卡波西肉瘤组织中基质交感分子1的表达及意义

目的探讨卡波西肉瘤组织中基质交感分子1(STIM1)蛋白的表达及临床意义。方法用免疫组织化学方法检测34例卡波西肉瘤、22例血管瘤、15例正常皮肤组织石蜡标本中STIM1蛋白的表达水平,并与卡波西肉瘤的临床病理特征进行统计学分析。结果 STIM1蛋白在3种组织均有不同程度的表达,其中卡波西肉瘤中表达阳性率为79.41%,血管瘤中为81.81%,正常皮肤组织中为13.33%。STIM1在卡波西肉瘤组织和血管瘤组织中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但两者与正常皮肤组织相比差异均有统计学意义(P<0.05)。STIM1蛋白的表达水平与卡波西肉瘤病理分期呈正相关(rs=0.611,P<0.05),结节期高于斑片期和斑块期(P<0.05)。STIM1的表达水平与民族、性别、年龄、人疱疹病毒8型(HHV-8)感染、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染、皮损面积等无明显相关性(P>0.05)。HIV合并HHV-8双阳性和HIV合并HHV-8双阴性的患者中STIM1蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STIM1在卡波西肉瘤组织结节期的表达高于斑片期和斑块期,可能对卡波西肉瘤的病程进展起重要作用。     

宫颈癌PIK3R1基因表达水平及临床意义

目的分析磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)在宫颈癌的表达并探讨其临床意义。方法收集2016年6月至2017年6月本院60例宫颈癌癌组织(CC组),42例因良性疾病切除的宫颈组织(对照组),采用RT-PCR和免疫组织化学法检测组织标本中PIK3R1基因及其编码蛋白(p85α)的表达情况。结果 CC组PIK3R1基因表达水平显著低于对照组(P0.05),p85α阳性表达率显著低于对照组(P0.05)。p85α蛋白阳性表达率与年龄、病理类型和病理分级无关(P0.05),与FIGO分期、淋巴结转移相关(P0.05);p85α阳性组整体生存情况优于p85α阴性组(P0.05)。结论癌组织中PIK3R1表达缺失预示着宫颈癌癌分期晚、存在淋巴结转移以及预后不良。     

STF083010对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的肾保护作用

目的探讨STF083010对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)的肾保护作用。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、IRI组与STF083010组,每组10只。假手术组大鼠开腹后仅分离双侧肾动脉,不夹闭肾动脉;IRI组和STF083010组大鼠采用无创动脉夹同时夹闭左、右肾动脉45 min后放开,建立IRI模型;STF083010组大鼠建立IRI模型前2h腹腔注射STF083010 15mg/kg。缺血再灌注24h后,应用全自动生化仪检测3组大鼠血清尿素氮和肌酐水平,3组大鼠均行肾组织病理学PAS染色,采用免疫组织化学法检测肾组织XBP1、GRP78蛋白阳性表达率,采用实时荧光定量PCR检测肾组织XBP1、GRP78 mRNA表达水平。结果IRI组血清肌酐[(322.10±18.93)μmol/L]、尿素氮[(41.16±3.09)mmol/L]水平、肾小管损伤评分(202.50±9.15)高于STF083010组[(149.70±14.80)μmol/L、(25.22±3.81)mmol/L、129.50±5.49]和假手术组[(49.58±2.82)μmol/L、(7.56±0.70)mmol/L、25.88±1.46](P0.05),STF083010组高于假手术组(P0.05);IRI组和STF083010组大鼠肾组织GRP78蛋白阳性表达率[(27.16±3.98)%、(58.72±7.12)%]、GRP78 mRNA表达水平(0.086±0.007、0.335±0.023)、XBP1蛋白阳性表达率[(56.32±5.21)%、(29.83±3.78)%]、XBP1mRNA表达水平(0.172±0.053、0.088±0.054)高于假手术组[(4.86±2.30)%、0.015±0.001、(5.68±1.37)%、0.039±0.004](P0.05),STF083010组GRP78蛋白阳性表达率和GRP78mRNA表达水平高于IRI组,XBP1蛋白阳性表达率和XBP1mRNA表达水平低于IRI组(P0.05)。结论 STF083010可通过抑制XBP1表达,增加GRP78表达保护大鼠肾功能。     

肝癌组织中NDRG2和AKT2及其磷酸化蛋白表达及意义

目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)、丝/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase 2,AKT2)mRNA和蛋白及ATK2磷酸化蛋白(p-AKT2)在原发性肝癌中的表达及临床意义。方法 30例原发性肝癌患者,取其肝癌组织为肝癌组、癌旁正常肝组织为对照组,采用荧光定量PCR技术检测2组NDRG2、AKT2mRNA表达情况,采用Western blot法检测2组NDRG2、AKT2蛋白和p-AKT2表达情况,采用免疫组织化学法检测2组NDRG2、AKT2蛋白和p-AKT2阳性表达率,并进行比较。结果肝癌组NDRG2mRNA和蛋白表达量(0.88±0.14、6.73±1.35)以及NDRG2蛋白阳性表达率(40.0%)明显低于对照组(1.59±0.27、9.34±1.63、96.7%)(P0.05),AKT2蛋白(14.52±1.75)、p-AKT2蛋白(18.51±1.59)相对表达量和p-AKT2蛋白阳性表达率(60.0%)明显高于对照组(9.53±1.84、12.58±1.81、6.7%)(P0.05),AKT2mRNA表达量(1.24±0.28)和AKT2蛋白阳性表达率(100.0%)与对照组(1.20±0.16、93.3%)比较差异无统计学意义(P0.05);肝癌组织中NDRG2与p-AKT2表达呈明显负相关(r=-0.672,P=0.341)。结论原发性肝癌患者肝癌组织中NDRG2呈低表达,p-AKT2呈高表达,且二者表达呈负相关,促进肝癌患者肝细胞NDRG2表达有助于肝癌的治疗。     

PAK6在膀胱癌中表达及其临床意义

目的探讨p21活化激酶6(p21-activated kinase 6,PAK6)在膀胱癌中的表达情况及其临床意义。方法膀胱癌患者89例(膀胱癌组),取其膀胱癌组织;行膀胱部分切除或全部切除术患者30例为对照组,取其正常膀胱上皮组织。采用免疫组织化学法检测2组组织PAK6蛋白阳性表达率。Biu-87、T24膀胱癌细胞和SV-HUC-1正常膀胱细胞分为Biub-87组、T24组和SV-HUC-1组,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞PAK6mRNA表达水平,采用Western blot法检测3组细胞PAK6蛋白表达水平。结果膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率(46.07%)明显低于对照组(96.67%)(P0.05),膀胱癌组复发者PAK6蛋白阳性表达率(29.41%)低于原发者(56.36%)(P0.05),膀胱癌组PAK6蛋白阳性表达率在肿瘤数量、病理分级、是否转移和临床分期上差异无统计学意义(P0.05);Biu-87组和T24组细胞PAK6mRNA(0.018 9±0.003 7、0.053 0±0.012 9)和PAK6蛋白表达水平(0.099 3±0.012 1、0.143 1±0.008 1)明显低于SV-HUC-1组(1.040 3±0.375 5、0.338 1±0.051 1),Biu-87组低于T24组(P0.05)。结论 PAK6在膀胱癌组织及细胞中呈低表达,且与膀胱癌的复发密切相关,可能在膀胱癌的发生、发展中起抑制作用,可作为新的抑癌指标指导临床。     

p55PIK和血管内皮生长因子在乳腺癌患者中的表达及意义

目的探讨乳腺癌患者磷脂酰肌醇-3-激酶亚基p55γ(p55γof phosphatidylinositol 3-kinase, p55PIK)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)水平变化及临床意义。方法 73例乳腺癌患者为乳腺癌组,59例乳腺癌前病变患者为癌前病变组,52例乳腺增生患者为乳腺增生组。采用免疫组织化学法检测3组患者手术切除组织p55PIK、VEGF蛋白阳性表达率并比较分析。对乳腺癌组患者随访30个月,采用Kaplan-Meier生存曲线分析p55PIK、VEGF阳性表达与乳腺癌患者预后的关系,采用log-rank法比较生存差异。结果乳腺癌组p55PIK和VEGF阳性表达率(57.53%、71.23%)明显高于癌前病变组(35.59%、50.85%)和乳腺增生组(15.38%、26.92%)(P0.05),癌前病变组高于乳腺增生组(P0.05);乳腺癌组p55PIK阳性患者病死率(38.10%)高于p55PIK阴性患者(12.90%)(P0.05),VEGF阳性患者病死率(34.62%)高于VEGF阴性患者(9.52%)(P0.05)。结论 p55PIK、VEGF阳性表达与乳腺癌的发生、发展有关,有可能成为乳腺癌临床治疗和预后的新靶点。     

移植性卡波西肉瘤动物模型的建立

目的建立模拟卡波西肉瘤发展过程的移植性卡波西肉瘤的动物模型。方法将36只裸鼠随机分为A、B、C、D四个实验组,每组各9只。卡波西肉瘤细胞体外培养并计数,调节细胞悬液浓度为1×10~8/L、1×10~9/L、5×10~9/L、1×10~(10)/L,各取0.2 ml分别接种于四组实验组裸鼠背部皮下。观察各组裸鼠肿瘤长出时间,肿瘤体积及颜色变化,待瘤体长到36 d时处死裸鼠,取下肿瘤组织进行组织病理学检查及免疫组化CD31、CD34、AE1/AE3、S100、HHV-8。结果卡波西肉瘤细胞株皮下注射移植成瘤率为100%,肿瘤组织经免疫组化CD31、CD34染色阳性证实为血管来源肿瘤。4个实验组中裸鼠肿瘤均由斑点逐渐形成斑块、结节,各实验组小鼠瘤体体积随时间延长而逐渐增大,不同细胞浓度的实验组小鼠瘤体体积差异无统计学意义(P>0.05)。第36天不同细胞浓度的实验组小鼠瘤体重量差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立了卡波西肉瘤细胞移植动物模型,且注射卡波西肉瘤细胞浓度越高,长出肿瘤的时间越短。     

视网膜母细胞瘤中SHH与PTCH的表达及其意义

目的探讨SHH与PTCH在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)组织中的表达及其在RB发生、发展中的意义。方法 17例手术切除的RB标本(RB组),17例因眼部外伤摘除的正常视网膜组织切片为对照组,2组分别采用实时PCR检测视网膜SHH mRNA与PTCH mRNA表达水平,采用Western blot法和免疫组织化学染色法检测视网膜SHH与PTCH蛋白表达水平,分析SHH mRNA和PTCH mRNA表达水平与RB临床病理特征间关系;采用Spearman等级相关分析SHH和PTCH蛋白在RB组织中表达的相关性。结果 RB组视网膜SHH mRNA和蛋白(2.86±0.57、5.19±1.61)及PTCH mRNA和蛋白(3.21±0.64、3.62±1.24)表达明显高于对照组(SHH mRNA和蛋白为1.02±0.13、0.56±0.06,PTCH mRNA和蛋白为1.14±0.17、0.74±0.15)(P0.05);RB组SHH和PTCH蛋白阳性表达率(70.6%和58.8%)高于对照组(29.4%和23.5%)(P0.05);RB组SHH mRNA和PTCH mRNA表达水平在肿瘤临床分期、淋巴结转移及分化程度上差异有统计学意义(P0.05);RB组SHH表达与PTCH蛋白表达呈正相关(r=0.865,P=0.025)。结论 SHH与PTCH在RB中高表达,SHH信号通路被激活可在一定程度上反映RB的进展和预后。     

δ阿片受体对乳腺癌化疗耐药性的影响

目的探讨δ阿片受体(delta opium receptor,DOR)在乳腺癌多药耐药性中的作用。方法乳腺癌MCF-7细胞分为耐药组和对照组,耐药组细胞采用含阿霉素的培养液培养6周,建立耐药细胞株;对照组细胞正常培养。68例乳腺癌患者,其中化疗耐药者45例、化疗敏感者23例,取患者癌旁正常组织为正常对照组,取化疗耐药者和化疗敏感者乳腺癌组织为化疗耐药组和化疗敏感组,采用反转录PCR法检测2组细胞和3组组织中DOR mRNA表达水平,采用Western blot法检测2组细胞和3组组织中DOR蛋白表达水平。采用ELISA法检测化疗耐药组和化疗敏感组P-gp转运蛋白表达水平,分析DOR与P-gp转运蛋白表达的相关性。结果耐药组细胞DOR mRNA和蛋白表达水平[(180.4±9.4)%、(157.2±9.3)%]高于对照组[(100.0±7.2)%、(100.0±10.1)%](P0.05);化疗耐药组组织中DOR mRNA和蛋白表达水平[(269.6±15.8)%、(276.8±14.9)%]高于化疗敏感组[(187.5±12.3)%、(164.6±13.5)%]和正常对照组[(100.0±6.1)%、(100.0±10.5)%](P0.05),化疗敏感组高于正常对照组(P0.05);化疗敏感组DOR和P-gp转运蛋白高表达率(42.2%、24.4%)均明显低于化疗耐药组(78.3%、82.6%)(P0.05),化疗敏感组和化疗耐药组DOR高表达者P-gp转运蛋白高表达率(73.3%)高于DOR低表达者(26.7%)(P0.05);化疗耐药组和化疗敏感组DOR蛋白表达水平与P-gp转运蛋白表达水平呈正相关(r=0.856,P=0.030)。结论 DOR的表达与乳腺癌化疗耐药具有明显相关性,有可能成为重要的化疗耐药预测指标。     

慢性鼻窦炎患者鼻黏膜组织GATA结合蛋白-3表达及与炎性因子水平的关系

目的探讨转录因子GATA结合蛋白-3(GATA binding protein-3,GATA-3)在慢性鼻窦炎患者鼻黏膜中的表达及与白细胞介素(interleukin,IL)-5、IL-6、IL-8的关系。方法慢性鼻窦炎患者41例为观察组,同期行鼻内镜修补手术脑脊液鼻漏患者23例为对照组,采用免疫组织化学法检测2组鼻黏膜组织GATA-3蛋白阳性表达,实时荧光定量PCR法检测鼻黏膜组织GATA-3mRNA相对表达量,ELISA法检测血清IL-5、IL-6、IL-8水平;Pearson相关法分析2组鼻黏膜组织GATA-3蛋白阳性表达与血清IL-5、IL-6、IL-8的相关性。结果观察组鼻黏膜组织GATA-3蛋白阳性表达率(87.80%)、GATA-3mRNA相对表达量(0.60±0.12)及血清IL-5[(78.28±44.22)ng/L]、IL-6[(42.51±5.42)ng/L]、IL-8[(77.15±43.63)ng/L]水平均高于对照组[26.09%、0.13±0.11、(35.73±32.18)ng/L、(18.32±2.51)ng/L、(28.24±31.27)ng/L](P0.05);观察组和对照组鼻黏膜组织GATA-3蛋白阳性表达与血清IL-5(r=0.761,P=0.002;r=0.814,P=0.001)呈正相关,与IL-6(r=0.021,P=0.518;r=0.019,P=0.594)、IL-8(r=0.061,P=0.411;r=0.072,P=0.395)无线性相关。结论慢性鼻窦炎患者鼻黏膜组织GATA-3表达上调,且与血清IL-5水平呈正相关,二者共同促进病情进展。     

星形细胞上调基因-1在原发性肝细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在原发性肝细胞癌组织中的表达及其意义。方法 60例肝细胞癌患者,取其肝癌组织60份为肝癌组,癌旁肝组织54份为对照组,采用荧光定量PCR法检测2组AEG-1mRNA表达情况,采用Western blot法检测AEG-1蛋白表达情况,采用免疫组织化学法检测AEG-1阳性表达率,分析AEG-1蛋白表达与病理指标间的关系。结果肝癌组AEG-1mRNA和蛋白相对表达量(4.71±2.87、1.27±0.62)及AEG-1阳性表达率(53.3%)均明显高于对照组(1.43±0.49、0.69±0.25、29.6%)(P0.05);肝癌组织AEG-1阳性表达水平在肿瘤转移及病理分级上差异无统计学意义(P0.05)。结论 AEG-1在原发性肝细胞癌组织中特异性表达增高,可能是诊断原发性肝细胞癌的生物学标记物。     

PIK3CA在胃癌组织中的表达及其与转移的关系

目的:探讨PIK3CA在胃癌组织中的表达及其与转移的关系。方法:采用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测PIK3CA基因在正常胃黏膜组织、原发胃癌组织、淋巴结转移及远处转移胃癌组织中mRNA和蛋白表达水平,并比较各组间的差别及其与临床病理特征的关系。结果:淋巴结转移胃癌组织中PIK3CAmRNA表达水平最高,分别约为正常胃黏膜组织及原发胃癌组织的5倍和2倍,差异具有统计学意义(P<0.05),但与远处转移胃癌组织比较差异无统计学意义。免疫组化结果表明,PIK3CA蛋白在原发胃癌组织、淋巴结转移及远处转移胃癌组织中阳性率分别为35%、67%和61%。与原发胃癌组织比较,淋巴结转移及远处转移胃癌组织中PIK3CA蛋白表达差异具有统计学意义(35%vs67%,P=0.015;35%vs61%,P=0.044)。此外,胃癌组织中PIK3CA蛋白高表达与淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、临床分期等因素无关(P>0.05)。结论:PIK3CA高表达可能在胃癌的发生发展中具有重要作用,检测PIK3CA表达水平有望成为评价胃癌转移的一个重要指标。     

原癌基因MYC在乳腺癌中的表达及与预后关系

目的探讨乳腺癌患者原癌基因MYC的表达及其临床意义。方法行手术治疗的乳腺癌患者135例,采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中MYC mRNA表达水平,Western blot法检测MYC蛋白表达,免疫组织化学法检测MYC蛋白阳性表达率,分析MYC mRNA及蛋白表达与临床病理特征的关系。结果乳腺癌腋窝淋巴结阳性患者、转移或死亡者组织中MYC mRNA(0.49±0.04、0.50±0.06)及蛋白表达(0.79±0.05、0.82±0.04)和MYC蛋白阳性率(84.3%、95.7%)均高于腋窝淋巴结阴性患者和生存者MYC mRNA水平(0.42±0.11、0.44±0.09)、蛋白表达水平(0.71±0.06、0.72±0.09)及MYC蛋白阳性率(59.5%、63.4%)(P0.05),三阴性乳腺癌组织中MYC蛋白表达(0.80±0.07)高于Luminal型乳腺癌(0.72±0.05)(P0.05)。结论 MYC在三阴性乳腺癌中表达增高,MYC高表达患者预后较差。     

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3GmRNA表达水平与HIV/AIDS患者疾病进展的相关性研究

目的 探讨河南省46例HIV/AIDS患者外周血单个核细胞载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)mRNA表达水平与艾滋病疾病进展的相关性.方法 采用实时定量PCR方法检测HIV感染不同疾病进展期患者外周血单个核细胞APOBEC3G mRNA表达水平;采用流式细胞仪进行CD4+T淋巴细胞的绝对和相对计数;采用全自动载量仪检测血浆HIV病毒载量.结果 河南省46例HIV/AIDS患者外周血单个核细胞APOBEC3G mRNA水平明显低于健康对照(t=4.887,P<0.01),缓慢进展组APOBEC3G mRNA水平显著高于HIV组和AIDS组(P<0.05).HIV/AIDS患者APOBEC3G mRNA表达水平与CD4+T淋巴细胞数呈正相关(R2=0.190,P=0.002),与病毒载量呈负相关(R2=0.094,P=0.038).结论河南省HIV/AIDS患者外周血单个核细胞APOBEC3G mRNA表达水平与HIV感染疾病进程密切相关,APOBEC3G高表达可能是延缓疾病进程的保护性因素之一.     

PCNA和NDRG1表达与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系

目的探讨增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和肿瘤生物标志物下游调节基因(N-Myc downstream-regulated gene 1, NDRG1)蛋白在卵巢恶性上皮肿瘤中的表达情况,分析其表达失调与卵巢癌发生和发展的关系。方法 60例卵巢恶性上皮肿瘤为卵巢癌组,15例卵巢良性肿瘤为卵巢良性肿瘤组,采用免疫组织化学SP法检测2组卵巢组织PCNA和NDRG1蛋白阳性表达率,采用Western blot法检测卵巢组织PCNA和NDRG1蛋白相对表达量,比较2组及卵巢癌组不同临床病理特征患者PCNA和NDRG1蛋白阳性表达率,采用Pearson相关分析卵巢癌组PCNA和NDRG1蛋白表达的相关性。结果 PCNA主要表达于细胞核,少量表达于细胞质;NDRG1表达于细胞膜和细胞质,少量定位于细胞核;卵巢癌组卵巢组织PCNA蛋白阳性表达率(78.33%)和相对表达量(0.43±0.12)高于卵巢良性肿瘤组(20.0%、0.12±0.05)(P0.05),NDRG1蛋白阳性表达率(43.33%)和相对表达量(0.07±0.02)低于卵巢良性肿瘤组(73.33%、0.17±0.05)(P0.05);卵巢癌组病理分级G_1、G_2、G_3级患者PCNA蛋白阳性表达率(50.00%、69.57%、96.30%)依次增高(P0.05),NDRG1蛋白阳性表达率(70.00%、56.52%、22.22%)依次降低(P0.05),有淋巴结转移者NDRG1阳性表达率(9.09%)低于无淋巴结转移者(51.02%)(P0.05);PCNA和NDRG1蛋白阳性表达率在G_2级和G_3级卵巢癌组织中呈负相关(r=-0.690,P0.001;r=-0.745,P0.001),在病理分级G_1级及不同FIGO分期中无相关性(P0.05)。结论 PCNA和NDRG1蛋白在卵巢癌的发生和恶化中发挥重要作用,其机制可能与PCNA蛋白上调、NDRG1蛋白下调有关。     

结直肠癌癌组织NPRL2、PIVKA-Ⅱ的表达水平及临床意义

目的 研究结直肠癌癌组织氮透性调节剂样2(NPRL2)、人异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)的表达水平及临床意义。方法 回顾性分析十堰市太和医院2015年3月至2017年3月收治的68例择期行根治术治疗的结直肠癌患者的临床资料。利用免疫组化检测结直肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织标本中NPRL2、PIVKA-Ⅱ的蛋白表达水平,分析两者与患者临床特征及3年生存率之间的关系,并利用Spearman分析NPRL2、PIVKA-Ⅱ的相关性。结果 结直肠癌组织中NPRL2蛋白阳性表达率(32. 35%)显著低于癌旁组织(88. 24%)及正常结肠组织(90. 00%),PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率(54. 41%)显著高于癌旁组织(2. 94%)及正常结肠组织(0),差异有统计学意义(P 0. 05); Dukes分期C、D期结直肠癌组织中NPRL2的蛋白阳性表达率(21. 88%、8. 33%)显著低于A+B期(58. 33%),Dukes分期C、D期PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率(75. 00、100. 00%)显著高于A+B期(4. 17%),差异有统计学意义(P 0. 05);NPRL2的蛋白阳性表达率与肿瘤淋巴转移、肝转移、临床TNM分期有关(P 0. 05),PIVKA-Ⅱ的蛋白阳性表达率与肿瘤的肝转移、临床TNM分期有关(P 0. 05); 68例结直肠癌患者有32例患者死亡,3年生存率为52. 94%。NPRL2蛋白阳性表达患者的3年生存率(77. 27%)显著高于蛋白阴性表达(41. 30%),PIVKA-Ⅱ蛋白阳性表达组患者的3年生存率(37. 84%)显著低于蛋白阴性组(70. 97%),差异有统计学意义(P 0. 05); Spearman相关分析结果显示,结直肠癌组织中NPRL2蛋白与PIVKA-Ⅱ蛋白的阳性表达率呈负相关(r=-0. 438,P 0. 05)。结论 在结直肠癌组织中NPRL2表达降低、PIVKA-Ⅱ表达升高,且与临床病理参数有一定的关联,同时对于预后评估也有一定的参考价值。     

E2F1对食管癌细胞株ECA109生物学功能的影响及机制

目的探讨E2F1对食管癌细胞株生物学功能的影响及其调控机制。方法食管癌细胞株ECA109分为ECA109阴性对照组(对照组)、ECA109空载体组(空载体组)和ECA109-E2F1过表达组(过表达组)。对照组仅行电转染不加入质粒载体,空载体组电转染不携带E2F1基因的质粒载体,过表达组电转染E2F1过表达质粒载体。质粒转染48h后,3组采用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,采用PCR检测转录因子E2F1、KB抑制蛋白激酶(I kappa B kinase,IKK)、IKKβ、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和survivin mRNA表达情况,采用Western blot法检测E2F1、IKKα、IKKβ、NF-κB、survivin蛋白表达情况。结果过表达组绿色荧光蛋白表现为针尖状,呈强阳性表达,空载体组绿色荧光蛋白表达呈阳性,对照组未见绿色荧光蛋白表达;转染48h后,过表达组G1期细胞比例与空载体组和对照组比较差异无统计学意义(P0.05);过表达组G2期细胞比例[(9.30±4.45)%]和早期凋亡率[(16.50±3.21)%]明显低于空载体组[(18.16±1.25)%、(31.70±5.56)%]和对照组[(17.60±4.42)%、(31.46±2.73)%](P0.05),S期细胞比例[(35.66±2.99)%]明显高于空载体组[(28.86±1.80)%]和对照组[(29.83±1.84)%](P0.05);空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48h后,过表达组E2F1mRNA(1.79±0.18)和蛋白(0.535±0.003)、IKKβmRNA(0.20±0.06)和蛋白(0.394±0.044)、NF-κB mRNA(4.64±0.55)和蛋白(0.043±0.001)、survivin mRNA(2.98±0.20)和蛋白(0.039±0.001)表达水平明显高于对照组[E2F1 mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.009)、IKKβmRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.021)、NF-κB mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.014±0.002)、survivin mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.027±0.003)]和空载体组[E2F1mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.212±0.020)、IKKβmRNA和蛋白(0.99±0.05、0.188±0.018)、NF-κB mRNA和蛋白(0.99±0.03、0.019±0.001)、survivin mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.025±0.002)](P0.05),IKKαmRNA(0.60±0.14)和蛋白(0.614±0.050)表达水平低于对照组(1.00±0.00、0.817±0.055)和空载体组(0.96±0.02、0.733±0.036);对照组与空载体组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 ECA109细胞株中E2F1与survivin存在表达调控关系,E2F1对survivin的表达调控通过激活NF-κB的经典激活通路,导致了survivin的转录激活。     

GYY4137对精索静脉曲张大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响

目的探讨缓释硫化氢供体GYY4137对精索静脉曲张(varicocele, VC)大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组各15只。VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型,假手术组、假手术+GYY4137组仅开腹不结扎左肾静脉。VC+GYY4137组、假手术+GYY4137组术后腹腔注射GYY4137(20 mg/kg GYY4137溶于1 mL生理盐水),1次/d,连续4周,VC组、假手术组腹腔注射等量生理盐水。药物处理4周后处死大鼠,取左侧附睾组织行病理检查,TUNEL法检测4组附睾上皮细胞凋亡指数(apoptotic index, AI),免疫组织化学法检测附睾上皮细胞细胞色素C(cytochrome C, CytC)、caspase-3阳性表达率,Western blot法检测附睾组织CytC、caspase-3蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测附睾组织CytC mRNA、caspase-3 mRNA相对表达量。结果药物处理4周,假手术组、假手术+GYY4137组附睾结构正常、上皮细胞排列整齐,VC组附睾组织结构萎缩、附睾管腔结构破坏、间质水肿,VC+GYY4137组附睾结构破坏、间质水肿程度较VC组轻;药物处理4周,VC组、VC+GYY4137组附睾上皮细胞AI[(23.18±2.09)%、(12.73±1.14)%]、CytC阳性表达率[(25.24±1.99)%、(13.88±1.26)%]及caspase-3阳性表达率[(28.20±2.11)%、(17.33±1.28)%]高于假手术组[(5.46±0.46)%、(5.37±0.77)%、(4.52±0.63)%]、假手术+GYY4137组[(5.86±0.55)%、(5.53±0.52)%、(4.93±0.65)%](P0.05),VC组高于VC+GYY4137组(P0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P0.05);VC组、VC+GYY4137组附睾组织CytC蛋白相对表达量(0.38±0.02、0.27±0.01)、CytC mRNA相对表达量(3.64±0.41、1.55±0.14)、caspase-3蛋白相对表达量(0.27±0.02、0.22±0.01)、caspase-3 mRNA相对表达量(4.09±0.36、2.27±0.32)均高于假手术组(CytC蛋白:0.11±0.03;CytC mRNA:1.01±0.04;caspase-3蛋白:0.10±0.01;caspase-3 mRNA:1.03±0.15)、假手术+GYY4137组(CytC蛋白:0.12±0.01;CytC mRNA:1.00±0.10;caspase-3蛋白:0.09±0.01;caspase-3 mRNA:1.09±0.18)(P0.05),且VC组高于VC+GYY4137组(P0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 GYY4137通过下调VC大鼠附睾组织CytC及caspase-3表达,抑制附睾上皮细胞凋亡,减轻附睾组织损伤。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

GLS1在胃癌患者癌组织的表达水平及其与临床预后的关系

目的探讨GLS1在胃癌患者癌组织的表达水平及其对临床预后的预测价值。方法收集88例行手术治疗的胃癌患者组织样本,包括胃癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学检测组织标本的谷氨酰胺酶1型(GLS1)、Raptor、Rictor蛋白表达,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测组织GLS1、Raptor、Rictor mRNA表达;收集患者临床病理资料,分析GLS1表达水平与胃癌病理资料的关系;对胃癌患者进行随访,分析GLS1表达与患者生存率的关系。结果胃癌组织GLS1蛋白阳性表达率为80.7%(71/88),Raptor阳性表达率为73.9%(65/88),Rictor阳性表达率为88.6%(78/88),癌旁组织分别为38.6%(34/88)、23.9%(21/88)、46.6%(41/88),胃癌组织GLS1、Raptor、Rictor蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织(P0.05)。胃癌组织GLS1、Raptor、Rictor m RNA相对表达量分别为(1.04±0.21)、(1.73±0.32)、(1.32±0.17),均高于癌旁组织(0.65±0.09)、(0.81±0.12)、(0.75±0.11),组间比较差异有统计学意义(P0.05)。肿瘤直径5 cm、低分化肿瘤、Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移、浸润深度为T3~T4者GLS1阳性率明显升高(P0.05)。GLS1阴性患者3年累积生存率(78.1%)高于阳性患者的3年累积生存率(47.2%),差异有统计学意义(P0.05)。多因素分析显示,GLS1表达、分化程度、TNM分期是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P0.05)。结论GLS1在胃癌组织表达显著升高,GLS1表达越高,患者预后越差,GLS1可作为胃癌临床预后评估的指标之一。