基于IRS-1/PI3K信号轴探究补肺健脾方对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响

目的 探究补肺健脾方(Bufei Jianpi formula, BJF)通过调控IRS-1/PI3K信号轴对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响。方法 将60只SPF级SD大鼠随机分为空白(Control)组、COPD稳定期模型(Model)组、氨茶碱(Am)组、补肺健脾方(BJF)组、吡格列酮(PIO)组以及补肺健脾方+吡格列酮(BJF+PIO)组,10只/组。采用烟熏加鼻腔滴菌(肺炎克雷伯杆菌)的方法建立COPD稳定期大鼠模型,自第9周开始给药至20周结束后取材,每周给予大鼠体重测量。分别对肺组织和骨骼肌组织进行常规切片与HE染色,并于光镜下观察其相应的病理学改变。分别于第0、8、20周采用非束缚全身体积描记系统观察大鼠肺功能,包括VT、PEF、EF50。采用qPCR技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、PGC-1α以及Leptin mRNA的表达。采用Western blot技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、AKT、p-AKT、PGC-1α、TFAM和Leptin蛋白的表达。结果 光镜观察显示与Control组比,Model组肺病理可见肺泡间质以及肺支气管存有...     

健脾补肺化痰方对哮喘大鼠气道胶原蛋白影响

目的:观察健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠气道壁胶原蛋白合成的影响。方法:48只SD大鼠随机分成正常对照组,哮喘模型组,辅舒酮组,健脾补肺化痰方高剂量、中剂量和低剂量组。以卵蛋白(OVA)致敏制备幼龄大鼠哮喘模型,HE染色测气道壁内、外径及网状基底膜层厚度,肺组织石蜡切片行免疫组化染色计算机图像分析测定气道Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果:健脾补肺化痰方高、中、低剂量干预组、辅舒酮组气道壁内、外径比值均高于哮喘模型组,网状基底膜厚度较哮喘模型组显著变薄(P<0.05或P<0.01),健脾补肺化痰方高、中、低各组间比较亦有差异(P<0.05),健脾补肺化痰方高剂量组与辅舒酮组比较无明显差异(P>0.05)。各组气道壁Ⅲ型胶原显著低于哮喘模型组(P<0.05或P<0.01),高、中、低剂量组各组间Ⅲ型胶原含量比较(P<0.05)依次增高。高剂量组与辅舒酮组Ⅲ型胶原含量相当(P>0.05)。结论:健脾补肺化痰方可以通过减少气道壁Ⅲ型胶原沉积和气道壁增厚而抑制气道重塑。     

健脾补肺化痰方对哮喘大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平的影响

目的:探讨健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠的血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平的影响。方法:将40只大鼠随机分为正常组、模型组、健脾补肺化痰方组、地塞米松组4组,每组10只。用卵白蛋白(OVA)雾化激发建立哮喘大鼠模型,用双抗体夹心法检测大鼠动脉血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF的水平。结果:与正常组比,哮喘各组大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比,健脾补肺化痰方组、地塞米松组VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平偏低,有显著差异(P0.01)。健脾补肺化痰方组、地塞米松组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:健脾补肺化痰方可降低大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF的表达,进而对哮喘气道重塑产生抑制。     

益气补肺方对肺损伤大鼠TNF-α和肺组织的影响

目的：探讨益气补肺方对油酸性急性肺损伤大鼠的TNF-α水平、肺脏组织学的影响及保护机制。方法：将50只大鼠随机分为：中药组、西药组、中药＋西药组、模型组和正常五组,每组10只。用油酸诱发急性肺损伤,观察造模后肺系数、血清及肺匀浆TNF-α水平,光镜观察肺组织改变。结果：与油酸组比较,中药组和中＋西药组TNF-α水平明显降低（P〈0.05）,肺泡纤维蛋白渗出和间隔增宽等组织学变化有明显改善（P〈0.05）。结论：益气补肺方对油酸诱发的大鼠急性肺损伤有一定的保护作用,抑制TNF-α生成是其作用机制之一。     

健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠EGF、MMP-9的含量影响

目的:研究表皮生长因子(EGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在幼龄哮喘大鼠气道重塑中的表达及其之间的相关性分析,通过实验初步探讨健脾补肺化痰方对哮喘患儿平喘作用的机理,为中医药防治小儿哮喘提供新的研究思路。方法:48只SD幼龄大鼠随机分成正常对照组,哮喘模型组,辅舒酮组,健脾补肺化痰方高剂量、中剂量和低剂量组,以卵蛋白(OVA)致敏制备幼龄大鼠哮喘模型。采用HE染色观察肺病理组织学变化,采用酶联免疫法(ELISA)检测血清中EGF、肺组织MMP-9的含量变化。结果:正常对照组哮喘大鼠镜下无炎症反应,无气道重塑。模型组炎症反应很重;气道壁明显增厚,气道壁受损,气道管腔狭窄,气道平滑肌层和网状基底膜层增厚;气道上壁纤维化改变明显,具备气道重塑的特征。健脾补肺化痰方低中高剂组大鼠病理变化炎症程度依次减轻,高剂组与辅舒酮组炎症反应相当,炎症反应很轻。各组大鼠血清中EGF、肺组织MMP-9含量与模型组之间有差异性(P0.05或P0.01)。     

健脾补肺化痰方对哮喘大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fos表达影响

目的:探讨健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fos表达的影响。方法:将120只雄性SD幼龄大鼠,随机分为正常组4周(Z4)、8周(Z8)、12周(Z12),模型组4周(M4)、8周(M8)、12周(M12),健脾补肺化痰方组4周(J4)、8周(J8)、12周(J12),地塞米松组4周(D4)、8周(D8)、12周(D12),每组30只,采用卵白蛋白(OVA)雾化激发建立哮喘大鼠模型,用Masson染色法及Img-Pro6.0图像分析系统,分别测定上述时间段各组大鼠肺组织中WAt/Pbm、WAi/Pbm及WAm/Pbm等气道形态学参数,同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组大鼠肺组织中TGF-β_1、c-fosm RNA的表达。结果:与正常组相比,模型组肺组织中TGF-β_1、c-fos的表达及WAt/Pbm、WAi/Pbm、Wam/Pbm等气道形态学参数均有不同程度升高(P0.05);与模型组相比,各治疗组以上指标均有不同程度下调(P0.05);健脾补肺化痰方组与地塞米松组比较,差异无显著性(P0.05)。结论:健脾补肺化痰方可通过下调TGF-β_1、c-fos的表达实现对气道重塑的抑制。     

HIF—1α、VEGF和IGF-1在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）及胰岛素样生长因子-1（IGF—1）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SABC法检测54例HCC组织及14例正常肝组织中HIF-1α、VEGF和IGF—1的表达情况，研究其与HCC生物学行为的关系。结果54例HCC中HIF-1α、VEGFIGF—1的表达均较相应正常肝组织高，差异具有统计学意义。HCC组织中HIF-1α蛋白与VEGF蛋白的表达呈正相关。HCC组织中HIF-1α蛋白与IGF—1蛋白的表达呈正相关。HIF-1α、VEGF的表达与肿瘤的侵袭转移能力密切相关。IGF—1在AFPt〉50μg/ml的HCC组织中高度表达明显高于AFP〈50μg／ml者，差异具有统计学意义。结论肝癌组织中HIF—1α、VEGF和IGF—1蛋白表达可反映肝癌的生物学行为，可作为预测肝癌浸润转移的一项重要指标。     

养阴化纤方对肺纤维化大鼠TNF-α、内皮素-1和羟脯氨酸水平的影响

目的:探讨养阴化纤方对博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用及机制.方法:选取雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、高剂量治疗组和低剂量治疗组5组,每组12只;后4组用盐酸博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,高剂量治疗组和低剂量治疗组分别灌服养阴化纤方药20和10g/kg,阳性对照组灌服等体积的地塞米松,正常对照组灌服等体积的生理盐水;灌药后第7和28天,分别检测大鼠支气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内皮素(ET-1)和肺组织羟脯氨酸(HYP)的水平,同时观察肺组织形态学变化.结果:5组间TNF-α、ET-1和HYP水平比较,差异均有统计学意义(第7天:F值分别为36.823、12.064和51.979,P均<0.001;第28天:F值分别为23.484、19.600和33.631,P均<0.001).且模型对照组的TNF-α、ET-1和HYP水平均高于正常对照组(P均<0.05),阳性对照组、高剂量治疗组和低剂量治疗组的TNF-α、ET-1和HYP水平均低于模型对照组(P均<0.05),肺纤维化程度亦低于模型对照组.结论:养阴化纤方可能是通过降低肺组织TNF-α、ET-1和HYP的水平而达到防治肺纤维化的效应.     

健脾疏肝方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠ADP、TNF-α的影响

目的 观察健脾疏肝方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的疗效及其对脂联素(ADP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分4组,即空白组、模型组、健脾疏肝方组、易善复组.采用高脂饲料连续造模8周,造模成功后,改用普通饲料,同时健脾疏肝方组及易善复组分别给予健脾疏肝方浸膏和易善复混悬液灌胃,...     

肿瘤坏死因子α对COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基表达的影响

目的 研究COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基的表达,以及TNF-α对其表达的影响,探讨COPD大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢的机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、COPD组及COPD+TNF-α组,每组15只.COPD组和COPD+TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予不含和含TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育.利用实时定量PCR和Western blot技术检测C2亚基在转录和蛋白水平的变化.结果 COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基mRNA表达为对照组的1.74倍和1.95倍(P均<0.01),其中COPD+TNF-α组显著高于COPD组(P<0.01).COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基蛋白表达也显著高于对照组(1.04±0.15和1.23±0.16比0.71±0.12,P<0.05和P<0.01),COPD组和COPD+TNF-α组表达无显著差异(P>0.05).结论 COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是经由TNF-α激活泛素一蛋白酶体途径所致.     

健脾补肺化痰方对小儿支气管哮喘缓解期肺功能的影响

【目的】观察健脾补肺化痰方对小儿支气管哮喘缓解期肺功能的影响,探讨中医药防治小儿支气管哮喘的机制。【方法】将60例支气管哮喘缓解期患儿随机分为治疗组和对照组各30例。对照组给予糖皮质激素(丙酸氟替卡松)吸入治疗,治疗组在对照组西药治疗的基础上,给予健脾补肺化痰方(由炙黄芪、太子参、炒白术、防风、茯苓、陈皮、半夏、炙甘草、煅龙骨、煅牡蛎、葶苈子等组成)治疗。观察并比较2组临床疗效及治疗1、2、3、6、9、12个月后呼气峰流速(PEF)值及呼气峰流速变异率(PEFv)等肺功能指标的变化情况。【结果】(1)治疗组总有效率为93.33%,显著优于对照组的83.33%(P0.05)。(2)在整个治疗过程中,治疗组患儿的PEF值均显著高于对照组,PEFv值均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】健脾补肺化痰方可改善肺脾气虚型支气管哮喘缓解期患儿的临床症状,增强患儿的肺功能,降低气道的高反应状态。     

疏肝泻火方对雌性性早熟大鼠血清IGF-1、GH、BGP水平的影响

目的:观察疏肝泻火方对雌性性早熟大鼠身长、胫骨长度和血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、生长激素(GH)、骨钙素(BGP)水平的影响。方法:取SD雌性大鼠60只,随机分为正常对照组、性早熟空白组、亮丙瑞林组以及疏肝泻火高、中、低剂量组6组,除正常对照组外,其余组大鼠采用兴奋性氨基酸-N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)诱导建立性早熟模型,并分别予药物干预,观察大鼠顶臀径、胫骨长度及黄体出现情况,测定血清IGF-1、GH、BGP水平。结果:与性早熟空白组比较,正常对照组、亮丙瑞林组、疏肝泻火高剂量组大鼠顶臀径较小(P0.05);与性早熟空白组比较,亮丙瑞林组与疏肝泻火高、中剂量组血清GH、IGF-1、BGF的浓度均较低(P0.05),低剂量组血清GH、IGF-1浓度较低(P0.05),但高于亮丙瑞林组(P0.05)。结论:疏肝泻火方改善性早熟患儿成年身高的机制可能与降低血清GH、IGF-1、BGF的浓度有关,且治疗效果与疏肝泻火方剂量相关。     

补肺健脾益肾方治疗对老年COPD稳定期患者T淋巴细胞亚群、BODE指数及生活质量的影响

目的:评价补肺健脾益肾方治疗老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期的疗效及对患者外周血T淋巴细胞亚群、BODE指数及生活质量的影响.方法:将80例中医辨证为肺脾肾气虚型COPD稳定期患者随机分组,对照组(40例)仅采取常规西医治疗,而观察组(40例)在常规西医治疗的基础上联合补肺健脾益肾汤,治疗8周后比较临床疗效及患者外周血T淋巴细胞亚群、BODE指数及生活质量的变化.结果:经治疗后观察组BODE指数及BMI积分、FEV1积分、MMRC积分、6MWT积分均较对照组明显减少,差异具有统计学意义(P＜0.05);经治疗后观察组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+较对照组明显升高,CD8 +水平较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);两组经治疗后肺功能指标FEV1和FEV1/FVC均较治疗前有明显改善,差异具有统计学意义(P＜0.05);两组治疗后SGRQ评分均较治疗前明显降低,但观察组治疗后SGRQ评分明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:补肺健脾益肾方用于老年COPD稳定期治疗可改善患者肺功能及BODE指数,提高生活质量,增强细胞免疫功能.     

TNFα对大鼠骨骼肌蛋白质降解速率的影响

目的：研究肿瘤坏死因子α（TNFα）对大鼠骨骼肌蛋白质降解具有促进作用的机制。方法：用TNFα处理在体、高体大鼠骨骼肌。结果：在体组TNFα处理后6h、12h比目鱼肌酪氨酸（Tyr）释放量非常显著地高于对照组（P＜0．01）;24h有所下降,但仍显著地高于对照组（P＜0．05）。三时相点骨骼肌泛素（Ub）含量比对照组皆有显著地增加（P＜0．01）。Tyr释放量、Ub含量变化趋势一致,相关非常显著（P＜0．01）。结论：TNFα具有全身效应,能通过循环系统作用于骨骼肌,并通过增加Ub含量促进骨骼肌蛋白质降解。而TNFα处理后的离体骨骼肌Ub、Tyr释放量皆无显著变化,提示TNFα对Ub系统的作用可能不是直接的,可能还有机体其它因素的参与。     

益气健脾消瘀泄浊方对慢性肾衰竭大鼠骨骼肌自噬的影响

[目的]观察益气健脾消瘀泄浊方对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠骨骼肌自噬的影响,探讨益气健脾消瘀泄浊方在保护肾功能基础上改善CRF大鼠蛋白质-能量营养不良(protein-energy wasting,PEW)的作用和机制。[方法]选择25只无特定病原体(specified pathogen free,SPF)级6周龄雄性SD大鼠建立CRF-PEW模型,并分为模型对照组、阳性对照组、中药治疗组,另选择5只相同遗传背景的SD大鼠作为假手术组;阳性对照组予复方藁-酮酸片混悬液,中药治疗组予益气健脾消瘀泄浊方中药煎剂,模型对照组与假手术组均予等体积0.9%氯化钠注射液,连续灌胃8周。于治疗前后检测大鼠血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清白蛋白(albumin,ALB)、24 h尿蛋白(24 hours urine protein,24 h Upr)水平;检测大鼠骨骼肌p62、微管相关蛋白轻链3A/3B (microtubule-associated protein light...     

间断性缺氧对结肠癌SW480细胞HIF1-α和生存素表达的影响

目的 模拟肿瘤缺氧环境,观察缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1-α,HIF1-α)和生存素在结肠癌SW480细胞中的表达变化.方法 用三气培养箱模拟肿瘤间断性缺氧环境,免疫荧光检测HIF1-α和生存素蛋白的表达部位,RT-PCR和Western blot检测HIF1-α和生存素m...     

健脾补肺化痰方对哮喘气道重塑模型幼龄大鼠全血中五种微量元素的影响

目的探讨健脾补肺化痰方对哮喘气道重塑模型幼龄大鼠全血五元素的影响。方法将180只幼龄大鼠随即分为正常组、模型组、西药组和健脾补肺化痰方组,考察大鼠血浆中Cu、Zn、Ca、Mg和Fe的含量。结果模型组大鼠全血五元素含量与正常组存在显著差异,Zn、Ca浓度低于正常组,Fe浓度高于正常组,说明哮喘的发生与低Zn、低Ca、高Fe密切相关;健脾补肺化痰方各组与模型组比较,Zn浓度明显高于模型组,Cu、Fe浓度明显低于模型组,说明健脾补肺化痰方能改善哮喘气道重塑模型幼龄大鼠的低zn、低Cu、高Fe状态。结论健脾补肺化痰方能改善哮喘气道重塑模型幼龄大鼠的低zn、低Ca、高Fe状态,从而纠正体内各元素的失调,预防哮喘发作具有十分重要意义。     

溃克灵加减方对TNBS结肠炎模型大鼠IGF-1、TGF-β1、CTGF表达的影响

目的:通过检测TNBS结肠炎模型大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的含量,探讨溃克灵加减方(MKKL)抗炎症性肠病纤维化的可能机制.方法:建立TNBS结肠炎模型,应用HE染色、Masson三色胶原染色观察结肠病理组织学变化及胶原纤维增生情况,免疫组化检测结肠IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达变化.结果:与对照组比较,模型组大鼠结肠组织胶原增生,IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达均显著增加(P＜0.01).与模型组比较,原方组、加减方组大鼠结肠胶原增生及IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达均显著减少(P＜0.05).加减方组对IGF-1、TGF-β1蛋白的下调作用明显优于原方组(P＜0.05),对CTGF蛋白的调节作用无统计学意义.结论:溃克灵加减方可能通过减少胶原沉积和下调肠道IGF-1、TGF-β1和CTGF的表达达到抗纤维化的目的.     

IGF-1对大鼠坐骨神经再生早期的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1对大鼠坐骨神经再生早期的影响.方法 建立大鼠坐骨神经切割伤模型,通过硅胶管进行桥接,实验组于再生室内注入胰岛素样生长因子-1,对照组注入等量生理盐水,于术后3、5、7、9、11 d取材,用SABC免疫组化法检测轴突再生情况以及雪旺细胞数目、形态和排列方式的变化.结果 ①雪旺细胞:在对照组,术后3 d,断端间隙内仅可见少量雪旺细胞,术后7 d,雪旺细胞数量明显增多,术后11 d,整个间隙内的雪旺细胞排列呈有序的条索状.在实验组,术后3 d,雪旺细胞即明显增多,以后各相同时相点雪旺细胞数目均明显高于对照组.②再生轴突:在对照组,术后5 d,轴突开始长出,术后7 d轴突快速增长,至第11天,再生的轴突已长过5 mm的间隙到达神经远端.在实验组,术后3 d轴突即开始长出,9 d就快到达远端.结论 胰岛素样生长因子-1能促进轴突延伸和雪旺细胞增殖,明显促进坐骨神经再生.