聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分支杆菌DNA的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术配对检测９２例肺结核患者外周血单个核细胞内和痰标本中结核分支杆菌ＤＮＡ，同时检测３０例非结核患者外周血。结果显示：外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率分别为７１７％和５５４％，前者明显高于后者（Ｐ＜００５）；各型肺结核外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率不尽相同；３０例非结核患者外周血ＰＣＲ阳性３例（１０％）。认为ＰＣＲ检测肺结核患者外周血单个核细胞内结核分支杆菌ＤＮＡ是一种快速、敏感的方法，可用于肺结核早期诊断与鉴别诊断     

肺结核患者外周血白细胞中结核分支杆菌DNA检测及实验评价

目的探讨结核菌检测的新途径及其在肺结核诊断中的价值。方法应用聚合酶链反应技术对７６例肺结核患者（４０例同时留有疾标本），４２例非结核患者外周血标本进行了结核分支杆菌ＤＮＡ检测。结果利用聚合酶链反应检测外用血白细胞中结核菌ＤＮＡ对肺结核诊断的灵敏度为８６％，特异性为 ９０％，准确度达８７％；４０例外周血与疾标本的ＰＣＲ配对检测表明，血标本中的结核菌ＤＮＡ检出率明显高于痰标本。结论外周血白细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ检测用于肺结核诊断具有较高的敏感性和准确性，明显优于痰标本，可作为肺结核诊断优良可靠的指标。     

肺结核患者外周血白细胞中结核分支杆菌DNA检测及实验评价

目的 探讨结核菌检测的新途径及其在肺结核诊断中的价值。方法 应用聚合酶链反应技术对７６例肺结核患者（４０例同时留有痰标本），４２例非结核患者外周血标本进行了结核分支杆菌ＤＮＡ检测。结果 利用聚合酶链反应检测外周血白细胞中结核菌ＤＮＡ对肺结核诊断的灵敏度为８６％，特异性为９０％，准确度达８７％；４０例外周血与痰标本的ＰＣＲ配对检测表明，血标本中的结核菌ＤＮＡ检出率明显高于痰标本。结论 外周血细胞中结     

AmpliSensor—聚合酶链反应定量检测肺结核患者外周血结 …

目的 探讨ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应定量检测外周血中结核分支杆菌ＤＮＡ在肺结核的应用价值。方法 采用ＱｌＡａｍｐ和ＡｃｕＰｕｒｅ法提取，制备全血中模板ＴＢ－ＤＮＡ，应用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ定量检测，并与ＩＳ６１１０－单管巢式聚合酶链反应（ＳＮ－ＰＣＲ）作比较。结果２００例肺结核患者的血液标本中，两种方法测得结核分支杆菌ＤＮＡ的阳性率分别为６０．５％、６３．５％。８５例非结核肺病     

结核患者外周血单个核细胞结核分支杆菌DNA转阴时间探讨

结核患者外周血单个核细胞结核分支杆菌ＤＮＡ转阴时间探讨雷建平我们已证实结核患者外周血单个核细胞（ＰＭＣ）中存在结核分支杆菌（ＴＢ）ＤＮＡ［１］，并在此基础上探讨结核患者ＰＭＣ中ＴＢ－ＤＮＡ转阴时间。对象和方法：为１５例经细菌学、病理学、Ｘ线、免疫学结...     

肺结核患儿外周血白细胞中结核分支杆菌DNA的检测

肺结核患儿外周血白细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ的检测傅清流黄秋生李庶甘聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用使对结核病快速诊断成为可能。有关痰结核分支杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）检测报告较多，而对其外周血白细胞中ＴＢ－ＤＮＡ检测甚少。为解决临床上结核病患儿痰标本...     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法检测支气管肺泡灌洗液结核杆菌抗原

利用抗结核分支杆菌ＭｃＡｂ和抗结核分支杆菌ＨＲＰ－ＭｃＡｂ经双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对１２８份支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬ）标本进行了检测。结果：痰菌阴性肺结核病人ＢＡＬ标本中结核分支杆菌抗原水平明显高于非结核肺部疾病组。对菌阴肺结核检出的敏感性为８４．１％，特异性为８２．４％，此法降低了利用多克隆抗体检测ＢＡＬ标本易出现的假阳性率。认为此法可作为结核病的辅助诊断方法。     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法检测支气管肺泡灌洗液结核杆菌抗原

利用抗结核分支杆菌ＭｃＡｂ和抗结核分支杆菌ＨＲＰ－ＭｃＡｂ经双抗体夹ＥＬＩＳＡ法，对１２８份支气管肺泡灌洗液标本进行了检测，结果：痰菌阴性肺结核病人ＢＡＬ标本中结核分支杆菌抗原水平明显高于非结核肺部疾病，对菌阴肺结核检出的敏感性为８４．１％，特异性为８２．４％，此法降低了利用多克隆抗体检测ＢＡＬ标本易出现的假阳性率，认为此法可作为结核病的辅助诊断方法。     

不同方法收集胃液进行结核分支杆菌培养对儿童肺结核的诊断价值

目的探讨胃液的结核分支杆菌培养对儿童肺结核的诊断价值。方法对４６例儿童肺结核患者选取痰、胃腔内直接吸取液、清晨呕吐液及其他时段呕吐液４种标本进行结核分支杆菌培养，并对其培养阳性率进行比较。结果上述４种标本的结核分支杆菌培养阳性率分别为９％、３３％、２６％和４％。结论酌情选用不同方法收集胃液进行培养，是诊断儿童肺结核的特异性方法之一     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

Detection of Mycobacterium tuberculosis DNA from peripheral blood in patients with HIV-seronegative and new cases of smear-positive pulmonary tuberculosis by polymerase chain reaction

Tuberculosis is still one of the most important cause of mortality and morbidity in many countries and there is a need for new methods for accurate and rapid diagnosis of tuberculosis. To determine the sensitivity and specificity of polymerase chain reaction (PCR) method, we have evaluated Mycobacterium tuberculosis DNA in peripheral blood samples with PCR technique in adult patients with human immunodeficiency virus (HIV)-negative and new cases of smear-positive pulmonary tuberculosis. We investigated the relationship between characteristic of the patients, radiological extension of the disease, sputum smear grade, presence of cavity, body-mass index (BMI) serum albumin level, total delay time and PCR positivity. Forty patients (33 male and 7 female; mean age 37.8 +/- 14.1) and 20 healthy control subjects (13 male and 7 female; mean age 35.6 +/- 7.3) were enrolled in this study. PCR was positive in 16 of 40 (40%) patients with pulmonary tuberculosis and negative in 24 of 40 (60%). None of the healthy controls had positive PCR results. The overall sensitivity specificity and accuracy of the PCR assay was 40, 100 and 60%, respectively. We found the positive correlation between PCR positivity and sputum smear grade (r=0.46, P=0.003) radiological extension of the disease (r=0.69, P=0.001), presence of cavity (r=0.90, P=0.001). We conclude that the detection of M. tuberculosis DNA from peripheral blood by PCR technique is useful for the rapid diagnosis of tuberculosis patients with HIV-negative. Hematogenous dissemination was important in tuberculosis patients and peripheral blood samples were suitable and easy materials. However, standardization of the PCR method must be ensured for the diagnosis of tuberculosis.     

Establishment and effect evaluation of polymerase spiral reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis

目的 建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法 针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2×反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果 通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论 PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。     

结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

目的 建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法 针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2×反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果 通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论 PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。     

GeneXpert MTB/RIF技术与血清结核分枝杆菌特异性蛋白抗体联合检测在菌阴肺结核诊断中的价值

目的 探讨GeneXpertmTB/RIF技术和血清结核分枝杆菌特异性蛋白(tuberculosis specific antigen,TB-SA)抗体联合检测在菌阴肺结核诊断中的价值.方法 搜集2014年6月至2016年2月期间山东省滨州市结核病防治院临床确诊的住院菌阴肺结核患者119例和菌阳肺结核患者47例作为试验组,同期确诊的住院非结核病患者71例和健康者55人作为对照组.每组均留取晨痰和血液一份,晨痰进行GeneXpertmTB/RIF检测结核分枝杆菌,血液进行血清TB-SA抗体检测.结果 119例菌阴肺结核患者,GeneXpertmTB/RIF、血清TB-SA抗体检测和2种方法联合检测的敏感度分别为37.8%、68.1%和81.2%,特异度分别为100%、74.6%和74.6%.2种方法联合检测结果与GeneXpertmTB/RIF和血清TB-SA抗体检测结果比较,差异均有统计学意义(χ2=47.21、5.71,均P<0.01),GeneXpertmTB/RIF和血清TB-SA抗体检测结果比较,差异有统计学意义(χ2=21.86,P<0.01).结论 GeneXpertmTB/RIF和血清TB-SA抗体联合检测敏感度提高,对菌阴肺结核的诊断有较大价值.     

Comparison of four DNA extraction methods for detecting Mycobacterium tuberculosis by real-time PCR and its clinical application in pulmonary tuberculosis

Objectives

China is one of the countries with a high burden of Mycobacterium tuberculosis (MTB) infection. One challenge for the earlier diagnosis of tuberculosis is the DNA extraction of MTB. This study was to compare four MTB DNA extraction methods, and use the best one in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.

Methods

A total of 43 serum and 94 plasma samples were collected from 124 clinical diagnosed pulmonary tuberculosis patients. Four different MTB DNA extraction methods, including phenol-chloroform method, Qiagen kit, Omega kit and magnetic bead method, were compared to determine which method displayed the highest sensitivity. A quantitative fluorescent PCR assay was also designed for the detection of MTB DNA.

Results

The highest DNA extraction efficiency (52.8%) and the best reproducibility (coefficient of variance =26.7%) were observed using the magnetic bead method. For 39 of the 124 (31.5%) pulmonary tuberculosis patients, MTB DNA was detected in their plasma or serum samples. Interestingly, 35.3% (12/34) of smear-negative cases were MTB DNA positive.

Conclusions

In conclusion, magnetic bead method is the best one for the DNA extraction of MTB. The detection of MTB DNA may provide valuable information for the diagnosis of acid-fast bacilli (AFB) negative pulmonary tuberculosis patients.KEY WORDS : Mycobacterium tuberculosis (MTB), pulmonary tuberculosis, plasma DNA, quantitative fluorescent PCR     

荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。