变形链球菌thrS基因生物信息学分析及同源重组质粒的构建

背景:变形链球菌是公认的主要致龋菌,细菌的黏附、生物膜形成、产酸、耐酸等各个表型都与细菌的致龋性相关.有研究结果提示,苏氨酰-tRNA合成酶基因(threonyl-tRNA synthetase,thrS)可能与变形链球菌的黏附、产酸、耐酸等致龋性表型相关.目的:对苏氨酰tRNA合成酶基因进行保守性分析,构建用于变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因敲除的重组质粒.方法:首先通过生物信息学结合Southern Blot对苏氨酰-tRNA合成酶基因的保守性进行分析,再将变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因上下游序列分别克隆至自杀质粒pFW5上的多克隆位点,构建用于基因敲除的重组质粒.观察苏氨酰-tRNA合成酶基因的保守性及重组质粒的构建结果.结果与结论:苏氨酰-tRNA合成酶基因在实验中所列6种变形链球菌中保守存在:经过聚合酶链反应和酶切分析,重组质粒所插入片断无误.表明重组质粒pFW5-thrS构建成功.重组质粒pFW5-thrS的构建可用于今后变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因功能的研究.     

抗Jo-1抗体阳性肌炎的临床与病理特点

成人炎性肌病中25%～40%血清中可查到氨酰t-RNA合成酶抗体,在这些肌炎特异性自身抗体中,第一个被发现也是最常见的是抗Jo-1抗体,其抗原是在蛋白质合成中起重要作用的组氨酰t-RNA合成酶,抗Jo-1抗体阳性的多发性肌炎（polymyositis,PM）/皮肌炎（dermatomyositis,DM）在临床上构成一组特殊症候群,称之为Jo-1综合征.该综合征在起病方式、临床表现及实验室检查方面与抗Jo-1抗体阴性的PM/DM患者明显不同.     

蛋白组学中非2D-PAGE的一些新技术

1引言 人类细胞中的全部基因称为基因组，由这些基因编码和调控的蛋白质则称为蛋白质组。人类基因组中有30，000个基因，而人类蛋白组却有100，000多个蛋白质，产生这么多的蛋白质与蛋白质有着复杂的翻译后修饰有关，如磷酸化，乙酰化，糖基化等等。面对如此几倍于基因数量的蛋白质，蛋白组的研究急需高分辨率、高通量和全自动化的蛋白质在线分析和鉴定技术。目前，双相聚丙稀酰氨凝胶电泳（2D-PAGE）与质谱（MS）是分辨和鉴定蛋白质最常用的方法，同时也存在许多缺点，人们正在不断改进和发展新技术，加速蛋白组的研究进展。     

血氨检测在临床肝脏疾病中的应用价值

氨对于人体是一种有害的物质,肝脏是其主要代谢场所,健康人血内有少量游离氨存在[1].血液中氨的来源主要为体内蛋白质代谢过程中产生的氨基酸,以及经脱氨作用分解而来的内源性氨;另一来源是蛋白质类食物在肠道内经细菌分解而成的外源性氨.在正常情况下,肝脏能将氨通过鸟氨酸循环的特殊酶系、鸟氨酸氨基甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸合成酶等作用,合成尿素,再经过肾脏排出.此外,脑和肾脏等器官的氨与谷氨酸作用生成谷氨酰胺后被运输到肝脏,在肝脏转变成尿素或其他含氮化合物后由肾脏排出体外,或形成铵盐随尿排出,这个过程不仅可以解毒,同时还消耗了CO2,故在维持酸碱平衡中也具有重要作用[2].     

尿液对氨基苯甲酸(PABA)的DACA法测定

1976年Arvanitakis 等首先于临床采用口服合成多肽N-苯甲酰-L-酪氨酰-对氨基苯甲酸(N-Benzoy-L-tyrosyl-P-aminobenzoicacid、简称BT-PABA)、回收尿中PABA 作为一种胰腺外分泌功能试验。目前国内多采用     

尿素测定的方法学进展和临床应用

尿素(Urea)是人体蛋白质代谢的终产物,体内的氨基酸经脱氨基作用分解为α-酮酸及氨,在正常情况下,体内的氨主要在肝脏通过尿素循环与二氧化碳生成尿素.尿素的生成量取决于饮食中蛋白质摄入量、组织蛋白质的分解代谢和肝功能状况,健康成人每天约产生16 g尿素.     

测定血管紧张素转化酶连续监测法的最佳条件评估

血浆血管紧张素转化酶Angiotensin-covertingEnzyme.(AEE.EC3.4.15.1)已广泛应用于类肉瘤的诊断及应用ACE抑制剂治疗高血压和心力衰竭的疗效观察.其检测方法是通过水解FAPGG(N-[3-(2-呋喃)丙烯醇酰]-2-苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸)生成FAP(N-[3-(呋喃)丙稀醇酰]-2-苯丙氨酸)和甘氨酰甘氨酸.ACE的参考范围报导不一.试验受多种因素影     

肽酰精氨酸脱亚氨酶催化趋化因子瓜氨酸化

蛋白质分子内精氨酸残基瓜氨酸化是蛋白质翻译后修饰作用之一,肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)催化趋化因子发生瓜氨酸化反应,改变趋化因子的生物学活性,显示出PAD在体内免疫系统中的调节作用。     

质粒介导的替加环素耐药机制的研究进展

1概述替加环素(tigecycline)是四环素类衍生的新型甘氨酰环素类抗菌药物,其在米诺环素的中心构架上增加了9-叔丁基-甘氨酰胺基侧链修饰结构[1]。替加环素进入细菌后可逆地结合于核糖体30S亚单位中的16S r RNA,阻断t RNA进入A位点从而抑制蛋白质转录翻译过程。通过结构研究发现,替加环素与核糖体30S亚基结合的同时,也与核糖体亚基H34残基相互作用,所以两者的结合比其他四环素类药物更牢固,抑制细菌蛋白合成的能力是四环素的20倍[2]。     

新型甘氨酰环素类抗菌药物替加环素的体外药敏试验操作规程

[编者按]替加环素(tigecyclin)是一种甘氨酰环素(glycylcycline)类抗生素,是半合成四环素米诺环素的衍生物.替加环素在细菌核糖体水平上抑制蛋白质合成,是针对MRSA及泛耐药鲍曼不动杆菌等耐药细菌有效的广谱抗菌药物.替加环素于2005年在美国上市,目前全球共有50多个国家和地区批准和上市了替加环素,预定2009年底将在中国上市.     

RNA的催化作用

RNA分子在蛋白质生物合成中仅发挥遗传信息和结构上作用而无酶活性的观念正受到挑战。催化作用RNA在RNA剪接中具有酶活性,RNase P的RNA部分在tRNA成熟过程具有催化性能。有证据表明rRNA在蛋白质生物合成肽键形成中有肽基转移酶活性和氨酰酯酶作用。因此,对RNA的功能需要重新评价。     

血清氨基肽酶测定法的探讨

氨基肽酶是水解酶,可作用于多种氨基酸衍生物。如用亮氨酰-β-萘胺为底物的固定时间法或用亮氨酰对硝基苯胺为底物的连续监测法。本文分别以亮氨酰对硝基苯胺和丙氨酰对硝基苯胺为底物测血中氨基肽酶活性,建立了适合于临床应用的方法和正常值。     

第六章 蛋白质的分解代谢

一、本章学习要点 1.了解蛋白质的生理功用。 2.了解蛋白质的生理需要量、氮平衡和蛋白质的营养价值和必需氨基酸。 3.掌握氨基酸脱氨基作用的主要方式、转氨基作用、转氨酶和联合脱氨基作用。 4.掌握体内氨的来源和氨的去路。谷氨酰胺的生成、尿素的生成。了解氨基酸脱氨基后产生的α-酮酸的去路。 5.个别氨基酸的代谢。了解氨基酸脱羧基作用及其生成的具有生物活性的物质。掌握一碳单位的概念、一碳单位的组成、一碳单位的载体、一碳单位的来源。了解蛋氨酸的代谢、半胱氨酸的代谢和酪氨酸的代     

Bz—MAG3的合成和鉴定

本文报告了Bz-MAG_3的合成和鉴定。用二甘氨酰甘氨酸与β-氯乙酰氯缩合,得到β-氯乙酰甘氨酰甘氨酰甘氨酸(Ⅰ),再用(Ⅰ)与硫代苯甲酸钠缩合,得到Bz-MAG_3。所得产物熔点与文献一致,核磁共振氢谱与元素分析结果均证实结构。Bz-MAG_3经~99mTcD4~-标记后,标记率>95％。小鼠静脉注射后,其药代动力学符合一室模型,半衰期4分钟。大耳兔静脉注射后,1分钟肾影较好,30分钟肾影变淡,揭示肾浓聚快,排泄迅速。     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶在肝胆疾病诊断中的价值

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Slycylprolinedipeptidy laminopeptidase,GPDA），有色特异地水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键（对其他肽键无作用）。用人工合成的X-脯氨酰对硝基苯胺作底物来检测此酶活性发现，以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物时酶活性最强，Km值最小，故称此酶为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶或甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶（glycylproline—p—nitmanilidase）。又由于它也能水解甘氨酰脯氨酰-β-萘胺，故又称为甘氨酰脯氨酰-β萘胺酶（Slycylproly--β-naphthvlamidase）。。     

应用新合成的试剂作基质测定人血浆凝血酶、凝血酶原和抗凝血酶Ⅱ的一种敏感的比色法

测定血浆凝血酶原、凝血酶及抗凝血酶Ⅲ的方法(如免疫法和血凝固试验等)已有不少报导。最近报导用三肽作底物测定血浆凝血酶及抗凝血酶Ⅲ。所用三肽是H-D苯丙氨酰-L-哌可酰-L-精氨酸或Boc-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酸的衍生物对硝酰替苯胺(P-nitroanilide)或氨甲基香豆素酰胺(Aminomethylcoumarinamide)。作者曾报导,L-脯氨酰-L-苯丙氨酰-L-精氨酸-α-萘酯对激肽释放酶是一种高灵敏度的基质,并用对甲苯磺酰-赖氨酸萘酯(Tos-Lys-NE)作基质制备了血纤维蛋白溶酶原的酶谱。本文介绍了用苯甲酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-精氨酸-α-萘酯(Bz-Leu-Ala-Arg-NE)作基质测定血浆凝血酶原和抗凝血酶Ⅲ,并且制备了血浆凝血酶原和凝血酶的酶谱。     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4检测方法的研究进展

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)催化蛋白质分子中精氨酸残基脱亚氨基,产生含瓜氨酸的蛋白质。瓜氨酸化蛋白质与类风湿性关节炎(RA)发病机制有关,PAD4被认为是治疗RA的新靶酶,检测PAD4对研究RA早期诊断方法与筛选RA治疗新药有意义。目前,用于检测分析PAD4的方法有二乙酰一肟比色法、高压液相层析法、连续分光光度监测法、ABAP测定法、荧光标记ABPP测定法等。     

婴儿脑脊液中谷氨酰胺浓度的参考值

肝衰引起脑病是个值得注意的问题。一般认为氨的增加是脑病的发展和严重肝脏病人昏迷的主要原因。进入脑中的大部分氨,将谷氨酸酰胺化而生成谷氨酰胺。骨骼肌将血流中的氨生成谷氨酰胺。在高氨血症,由脑、骨骼肌和其他组织合成谷氨酰胺,是身体解毒去氨的主要机制。脑内氨增加引起神经损伤时,解毒作用系统则可能成为实际有用的途径。所谓肝昏迷的Kreb氏循环缺失学说认为,由于谷氨酸酰胺化作用而使Kreb氏循环的中间产物     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4检测方法的研究进展

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)催化蛋白质分子中精氨酸残基脱亚氨基,产生含瓜氨酸的蛋白质.瓜氨酸化蛋白质与类风湿性关节炎(RA)发病机制有关,PAD4被认为是治疗RA的新靶酶,检测PAD4对研究RA早期诊断方法与筛选RA治疗新药有意义.目前,用于检测分析PAD4的方法有二乙酰一肟比色法、高压液相层析法、连续分光光度监测法、ABAP测定法,荧光标记ABPP测定法等.     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4检测方法的研究进展

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)催化蛋白质分子中精氨酸残基脱亚氨基,产生含瓜氨酸的蛋白质.瓜氨酸化蛋白质与类风湿性关节炎(RA)发病机制有关,PAD4被认为是治疗RA的新靶酶,检测PAD4对研究RA早期诊断方法与筛选RA治疗新药有意义.目前,用于检测分析PAD4的方法有二乙酰一肟比色法、高压液相层析法、连续分光光度监测法、ABAP测定法,荧光标记ABPP测定法等.