电针刺激对脑缺血大鼠神经干细胞分化的影响

目的研究电针刺激对脑缺血大鼠神经干细胞分化的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),随机分为电针组和模型组。电针组电针刺激"百会"和"风府"穴,模型组不予电针。免疫荧光双标法检测5-溴脱氧尿苷-神经元特异性烯醇化酶(BrdU/NSE)和5-溴脱氧尿苷-胶质纤维酸性蛋白(BrdU/GFAP)阳性细胞的表达。结果两组间BrdU/NSE阳性细胞表达比较差异有显著性(F=1 069.23,P<0.01);组内不同时间BrdU/NSE阳性细胞表达比较差异均有显著性(F=1.90、355.51,P<0.01)。组间BrdU/GFAP阳性细胞表达比较差异有显著性(F=28 100.21,P<0.01);组内不同时间BrdU/GFAP阳性细胞表达比较差异有显著性(F=6.50、90.18,P<0.01)。结论电针刺激能促进脑缺血大鼠NSE和GFAP的表达。     

早期干预对HIBD大鼠神经干细胞分化的影响

目的:研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain injury)新生大鼠内源性神经干细胞分化能力的影响。方法:共75只7日龄SD(Sprague Dawley)大鼠,随机分成模型组(n=50)和假手术组(n=25),模型组用Rice法制作50只缺氧缺血性脑病模型,分成HIBD组(n=25)和干预组(n=25)。对干预组进行早期干预,HIBD组和假手术组常规饲养,每组选取1天,7天,14天,21天,28天5个时间点处死5只,每只鼠处死前都进行腹腔BrdU注射标记新生细胞,应用荧光免疫双标技术检测各时间点海马齿状(DG)GFAP/BrdU和NeuN/BrdU阳性细胞数。结果:(1)3组大鼠DG区均有BrdU/NeuN和BrdU/GFAP阳性双标记染色;(2)与假手术组比较,干预组及HIBD组大鼠DG区BrdU/NeuN和BrdU/GFAP阳性双标记染色在术后14,21,28天均有显著增高(P<0.01)。(3)早期干预组大鼠术后14,21,28天时的BrdU/NeuN和BrdU/GFAP阳性双标记染色均显著高于HIBD组(P<0.01)。结论:缺氧缺血致大鼠脑损伤可诱导内源性神经干细胞分化;早期干预可提高脑损伤鼠内源性神经干细胞分化能力。     

Tmem72对小鼠神经干细胞体外增殖和分化的影响

目的 探究跨膜蛋白72(transmembrane protein 72,Tmem72)对小鼠神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法 Western blot检测野生小鼠中Tmem72在不同年龄、不同脑区中的蛋白表达情况;在N2a细胞中瞬时转染Tmem72敲降质粒,利用CCK8、RT-qPCR、Western blot检测基因敲降后的增殖变化,流式细胞术检测细胞周期及凋亡变化;在小鼠神经干细胞中用慢病毒感染细胞,RT-qPCR、Western blot检测敲降效率,并检测增殖和分化标记物的表达变化;转录组测序分析差异表达基因及基因富集的信号通路。结果 Tmem72在不同年龄段及脑区中表达;与对照组相比,Tmem72敲降组在N2a细胞与神经干细胞中Tmem72的表达均显著下调(P<0.05);Tmem72敲降后N2a细胞的增殖能力及活力显著上调(P<0.05),而凋亡能力显著下降(P<0.01);Tmem72敲降后神经干细胞的增殖能力无显著变化,但促进向星形胶质细胞和未成熟神经元的方向分化(P<0.05);转录组测序分析发现差异基因富集到跨突触信号条件、胶质细胞分化...     

水杨酸钠对新生小鼠下丘核区神经干细胞分化的影响

目的　在体外培养新生小鼠下丘核区NSCs的基础上 ,研究水杨酸钠对NSCs分化的影响。方法　分离、收集新生昆明小鼠下丘核区脑组织 ,体外经EGF和bFGF刺激下培养 ;通过免疫细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向和水杨酸钠给药后分化为神经元的细胞的GABA和Glu蛋白表达。结果　培养的部分细胞在特定生长因子的作用下可分裂、增殖 ,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin ,并在撤除生长因子后向神经元和胶质细胞分化。干细胞分化的神经元中的GABA和Glu蛋白表达位于细胞质和细胞核。在无水杨酸钠组两类递质阳性着色细胞数没有明显差异 ;水杨酸钠给药后Glu阳性着色细胞数较GABA阳性着色细胞数明显增加 ,吸光度值比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　①小鼠下丘核区存在着具有多向分化潜能的神经干细胞。②水杨酸钠具有促进NSCs分化为Glu阳性神经元的作用。     

天麻素对海人酸干预的大鼠神经干细胞分化的影响

目的:研究天麻索对海人酸干预的神经干细胞分化的影响及其机制.方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经千细胞,通过免疫组织化学法和免疫荧光法进行鉴定.将神经干细胞分为3组:第1组不加药为空白对照组,第2组加入不同浓度梯度的海人酸,第3组加入天麻素和不同浓度梯度海人酸.计算分化后神经元和胶质细胞比例.结果:培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能,是神经干细胞.海人酸可以有效诱导神经十细胞向胶质细胞分化,天麻素可在一定程度上阻断海人酸的作用,诱导神经干细胞向神经元分化.结论:天麻素可减少海人酸兴奋性的影响,诱导神经干细胞向神经元分化.     

壳寡糖对神经干细胞分化的影响

目的:探讨壳聚糖的降解产物壳寡糖对神经干细胞分化的影响。方法:将壳聚糖降解为分子量1100能够溶于水的壳寡糖,然后将不同浓度的壳寡糖(0.1mg/ml,0.01mg/ml)与神经干细胞共培养12天,研究壳寡糖对神经干细胞分化的影响,对照组采用无壳寡糖培养。结果:实验组的神经干细胞分化的突起平均长度比对照组要长,表明一定浓度的壳寡糖能够促进神经干细胞的分化。结论:用壳聚糖制备人工神经移植物时,壳聚糖导管不仅在神经再生过程可起到支架,细胞依附的作用,同时其降解产物壳寡糖能够起到促进神经生长的作用,而进一步阐明壳聚糖具有多功能的生物学作用。     

孕酮对小鼠放射性脑损伤的神经保护作用及分子机制

目的 探讨孕酮对小鼠放射性脑损伤的神经保护作用及其可能分子机制.方法 144只小鼠分为溶剂对照组、单纯照射组和孕酮组,采用Morris水迷宫实验评价小鼠空间学习和记忆能力;干/湿法测定脑含水量;ELISA法检测脑脊液三磷酸腺苷(ATP)、环氧合酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot法检测脑组织P2X7受体蛋白表达水平.结果 单纯照射组小鼠第4～7天平均潜伏期时间和寻找平台的路径总长均明显大于溶剂对照组,孕酮组明显短于单纯照射组(P=0.0001);单纯照射组脑含水量和细胞凋亡率明显高于溶剂对照组,孕酮组明显低于单纯照射组(P=0. 000 0);单纯照射组脑脊液 ATP、COX-2、TNF-α和IL-6的含量明显高于溶剂对照组,孕酮组明显低于单纯照射组(P=0.010 9、0.004 6、0.007 8、 0.001 4);单纯照射组小鼠脑组织P2X7受体蛋白的表达高于溶剂对照组,而孕酮组P2X7受体蛋白的表达水平明显低于单纯照射组.结论 孕酮可能通过抑制ATP介导的 P2X7R活化和炎症介质的释放,进而减轻脑水肿和减少细胞凋亡,起到保护放射性脑损伤所致的神经损害作用.     

电针治疗放射性脑损伤的相关研究进展

放射线在肿瘤的临床治疗中发挥着重要作用,但放射线照射导致的学习记忆及认知功能障碍也不容忽视.当放射剂量达到一定值后,脑组织内细胞增殖分化受阻、凋亡增多且细胞周期受阻.神经干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,此类细胞日常处于静止状态,但在受到外界损伤时神经干细胞可被重新激活,并增殖分化迁移至受损部位.电针对脑损伤后神经干...     

胚胎小鼠神经干细胞的培养和诱导分化

目的 探索体外培养和诱导分化胚胎小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法 .方法分离12.5 d ICR小鼠胚胎的大脑皮质,通过Accutase酶消化法和机械消化法,将组织消化成单个细胞,置于完全培养基中培养,3d后神经干细胞增殖成神经球;将传代的神经球消化,通过诱导培养基诱导其分化;采用细胞免疫荧光染色和qRT-PCR技术检测巢蛋白(Nestin)、中间微管相关蛋白2(Map2)和胶质纤维酸性蛋白(Gfap)的表达,鉴定NSCs、分化形成的神经元和星形胶质细胞.结果 NSCs能被Nestin特异性标记,诱导分化后的细胞可被Map2和Gfap抗体特异识别;qRT-PCR结果显示,诱导后Nestin的表达水平降低,而Map2和Gfap的表达水平升高.结论 通过Accutase酶消化法联合机械消化法分离小鼠胚胎脑皮质,进行体外培养,可获得具有自我更新能力和多向分化潜能的NSCs.     

ICR小鼠神经干细胞的诱导分化及鉴定

目的 建立一种小鼠神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)的快速诱导分化方法并鉴定诱导分化后的细胞类型.方法 将消化后的单细胞在经Matrigel铺底的盖玻片上进行接种,使用倒置显微镜观察诱导分化后不同时间点的细胞形态变化,并采用神经上皮干细胞蛋白(neuroepithelial stem cell ...     

脑缺氧缺血对不同年龄小鼠脑组织神经干细胞增生与分化的影响

目的：探讨脑缺氧缺血损伤（HI）对不同年龄小鼠脑组织神经干细胞增生与分化的影响。方法：结扎9d龄（P9）、21d龄（P21）C57／BL6小鼠（各10只）左侧颈总动脉后分别给予吸入体积分数为7．7％氧气的氮氧混合气35min（P9小鼠）／30min（P21小鼠）,制成脑HI模型,选取相应天龄正常对照组小鼠各5只,连续腹腔注射新生细胞标记物5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）7d,并分别于末次注射后4周处死小鼠并取脑,采用免疫组织化学染色及免疫荧光染色法分别以成熟神经元细胞标记物、少突细胞标记物、新生小胶质细胞标记物以及星形胶质细胞标记物检测不同日龄小鼠神经干细胞增生与细胞分化情况。结果：细胞增生随着脑组织发育快速下降;HI后P9小鼠皮层和纹状体的BrdU阳性细胞数显著增加,而在P21小鼠,大量的新生细胞仅发现于纹状体区;P9小鼠在皮层和纹状体区、P21小鼠仅在纹状体区检测到极少量新生细胞为成熟神经元细胞,多数分化为胶质细胞;HI后,P9小鼠3种新生胶质细胞在皮层和纹状体区均显著增高,P21小鼠仅发现在纹状体区新生小胶质细胞和星形胶质细胞均增加,新生少突细胞无明显改变。结论：适中的HI损伤可诱导神经干细胞增生和存活,细胞增生和分化与大脑区域和年龄相关。     

不同生长因子对神经干细胞定向分化的影响

目的 研究神经干细胞（NSCs）分化为神经元和胶质细胞的影响因素,探讨各种生长因子对小鼠NSCs定向分化的影响。方法 以无血清培养法从E13-14d的昆明小鼠大脑皮质分离培养获得NSCs后,分别加入50 mg/L EGF、bFGF、IGF-1、NGF和PDGF处理,分析不同生长因子对NSCs定向分化的影响。结果 分离得到的细胞表现出NSCs的特性,能无限增殖,神经元微管相关蛋白和胶原纤维酸性蛋白均呈阳性表达。与空白对照组相比,各生长因子均可显著诱导NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,其中NGF的诱导NSCs分化为神经元的作用最强;IGF-1、NGF、PDGF均能明显诱导NSCs分化为星形胶质细胞。结论 几种生长因子均能促进NSCs分化,其中NGF诱导NSCs向神经元方向作用最强;而IGF-1、NGF和PDGF促进NSCs向星形胶质细胞分化的作用均较强。     

微环境影响神经干细胞分化的研究进展

神经干细胞是神经系统中能够增殖分化成神经元和胶质细胞的特定原始神经细胞,它具有高度的自我更新能力、多潜能分化、迁移功能及良好的组织融合性等特性。目前已在哺乳动物的中枢神经系统多个部位发现并分离出神经干细胞。同时,神经干细胞的分化又受到其所处微环境的影响,因此,对于微环境的研究将对临床治疗神经系统疾病有重要意义。     

昆明小鼠胚胎干细胞定向分化为神经干细胞的实验研究

目的 探讨体外分离培养、诱导胚胎干细胞(ESC)分化为神经干细胞(NSC)的方法.方法 自孕3.5d的昆明小鼠获得附植前的早期胚胎,在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上培养获得ESC克隆. 进行Oct-4免疫细胞化学鉴定、碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定及体外分化能力的鉴定.在无人重组白血病抑制因子(hLIF)存在的条件下将ESC悬浮培养4d,形成拟胚体(EB),再经全反式维甲酸(RA)诱导4d,在神经干细胞筛选培养基中扩增,采用免疫细胞化学方法检测NSC特异性标志物Nestin的表达.结果 所分离得到的ESC的AKP染色阳性,Oct-4表达阳性,符合ESC的一般特性.ESC经RA初步诱导,NSC选择性培养基筛选培养7d后,形成大量神经球样结构,所形成的神经球样结构呈Nestin抗原阳性.结论 体外分离得到的昆明小鼠ESC经RA诱导后,再经选择性培养基筛选培养可获得大量NSC,有望为神经系统损伤及神经变性疾病提供新的治疗途径.     

黄芪皂甙诱导小鼠神经干细胞向神经元分化

目的：观察黄芪皂甙对体外培养的小鼠神经干细胞（NSCs）向神经元分化的影响.方法：采用机械分离、无血清传代培养法从胚胎（E14.5）小鼠室管膜前下区获得NSCs,观察不同浓度（20,40,60mg/L）黄芪皂甙在干预后不同时段（3,7d）的分化情况,通过免疫荧光检测神经元（β-Tubulin）,星形胶质细胞（GFAP）及少突胶质细胞（CC-1）的比例,并采用银杏内酯B（40mg/L）作为阳性对照,正常组为阴性对照,观察黄芪皂甙对小鼠NSCs分化的影响.结果：加入黄芪皂甙培养3,7d后,黄芪皂甙40mg/L及60mg/L组、银杏内酯B组分化为β-Tubulin（＋）神经元比例均显著高于正常对照组,黄芪皂甙两种浓度组间无统计学差异;银杏内酯B组分化为GFAP（＋）星形胶质细胞比例显著高于正常对照组,而黄芪皂甙对星形胶质细胞的分化比例无明显影响.结论：黄芪皂甙能促进NSCs定向分化为神经元,而银杏内酯B促进NSCs向神经元和星形胶质细胞分化.     

BDNF对大鼠胚胎神经干细胞诱导分化的影响

【目的】脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠神经干细胞（NSCs）诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著（P〈0.05）。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组（13.1%）比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。     

黄芩苷对体外培养神经干细胞分化的影响

[目的]探索黄芩苷对体外神经干细胞分化的影响。[方法]培养胎鼠脑皮质神经干细胞,应用细胞免疫化学方法,以神经元特异性的微管相关蛋白-2(MAP-2)和星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)为标记,对分化后的神经干细胞进行区分,评价黄芩苷对神经干细胞分化的影响。[结果]黄芩苷可以促进神经干细胞向神经元分化,其中高剂量组明显优于对照组。[结论]黄芩苷具有促进神经干细胞分化为神经元的作用。     

早期干预对早产儿脑损伤神经发育影响的新进展

近年来,随着科学技术的发展,医疗技术的水平也随着提高,特别是产科和新生儿重症监护技术的快速发展,使早产儿的存活率不断提高,而随之而来的是早产儿脑损伤的发病率也不停的增加。国内外对早产儿脑损伤的研究有了很大的发展,从概念,诊断标准和早期干预方法上都有了深入的研究跟工作的开展。纵观国内外的文献,早产儿脑损伤还没有一个明确的概念和诊断标准,而治疗上主要以早期干预为主。现国际上比较公认的早期干预主要有早期教育、视听刺激、PT、抚触和水疗。而中国的中西医结合的干预方法,就是在西医的基础上在加上中医传统疗法,如中药浴,针灸和推拿等。而中医传统疗法,对早产儿脑损伤的患儿的作用是否有明显不同于单纯西药干预的效果,中医在这个方面是否有它独特的治疗作用和优势,成为今后产科领域探讨的一个方向。