青藤碱对痛风性关节炎模型大鼠TNF-α,IL-1β及COX-2的影响

目的:观察青藤碱对痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜炎性细胞因子的影响,并进一步探讨其治疗GA的作用机制。方法:选用SD大鼠90只,随机选出10只作为正常组,其余80只采用尿酸钠诱导大鼠痛风性关节炎模型,于造模7 d后筛选出造模成功(关节炎指数大于4分)的大鼠共50只,随机分为模型组、双氯芬酸钾组、青藤碱低剂量组(25 mg/kg)、青藤碱中剂量组(50 mg/kg)、青藤碱高剂量组(100 mg/kg),每组10只;双氯芬酸钾组灌胃给予25 mg/kg双氯芬酸钾,青藤碱各剂量组分别在大鼠左后肢大腿上1/3外侧肌肉注射青藤碱注射液25,50,100 mg/kg,正常组、模型组大鼠同上述肌注方法注射1 ml/kg生理盐水,每天1次,连续给药21 d。观察GA大鼠踝关节肿胀程度,通过ELISA法测定各组大鼠滑膜悬液中TNF-α和IL-1β的含量,采用免疫组化检测大鼠滑膜组织COX-2的表达。结果:模型组大鼠踝关节肿胀程度随着时间推移逐渐增加,出现踝关节肿胀严重。与模型组比较,双氯芬酸钾组及青藤碱各剂量组关节肿胀明显抑制,差异有统计学意义(P﹤0.01)。双氯芬酸钾组及青藤碱各剂量组滑膜悬液中TNF-α、IL-1β、COX-2含量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P﹤0.01);与双氯芬酸钾组比较,青藤碱高剂量组大鼠滑膜悬液中IL-1β、TNF-α的含量有显著性差异(P﹤0.05);与双氯芬酸钾组比较,青藤碱各剂量组大鼠滑膜组织中COX-2表达略高,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论:青藤碱能有效降低GA大鼠滑膜中TNF-α、IL-1β及COX-2的水平,抑制炎性细胞因子的恶性循环,从而对GA起到治疗作用。     

青藤碱对兔膝骨关节炎模型组织形态学及关节液炎性细胞和聚集蛋白聚糖酶含量的影响

目的观察不同剂量青藤碱对兔膝骨关节炎(OA)模型关节软骨和滑膜组织形态学及关节液白细胞介素(IL)-6、IL-17及聚集蛋白聚糖酶(ADAMTS)-4、ADAMTS-5含量的影响。方法采用Hulth法建立OA模型。将50只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组和青藤碱低、中、高剂量组。空白组不予任何处理,模型组给予生理盐水、给药组给予盐酸青藤碱注射液膝关节腔注射,共干预10次,青藤碱给药量分别为0.2 mL(5 mg)、0.35 mL(8.75 mg)和0.5 mL(12.5 mg)。干预结束后取关节软骨行番红O染色,取滑膜组织行HE染色,进行组织学评分;ELISA检测关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量。结果模型组软骨Mankin’s评分和滑膜组织病理学评分显著高于空白组(P0.01),青藤碱中、高剂量组软骨Mankin’s评分和滑膜评分显著低于模型组(P0.05,P0.01);模型组关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量较空白组显著升高(P0.01),青藤碱中、高剂量组关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量较模型组显著降低(P0.05,P0.01)。结论中、高剂量青藤碱对OA模型病变软骨具有保护作用。     

木瓜三萜对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织中Akt,NF-κB和促炎因子的表达影响

目的:观察木瓜三萜对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠关节滑膜组织中Akt,核转录因子-κB(NF-κB)和炎症因子表达影响,在此基础上探讨其可能机制。方法:80只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜中、高剂量组(50,100 mg·kg~(-1)),除正常组外,其余大鼠右后足跖注射弗氏佐剂造模,木瓜三萜(50,100 mg·kg-1)灌胃(ig)给药,足容积法测量致炎侧足肿胀、进行关节评分;光学显微镜观察关节滑膜病理变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠关节滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测关节滑膜组织中蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和人核转录因子-κB p65(NF-κB p65)表达水平。结果:与正常组比较,大鼠致炎后14 d关节肿胀度达峰值,可见模型组关节滑膜组织炎症反应,如滑膜组织增生,炎细胞浸润;关节组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8含量明显上升,p-Akt和NF-κB p65表达增多(P0.01);与模型组比较,木瓜三萜中、高剂量组能显著抑制AA大鼠足爪肿胀、降低多发性关节评分及改善关节滑膜组织病理变化,降低滑膜组织病理评分,降低关节滑膜组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8含量及p-Akt和NF-κB p65蛋白表达水平(P0.05,P0.01)。结论:木瓜三萜具有显著的抗炎作用,抑制Akt/NF-κB信号通路激活及促炎因子生成可能是其发挥抗炎作用的重要机制之一。     

木瓜醇提物对大鼠类风湿性关节炎模型关节炎症及滑膜细胞凋亡的影响

目的:探讨木瓜醇提取物(CFE)对类风湿性关节炎(RA)大鼠模型的作用及机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,CFE低、中、高剂量组及雷公藤多苷片组。除正常组外,其余各组分别从每只大鼠右后足跖皮内注入完全弗氏佐剂0.1 mL,复制RA模型。灌胃给药,CFE低、中、高剂量组剂量分别为0.15,0.30,0.60 g·kg~(-1)·d~(-1),雷公藤多苷片组的剂量为0.009 g·kg~(-1)·d~(-1),正常组及模型组灌胃等体积的蒸馏水,每天1次,连续30 d。观察大鼠足肿胀度、炎症指数、脏器指数,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠滑膜组织病理变化情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠关节B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及死亡因子(Fas)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠足肿胀度、炎症指数显著升高(P0.01);血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),抗炎因子IL-10显著降低(P0.01),滑膜组织中Bcl-2表达明显升高(P0.05);与模型组比较,CFE中、高剂量组足趾肿胀程度及炎症指数显著降低(P0.01),CFE各剂量组滑膜组织增生及炎症细胞浸润等病理变化减轻,血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平明显降低(P0.05),抗炎因子IL-10明显升高(P0.05),Bax,Fas的表达量升高,Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P0.01)。结论:CFE能够降低RA关节炎症程度,具有较好的抗RA功效,这可能与CFE诱导的关节滑膜细胞凋亡有关。     

淫羊藿苷抗尿酸钠诱导的大鼠急性痛风性关节炎作用

目的:观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对尿酸钠诱导的大鼠急性痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:SD大鼠72只,雄雌各半,随机分为正常组,模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg~(-1)),秋水仙碱组(1.5 mg·kg~(-1)),每组12只,按分组预给药5 d后在大鼠右踝关节腔内注射3.0%尿酸钠溶液100μL复制大鼠GA模型,继续给药48 h,期间测量右踝关节周径并作步态评分。造模48 h后麻醉动物,苏木素-伊红染色观察关节腔积液涂片和关节滑膜白细胞浸润情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定关节囊和滑膜组织中白细胞介素-1β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和前列腺素E_2(PGE_2)含量。蛋白质免疫印迹(Western blot)测定关节囊和滑膜组织环氧化酶-2(COX-2)蛋白含量。结果:模型组大鼠关节周围组织肿胀,步态跛行,关节积液和滑膜组织中大量白细胞浸润,炎症因子IL~(-1)β,IL-6,TNF-α均显著高于正常组,PGE_2含量明显升高(P0.05),关节囊和滑膜组织COX-2蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,ICA低、中、高剂量组可明显改善GA模型大鼠关节肿胀和步态异常,显著降低白细胞浸润和IL~(-1)β,IL-6,TNF-α,PGE_2含量,明显降低COX-2蛋白表达(P0.05)。结论:ICA可通过抑制炎症反应改善尿酸钠诱导的大鼠急性GA症状。     

青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素-1β及白细胞介素-17和骨生长分化因子2的影响

目的观察青藤碱对骨质疏松性压缩骨折家兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17和骨生长分化因子2(GDF2)的影响,探讨其作用机制。方法先将36只雌性家兔去卵巢建立骨质疏松模型,4周后再采用剪断L1-5椎体前缘的方法建立骨质疏松性压缩骨折模型,成模后分为模型组、青藤碱A组和青藤碱B组。青藤碱A组和青藤碱B组分别用10%青藤碱按2 m L/(kg·d)和4 m L/(kg·d)剂量灌胃,模型组灌等体积生理盐水,均1次/d,连续灌胃1个月。于灌胃10,20,30 d拍摄骨痂X射线片对骨痂生长情况进行评分;灌胃前后采用双抗体夹心法检测耳缘静脉血IL-1β、IL-17水平;灌胃结束后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测骨折处骨痂组织中GDF2表达水平,采用RT-PCR法检测骨折处骨痂组织中GDF2 mRNA表达水平。结果灌胃20,30 d后,青藤碱A组和青藤碱B组骨痂生长良好,断层边缘逐渐模糊或消失,骨密度增大,综合评分均明显高于同期模型组(P均0.05),青藤碱A组和青藤碱B组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。灌胃结束后,青藤碱A组和青藤碱B组血清IL-1β、IL-17水平均明显低于模型组(P均0.05),GDF2、GDF2 mRNA表达水平均明显高于模型组(P均0.05),青藤碱A组和青藤碱B组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论青藤碱可通过抑制IL-1β、IL-17介导的炎性反应,提高GDF2诱导成骨分化和骨形成能力,从而促进骨痂生长而加速骨折愈合。     

补阳还五汤对类风湿关节炎小鼠MPO，NE mRNA表达及TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-17的影响

目的:观察不同剂量的补阳还五汤对类风湿关节炎模型小鼠膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidas,MPO),中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE) mRNA表达及血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL~(-1)β),白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6),白细胞介素-17(interleukin-17,IL~(-1)7)的影响。方法:将小鼠随机分为正常组,模型组,甲氨喋呤组(0. 001 5 g·kg~(-1)),补阳还五汤2. 5,1. 25,0. 625 g·kg~(-1)组。采用胶原诱导的方法制备类风湿关节炎小鼠模型,连续灌胃给药28 d后使用病理学方法分析小鼠治疗效果,使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清及关节液中炎性因子的表达,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物蛋白MPO及NE mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠关节明显肿胀(P 0. 01),关节病理积分、血清及关节液中炎性因子水平,膝及踝关节中MPO,NE mRNA表达水平较明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,补阳还五汤组(2. 5 g·kg~(-1))治疗28 d后小鼠小鼠关节肿胀明显减轻(P 0. 05,P 0. 01),关节病理积分、血清及关节液中炎性因子水平,膝及踝关节中MPO,NE mRNA表达水平较明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:适宜剂量的补阳还五汤可下调小鼠膝和踝关节滑膜中性粒细胞标志物蛋白MPO及NE mRNA表达水平,从而抑制中性粒细胞活性,降低血清和关节液中炎性因子TNF-α,IL~(-1)β,IL-6和IL~(-1)7的水平。     

青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎兔软骨和滑膜组织形态学及基质金属蛋白酶-13和软骨寡聚基质蛋白的影响

目的观察青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎模型兔关节软骨和滑膜组织形态学及血清和关节液中基质金属蛋白酶(MMP)-13和软骨寡聚基质蛋白(COMP)含量的影响,探讨青藤碱治疗膝骨关节炎的部分作用机制。方法 38只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组和青藤碱组。空白组不予任何处理,模型组、透明质酸钠组和青藤碱组通过木瓜蛋白酶关节腔注射法诱导膝骨关节炎模型后,分别用生理盐水、透明质酸钠和青藤碱干预。5周后取关节软骨及滑膜HE染色并进行组织学评分,ELISA检测血清及关节液中MMP-13和COMP的含量。结果模型组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著高于空白组,青藤碱组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著低于模型组(P0.01);模型组血清及关节液中MMP-13和COMP含量较空白组显著升高(P0.01);青藤碱组血清、关节液中MMP-13含量较模型组显著降低,关节液中COMP含量较模型组降低(P0.05,P0.01)。结论青藤碱具有改善滑膜炎症、延缓关节软骨退变进程的作用。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠滤泡辅助性T细胞的影响

目的研究青藤碱对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)的影响,探讨青藤碱治疗类风湿关节炎的可能机制。方法 35只DBA/1小鼠随机分为正常组(5只),模型组(10只),青藤碱组(10只),地塞米松组(10只)。青藤碱组予青藤碱溶液74 mg/(kg·d),地塞米松组予地塞米松0. 88 mg/(kg·2d),正常组和模型组予0. 9%氯化钠注射液10 m L/(kg·d),造模后1 d即实验第1 d,各组小鼠均后肢肌肉注射给药,连续用药58 d。实验第21 d开始,计算各组小鼠关节炎指数。实验第59 d处死小鼠,观察关节滑膜病理变化。收集眼眶血,应用流式细胞仪测定小鼠Tfh细胞比例,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素21(IL-21)水平,应用实时免疫荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脾脏组织B细胞淋巴瘤-6(Bcl-6) mRNA水平,应用蛋白免疫印迹法(WB)检测脾脏组织Bcl-6蛋白水平。结果与正常组比较,模型组的关节炎指数、Tfh细胞比例和IL-21水平均升高(P 0. 01),脾脏组织Bcl-6mRNA表达、Bcl-6蛋白水平增加(P 0. 01);与模型组比较,青藤碱组和地塞米松组关节炎指数下降(P 0. 05,P 0. 01),青藤碱组Tfh细胞比例、IL-21水平、脾脏组织Bcl-6 mRNA表达、Bcl-6蛋白水平降低(P0. 05,P 0. 01),地塞米松组Tfh细胞比例降低(P 0. 05),脾脏组织Bcl-6 mRNA表达、Bcl-6蛋白水平比较差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论青藤碱能下调CIA小鼠Bcl-6 mRNA和Bcl-6蛋白的表达,降低Tfh细胞比例,抑制IL-21水平,并改善小鼠的关节炎症状。     

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:探讨桂枝芍药知母汤(GT)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中炎性信号表达的影响。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组化实验,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验,蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GT高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg~(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10-4g·kg~(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,免疫组化检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的表达,Image-Pro Plus6.0图像分析系统测定平均积分吸光度(IA),Western blot检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸酶~(-1)(Caspase~(-1))信号衔接蛋白表达,ELISA测定炎性因子白细胞介素~(-1)β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),核因子-κB(NF-κB)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,模型组大鼠关节滑膜组织中NLRP3,ASC,Caspase~(-1),L~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达明显升高(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显降低(P0.05);与模型组比较,GT高、中剂量组NLRP3,ASC,GT各剂量组Caspase~(-1)表达水平均显著降低(P0.05),Caspase~(-1)2表达明显升高(P0.05),GT各组IL~(-1)β,IL-6,TNF-α,NF-κB表达均明显降低(P0.05)。结论:GT治疗GA的作用机制可能与降低NLRP3,ASC,Caspase~(-1)表达,抑制IL~(-1)β分化成熟及NF-κB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响。方法:将90只大鼠随机分为空白组、模型组、对照组、四神丸高剂量组、四神丸中剂量组和四神丸低剂量组,每组各15只。除空白组外,其余各组制备脾肾阳虚证溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后,空白组则以等体积生理盐水灌胃,对照组以柳氮磺胺嘧啶水溶液0. 5 g·kg-1灌胃,四神丸低剂量组以四神丸药液13 g·kg-1灌胃,四神丸中剂量组以四神丸药液26g·kg-1灌胃,四神丸高剂量组以四神丸药液52 g·kg-1灌胃,模型组灌服等体积生理盐水,共21 d。采用酶联免疫法检测大鼠血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平,并计算IL-1β/IL-4;取胸腺组织称质量并计算大鼠胸腺指数; HE染色观察大鼠结肠损伤情况,用免疫组织化学法检测结肠黏膜IL-13的表达。结果:与空白组比较,模型组胸腺指数明显较低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组胸腺指数高于对照组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组和对照组大鼠血清IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著增高,IL-4含量均降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著降低,其中以四神丸中剂量组降低明显; IL-4含量显著升高,其中以四神丸中剂量组升高明显,差异有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组大鼠血清IL-13含量降低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠结肠组织IL-13蛋白表达增高,其中以四神丸高剂量组表达升高显著,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:四神丸可提高UC大鼠机体免疫功能,抑制炎症反应,其作用机制可能与调节Th1/Th2免疫平衡有关。     

牛膝总皂苷对实验兔膝骨关节炎滑膜组织的影响

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)对兔膝骨关节炎(OA)模型滑膜组织的影响。方法:将40只实验兔分为正常组8只、OA模型组32只,OA造模成功后将OA模型组分为OA模型阳性对照组、OA模型空白组、OA模型TSA低剂量组、OA模型TSA中剂量组、OA模型TSA高剂量组,各6只,分别予硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水、TSA低剂量、TSA中剂量、TSA高剂量灌胃2个月后进行关节粘连改善度测定、滑膜组织病理HE染色、滑膜炎KRENN评分、β-catenin蛋白免疫组化检测,及关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3含量检测。结果:实验兔OA模型造模成功后灌胃2个月,与OA模型空白组关节粘改善度比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA低、中、高剂量组差异有统计学意义(P0.05),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P0.01);滑膜HE染色和滑膜炎评分比较,OA模型空白组见大量滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列紊乱,滑膜组织周边可见较多毛细血管增生,呈重度滑膜炎表现,OA模型阳性对照组见中度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列不规则,滑膜组织周边可见少量毛细血管增生,呈中度滑膜炎表现,OA模型TSA高剂量组见轻度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列尚规则,滑膜组织周边可见微量毛细血管增生,呈轻度滑膜炎表现;β-catenin蛋白免疫组化比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA高剂量组与OA模型空白组比较,差异有统计学意义(P0.01),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P0.05);各组与正常组比较TNF-1,IL-1β,MMP-3指标差异有统计学意义(P0.05),OA模型TSA高剂量组与OA模型阳性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),两者与OA模型空白组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:牛膝总皂苷能有效抑制OA滑膜炎症,改善关节粘连度,降低滑膜组织β-catenin蛋白表达以及减少关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3因子含量,其作用机理有待进一步探索。     

黄芪桂枝五物汤对CIA模型大鼠关节滑膜细胞凋亡的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤(HGW)对胶原诱导型关节炎(CIA)模型大鼠关节滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:选用SD大鼠72只,随机分为正常组,模型组,HGW低、中、高剂量组,Tofacitinib(TFN)组,HGW低、中、高剂量组药物剂量分别为16,32,64 g·kg~(-1),相当于临床常人用量的3,6,12倍,TFN给药剂量为15 mg·kg~(-1),正常组、模型组每日给予10 m L·kg~(-1)蒸馏水。以牛Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂建立CIA大鼠模型,经HGW治疗4周后光镜下观察各组大鼠踝关节病理形态;通过流式细胞术检测白细胞介素(IL)-4,IL~(-1)0含量,免疫组化法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)染色检测滑膜细胞的凋亡。结果:与正常组比较,模型组,HGW低、中、高剂量组,TFN组大鼠滑膜中Bcl-2蛋白表达增多(P0.05),模型组Bax蛋白表达减少(P0.05);与模型组比较,HGW高剂量组,TFN组大鼠滑膜中Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增多(P0.05)。滑膜细胞凋亡可见,与正常组比较,模型组,HGW低、中、高剂量组,TFN组滑膜细胞增多,凋亡率下降(P0.05);与模型组比较,HGW低、中、高剂量组,TFN组大鼠滑膜细胞凋亡率上升(P0.05);与HGW低剂量组比较,HGW高剂量组滑膜细胞凋亡率显著上升(P0.01);与HGW-M组比较,HGW高剂量组滑膜细胞凋亡率上升(P0.05)。结论:黄芪桂枝五物汤可以促进RA大鼠异常亢进的滑膜细胞凋亡。     

抗栓通络丸对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用

目的:探讨抗栓通络丸对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法:将40只健康雄性大鼠随机分为模型组、地尔硫卓组、中药高剂量组及中药低剂量组,每组各10只。模型组给予生理盐水10 mL·kg~(-1)灌胃,中药高剂量组、中药低剂量组及地尔硫卓组分别给予抗栓通络丸浓度为0.045 g·L~(-1)、0.180 g·L~(-1)及地尔硫卓5 mg·kg~(-1)加氯化钠溶液配制成药液灌胃,灌胃1周后采用结扎左冠状动脉前降支方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。动态II导联心电图监测缺血再灌注损伤期间各组大鼠心率及ST段变化值;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量。结果:与模型组比较,中药高剂量组和地尔硫卓组都可有效减慢缺血再灌注损伤不同时间段的心率,差异具有统计学意义(P0.05);中药低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药高剂量组和地尔硫卓组的下降幅度最为明显,缺血20 min起不同时间段比较,差异有统计学意义(P0.05),而中药低剂量组缺血再灌注损伤各时间点ST段的降低幅度与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组、地尔硫卓组都可降低血清中IL-6含量,中药高剂量组高于中药低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:抗栓通络丸可改善缺血再灌注损伤心肌超微结构及异常心电图,降低IL-6含量,抑制炎症反应,从而发挥保护心肌的作用。     

赤雹根总皂苷对II型胶原诱导性关节炎大鼠IL-7表达的影响

目的观察赤雹根总皂苷(Total saponins from Thladiantha dubia root,TSTR)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清、滑膜白细胞介素-7(IL-7)表达的影响,探讨TSTR治疗大鼠CIA的作用机制。方法雄性Wistar大鼠80只,随机取10只作为空白组,其余大鼠均于尾根部及背部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂(CFA)混匀的乳剂,7 d后同法操作,以首次注射后14 d大鼠关节炎指数(AI值)≥4分为造模成功。将成模大鼠随机分为模型组,TSTR高、中、低(80,40,20 mg·kg~(-1))剂量组,雷公藤多苷(Tripterygium Glycoside,TG,12 mg·kg~(-1))组,各药物组均灌胃给予相应药物35 d,每天1次。观察大鼠足爪肿胀度,评估AI值;HE染色观察滑膜病理变化;ELISA法检测大鼠血清中IL-7含量;RT-PCR法检测大鼠滑膜中IL-7 mRNA表达水平;Western Blot检测滑膜中IL-7蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠AI值增高(P0.01),滑膜组织中炎性细胞数量增多,在血清和滑膜中IL-7的含量、基因和蛋白表达均显著增高(P0.01);与模型组比较,TSTR各剂量组AI值明显低于模型组(P0.01),TSTR低剂量组滑膜组织中炎性细胞数量及血管数量明显减少,TSTR中、低剂量组大鼠血清中IL-7含量及滑膜中IL-7 mRNA、蛋白的表达均显著降低(P0.05,P0.01)。结论 TSTR对CIA大鼠的治疗作用可能与抑制血清及滑膜中IL-7的表达有关。     

麝香乌龙丸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织病理形态及TNF-α,IL-6表达的影响

目的:观察麝香乌龙丸对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织病理形态及滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(A)10只,造模组30只.造模组大鼠于右后足跖皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1 mL造成AA模型.将造模成功的造模组随机分为模型组(B)、麝香乌龙丸低、高剂量组(C,D,n=10),ig给予1.0,2.0 g·kg-1的麝香乌龙丸,每日1次;A,B组每日ig生理盐水2 mL/只.30 d后,取跖趾关节,HE染色观察滑膜组织病理形态,免疫组化法检测滑膜组织中TNF-α,IL-6的表达.结果:麝香乌龙丸低、高剂量组滑膜组织破坏程度较模型组明显减轻;TNF-α,IL-6在麝香乌龙丸低、高剂量组中表达均较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05),麝香乌龙丸低、高剂量组比较无统计学意义.结论:麝香乌龙丸能改善AA大鼠滑膜组织病理损害,下调TNF-α,IL-6的表达.     

两个厂家的雷公藤多苷片对CIA模型大鼠干预作用比较

目的:观察并比较湖南千金协力(QJ)和浙江得恩德(DED)两个厂家的雷公藤多苷(TG)片口服后对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的药效及多脏器的干预作用。方法:72只SD大鼠随机分为正常组,模型组,千金协力TG片临床2倍,6倍等效剂量组(QJ-TG 0. 018,0. 054 g·kg~(-1)),得恩德TG片临床2倍,6倍等效剂量组(DED-TG 0. 018,0. 054 g·kg~(-1))。首次免疫后当天开始灌胃给药,每天1次。二次免疫后观察大鼠关节红肿和畸形症状,评价关节炎临床积分,分别在第21,42天取材,进行炎症关节组织病理学检查;血清酶学方法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),谷氨酰转移酶(GGT),总胆红素(TBIL),肌酐(CRE)和尿素(UREA)含量;评估大鼠附睾精子畸形率及睾丸与卵巢组织的损伤程度。结果:两个厂家TG片均能改善CIA模型大鼠炎症关节红、肿和畸形症状,降低临床积分,抑制关节滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏的病理改变。其中,QJ-TG 0. 018,0. 054 g·kg~(-1)组和DED-TG 0. 054 g·kg~(-1)组与模型组比较,有统计学差异(P 0. 05,P 0. 01),DED-TG 0. 018 g·kg~(-1)组与模型组比较未见明显变化;两个厂家相同剂量TG比较,DED-TG 0. 054 g·kg~(-1)组在第12和18 d比QJ-TG同剂量组对临床积分的抑制作用明显(P 0. 05)。除DED-TG 0. 054 g·kg~(-1)组能明显升高白细胞数和脾脏指数外,两个厂家TG片对CIA模型大鼠的体质量、其他脏器指数、消化系统、肝肾功能及肝肾病理均无明显影响,却能不同程度增加CIA雄性大鼠精子畸形率,对睾丸曲细精管造成显著损伤,其严重度随剂量和时间增加而增加,而同等剂量下DED-TG的雄性生殖毒性大于QJ-TG。DED-TG 0. 054 g·kg~(-1)组和QJ-TG 0. 054 g·kg~(-1)组除可见卵巢组织中血管分布减少,黄体体积缩小外,未见其他毒性作用。结论:两个厂家TG片2倍和6倍临床等效剂量口服均能延缓大鼠CIA的发病,降低关节炎临床积分,改善关节病理改变,并有一定程度的雄性生殖毒性。高剂量DED-TG比QJ-TG的毒-效作用更明显。     

活血软膏对兔膝关节损伤所致骨关节炎的影响

目的:观察活血软膏对兔膝关节损伤所致骨关节炎的治疗作用和抗炎镇痛作用。方法:采用大耳白兔60只,雌雄各半,按体质量随机选取10只兔,设为正常组,余下兔在右后腿膝关节的股骨内踝关节面造成关节软骨损伤并剪断前交叉韧带,建立兔膝骨关节炎动物模型。正常组则切开皮肤后立即缝合。手术2周后,按体质量区组随机将兔分为模型组,阳性药物扶他林组(1 cm·kg~(-1)·d~(-1))组,活血软膏高、中、低剂量组(6,3,1.5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。测定兔关节腔液及外周血中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及自由基一氧化氮(NO)含量,并对兔关节软骨进行病理组织学检查,研究活血软膏对兔膝关节炎的治疗作用。采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型和角叉菜胶所致大鼠足肿胀的动物模型,测定小鼠腹腔液吸光度和大鼠足肿胀值,研究活血软膏的抗炎作用。采用热水法致小鼠疼痛甩尾和角叉菜胶致大鼠足压痛的动物模型,记录小鼠甩尾时间和大鼠足压痛的时间,研究活血软膏的镇痛作用。选取SPF级ICR小鼠120只,SD大鼠60只,雌雄各半,按体质量区组随机将小鼠分为模型组,扶他林组(3 cm·kg~(-1)·d~(-1)),活血软膏高、中、低剂量组(16,8,4 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组12只,大鼠随机分为模型组,扶他林组(2 cm·kg~(-1)·d~(-1)),活血散高、中、低剂量组(8,4,2 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。结果:与模型组比较,活血软膏所试剂量,可不同程度地降低兔血清和关节液中的IL-1β,TNF-α,NO的水平,且高剂量组作用明显(P0.05);病理学检查,活血软膏所试剂量,膝关节软骨组织和滑膜组织病变明显轻于模型组(P0.05);活血软膏大中剂量组腹腔液浓度值、足肿胀值明显降低(P0.05),小鼠甩尾镇痛作用,活血软膏大剂量组痛阈率明显高于模型组(P0.05),镇痛作用可持续4 h,活血软膏高、中剂量组的大鼠足压痛值明显升高(P0.05)。结论:活血软膏对兔膝关节损伤所致骨关节炎,具有明显的关节修复和抗炎镇痛作用。     

火针对急性痛风性关节炎大鼠NALP3、IL-1β表达的影响

目的观察急性痛风性关节炎模型大鼠NALP3炎性体及IL-1β的表达,探讨火针对其的影响及可能作用机制。方法 75只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、火针组、针刺组及秋水仙碱组5组,每组15只。除正常组外,其余各组采用氧嗪酸钾联合Coderre方法造模。各组采取相应干预措施。于治疗第1天、治疗第4天、治疗第7天取材记录,采用酶联免疫法检测大鼠血清NALP3及IL-1β水平变化,免疫组化法检测大鼠关节滑膜NALP3、IL-1β的变化。结果 (1)治疗第1天,与正常组比较,模型组、火针组、针刺组及秋水仙碱组关节滑膜NALP3及IL-1β水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。(2)治疗第4天,与正常组比较,模型组及针刺组血清NALP3水平升高,差异有统计学意义(P0.01);模型组、针刺组血清IL-1β水平均升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,火针组及秋水仙碱组血清IL-β、NALP3表达受到抑制,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,火针组、针刺组及秋水仙碱组关节滑膜IL-1β、NALP3表达受到抑制,差异有统计学意义(P0.05)。(3)治疗第7天,与正常组比较,仅模型组血清IL-1β仍处于较高水平,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,仅秋水仙碱组血清IL-1β下降明显,差异有统计学意义(P0.05)。各组NALP3恢复正常水平,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论火针治疗急性痛风性关节炎的分子机制可能与火针具有抑制血清NALP3炎性体的活化和IL-1β的成熟分泌作用相关联。     

中药熏蒸方对佐剂性关节炎大鼠IL-1Ra/IL-1β的影响

目的:研究中药熏蒸方对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血清、关节滑膜组织中的白细胞介素1β(IL-1β)、IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的影响,并探讨其改善类风湿性关节炎(RA)的作用机制。方法:采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,随机分为模型组、MTX组、中药熏蒸组、MTX+中药熏蒸组,分别给予中药熏蒸,MTX(1.9 mL·kg~(-1)·w~(-1))腹腔注射,中药熏蒸+MTX(1.9 mL·kg~(-1)·w~(-1))腹腔注射,另设正常大鼠为正常组,连续给药20天后处死大鼠收集血清、关节滑膜组织。观察大鼠关节肿胀度和关节炎指数的变化,酶联免疫吸附剂(ELISA)测定检测血清IL-1β、IL-1Ra的水平,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测滑膜组织中IL-1β、IL-1Ra mRNA表达量的变化,并观察中药熏蒸方对这些指标的影响。结果:与正常组比较,模型组关节肿胀度和关节炎指数明显升高,血清、滑膜组织IL-1β表达水平明显升高、IL-1Ra表达水平下降;中药熏蒸方能抑制模型组血清、滑膜组织IL-1β的表达,上调血清、滑膜组织IL-1Ra表达量,而中药熏蒸方和MTX两药协同的效果更加明显。结论:中药熏蒸方改善AA大鼠关节炎机制可能与恢复IL-1Ra/IL-1β的平衡相关。