月华丸(胶囊)对耐多药结核菌感染自噬相关蛋白LC3的影响

目的:观察月华丸(胶囊)对结核分枝杆菌感染巨噬细胞自噬的影响,探寻其抗结核分枝杆菌的药效药理作用及其机制。方法:以月华丸(胶囊)含药血清干预感染结核分枝杆菌小鼠的单核巨噬细胞(RAW264. 7),实验共分为5组:阴性对照组、10%月华丸(胶囊)含药血清组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华丸(胶囊)含药血清组、自噬诱导剂雷帕霉素(Rep)组,另设未被感染的细胞为正常组。采用免疫荧光染色法检测LC3。结果:阴性对照组细胞胞浆中未见LC3蛋白颗粒。与阴性对照组比较,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组细胞胞浆中可见少量LC3蛋白颗粒,10%月华丸(胶囊)含药血清组及Rep组细胞胞浆LC3蛋白颗粒均明显增多,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组多于10%月华丸(胶囊)含药血清组。结论:月华丸(胶囊)含药血清能诱导被耐多药结核菌感染巨噬细胞自噬。     

瑶药黄稔根不同极性部位对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的:黄稔根不同极性部位对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨。方法:用系列浓度(12.5、25、50、100、200μg/m L)的黄稔根的不同极性部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)处理RAW264.7细胞,MTT法检测细胞增殖活性;通过LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,采用系列浓度黄稔根不同极性部位处理炎症模型,MTT法检测黄稔根4个不同极性部位对细胞的保护作用。结果:在实验浓度范围内,黄稔根的不同极性部位对细胞无细胞毒性作用。与LPS模型组比较,浓度为50、100、200μg/m L黄稔根乙酸乙酯部位和正丁醇部位能显著改善LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应,具有较好的浓度依赖性。黄稔根石油醚部位与LPS模型组相比仅在200μg/m L浓度下有保护性作用。而不同浓度的黄稔根水部位未表现出保护作用。结论:初步证明了黄稔根乙酸乙酯部位及正丁醇部位对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用。     

铁棍山药促进巨噬细胞吞噬细菌的高内涵分析方法研究

目的建立巨噬细胞系RAW 264.7对绿色荧光蛋白标记的大肠杆菌(GFP-E.coli)吞噬活性的高内涵分析方法,评价铁棍山药在体外对巨噬细胞增殖和吞噬活性的促进作用。方法采用CCK-8法测定铁棍山药作用于RAW 264.7巨噬细胞的增殖活性。采用高内涵技术,建立铁棍山药调节巨噬细胞RAW 264.7吞噬细菌活性的评价方法。结果通过考察给药时间、细菌加入量、细菌刺激时间等因素,确定所建立方法的最佳方案为给药12 h、细菌加入量为50倍、细菌刺激时间1.5 h;方法重复性考察RSD值为2.31%。与不加药组相比,在铁棍山药质量浓度为0.156~1.25 mg/m L都能促进巨噬细胞的增殖,以及单个细胞的平均吞噬率;在1.25 mg/m L时铁棍山药促进巨噬细胞的增殖及吞噬活性的能力最强。结论首次建立铁棍山药促进巨噬细胞吞噬活性的高内涵分析方法,该方法具有准确、直观、高通量等优势;铁棍山药在体外既能促进巨噬细胞增殖,又能提高单个细胞的吞噬能力,为进一步分析山药等补益类中药的免疫活性及增强免疫机制的研究提供新思路和新方法。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

胀果甘草多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究胀果甘草多糖GiP-B1对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响。方法:用浓度为25~400μg·mL~(-1)的GiP-B1与RAW 264.7巨噬细胞共同培养,MTT法检测其细胞增殖率,中性红试验检测其吞噬功能,ELISA法检测其分泌TNF-α、IL-1β的功能,Griess法检测其释放NO和iNOS的能力,RT-q PCR法检测其iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达。结果:给药24 h后,与空白对照组相比,200~400μg·mL~(-1)组的GiPB1可促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,差异极显著(P0.01);50~100μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著促进RAW 264.7巨噬细胞的吞噬作用(P0.05)。作用RAW 264.7巨噬细胞48 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著提高巨噬细胞的IL-1β分泌量(P0.05),100~200μg·mL~(-1)组的GiP-B1则可显著提高巨噬细胞分泌TNF-α的能力(P0.05);不同浓度的GiP-B1干预RAW 264.7巨噬细胞后培养48 h,GiP-B1浓度增至100~400μg·mL~(-1)时,NO生成量显著高于阴性对照组(P0.05),且与GiP-B1浓度存在剂量效应关系;NOS生成量也高于阴性对照组,但仅200μg·mL~(-1)组有显著性差异(P0.05)。给药24 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著增加iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量(P0.05)。结论:一定质量浓度的GiP-B1能增强RAW264.7巨噬细胞增殖率和吞噬能力,促TNF-α、IL-1β、NO及NOS释放,上调iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA水平,从而增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能。     

芎芍胶囊含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察芎芍胶囊大鼠含药血清中脂质对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞24 h,建立RAW264.7源性泡沫细胞模型,添加大鼠含药血清,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞)、模型组(80 mg/L ox-LDL)、正常血清组(10%正常大鼠血清)及正常血清对照组(80 mg/L ox-LDL+10%正常大鼠血清)、辛伐他汀组(80 mg/L ox-LDL+10%辛伐他汀血清)、芎芍胶囊血清组(80 mg/L ox-LDL+10%芎芍胶囊血清)。通过油红O染色观察细胞内胆固醇分布;以胆固醇检测试剂盒检测正常血清组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组血清总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量,检测各组细胞内TC及FC含量。结果模型组细胞形态及染色结果符合泡沫细胞标准;正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组细胞内均含有大量脂滴,且各组细胞内脂质着色无明显差异。与正常血清组比较,辛伐他汀血清、芎芍胶囊血清组TC差异均无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀血清组FC含量升高(P<0.0...     

仙茅不同炮制品对巨噬细胞免疫活性的影响

目的比较仙茅不同炮制品对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法仙茅不同炮制品水提液作用于体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,以细胞活力检测试剂盒(CCK-8)测定其细胞增殖率,中性红试验法测定其中性红吞噬率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其培养上清中活性氧簇(ROS)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌水平。结果仙茅不同炮制品均能提高RAW264.7细胞的增殖及吞噬活性,促进其分泌NO、TNF-α并且拮抗ROS的释放,以苔黑酚葡萄糖苷、盐仙茅效果较为显著。结论盐仙茅能有效提高RAW264.7细胞的免疫活性,苔黑酚葡萄糖苷可能是仙茅中增强RAW264.7细胞免疫活性的有效物质。     

板蓝根活性部位对细胞凋亡和RAW264.7表达IL-10、TNF-α的影响

目的探讨板蓝根活性部位对Hep-2、Hela、U937、Jukart细胞的细胞凋亡和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7表达细胞因子IL-10、TNF-α的影响。方法 0.5 g/L板蓝根活性部位作用于Hep-2、Hela、U937、Jukart 24 h,经PI染色,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响;100TCID50的单纯疱疹病毒(HSV-1)作用于U937,0.5 g/L药物处理24 h,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响。ELISA检测1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物对LPS处理小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7后IL-10、TNF-α表达的影响。结果①0.5 g/L板蓝根活性部位作用24 h对Hep-2、Hela、Jukart、U937细胞凋亡无明显影响,但HSV-1感染U937后药物抗病毒组较病毒组的细胞凋亡率由9.72%下降至6.71%,差异有统计学意义(P<0.01);药物作用于Hela细胞时引起其G1期阻滞(从68.76%延长至74.77%),S期缩短(从31.22%降至21.62%),与正常Hela细胞组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPS刺激1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物组细胞凋亡率分别为19.35%、28.14%、7.52%,明显低于LPS模型组(70.42%),差异有统计学意义(P<0.01)。与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组细胞凋亡率上升(由5.81%升至15.03%),差异有统计学意义(P<0.01),而0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组无明显促进细胞凋亡的效应。与LPS刺激0.5 g/L、0.25 g/L药物组比较,0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组的细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组RAW264.7G1、S期缩短,G2期延长,差异有统计学意义(P<0.01);0.5 g/L药物对照组细胞G1期延长,S期缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。③LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组IL-10、TNF-α明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组IL-10降低,1 g/L药物对照组TNF-α升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与LPS模型组比较,LPS 1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L IL-10刺激药物组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论板蓝根活性部位抑制HSV-1和LPS引起U937、RAW264.7的细胞凋亡,并24 h时下调LPS作用后RAW264.7的IL-10表达。     

槐定碱2种加药方式对LPS激活的RAW264.7巨噬细胞TLR4-JNK通路的影响

目的:观察槐定碱预处理和预混合2种给药方式对脂多糖(LPS)激活的RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)及下游c-jun氨基末端激酶(JNK)、c-jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS的分子机制。方法:将RAW264.7细胞分为5组:RAW264.7细胞对照组加入未加血清的DMEM培养基;LPS组加含100μg/L LPS的DMEM培养基;槐定碱药物组加含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基;槐定碱预处理组以含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基孵育细胞24 h弃去槐定碱,而后加入100μg/L LPS的DMEM培养基继续孵育细胞;槐定碱预混合组以终浓度为31.25 mg/L槐定碱与100μg/L LPS预先混合1 h的DMEM培养基孵育细胞。上述5组处理完毕后于5、30、60、120 min收集细胞,以RT-PCR技术检测RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA表达,免疫细胞化学和Western blot检测细胞c-jun的蛋白的表达。结果:RAW264.7细胞对照组与槐定碱药物组各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组RAW264.7细胞的TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著高于RAW264.7细胞对照组(P0.01或P0.05),但各指标显著升高的时间点有所不同;槐定碱预处理组与槐定碱预混合组RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著低于LPS组(P0.01或P0.05),但各指标显著降低的时间点有所不同。结论:槐定碱可通过调控TLR4-JNK信号转导通路发挥抗LPS作用,其不同加药方式显示的效应表明其作用可能是多环节的。     

橙皮苷对RAW264.7 巨噬细胞泡沫化及ICAM-1 表达的影响

目的：探讨橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及细胞间黏附因子-1表达的影响。方法：体外培养RAW264.7 巨噬细胞,橙皮苷作用于未经诱导的RAW264.7 巨噬细胞及ox-LDL(50 μg?mL- 1）诱导后的RAW264.7巨噬细胞,将细胞分为空白对照组、ox-LDL模型组和橙皮苷给药组。MTT法检测不同浓度的橙皮苷对RAW264.7细胞活性的影响;用油红O染色观察橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞内脂类堆积与泡沫细胞形成。观察橙皮苷对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响;免疫印迹法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的蛋白表达。逆转录聚合酶链反应法检测RAW264.7巨噬细胞中ICAM-1的mRNA表达。结果：橙皮苷浓度大于或等于5 μM时,RAW264.7巨噬细胞存活率大于80%。橙皮苷抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化。橙皮苷能减少泡沫细胞的ICAM-1蛋白表达水平。橙皮苷能减少泡沫细胞ICAM-1 mRNA表达水平。结论：橙皮苷能抑制RAW264.7巨噬细胞泡沫化及ICAM-1的蛋白和mRNA表达,提示橙皮苷具有抗动脉粥样硬化临床应用价值。     

基于巨噬细胞吞噬模型的阿胶品质生物评价方法构建

目的:建立基于小鼠巨噬细胞系RAW 264.7吞噬模型的阿胶生物活性评价方法。方法:采用CCK-8法考察细胞密度、孵育时间以及阿胶对巨噬细胞增殖活性的影响,确定合适的阿胶给药浓度。采用高内涵结合荧光成像技术,通过考察其感染复数(multiplicity of infection,MOI,MOI=细菌数/细胞数)、给药剂量等影响因素,分析阿胶影响巨噬细胞的整体吞噬率及单个细胞吞噬指数。结果:确定最佳检测方法,即给药时间为24 h、MOI值为200倍、细菌刺激时间为2 h。与Control组相比,在阿胶质量浓度为0.125～2.0 mg·mL~(-1)时,可促进巨噬细胞的增殖,在0.5 mg·mL~(-1)时阿胶促进巨噬细胞的增殖能力达到最强;在阿胶质量浓度为0.25～1.0 mg·mL~(-1)时,对单个细胞的吞噬能力没有明显作用,但是对巨噬细胞的整体吞噬率具有剂量依赖的促进作用,并在0.25 mg·mL~(-1)时阿胶促进巨噬细胞吞噬率的能力达到最强。结论:本研究建立了以巨噬细胞吞噬绿色荧光标记的大肠杆菌(Green Fluorescent Protein-Escherichia coli,GFP-E.coli)为生物模型的高内涵荧光成像筛选技术的阿胶品质评价生物方法,可用于对不同品质阿胶的检测。     

景虎通脉方含药血清对巨噬细胞炎症反应及泡沫化形成的作用研究

目的:通过研究景虎通脉方含药血清对巨噬细胞炎症反应及泡沫化形成的影响,探讨景虎通脉方抗动脉粥样硬化的可能机制。方法:大鼠灌胃后制备不同浓度的景虎通脉方含药血清,观察其对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株(RAW264.7)增殖的影响;观察1%景虎通脉方含药血清对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导RAW264.7细胞脂质沉积和泡沫细胞形成的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)及白介素-6(IL-6)水平,油红O染色观察细胞脂质沉积,流式细胞术检测巨噬细胞CD36与CD204表达。结果:与正常对照组比较,10%、5%、2.5%景虎通脉方含药血清均对RAW264.7细胞增殖有不同程度的抑制作用,1%、0.5%含药血清对RAW264.7细胞增殖无明显影响。与模型组比较,1%景虎通脉方含药血清组RAW264.7细胞胞内脂质沉积减少,细胞中IL-1β、IL-6表达明显降低(P0.01),CD36和CD204表达明显降低(P0.01)。结论:景虎通脉方含药血清可能通过减少CD36和CD204的表达,抑制脂质的沉积和泡沫细胞的形成,减少炎症反应,达到抗动脉粥样硬化的目的。     

身痛逐瘀胶囊对LPS诱导RAW264.7细胞释放NO抑制作用的研究

目的:观察身痛逐瘀胶囊对LPS诱导RAW264.7细胞释放NO的抑制作用。方法:以脂多糖诱导RAW264.7细胞,观察不同浓度的身痛逐瘀胶囊(1、5、10、20 mg/ml)处理RAW264.7细胞,MTT法检测细胞活性;同时检测LPS诱导RAW264.7细胞释放NO量以及身痛逐瘀胶囊和12味单味中药水提物干预后RAW264.7细胞释放NO量。结果:身痛逐瘀胶囊作用RAW264.7细胞的安全范围<20mg/ml,与LPS组相比,身痛逐瘀胶囊(1、5、10mg/ml)能有效抑制NO释放,12味单味中药水提物无效。结论:身痛逐瘀胶囊对LPS诱导RAW264.7细胞产生的炎症具有保护作用,其保护机制与抑制NO的释放有关。     

豨桐丸对尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化的影响

目的探讨豨桐丸对尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化的影响。方法巨噬细胞RAW264.7随机分为对照组、模型组(200μg/mL)、秋水仙碱组(0.4μg/mL)及豨桐丸低、中、高剂量组(100、200、400μg/mL)。预给药2 h后,加入尿酸钠晶体诱导RAW264.7细胞,ELISA法检测IL-1β水平,Western blot法检测IκBα、p65表达,试剂盒法检测NF-κB与DNA的结合活性。结果尿酸钠晶体刺激RAW264.7细胞18 h后,IL-1β水平显著升高,30 min后细胞内IκBα表达显著降低,2 h后细胞核中p65表达、NF-κB与DNA的结合活性显著升高(P0.01);200、400μg/mL豨桐丸作用后,IL-1β水平、p65表达、NF-κB与DNA的结合活性显著降低,IκBα表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论豨桐丸通过抑制尿酸钠晶体诱导巨噬细胞NF-κB活化,从而降低IL-1β水平。     

均一猪苓多糖对肿瘤微环境中RAW264.7细胞表达IL-10及相关机制的影响北大核心

目的:探讨在肿瘤微环境中均一猪苓多糖对RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10及其相关机制的影响。方法:建立小鼠膀胱癌细胞MB49与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养的细胞模型,体外模拟肿瘤微环境。实验分为对照组、IL-4(20 ng/mL)组及均一猪苓多糖低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(200μg/mL)浓度组。采用CCK-8实验检测均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法和RT-qPCR法分别检测共培养体系细胞上清中IL-10水平及RAW264.7细胞中IL-10的mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞中IL-10蛋白及激活IL-10的上游信号通路PI3K/AKT/mTOR和下游信号通路JAK1、STAT3、SOCS3、IL-1Ra蛋白表达。结果:与对照组比较,均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖均无明显影响;均一猪苓多糖中、高浓度组及IL-4组促进了肿瘤微环境中RAW264.7细胞IL-10的分泌及细胞中IL-10 mRNA及蛋白表达;不同浓度均一猪苓多糖干预后,均上调了肿瘤微环境中RAW264.7细胞SOCS3、IL-1Ra蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、p-JAK1/JAK1水平。结论:在膀胱癌肿瘤微环境中均一猪苓多糖可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10,同时通过IL-10/JAK1/STAT3通路,上调SOCS3及IL-1Ra协同IL-10发挥抗炎功能。     

桑黄素抑制巨噬细胞氧化应激反应的体外研究

目的 探究桑黄素(Morin)在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW 264.7氧化应激过程中的作用及相关机制。方法 体外培养RAW 264.7细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)组(DMSO)、LPS组(LPS 1 mg/L)、Morin组(Morin 25.0μmol/L)、LPS+Morin组(LPS 1 mg/L+Morin 25.0μmol/L)。经不同浓度Morin预处理后,予LPS 1 mg/L刺激24 h,四唑盐(MTT)比色法检测不同处理对细胞活力的影响。蛋白免疫印迹法(western blot, WB)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Morin(25.0μmol/L)对LPS诱导的RAW 264.7细胞中NADPH氧化酶1(NOX1)、NOX4、核因子2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)的表达。结果 MTT比色法结果显示,LPS(1 mg/L)和Morin(12.5、25.0μmol/L)对RAW 264.7细胞活力均未造成显著影响(P>0.05)。WB和qRT-PCR结果显示,Morin预处理可显著抑制LPS诱导的RAW 264...     

总丹参酮抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨总丹参酮抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的潜在分子机制。方法:MTT检测1、2、4μg/mL总丹参酮对RAW264.7细胞活力的影响;ELISA和qRT-PCR检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞合成分泌细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影响;Western blot检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞iNOS、COX-2及NF-κB、TLR4/MyD88/TAK1通路蛋白表达影响。结果:不同浓度总丹参酮(1、2、4μg/mL)对RAW264.7细胞活力无明显影响;2、4μg/mL总丹参酮显著抑制了LPS诱导RAW264.7细胞中iNOS、COX-2表达及细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β合成分泌增加,阻断了TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号传导。结论:总丹参酮能通过阻断TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号级联反应发挥抗炎作用,提示总丹参酮是一种用于治疗炎性疾病的潜在药物。     

祖师麻对巨噬细胞分泌VEGF和表达HIF-1a的影响

目的:观察祖师麻注射液对巨噬细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响并探讨其机制。方法:将巨噬细胞RAW264.7与脂多糖及不同浓度的祖师麻注射液共同培养,MTT法检测细胞的增殖,ELISA检测细胞培养液中VEGF的含量,Wstern blot检测缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)的表达。结果:随着祖师麻浓度从218.7mg/ml下降至0.3mg/ml,其对RAW264.7细胞增殖的抑制率也从34.04%下降至2.28%;经218.7mg/ml、72.9mg/ml、24.3mg/ml祖师麻处理后,RAW264.7细胞分泌的VEGF从1895±155pg/ml分别减少至1029±175pg/ml、1575±186pg/ml、1550±217pg/ml,同时细胞内HIF-1a的表达也明显降低。结论:祖师麻注射液可抑制巨噬细胞RAW264.7分泌VEGF,其机理与抑制HIF-1a的表达密切相关。     

岩白菜素对LPS诱导RAW264.7细胞炎性因子产生及细胞形态变化的影响

目的:探讨岩白菜素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下RAW264.7细胞产生炎性因子及细胞形态变化的影响。方法:以不同浓度岩白菜素作用RAW264.7细胞24、48 h,记录巨噬细胞形态,将RAW264.7细胞随机分为正常对照组、模型组及岩白菜素300、50μg/mL组,各组设置24、48 h处理,处理完毕后,用RT-PCR法检测LPS诱导的RAW264.7细胞内炎性相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β及参与细胞骨架调节因子RhoA、Rac1、Cdc42的表达。结果:岩白菜素作用RAW264.7细胞24 h后能显著降低细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达,作用48 h后能显著升高TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达。岩白菜素处理细胞48 h后,巨噬细胞骨架调节因子Rac1、Cdc42 mRNA表达显著上调,RhoA mRNA表达显著下调。结论:一定浓度的岩白菜素处理LPS诱导的RAW264.7细胞24 h,巨噬细胞形态变化不明显,能显著发挥抗炎作用,而当岩白菜素作用时间为48 h时,巨噬细胞伪足增多,炎症反应加强。     

参芪扶正注射液对化疗后免疫抑制的减毒作用

目的:探讨参芪扶正注射液含药血清对化疗药物所造成免疫抑制的减毒作用。方法:选用Wistar雄性大鼠20只,随机分为含药血清组和空白血清组。含药血清组按40 g.kg-1.d-1的剂量尾静脉注射参芪扶正浓缩液,每日给药2次,连续给药5次。空白血清组给予生理盐水代替参芪扶正浓缩液,余相同。2组大鼠于末次给药后1 h后自腹主动脉采血,分离血清。研究设药物组和对照组。药物组分别用5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液(50 mg.L-1)、顺铂注射液(6.25 mg.L-1)、参芪扶正注射液含药血清作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞;对照组用空白血清作用于RAW264.7细胞。利用酶标仪对作用后的RAW264.7细胞进行检测,观察5-Fu注射液、顺铂注射液、含药血清对RAW264.7细胞增殖的影响。结果:单用参芪扶正注射液组与空白对照组相比能明显促进RAW264.7细胞增殖(P<0.01)。5-Fu、顺铂注射液联合含药血清后与单用5-Fu、顺铂注射液相比,对于RAW264.7细胞增殖的抑制明显降低,其差异皆有显著性(P<0.01)。结论:参芪扶正注射液在体外环境下可促进巨噬细胞的增殖,改善化疗药物所造成的免疫抑制,对不同化疗药物的减毒趋势相同而减毒强度不同。