因。结论 整合子参与是形成绿脓假单胞菌多重耐药的重要因素。     

重症监护病房产VIM-2型金属酶绿脓假单胞菌的研究

目的分析重症监护病房产金属β内酰胺酶绿脓假单胞菌的同源性、金属酶基因型及转移机制。方法用2-巯基丙酸协同试验筛选重症监护病房分离的对亚胺培南耐药的绿脓假单胞菌中的产金属酶株，聚合酶链反应(PCR)、克隆测序确定耐药基因，整合子PCR扩增，脉冲场凝胶电脉分析同源性。结果26株绿脓假单胞菌2-巯基丙酸协同试验阳性，酶粗提液能水解亚胺培南，活性能被EDTA抑制。VIM型金属酶引物PCR扩增阳性，经克隆测序证实为VIM-2型金属酶。整合子可变区序列分析表明，blaVIM-2位于Ⅰ类整合子上，该基因上游含有1个aacA4基因，下游为aadB基因。脉冲场凝胶电脉结果证实产酶株均来自同一克隆。结论医院重症监护病房有产VIM-2型金属酶绿脓假单胞菌的流行，耐药基因位于Ⅰ类整合子上。     

多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药研究

目的探讨宜兴市第二人民医院临床分离多重耐药铜绿假单胞菌与氨基糖苷类抗菌药物的表型与基因型的关系,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用琼脂纸片扩散(K-B)法对临床分离的铜绿假单胞菌进行药敏试验,选出34株多重耐药菌株,用聚合酶链反应(PCR)法检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、ant(2′)-Ⅰ、ant(3′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ检出阳性率分别为85.3%、44.1%、17.6%、11.8%、5.9%。对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星的耐药率分别为91.18%、44.12%、88.24%、85.29%。结论多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药程度不同,临床应根据药敏结果选择用药,以减少耐药菌株的产生,控制院内感染。