基于IRS-1/PI3K信号轴探究补肺健脾方对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响

目的 探究补肺健脾方(Bufei Jianpi formula, BJF)通过调控IRS-1/PI3K信号轴对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响。方法 将60只SPF级SD大鼠随机分为空白(Control)组、COPD稳定期模型(Model)组、氨茶碱(Am)组、补肺健脾方(BJF)组、吡格列酮(PIO)组以及补肺健脾方+吡格列酮(BJF+PIO)组,10只/组。采用烟熏加鼻腔滴菌(肺炎克雷伯杆菌)的方法建立COPD稳定期大鼠模型,自第9周开始给药至20周结束后取材,每周给予大鼠体重测量。分别对肺组织和骨骼肌组织进行常规切片与HE染色,并于光镜下观察其相应的病理学改变。分别于第0、8、20周采用非束缚全身体积描记系统观察大鼠肺功能,包括VT、PEF、EF50。采用qPCR技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、PGC-1α以及Leptin mRNA的表达。采用Western blot技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、AKT、p-AKT、PGC-1α、TFAM和Leptin蛋白的表达。结果 光镜观察显示与Control组比,Model组肺病理可见肺泡间质以及肺支气管存有...     

补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺泡表面活性蛋白A、D及肺泡结构的影响

目的:观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠肺泡表面活性蛋白(Surfactant-associated Proteins,SP)-A、SP-D及肺泡结构的影响。方法:将36只COPD大鼠随机分为空白组,模型组,补肺益肾高剂量组、中剂量组、低剂量组,氨茶碱组,采用香烟暴露联合反复细菌感染制备COPD稳定期大鼠模型,空白组、模型组给予生理盐水灌胃,补肺益肾高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予补肺益肾方7.4 g·(kg·d)~(-1)、3.7g·(kg·d)~(-1)、1.85 g·(kg·d)~(-1)灌胃,氨茶碱组给予氨茶碱54 mg·(kg·d)~(-1)灌胃。治疗12周后取材,检测肺组织病理、肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构,荧光定量PCR检测肺组织SP-A、SP-D基因表达,激光共聚焦检测肺组织SP-A、SP-D阳性表达。结果:肺组织病理示,空白组大鼠肺组织结构基本正常;模型组大鼠肺泡壁部分断裂融合,细支气管壁增厚,管壁周围结缔组织增生、炎症细胞浸润,气道内黏液分泌;补肺益肾高剂量组、中剂量组、低剂量组和氨茶碱组均有不同程度减轻,补肺益肾中剂量组减轻尤为明显。肺组织超微结构示,空白组大鼠肺组织肺泡Ⅱ型细胞中可见线粒体丰富,线粒体嵴排列整齐,板层小体完整;模型组Ⅱ型细胞线粒体较小,线粒体嵴较为清晰,但板层小体脱颗粒、空泡化;补肺益肾高剂量组Ⅱ型细胞中线粒体丰富,线粒体嵴清晰,板层小体较少但结构完整;补肺益肾中剂量组Ⅱ型细胞中线粒体丰富且排列整齐,线粒体嵴较为清晰,板层小体丰富且结构完整,细胞边缘绒毛完整;补肺益肾低剂量组和氨茶碱组Ⅱ型细胞中线粒体较少,结构不清晰,板层小体少且部分空泡化。荧光定量PCR示,与空白组比较,模型组肺组织SP-A、SP-D mRNA显著降低(P≤0.01);与模型组比较,补肺益肾高剂量组、中剂量组,氨茶碱组SP-A、SP-D mRNA均显著升高(P≤0.01),补肺益肾低剂量组SP-A mRNA升高(P≤0.01);与补肺益肾高剂量组、中剂量组比较,低剂量组和氨茶碱组SPA、SP-D mRNA均显著降低(P≤0.01)。激光共聚焦显示,与空白组比较,模型组肺组织SP-A、SP-D阳性表达细胞数明显降低(P≤0.01);与模型组比较,补肺益肾高剂量组、中剂量组和氨茶碱组SP-A、SP-D均升高(P≤0.01);与补肺益肾高剂量组比较,中剂量组SP-A、SP-D均升高(P≤0.05或P≤0.01);与补肺益肾中剂量组比较,补肺益肾低剂量组和氨茶碱组SP-A、SP-D均降低(P≤0.01)。结论:补肺益肾方能够改善COPD模型大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中板层小体的结构,调节肺泡表面活性蛋白的合成和分泌,从而维持肺泡结构稳定,以补肺益肾中剂量尤为显著。     

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠模型全身和肺脏炎症反应的影响及远期效应

目的：评价调补肺肾（补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾）三法对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonarydisease,COPD）稳定期大鼠全身和肺脏局部炎症反应的影响及远期效应。方法：将大鼠随机分为6组：对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组。除对照组外,采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型。于第9周分别以补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方和氨茶碱灌胃至第20周,于20、32周分批取材,观察外周血白细胞计数和中性粒细胞比率及血清、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）和肺组织白细胞介素1p（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor—α,TNF—α）、可溶性TNF受体Ⅱ（soluble tumor necrosis factor receptor Ⅱ,sTNFR2）的水平。结果：各组外周血白细胞计数和中性粒细胞比率比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。20周时模型组BALF 中白细胞计数较对照组明显升高（P〈0．01）,3个中药组及氨茶碱组均较模型组显著降低（P〈0．01）,其中补肺健脾组白细胞计数明显低于氨茶碱组（P〈0．05）;第32周,3个中药组的BALF中白细胞计数较氨茶碱组明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,而3个中药组间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。第20和32周,模型组血清和肺组织IL-18、IL-6、IL-8、IL-10、TNF—α、sTNFR2含量,BALF中IL-8、IL-10、TNF—α水平均较对照组显著升高（P〈0．05,P〈0．01）;3个中药组上述因子均较模型组明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,其中3个中药组血清、BALF和肺组织中细胞因子水平较氨茶碱组降低,而以血清和BALF改变明显（P〈0．05,P〈0．01）。第32周外周血清和BALF、肺组织炎症因子表达与20周时比较,差异无统计学意义。结论：补肺健脾、补肺益肾和益气滋肾中药可显著降低COPD稳定期大鼠全身和肺脏局部的炎症反应,且具有良好的远期效应。     

调补肺肾法对COPD大鼠肺组织胶原和基质金属蛋白酶的影响及远后效应

目的观察调补肺肾方法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺组织胶原和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响及远后效应。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、补肺健脾组[4.84 g/(kg.d)]、补肺益肾组[4.44 g/(kg.d)]、益气滋肾组[4.84 g/(kg.d)]和氨茶碱组[2.3 mg/(kg.d)],采用香烟熏吸联合细菌感染法制造COPD稳定期模型。于第9周起分别给予补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方和氨茶碱,给药12周,于第20、32周分批取材,观察肺组织病理、MMP-9、MMP-2、金属蛋白酶组织抵制剂(TIMP)-1和Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原等表达。结果模型组肺组织病理损害明显。第20周时,补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾中药可明显减轻肺组织病理损伤,改善支气管壁增厚、支气管狭窄、肺泡破裂和融合、肺小动脉壁增厚(P<0.05或P<0.01),降低肺组织MMP-9、MMP-2、TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原等表达(P<0.05或P<0.01),在32周仍显著改变(P<0.05或P<0.01),且较氨茶碱组显著(P<0.05或P<0.01)。结论补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾法可明显改善COPD肺组织损害,降低肺组织胶原和基质金属蛋白酶表达,且远后效应良好。     

参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管平滑肌增殖中乙酰化组蛋白H4和NF-κBp65表达的影响

目的:观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证大鼠支气管平滑肌(ASM)增殖中乙酰化组蛋白H4和NF-κBp65表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、中药组、氨茶碱组、模型组,每组各10只。采用气管内滴注脂多糖加烟熏28天的方法建立COPD肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化,运用图像分析法测量小气道管壁和ASM的厚度,采用免疫组化和蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠ASM中乙酰化组蛋白H4的表达。采用免疫组化、实时荧光定量PCR和Western blot方法检测大鼠ASM中NF-κBp65的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道管壁和ASM的厚度明显增厚(P0.05),乙酰化组蛋白H4的蛋白表达与NF-κBp65mRNA和蛋白的表达明显增高(P0.05),中药组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组和氨茶碱组大鼠小气道管壁和ASMC的厚度均明显降低(P0.05),乙酰化组蛋白H4的蛋白表达与NF-κBp65mRNA和蛋白的表达均明显降低(P0.05),中药组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:参芪补肺汤可抑制COPD肺气虚证模型大鼠ASM增殖,其机制与通过降低乙酰化组蛋白H4的表达,从而抑制NF-κBp65表达有关。     

健脾清化方对2型糖尿病大鼠肝脏糖异生的影响

目的:探讨健脾清化方对2型糖尿病大鼠肝脏糖异生的影响。方法:取Wistar大鼠,除正常组外,采用高脂喂养联合小剂量链脲左菌素(STZ)腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠模型,成模后随机分为模型组、健脾清化方组。健脾清化方组予以含生药15 g·kg~(-1)·d~(-1)的混悬液灌胃,正常组和模型组用同体积双蒸水灌胃。连续灌胃4周后观察各组大鼠葡萄糖耐量和丙酮酸耐量,Western blot法测大鼠肝脏糖异生相关蛋白pFOXO1、FOXO1、PEPCK、G6Pase蛋白的表达,RT-PCR法测大鼠肝脏PEPCK、G6Pase的mRNA表达。结果:腹腔葡萄糖耐量和丙酮酸耐量试验结果显示,与正常组比较,模型组各时间点的血糖和曲线下面积(AUC)显著增加(P0.01);与模型组比较,健脾清化方能降低各时间点的血糖和AUC(P0.05)。肝糖异生相关蛋白及mRNA结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏pFOXO1/FOXO1蛋白表达的比值显著降低(P0.01),G6Pase、PEPCK蛋白及mRNA表达显著增加(P0.01);与模型组比较,健脾清化方组大鼠肝脏pFOXO1/FOXO1蛋白表达的比值显著增加(P0.01),G6Pase、PEPCK蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。结论:2型糖尿病大鼠肝脏糖异生增加;健脾清化方可通过影响2型糖尿病大鼠肝脏糖异生相关酶的表达,减少其肝脏糖异生,从而降低血糖。     

槲皮素对慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌损伤的保护作用及其作用机制

目的 探讨槲皮素对气管内注射脂多糖并结合香烟烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型中骨骼肌线粒体及过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)/沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(SIRT3)信号通路的影响.方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=16)、COPD组(n=16)和槲皮素组(n=16).COPD组和槲皮素组大鼠气管内注射脂多糖并结合香烟烟雾暴露建立COPD模型.从第31天开始,对照组和COPD组大鼠灌服生理盐水,槲皮素组COPD大鼠灌服槲皮素(100 mg/kg).实验结束时测量各组大鼠的肺功能,并对骨骼肌线粒体酶活性、氧化参数和细胞因子进行分析.通过实时PCR和Western blot分析大鼠左比目鱼肌组织中PGC-1α和SIRT3的表达.结果 在肺功能参数测定中,COPD组和槲皮素组大鼠峰值呼气流量(PEF)和用力呼气量(FEV)0.3/用力肺活量(FVC)比值均较对照组明显降低(P<0.05).COPD组大鼠骨骼肌线粒体中细胞色素C氧化酶(COX)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性均显著低于对照组(P<0.05);COPD组骨骼肌线粒体丙二醛(MDA)含量明显高于对照组(P<0.05),而锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶活性均显著低于对照组(P<0.05);COPD组大鼠骨骼肌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平均显著高于对照组(P<0.05);所有这些异常经槲皮素治疗均显著减弱(P<0.05).Western blot和实时PCR检测显示,COPD组PGC-1α和SIRT3的蛋白和mRNA水平显著低于对照组(P<0.05).此外,槲皮素组PGC-1α和SIRT3的蛋白和mRNA表达较COPD组显著升高(P<0.05).结论 槲皮素可通过减轻COPD大鼠骨骼肌线粒体功能损伤改善骨骼肌功能障碍,部分原因可能与PGC-1α/SIRT3信号通路上调有关.     

肿瘤坏死因子-α在慢阻肺大鼠骨骼肌蛋白分解代谢中的作用及其机制

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢中的作用及其机制。方法45只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组和COPD TNF-α组,每组15只。COPD组和COPD TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予含或不含有TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育。实时定量PCR和Western blot检测泛素在mRNA和蛋白水平的变化。结果COPD组和COPD TNF-α组泛素mRNA和蛋白的表达均高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。结论COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是TNF-α激活泛素-蛋白酶体途径所致。     

肿瘤坏死因子-α在慢阻肺大鼠骨骼肌蛋白分解代谢中的作用及其机制

目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢中的作用及其机制.方法 45只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组和COPD+TNF-α组,每组15只.COPD组和COPD+TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予含或不含有TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育.实时定量PCR和Western blot检测泛素在mRNA和蛋白水平的变化.结果 COPD组和COPD+TNF-α组泛素mRNA和蛋白的表达均高于空白对照组(P<0.05或P<0.01).结论 COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是TNF-α激活泛素-蛋白酶体途径所致.     

肿瘤坏死因子α对COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基表达的影响

目的 研究COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基的表达,以及TNF-α对其表达的影响,探讨COPD大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢的机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、COPD组及COPD+TNF-α组,每组15只.COPD组和COPD+TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予不含和含TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育.利用实时定量PCR和Western blot技术检测C2亚基在转录和蛋白水平的变化.结果 COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基mRNA表达为对照组的1.74倍和1.95倍(P均<0.01),其中COPD+TNF-α组显著高于COPD组(P<0.01).COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基蛋白表达也显著高于对照组(1.04±0.15和1.23±0.16比0.71±0.12,P<0.05和P<0.01),COPD组和COPD+TNF-α组表达无显著差异(P>0.05).结论 COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是经由TNF-α激活泛素一蛋白酶体途径所致.     

OGP(10-14)及其类似物G48A对成骨细胞IGF-1和Cbfα1表达的影响

目的 探讨成骨生长肽羧基端片段[OGP(10-14)](G36G)及其类似物CM8A对大鼠成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响.方法 体外分离SD大鼠成骨细胞,传代培养后取第3代细胞并用于实验.根据不同处理因素,将成骨细胞分为G36G组(培养液含1×10-11mol/L G36G)、G48A组(培养液含1×10-13mol/L G48A)、甲状旁腺激素(PTH)组(培养液含I×10-8moL/L PTH)和对照组(未处理).运用RT-PCR技术分别检测各组成骨细胞Cbfα1、IGF-1mRNA的表达,并进行统计学比较.结果 G36G组、G48A组、PTH组和对照组Cbfα1 mRNA表达分别为1.123±0.081、1.101±0.115、1.104±0.054、0.893±0.067;IGF-1 mRNA表达分别为1.130±0.067、1.213±0.111、1.173±0.180、0.908±0.081.经统计学分析,G36G组、G48A组和PTH组Cbfα1、IGF-1 mRNA表达较对照组显著上升(均P＜0.05),而其三组间比较无显著差异(P＞0.05).结论 OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞Cbfα1和IGF-1 mRNA的表达具有上调作用.     

电针对血管性痴呆大鼠在体海马CA1区β淀粉样蛋白1-40的影响

【目的】观察电针对血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区β淀粉样蛋白(Aβ1-40)基因与蛋白表达的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,电针组(电针百会、大椎穴),西药组(吡拉西坦,剂量为0.8 mg·kg-1·d-1);后3组采用改良二血管阻断(2-VO)法复制VD模型,并运用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,采用Western blot法检测Aβ1-40蛋白表达,荧光定量PCR法检测Aβ1-40 mRNA表达。【结果】模型组第1~4天逃避潜伏期均显著延长,停留于原平台象限总时间及单次进入原平台的时间均显著减少,海马CA1区Aβ1-40 mRNA和蛋白表达均显著增加(P0.05或P0.01);电针组可显著缩短各时段逃避潜伏期,增加停留于原平台象限总时间及单次进入原平台时间,显著抑制海马CA1区Aβ1-40 mRNA与蛋白表达(均P0.05或P0.01)。【结论】电针改善VD大鼠学习记忆能力与其能抑制VD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40 mRNA与蛋白表达有关。     

健脾补肺化痰方对哮喘大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平的影响

目的:探讨健脾补肺化痰方对幼龄哮喘大鼠的血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平的影响。方法:将40只大鼠随机分为正常组、模型组、健脾补肺化痰方组、地塞米松组4组,每组10只。用卵白蛋白(OVA)雾化激发建立哮喘大鼠模型,用双抗体夹心法检测大鼠动脉血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF的水平。结果:与正常组比,哮喘各组大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比,健脾补肺化痰方组、地塞米松组VCAM-1、ICAM-1、VEGF水平偏低,有显著差异(P0.01)。健脾补肺化痰方组、地塞米松组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:健脾补肺化痰方可降低大鼠血清VCAM-1、ICAM-1、VEGF的表达,进而对哮喘气道重塑产生抑制。     

基于“心脑肾轴”理论探究补肾活血方对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1 α、NRF-1、mtTFA mRNA表达影响

目的旨在基于"心脑肾轴"理论通过该实验探讨补肾活血方对心肌梗死后慢性心衰(chronic heart failure,CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达的影响。方法从80只健康雄性大鼠中,随机选取20只大鼠,作为空白对照组,其余大鼠经结扎法配以节食、力竭式游泳以建立慢性心衰大鼠模型,将造模成功的60只大鼠随机分为中药组、西药组以及模型对照组。中药组(9.2 g·kg~(-1)·d~(-1))、西药组(1.5 mg~(-1)·d~(-1)),灌胃予以相应药物,空白对照组、模型对照组予以等量的去离子水,对每组大鼠行灌胃处理,每日1次。予以灌胃处理28 d后,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中ATP、ADP、NT-proBNP浓度;采用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达量。结果与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的ATP浓度明显下降,ADP、NTproBNP浓度显著升高(P0.01);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P0.05)。与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的PGC-1α、NRF-1、mtTFAmRNA和蛋白表达水平降低,组内之间的差异均有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠PGC-1α、NRF-1、mtTFAmRNA和蛋白表达水平升高,组内之间的差异均有统计学意义(P0.05)。中药组与西药组的ATP、ADP、NT-proBNP浓度以及PGC-1α、NRF-1、mtTFAmRNA和蛋白表达水平无明显差异,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论补肾活血方可使得心梗后心衰大鼠心肌细胞PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA的表达上调,促进PGC-1α、NRF-1、mtTFA蛋白含量增加,从而增加线粒体的生成和ATP产能,改进心肌细胞的能量代谢,以此来改善和纠正心衰。     

IGF-1、PKC在大鼠心肌梗死后左室重构中的表达及意义

目的研究心肌梗死后左室重构(left ventricular remodeling, LVRM)过程中蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达以及药物干预研究.方法 SD雌性大鼠建立心肌梗死模型,随机分为3组,分别为单纯心肌梗死(myocardial infarction, MI)组、卡托普利(captopril, Cap)组和缬沙坦(valsartan, Val)组,另设假手术(Sham)组不结扎冠状动脉.行心脏标本病理分析;用免疫组化染色法检测血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AgT1R)、PKC和IGF-1蛋白的表达;采用RT-PCR方法检测IGF-1 mRNA的表达.结果①MI组左室重量(LVW)和指数(LVWI)及心肌AgT1R、PKC、IGF-1 mRNA及蛋白表达均显著增加,与Sham组比较有差异性(P《0.05, P《0.01);②卡托普利组和缬沙坦组LVWI、AgT1R、PKC、IGF-1 mRNA及蛋白表达均比MI组减少(P《0.05, P《0.01).结论 IGF-1、PKC可能在心肌梗死后大鼠左室重构过程中起重要作用.卡托普利和缬沙坦可能通过抑制IGF-1表达而改善LVRM.     

补肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠黏膜屏障的保护作用研究

背景 人体呼吸道和胃肠消化道具有相似的黏膜结构,黏膜屏障构成机体抵御外邪的第一道防线,当呼吸道感染后刺激黏膜产生局部免疫应答,通过迁移和归巢影响到肠道,导致黏膜局部抗感染能力减弱,诱发黏膜屏障损伤,加重慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺部病变。目的 基于“肺与大肠相表里”中医药经典脏腑理论,观察补肺健脾方对COPD稳定期模型大鼠肺组织炎性因子表达水平,肺、结肠组织肺肠相关活性肽表达水平的影响。方法 2019年9月至2020年12月选取SPF级SD大鼠50只,采用乱数表法将50只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、氨茶碱组和益生菌组,每组10只。1～8周采用香烟烟雾暴露联合鼻腔滴注脂多糖(LPS)制作COPD模型(对照组除外)。各组自第9周起灌胃给药,12周结束后取材。在光镜下观察肺、结肠组织病理变化,采用免疫组化法检测肺组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)分泌型免疫球蛋白A(SIgA)及肺、结肠组织P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)表达水平。结果 对照组大鼠肺、结肠组织结构基本完整;模型...     

OGP(10-14)及其类似物G48A对成骨细胞IGF-1和Cbfα1表达的影响

目的探讨成骨生长肽羧基端片段[OGP(10-14)](G36G)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响。方法体外分离SD大鼠成骨细胞,传代培养后取第3代细胞并用于实验。根据不同处理因素,将成骨细胞分为G36G组(培养液含1×10-11mol/LG36G)、G48A组(培养液含1×10-13mol/LG48A)、甲状旁腺激素(PTH)组(培养液含1×10-8mol/LPTH)和对照组(未处理)。运用RT-PCR技术分别检测各组成骨细胞Cbfα1、IGF-1mRNA的表达,并进行统计学比较。结果G36G组、G48A组、PTH组和对照组Cbfα1mRNA表达分别为1.123±0.081、1.101±0.115、1.104±0.054、0.893±0.067;IGF-1mRNA表达分别为1.130±0.067、1.213±0.111、1.173±0.180、0.908±0.081。经统计学分析,G36G组、G48A组和PTH组Cbfα1、IGF-1mRNA表达较对照组显著上升(均P<0.05),而其三组间比较无显著差异(P>0.05)。结论OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞Cbfα1和IGF-1mRNA的表达具有上调作用。     

缺氧诱导因子-1α在COPD患者外周血单个核细胞中的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中的表达水平及其临床意义.方法 130例受试者分为COPD稳定期组(n=50)、COPD急性加重期(AECOPD)组(n=50)和对照组(n=30)3组.分别应用免疫细胞化学和Western blot检测外周血单个核细胞中HIF-1α的蛋白表达;同时测定受试者的C反应蛋白(CRP).结果 3组HIF-1α表达水平差异有统计学意义(P<0.01),HIF-1α在对照组少量表达,在COPD稳定期组和AECOPD组均有明显表达,且在AECOPD组的表达水平明显高于COPD稳定期组(P<0.01);HIF-1α与CRP有显著的相关性.结论 外周血炎症细胞中HIF-1α可能参与COPD全身慢性炎症反应,同时其蛋白表达水平可能是反映COPD病情的一个重要指标.     

细胞因子信号转导抑制因子3对糖尿病大鼠胰岛素受体底物1及其丝氨酸磷酸化水平的影响

目的 观察糖尿病大鼠肝脏和骨骼肌中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及丝氨酸磷酸化胰岛素受体底物1(PIRS-1Ser307)水平,探讨其在胰岛素抵抗发生中的机制。 方法 将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(20只)和糖尿病组(20只)。对照组大鼠予以普通饲料喂养,糖尿病组大鼠予以高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲霉素,其中16只大鼠制成2型糖尿病模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1 mRNA水平,Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1、PIRS-1Ser307蛋白水平。应用t检验及Pearson直线相关进行数据分析。 结果 ①与对照组相比,糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3 mRNA显著升高(P＜0.05),IRS-1 mRNA显著降低(P＜0.05);糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3和PIRS-1Ser307蛋白显著升高(P＜0.05),IRS-1蛋白显著降低(P＜0.05);②糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3蛋白与IRS-1蛋白呈负相关(r=-0.865、-0.756,P＜0.05),与PIRS-1Ser307蛋白呈正相关(r=0.678、0.663,P＜0.05)。 结论 糖尿病大鼠可能通过上调SOCS-3基因,增加IRS-1丝氨酸磷酸化水平和降低IRS-1表达,诱发胰岛素抵抗。      

六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠PHD2和HIF-1α表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠肾组织中脯氨酸羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨慢性肾衰的发病机制以及六味地黄汤防治慢性肾脏病的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组。5/6肾切除法复制慢性肾衰模型。六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组分别给予3.38 g/(kg·d)、6.75 g/(kg·d)、13.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃。假手术组和模型组给予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模12周后,检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐,HE染色观察各组大鼠肾组织形态学变化,免疫组化法和RT-PCR法分别检测各组大鼠肾组织中PHD2、HIF-1α蛋白水平和基因表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐较假手术组明显升高(P0.05),六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组明显降低(P0.05)。HE染色假手术组大鼠肾组织肾间质纤维化不明显,模型组肾间质纤维化明显,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组肾间质纤维化程度明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠肾组织PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05)。与模型组比较,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾组织中PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),且PHD2与HIF-1αmRNA的表达呈负相关(r=-0.653,P=0.00)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可有效防治慢性肾脏病,其作用机制可能与上调PHD2、降低HIF-1α表达有关。