密蒙花提取物治疗兔去势所致干眼症

目的观察密蒙花提取物对去势所致的干眼症雄免基础泪液分泌量，泪腺局部炎症因子转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor—α，TNF—α）的影响，探讨密蒙花提取物抗雄激素水平下降所致的干眼症的作用机制。方法将30只日本大耳雄兔随机分为空白组（A）、模型组（B）、1倍剂量密蒙花提取物治疗组（C）、2倍剂量密蒙花提取物治疗组（D）和染料木黄酮治疗组（E），每组6只，对B、C、D、E组行雄激素去势术建立动物模型，对C、D、E组分别以密蒙花提取物1倍剂量和2倍剂量以及染料木黄酮连续灌胃1个月，对全部实验兔行Schirmer I试验．采用免疫组织化学方法，对兔泪腺组织中炎症因子TGF-β1、IL-1β、TNF—α进行检测。结果C、D、E组SchirmerI试验测量值明显高于B组（P〈0．01），在泪腺导管及腺泡上皮细胞中．IL-1β、TNF—α．阳性表达的细胞数均明显低于B组，而TGF—β1阳性表达的细胞数均明显高于B组（P〈0．01）。以上检测结果C、D组均优于E组（P〈0．05）。结论密蒙花提取物中主要成分为黄酮类物质，可显著抑制雄激素水平降低后兔干眼症的发生。其作用机制可能与黄酮类物质化学结构与雄激素类似，可起到拟雄激素效应，从而调节泪腺局部炎症反应有关。密蒙花提取物可能成为治疗干眼症的新途径。     

菊花总黄酮对去势导致干眼症雄兔泪腺细胞Fas、FasL表达的影响

目的：观察菊花总黄酮对去势所致干眼症白兔泪腺凋亡相关基因蛋白Fas、FasL表达的影响,探讨菊花总黄酮治疗干眼症的作用机制。
　　方法：将150只雄性日本大耳白兔随机分为正常组( A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、雄激素对照治疗组(D组)和菊花总黄酮治疗组(E组)。 C组、D组、E组行双侧去势术建立白兔干眼症模型。 E组白兔用菊花总黄酮灌胃治疗,D组用雄激素肌肉注射,A组、B组、C组用生理盐水灌胃。分别于治疗后1,3,5mo每组处死10只,取材用与相关指标检测。全部白兔行 SchirmerⅠ试验,并检测泪膜破裂时间,处死后取泪腺组织,采用免疫组织化学法检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Fas、FasL的表达,并计数凋亡细胞数量。
　　结果：E组SchirmerⅠ试验测量所得滤纸湿长明显高于C组(P<0.01),泪膜破裂时间明显长于C组(P<0.01)。 E组治疗1,3,5 mo后,泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas阳性表达的细胞数均明显低于C组,FasL阳性表达的细胞数均明显高于C组,细胞凋亡数量均明显低于C组(P<0.01)。结论：菊花总黄酮中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制雄激素水平降低后白兔干眼症的发生,抑制泪腺细胞凋亡,维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性。     

密蒙花提取物滴眼剂对实验性干眼症鼠泪腺组织细胞凋亡的影响

目的:观察密蒙花提取物滴眼剂对去势所致干眼症雄鼠基础泪液分泌量、泪膜稳定性、泪腺凋亡相关基因蛋白Bax和Bcl-2表达的影响。方法:将45只Wister雄性大鼠随机分为空白组(A1,A2,A3)、模型组(B1,B2,B3)、密蒙花提取物滴眼剂治疗组(C1,C2,C3),共9组,1:饲养1mo,2:饲养2mo,3:饲养3mo,每组5只。B,C组行去势术建立动物模型,C组以密蒙花提取物滴眼剂连续滴眼治疗,对全部实验大鼠行SchirmerⅠ试验、测量泪膜破裂时间,采用免疫组织化学的方法,对大鼠泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Bax和Bcl-2进行检测。结果:C组SchirmerⅠ试验测量值明显高于B组(P<0.01),泪膜破裂时间明显长于B组(P<0.01)。泪腺导管及腺泡上皮细胞中Bax阳性表达的细胞数均明显低于B组,而Bcl-2阳性表达的细胞数均明显高于B组(P<0.01)。结论:密蒙花提取物滴眼剂可显著抑制雄激素水平降低后大鼠干眼症的发生,抑制泪腺细胞凋亡,维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性。     

密蒙花提取物滴眼对干眼症去势鼠泪腺组织雄激素受体数量的影响

目的:观察密蒙花提取物滴眼剂对去势所致干眼症雄鼠基础泪液分泌量、泪膜稳定性、泪腺中雄激素受体表达的影响,探讨密蒙花提取物滴眼剂抗雄激素水平下降所致干眼症的作用机制。方法:将45只Wister雄性大鼠随机分为空白组(A1、A2、A3)、模型组(B1、B2、B3)、密蒙花提取物滴眼剂治疗组(C1、C2、C3),共9组,1代表饲养1mo,2代表饲养2mo,3代表饲养3mo,每组5只,对B、C组行去势术建立动物模型,对C组以密蒙花提取物滴眼剂连续滴眼治疗1mo,对全部实验大鼠行Schirmer I试验、测量泪膜破裂时间,采用流式细胞仪检测泪腺中雄激素受体的表达。结果:C组Schirmer I试验测量值明显高于B组(P<0.01),泪膜破裂时间明显长于B组(P<0.01),显示密蒙花提取物滴眼剂能够显著维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性;C组流式细胞仪检测的AR阳性表达率明显高于B组,显示密蒙花提取物滴眼剂中的有效成分可能有拟雄激素的效应。结论:密蒙花提取物滴眼剂中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制雄激素水平降低后大鼠干眼症的发生,其作用机制可能与黄酮类物质结构与雄激素类似,可以起到拟雄激素效应,从而维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性。     

密蒙花滴眼液对去势雄兔泪腺细胞炎症因子的影响

目的：观察不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔泪腺细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,探讨不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔干眼症模型的疗效。

方法：将密蒙花原药材制备成低、中、高3种浓度滴眼液。将42只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为A：空白组; B：模型组; C：低浓度密蒙花滴眼液组; D：中浓度密蒙花滴眼液组; E：高浓度密蒙花滴眼液组; F：安慰剂滴眼液组; G：睾酮组等7组,每组6只。除A组外其余6组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术。从术后第3天开始C、D、E、F组分别予相应滴眼液滴双眼。各组实验用兔,分别于术前和术后第4wk各进行一次Schirmer I试验(SIT)和泪膜破裂时间(BUT)测定。采用免疫组化法对泪腺细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的表达进行检测。

结果：1)SIT与BUT值比较：术后C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.01); D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05); 2)术后各组炎症因子TNF-α、IL-1β比较：C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.05); D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05)。

结论：1)密蒙花滴眼液具有与雄激素相似的抑制细胞炎症因子表达的作用,但其作用弱于雄激素; 2)中、高浓度密蒙花滴眼液对TNF-α和IL-1β的抑制作用要强于低浓度密蒙花滴眼液,但中、高浓度密蒙花滴眼液的抑制作用差别不明显。     

淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用研究

目的　观察淫羊藿总黄酮对干眼症雄兔泪腺中Bax和Bcl-2表达的作用。方法　随机将80只雄性健康新西兰大耳白兔分为A组（空白组）、B组（手术组）、C组（淫羊藿总黄酮组）、D组（雄激素组）,每组20只。A组以生理盐水进行灌胃,B、C、D三组建立干眼症模型后分别以生理盐水灌胃、淫羊藿总黄酮灌胃、丙酸睾酮肌肉注射进行干预。每组根据喂养时间不同又分为A1~D1组（喂养1个月）和A2~D2组（喂养2个月）,每组10只。A1~D1组于造模前及造模后2周、4周时,A2~D2组于造模后6周及末次最后一次用药后对雄兔进行泪液分泌实验（Schirmer Ⅰ test,SIT）和泪膜破裂时间（BUT）检查;A1~D1组和A2~D2组分别在饲养1个月及2个月时处死雄兔,即刻摘取泪腺,应用Western blot检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果　SIT、BUT检查结果显示,B、C、D三组雄兔均在造模1个月后形成干眼症。C1组、C2组及D1组、D2组雄兔泪腺组织中的Bax相对含量均较B1组、B2组低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);C2组Bax相对含量低于C1组,差异有统计学意义 (P<0.05),而C2组与D2组Bax相对含量差异无统计学意义(P＞0.05);C1、C2组及D1组、D2组雄兔泪腺组织中Bcl-2相对含量均较B1组、B2组高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);C2组Bcl-2表达高于C1组,差异有统计学意义 (P<0.05),而C2组与D2组Bcl-2表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论　淫羊藿总黄酮可提高干眼症雄兔泪腺中Bcl-2 的表达,减少Bax的表达,且随用药时间增长其效果逐渐与雄激素相当。淫羊藿总黄酮很可能是通过促进凋亡相关基因Bcl-2、调低Bax的表达达到抑制细胞凋亡的作用。     

密蒙花总黄酮对去势导致干眼症雄鼠泪腺Bax mRNA、BcL-2 mRNA表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对雄激素水平下降所致干眼症雄鼠的泪腺上皮细胞中Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。方法将健康1月龄、体质量150～180gWistar雄性大鼠150只随机分为A1、B1、C1、D1、E1、A3、B3、C3、D3、E3、A5、B5、C5、D5、E5共15组,每组10只。采用去势的方法建立雄激素水平下降所致干眼症动物模型,分别观察各组SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色情况,以确定干眼症模型是否建立成功。其中,A代表正常组;B代表假手术组;C代表模型对照组;D代表雄激素对照治疗组(造模成功后,丙酸睾酮1mg.kg-1大腿肌肉注射,每3d1次);E代表密蒙花总黄酮治疗组(造模成功后,密蒙花总黄酮0.045g.kg-1灌胃,每3d1次);1代表饲养1个月;3代表饲养5个月;5代表饲养7个月。用RT-PCR法对各组泪腺组织中Bax mRNA、Bcl-2mRNA的表达进行检测,并比较。结果SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色结果显示,大鼠均在造模3个月后形成干眼症。D3组、D5组泪腺组织中的BaxmRNA相对含量较C3组、C5组降低,差异均有统计学意义(均为P<...     

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症模型角膜和泪腺组织中TNF-α,IL-1β表达的影响

目的:探讨密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症动物模型角膜及泪腺组织炎症因子表达的影响与组织损伤的关系。方法:选取150只健康1月龄Wistar雄性大鼠随机分为5组(正常组、假手术组、手术对照组、雄激素治疗组、密蒙花总黄酮治疗组,分别用A,B,C,D,E组表示),每组30只。将C,D,E三组实验鼠切除双侧睾丸及附睾;B组只切开阴囊,不切除睾丸,作为假手术对照组,A组不作处理。自造模后1wk,待伤口基本愈合开始用药。A,B,C组以生理盐水灌胃,1次/d;D组用丙酸睾酮注射液大腿肌肉注射,3d1次;E组以密蒙花提取物生理盐水混悬液灌胃,1次/d。各组实验动物分别于用药1,3,5mo后随机取10只,行SchirmerⅠ试验、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)及角膜荧光素染色检查并处死各组动物,取双眼泪腺、角膜组织采用免疫组织化学方法观察各组角膜和泪腺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)蛋白的表达。结果:A与B组泪腺、角膜上皮细胞中TNF-α,IL-1β阳性表达均不明显;C组泪腺、角膜上皮细胞中TNF-α,IL-1β阳性表达的细胞数明显高于D,E组(P<0.05);D,E各组间差异不显著(P>0.05)。结论:去势雄鼠干眼症角膜和泪腺组织局部炎症反应可能是角膜损伤和泪腺分泌功能丧失的原因之一,TNF-α,IL-1β表达增加与其炎症反应有关。密蒙花总黄酮能够下调去势雄鼠角膜和泪腺局部TNF-α,IL-1β蛋白的表达,可能是其治疗干眼症的关键机制之一。     

密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型中泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。

方法：将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞,随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组),无雄激素培养空白组(以下简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。建立干眼症细胞模型。用Trizol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。

结果：密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。

结论：密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加。密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。     

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症泪腺TGF-β_1及其基因表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对去势雄鼠导致干眼症泪腺TGF-β1及其基因表达的影响。方法90只健康1月龄SPF级Wistar雄性大鼠切除双侧睾丸及附睾建立干眼症模型;30只匹配大鼠切开阴囊而不切除睾丸作为假手术组。手术1周后,雄激素治疗组用丙酸睾酮注射液1 mg/kg股四头肌内注射,每3日1次（30只模型鼠）;密蒙花总黄酮治疗组以密蒙花总黄酮0.02 g/kg与生理盐水混悬液灌胃,每日1次（30只模型鼠）;正常组（30只正常鼠）、假手术组、模型组（30只）以生理盐水灌胃,每日1次。造模1、3、5个月后各组随机抽取10只大鼠处死,取双眼泪腺组织免疫组织化学法检测TGF-β1的表达,采用实时定量PCR（real-time PCR）法荧光定量检测TGF-β1mRNA的表达。结果造模5个月后,正常组和假手术组大鼠泪腺组织细胞中几乎无TGF-β1阳性表达,而模型组、雄激素治疗组和密蒙花总黄酮治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1大量阳性表达,表现为大量棕黄色颗粒沉着。正常组、假手术组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均光密度值（OD）高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）;密蒙花总黄酮治疗组和雄激素治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值大于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）;密蒙花总黄酮治疗组的大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值小于雄激素治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）。TGF-β1mRNA在不同组大鼠泪腺组织细胞中的表达差异比较与TGF-β1表达相同（P〈0.05）。结论密蒙花总黄酮可抑制去势雄鼠干眼症泪腺炎症反应,上调TGF-β1mRNA的表达以增加TGF-β1的合成是其作用途径之一。     

Effects of extract of Buddleja officinalis on partial inflammation of lacrimal gland in castrated rabbits with dry eye

AIM: To assess the effects of extract of Buddleja officinalis on tear secretion volume, tear film stability, expressions of TGF-β1, IL-1β, TNF-α in lacrimal gland of castrated rabbits with dry eye. METHODS: A total of 30 victory rabbits were divided averagely into normal group(A), model group(B), therapy group with low dose extract of Buddleja officinalis (C), therapy group with high dose extract of Buddleja officinalis (D) and therapy group with genistein (E). The dry eye model was established with orchiectomy on Group B, C, D, E. Group C, D, E were administered intragastrically with corresponding dose extract of Buddleja officinalis or genistein for 30 days. All rabbits were detected with SIT. TGF-β1, IL-1β, TNF-α were detected with immunohistochemistry and the ultrastructure of lacrimal gland was observed under transmission electron microscope. RESULTS: The SIT value of group C, D, E were respectively 13.167±4.957, 14.667±5.279, 8.667±0.516, obviously higher than that of group B 5.667±2.338 (P<0.01). The positive expression of IL-1β in acinar cell and glandular tube cell of group C, D were 0.470±0.048, 0.510±0.088, obviously lower than that of group B 0.770±0.118 (P<0.01). The positive expression of TNF-α of group C, D were 0.498±0.156, 0.435±0.069, obviously lower than that of group B 0.769±0.095 too (P<0.01). The positive expression of TGF-β1 of group C, D were 0.406±0.171, 0.497±0.147, obviously higher than that of group B 0.222±0.113(P<0.01). Any result of group C, D was positive compared with that of group E (P <0.05). Ultrastructure of the lacrimal gland of group C, D, E was well preserved, especially in D group it was remarkable. CONCLUSION: The extract of Buddleja officinalis can adjust lacrimal gland partial inflammation of dry eye.     

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼病血清睾酮水平的影响

目的:观察密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼病大鼠模型基础泪液分泌量、泪膜稳定性及血清睾酮水平的影响,探讨密蒙花总黄酮抗性激素水平失调导致的大鼠干眼病的作用机制。方法:将1月龄健康雄性Wistar大鼠150只,体质量200g左右,采用随机数字法分为5组,每组30只。分别为:A:正常组;B:假手术组;C:手术对照组;D:雄激素治疗组;E代表:密蒙花总黄酮治疗组;将C,D,E三组实验鼠切除双侧睾丸及附睾;B组只切开阴囊而不切除睾丸,作为假手术组;A组不做任何处理。各组在造模后1wk,待伤口基本愈合后开始用药。各组实验动物分别于用药1,3,5mo后随机取10只,行SchirmerⅠ试验(SⅠt)、测量泪膜破裂时间(breaking up time,BUT),于第5mo,抽血测定血清睾酮水平。结果:D,E组SⅠt测量值明显高于C组(P<0.05)、BUT明显长于C组(P<0.05),血清睾酮水平C,E组明显低于A,B,D组(P<0.0l)。结论:雄激素水平下降可导致干眼病,采用双侧睾丸及附睾切除的方法可成功建立雄激素水平下降所致的大鼠干眼病动物模型。密蒙花总黄酮具有拟雄激素效应,能够产生同丙酸睾酮治疗干眼病相似的效果。密蒙花总黄酮可能成为治疗干眼病的一个全新药物。     

Effects of extract of Buddleja officinalis eye drops on androgen receptors of lacrimal gland cells of castrated rats with dry eye

AIM: To evaluate the effects of the extract of Buddleja officinalis eye drops in basic tears secretory volume, tear film stability, expression of androgen receptors (AR) in castrated rats with dry eye, and to investigate the therapeutic effects of the extract of Buddleja officinalis on dry eye caused by gonadal hormones level imbalance. · METHODS: Forty-five Wistar masculinity rats were divided at random into nine groups, including normal groups (A1, A2 and A3); model groups (B1, B2 and B3); therapy groups with extract of Buddleja officinalis eye drops (C1, C2 and C3). The "1" stood for being fed for 1 month, and "2" for 2 months, and "3" for 3 months. The dry eye model was established with orchiectomy on groups B and C. Group C was treated with Buddleja officinalis extract eye drops for one month. All rats were checked with Schirmer I test (SIT) and tear film break-up time (BUT). Expression of AR was analyzed by flow cytometer (FCM). · RESULTS: The SIT value of group C was significantly higher than that of group B (P <0.01) and the BUT value of group C was significantly longer than that of group B (P < 0.01), which indicated the eye drop could significantly keep basic tears secretory volume and tear film stability. And the expression of AR of group C was much higher than that of group B, which showed that available composition of the eye drops maybe display androgen-like activity. · CONCLUSION: The main components of the extract of Buddleja officinalis is the flavonoids that can significantly inhibit happening of dry eye of rat after androgen level lowered. Its mechanism is like androgen's and it can display androgen-like activity to keep basic tears secretory volume and tear film stability     

针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的 探讨针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,分析针刺对干眼的作用机制.方法 取健康新西兰白兔18只随机分为空白组、模型组、针刺组,每组6只,空白组不作任何处理;模型组皮下注射氢溴酸东莨菪碱,每天4次,每次2 mg·kg-1共24 d;针刺组在与模型组同样处理的基础上进行针刺,每天1次,共14 d.不同时段观察各组泪液分泌试验检测泪液量的结果,光镜、电镜观察泪腺形态学变化,免疫组织化学检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白的表达.结果 泪液分泌试验检测泪液量结果显示在针刺第4、7、14天同时段针刺组与模型组相比明显升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在针刺第14天时,针刺组与实验前相比,差异无统计学意义(P＞0.05).光镜、电镜示针刺组泪腺上皮细胞胞浆丰富,排列紧密,活动良好,与空白组接近.免疫组织化学检测显示与模型组比较,针刺组泪腺导管及腺泡上皮细胞中Bax的阳性细胞半定量评分值明显低,差异有统计学意义(P ＜0.05);Bcl-2的阳性细胞半定量评分值亦低,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组相比,针刺组Bax、Bcl-2评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).与模型组比较,针刺组的泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas、FasL的阳性细胞半定量评分值明显低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与空白组相比,针刺组Fas、FasL评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 针刺通过抑制干眼兔泪腺组织的细胞凋亡及腺体萎缩,促进兔干眼模型的泪腺代谢,从而达到增加泪液分泌的作用.