激动α1B—肾上腺素受体对DDT1 MF—2细胞生长的刺激作用及途径

目的 研究激动α1B－肾上腺素受体（α1B－AR）对DDT1MF－2细胞生长的影响及其机制。方法 用^3H^-胸腺嘧啶参入法测定细胞的DNA合成速率;用流式细胞计测定细胞周期。结果 去甲肾上腺（NE,0.1－1μmol.L^-1)可刺激DDT MF－1细胞DNA的合成。磷脂酶C抑制剂（U73122,10μmol.L^-1)、Ca^2 /ATP酶抑制剂（CPA,10μmol.L^-1)、胞内Ca^ 络合剂（BATPTA／AM,10μmol.L^-1)、PKC抑制剂（RO－31－8220,0．1μmol.L^-1或calphostin C,0.1μmol.L^-1)、酷氨酸激酶抑制剂（tyrphostin A25,10μmol.L^-1或genis-tein,10μmol.L^-1)、MEK1／2抑制剂（P98059,100μmol.L^-1)均可阻断NE刺激细胞DNA合成的作用。结论 激动α1B－AR可刺激DDT1MF－2细胞增殖,其信号转导途径可能与PLC激活、Ca^2 释放、PKC、TK和ERKs的激活有关。     

酪氨酸蛋白激酶在不同α_1肾上腺素受体亚型Ca~(2+)调控中的作用

目的　了解酪氨酸蛋白激酶信号途径在不同α1肾上腺素受体亚型Ca2 +调控中的作用。方法　用Fura 2荧光探针双波长测定细胞胞浆游Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)的方法 ,在分别转染了α1A、α1B和α1D肾上腺素受体cDNA的HEK2 93细胞 ,观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein和磷脂酶C抑制剂U7312 2 对激动不同α1肾上腺素受体亚型引起的 [Ca2 +]i 变化的影响。结果　预先用U7312 2 (0 1,10 ,5 0 μmol·L-1)与细胞共同孵育 10min ;用Genistein(10 ,10 0 ,2 0 0 μmol·L-1)与细胞共同孵育 1h。在分别转染了α1A、α1B和α1DcDNA的HEK2 93细胞 ,U73 12 2 和Genistein均能浓度依赖性地抑制肾上腺 (10 μmol·L-1)引起的双相 [Ca2 +]i 的升高。在上述细胞 ,U7312 2 (5 0 μmol·L-1)能完全抑制肾上腺素引起的[Ca2 +]i 升高 ;而用最大有效浓度 10 0 μmol·L-1的Genistein只能部分抑制肾上腺素升高 [Ca2 +]i 的作用。结论　在HEK 2 93细胞 ,不同α1肾上腺素受体亚型 (α1A α1B和α1D)激动均能部分通过酪氨酸蛋白激酶信号途径引起Ca2 +释放和Ca2 +内流。α1肾上腺素受体可能通过G蛋白和酪氨酸蛋白激酶两种途径激活磷脂酶C     

Ca~(2+)运动对α_1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用

目的　研究Ca2 +运动对α1 肾上腺素受体引起ClC 3氯通道表达的作用。方法　在A10细胞上 ,用RT PCR和Westernblot检测ClC 3mRNA和蛋白质表达情况。结果　苯肾上腺素 ( 10 μmol·L-1)和thapsigargin( 0 1μmol·L-1)可促进ClC 3mRNA和蛋白质的表达 ;SK&F963 65 ( 10 μmol·L-1)和genistein( 10 μmol·L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC 3的表达 ,nifedipine( 10 μmol·L-1)无此作用。结论　在A10细胞上 ,通过钙池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)的Ca2 +内流参与了α1 肾上腺素受体引起的内源性ClC 3氯通道的表达 ,而通过电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)的Ca2 +内流可能与此无关。蛋白酪氨酸激酶参与了ClC 3氯通道的表达     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)池操纵性Ca~(2+)内流的影响

目的　研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流的影响。方法　采用培养的CSMC ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果　 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (genistein ,2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低内皮素 1(ET 1,10 -7mol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为5 6%± 2 .9%、2 5 6%± 3 9%、48 9%± 3 7% ;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (vanadate ,2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,增加比率分别为8 2 %± 3 9%、18 8%± 4 9%、46 6%± 6 9% ;(2 ) genistein(2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 7%±2 6%、2 4 6%± 6 5 %、5 1 3 %± 6 9% ;vanadate (2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMCCa2 +内流 ,增加比率分别为 4 8%± 2 0 %、2 8 5 %± 4 6%、49 6%± 3 3 % ;(3 ) genistein (2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸 (Cyclopiazonicacid ,CPA ,10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 5 %± 3 0 %、2 2 5 %± 5 2 %、     

溶血磷脂酰胆碱刺激脑微血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号转导途径

通过测定 [3 H]胸腺嘧啶核苷 ( [3 H]Td R)参入和结晶紫染色法测定平滑肌细胞增殖 ,研究了溶血磷脂酰胆碱 ( LPC)刺激牛脑微血管平滑肌细胞( BCMSMC)增殖的细胞内信号转导途径 .结果显示 ,LPC能浓度依赖性 ( 1 nmol· L-1- 1 0μmol·L-1)诱导 BCMSMC摄取 [3 H]Td R,在 LPC的浓度为 1 0μmol· L-1时作用达最大 ,cpm由 366± 1 42升至 1 761± 2 96( P<0 .0 1 ) ;LPC亦能浓度依赖性( 1 nmol· L-1- 1 0μmol· L-1)诱导 BCMSMC增殖 ,在 LPC浓度为 1 μmol· L-1时促增殖作用达坪值 ,A595nm由 0 .0 60± 0 .0 0 9增至 0 .1 0 0± 0 .0 1 5( P<0 .0 1 ) .丝裂原激活蛋白激酶 ( MAPK)特异性抑制剂 PD980 59( 2 - 50 μmol· L-1) ,血小板衍生生长因子受体抑制剂酪氨酸磷酸化抑制剂 AG 1 2 96( 2 -50 μmol· L-1)以及蛋白质酪氨酸激酶抑制剂除莠霉素 A( 2 - 1 0μmol· L-1)能浓度依赖性地抑制LPC的上述作用 .表明 LPC能促进 BCMSMC增殖 ,其细胞内信号转导与 MAPK途径有关 .     

酪氨酸激酶抑制剂对cyclopiazoni cacid引起的大鼠主动脉血管环收缩效应的影响

目的　探讨酪氨酸激酶在Ca2 +池操纵性Ca2 +内流中的作用。方法　记录大鼠胸主动脉环收缩反应。结果　①不同剂量酪氨酸激酶抑制剂 genistein (1～ 10 0 μmol·L-1)和tyrphostin 2 5 (Tyr 2 5 ,1～ 30 μmol·L-1)均以浓度依赖性抑制cyclopiazonicacid (CPA)引起的平滑肌收缩平台期。Tyr 2 5的最大作用浓度为 10 μmol·L-1,抑制率为 42 %±11%。② 10 μmol·L-1Tyr 2 5和 1μmol·L-1nifedipine(Nif)对CPA引起电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)开放过程的抑制作用存在部分交叉。③ 1μmol·L-1Nif预处理阻断VDCC作用后 ,10 μmol·L-1Tyr 2 5只能部分阻断CPA引起的Ca2 +池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)开放过程 ,再加入 6 0 μmol·L-1SK&F96 36 5可完全阻断SOCC的开放过程。结论　CPA引起平滑肌的收缩过程中 ,蛋白质酪氨酸激酶参与了开启VDCC和SOCC的信号转导过程     

四肽FMRFa对大鼠心室肌Na^＋／Ca^2＋交换的抑制

目的　研究四肽FMRFa对大鼠单个心室肌细胞Na /Ca2 交换的作用。方法　用膜片钳全细胞记录法测定成年大鼠心室肌细胞Na /Ca2 交换电流 (INa /Ca2 )和其他离子通道电流。结果　FMRFa对大鼠心室肌细胞INa /Ca2 呈浓度依赖性抑制 ,10 0 μmol·L-1浓度时抑制内向和外向INa /Ca2 密度分别达 6 0 1%和 5 6 5 % ,对内向电流及外向电流的IC50 分别为 2 0 μmol·L-1和 34μmol·L-1。FMRFa 5 μmol·L-1抑制INa /Ca2 内向和外向电流密度分别为 38 7%和 34 9% ,但FMRFa 5 μmol·L-1及 2 0 μmol·L-1对L型钙电流、钠电流、瞬时外向电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用。结论　FMRFa对大鼠心室肌细胞是一个特异性Na /Ca2 交换抑制剂。     

咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制

目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯?     

左旋硝基精氨酸甲酯和地佐环平和硝苯地平对吗啡致NG108-15细胞内钙浓度变化的影响

目的　探讨一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)、N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体拮抗剂地佐环平 (MK 80 1)和钙通道阻滞剂硝苯地平对吗啡作用的影响是否与细胞 [Ca2 + ]i 有关。方法　体外培养NG10 8 15细胞 ,用荧光指示剂Fura2 AM负载 ,荧光分光光度计动态测定细胞 [Ca2 + ]i。结果　吗啡、MK 80 110 μmol·L- 1、硝苯地平 1,2和3μmol·L- 1急性处理能降低由NMDA刺激 (模拟兴奋性刺激 )所致的细胞 [Ca2 + ]i 升高。MK 80 110μmol·L- 1和硝苯地平 3μmol·L- 1与吗啡合用均能完全对抗NMDA的作用。吗啡处理细胞 4 8h后 ,再用纳洛酮处理 ,细胞 [Ca2 + ]i 可增加约 39% ,L NAME ,MK 80 1和硝苯地平与吗啡合用均能降低纳洛酮引起的细胞 [Ca2 + ]i 的升高。结论　MK 80 1,L NAME和硝苯地平对吗啡调节的作用均与胞内Ca2 + 浓度的变化密切相关     

渗透压、肾上腺素、激活PKC对血管平滑肌细胞Cl~-运动的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞容积性调节Cl- 运动的机制。方法　用Cl- 特异的荧光探针 MEQ及生物荧光双波长影像分析系统 ,观察渗透压、肾上腺素、PKC的激活以及细胞外Cl- 浓度 ([Cl- ] o)的改变对容积性调节Cl- 运动的影响。结果　A10细胞静息时胞质氯离子浓度 ([Cl- ] i)为(3 0 3 9± 3 0 1)mmol·L- 1(n =3 0 ) ;低渗条件使Cl- 外流 ,[Cl- ] i 由静息时 (3 0 87± 3 11)mmol·L- 1降低到 (2 4 3 9±2 56)mmol·L- 1(n =3 0 ,P <0 0 5) ;高渗时则从 (2 4 3 9±2 56)mmol·L- 1增加到 (3 4 64± 3 46)mmol·L- 1(n =3 0 ,P <0 0 5) ;肾上腺素 (10 μmol·L- 1)能降低 [Cl- ] i,BAPTA AM (2 0 μmol·L- 1)能完全抑制 10 μmol·L- 1肾上腺素引起的[Cl- ] i 变化 ,但是两者对渗透性改变引起的 [Cl- ] i 变化均无影响 ;10 0nmol·L- 1PDBu可以完全抑制容积性调节的Cl-运动 ;降低 [Cl- ] o 可以显著增加低渗时Cl- 的外流。结论　在A10细胞上 ,存在着容积性调节的Cl- 运动及Ca2 + 依赖性的Cl- 运动。容积性调节的Cl- 运动在低渗时激活 ,高渗时失活 ;不受胞内外Ca2 + 的影响 ;PKC的激活参与了容积性调节的Cl- 运动的调节     

阿魏酸钠对转化生长因子β_1抑制肝细胞增殖作用的影响

目的　探讨转化生长因子 β1(TGFβ1)抑制肝细胞生长过程中 ,阿魏酸钠 (sodiumferulic,SF)的干预作用。方法　以培养的正常人肝细胞株 (L0 2细胞 )为对照 ,5 μg·L-1TGFβ1处理的细胞为模型组 ,MTT比色法及3 H TdR参入法分别检测TGFβ1及SF对L0 2细胞生长和DNA合成的影响 ;以流式细胞计数仪分析TGFβ1和SF对L0 2细胞周期各时相变化的影响 ;采用化学荧光探针DCFH DA ,经流式细胞计数仪检测TGFβ1致细胞内活性氧自由基 (ROS)生成情况及不同浓度的SF的干预作用。结果　 5 μg·L-1TGFβ1处理L0 2细胞 2 4h ,细胞存活率下降为对照组的 6 7 93% (P <0 0 1vs对照组 ) ,细胞DNA合成抑制率为 37 5 6 % ,2 5 0μmol·L-1SF可以使L0 2细胞存活率升高 19 2 8% (P <0 0 1vs模型组 ) ,DNA合成增加 17 71% (P <0 0 5vs模型组 ) ;SF促进L0 2细胞周期由G0 /G1期向S期和G2 /M期过渡 ,12 5 μmol·L-1和 2 5 0 μmol·L-1SF使L0 2细胞周期S期的比例分别增加 11 4 5 %和 17 92 % (P <0 0 1vs模型组 ) ;5 μg·L-1TGFβ1使L0 2细胞内ROS产生量升高为对照组的1 90倍 ,6 2 5 μmol·L-1～ 2 5 0 μmol·L-1SF分别降低TGFβ1的诱导作用 14 5 %～ 2 7 5 %。结论　阿魏酸钠对抗由TGFβ1引起的肝细胞生长抑制作用 ,这可能与     

外周α_1、α_2受体作用减弱脑室注射组胺对颈动脉窦反射的抑制

目的　探讨外周α1 和α2 肾上腺素受体 (α1 AR,α2AR)在脑室注射(icv)组胺 (HA)对颈动脉窦压力感受性反射(CSR)重调定中的作用。方法　孤离麻醉SD大鼠的双侧颈动脉窦区,将不同窦内压 (ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic五参数曲线拟合,求得ISP MAP关系曲线及其特征参数,观察icvHA以及预先在外周静脉注射(iv)α1 或α2 AR拮抗剂对CSR的影响。结果　icvHA( 60μmol·L-1, 5μl)导致ISP MAP关系曲线后半程明显上移(P<0 05),ISP和增益关系曲线中部明显下移 (P<0 05 ),反射参数MAP反射变动范围及反射最大增益减小 (P<0 05),而阈压与饱和压增大(P<0 05);预先外周iv选择性的α1 AR拮抗剂酚苄明 (PBZ, 2 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 )或α2 AR拮抗剂育亨宾(YOH, 5μmol·L-1, 0 15μl·g-1 ),均能明显加强HA的上述效应,YOH的这种加强作用不如PBZ的显著 (P<0 05 );单独外周iv相同剂量的PBZ或YOH对CSR无影响 (P>0 05 )。结论　脑室给HA使CSR产生快速重调定,反射敏感性下降;外周α1、α2 AR作用可减弱icvHA对CSR的重调定;外周α1 AR在调制这种抑制性重调定的过程中可能发挥重要作用。     

三氧化二砷对心肌细胞蛋白激酶C及胞内游离钙的影响

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3)治疗白血病时的心脏不良反应机制。方法　Fluo 3/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞 ,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2 O3干预后的心室肌胞浆 [Ca2 +]i,磷基转移法测定心室肌胞膜和胞浆内蛋白激酶C(PKC)的活性。结果　 0 .5 μmol·L- 1As2 O3对台氏液中豚鼠心室肌细胞 [Ca2 +]i 无明显影响。 2 μmol·L- 1As2 O3持续作用 6min时 ,细胞 [Ca2 +]i 开始升高 ,持续约 9min后恢复到给药前水平。 10 μmol·L- 1As2 O3作用不到 3min时 ,心室肌细胞 [Ca2 +]i 持续升高至扫描结束共 2 7min ,一直没有恢复。As2 O3引起的 [Ca2 +]i 升高可被钙通道阻滞剂维拉帕米和硝苯地平不完全阻断。 2～ 10 μmol·L- 1AS2 O3作用3h可使细胞膜及胞浆相的PKC活性升高 ,10 μmol·L- 1组 ,细胞膜相的PKC升高更明显。结论　一定浓度的As2 O3可使心肌细胞内游离钙升高、PKC活化 ,细胞膜可能是As2 O3最初作用靶点。     

用选择性可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂研究大鼠小脑内NO-cGMP神经通路

应用清醒大鼠脑微透析技术以选择性可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂 1 H- [1 ,2 ,4]口恶二唑 [4,3- a]喹喔啉 - 1 -酮 ( ODQ)为工具药研究大鼠小脑 NO-c GMP神经通路 .小脑内局部灌流 ODQ( 5,1 0 ,50 ,1 0 0 μmol· L-1,5μL·min-1)可剂量依赖性降低细胞外基础 c GMP水平 ,最大可使细胞外基础 c GMP水平降低 80 % .ODQ1 0 0 μmol· L-1可完全对抗N -甲基 - D-天冬氨酸 ( NMDA,2 0 0μmol· L-1)或α-氨基羟甲基异口恶唑丙酸 ( AMPA,1 0 0μmol· L-1)引起的细胞外 c GMP水平增加 ,ODQ也可抑制 NO供体 S-亚硝基 - N-乙酰青霉胺 ( SNAP,1 .5mmol·L-1)引起的细胞外 c GMP水平增加 .说明在基础条件下小脑内 c GMP80 %来源于可溶性鸟苷酸环化酶激活 .进一步证明了 NO通过激活可溶性鸟苷酸环化酶使 c GMP增加 .     

大鼠海马β-肾上腺素受体和烟碱受体亚型在烟碱激活p44/42MAPK中的作用

目的　为探讨烟碱对海马脑片p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的影响 ,以及 β 肾上腺素受体 (β AR)、烟碱受体亚型在其中的作用。方法　将 4 0 0 μm厚的海马脑片置于预先经 95 %O2 和 5 %CO2 饱和的 2 8℃人工脑脊液中预孵 90min后分别加入普萘洛尔、α 银环蛇毒素和美卡拉明 ,30min后再加入烟碱 ,使其终浓度分别为 1和 10 0 μmol·L- 1。于烟碱作用 90min时 ,运用免疫印迹法检测这 3个受体阻断剂对烟碱引起的p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的抑制效果。结果　烟碱对p4 4/ 4 2MAPK磷酸化的作用与烟碱浓度有关 ,10 0 μmol·L- 1烟碱比 1μmol·L- 1烟碱作用强。美卡拉明单独作用可阻断 1μmol·L- 1烟碱和部分阻断10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2MAPK磷酸化 ;α 银环蛇毒素只能阻断 10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2 /4 4MAPK磷酸化 ;但同时使用这两种烟碱受体阻断剂时 ,两种浓度烟碱引起的p4 4/ 4 2MAPK磷酸化均可被完全阻断 ;普萘洛尔对 1μmol·L- 1烟碱引起的p4 4MAPK磷酸化和 10 0 μmol·L- 1烟碱引起的p4 2MAPK磷酸化仅有部分阻止作用。结论　在烟碱激活的p4 4/ 4 2MAPK中 ,不同烟碱受体亚型在不同烟碱浓度中起作用 ;β AR仅参与烟碱引起的p4 4/4 2MAPK部分磷酸化。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的　探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法　取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论　PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高可能与激活细胞内蛋白激酶A和蛋白激酶C信号转导系统有关     

芍药苷通过激活腺苷A1和A2a受体促进低氧条件下EPO基因的表达

目的探讨芍药苷影响促红细胞生成素(EPO)表达的靶受体及其下游分子信号通路。方法以不同剂量(0.02、0.2、2、20μmol·L-1)芍药苷,以及PI-3K通路抑制剂(LY294002 30 μmol·L-1)、腺苷A2a受体拮抗剂(SCH582610.2μmol·L-1)、腺苷A1受体拮抗剂(DPCPX 10 μmol·L-1)和激动剂(CPA1μmol·L-1)处理HepG2细胞在低氧条件下培养,用RT-PCR和Western blot的方法检测促红细胞生成素(EPO)表达。结果常氧条件下芍药苷抑制EPO的表达,低氧时2μmol·L-1浓度的芍药苷能促进EPO基因的表达但对蛋白表达没有影响,SCH58261、DPCPX、LY294002能抑制芍药苷升高EPO mRNA的现象。结论芍药苷能通过同时激活A1和A2a受体,然后进一步激活PI-3K通路促进低氧条件下EPO基因的表达。     

硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的　观察硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ 氨基丁酸 (GABA)Ca2 + 依赖性和Ca2 + 非依赖性释放的影响。方法　制备大鼠前额皮层粗突触体。用人工脑脊液(aCSF)孵育 ,分为 5组 :基础释放组 (Base)、硫喷妥钠 10μmol·L-1组 (THS10 )、硫喷妥钠 30 μmol·L-1组 (THS30 )、硫喷妥钠 10 0 μmol·L-1组 (THS10 0 )、硫喷妥钠 30 0 μmol·L-1组 (THS30 0 ) ,每组含 8份突触体。向每组各等份突触体反应液中加入不同浓度的硫喷妥钠 (Base组不加入 ) ,于 37℃条件下应用 30mmol·L-1KCl或 2 0 μmol·L-1veratridine诱发谷氨酸和GABA释放。应用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定各反应液中的谷氨酸和GABA浓度。观察谷氨酸和GABACa2 + 非依赖性释放时 ,aCSF中不含Ca2 + 。结果　硫喷妥钠 30、10 0、30 0 μmol·L-1可显著抑制KCl或vera tridine诱发的Ca2 + 依赖性谷氨酸释放 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 1) ,IC50 分别为 2 5 6 μmol·L-1和 2 6 3μmol·L-1;THS10与THS30组 ,THS30与THS10 0组之间差异有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 1)。硫喷妥钠各浓度组中 ,Ca2 + 依赖性GABA释放及Ca2 + 非依赖性谷氨酸和GABA释放水平与Base组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　硫喷妥钠可剂量依赖性地抑制大     

酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α_(1B)-AR引起的Ca~(2+)内流的影响

目的　探讨Trp3(transientreceptorpotential 3)蛋白是否参与α1B AR引起的Ca2 + 内流以及酪氨酸激酶对其调控作用。方法　采用脂质体转染 ,将hTrp3cDNA分别转染到HEK2 93细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK2 93细胞 ;Westernblot方法检测Trp3蛋白表达情况 ;Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 + 浓度。结果　HEK2 93细胞上可检测到hTrp3的内源性表达 ,转染后其表达增加。α1B HEK2 93细胞转染hTrp3cDNA后 ,α1B AR引起的Ca2 +内流显著增加 (P <0 0 1) ;转染hTrp3cDNA对thapsigargin诱导的Ca2 + 内流无作用。 5～ 30 μmol·L-1genistein对转染细胞α1B AR诱发的Ca2 + 内流有抑制作用 ,最大抑制率达(75 2± 12 6 ) %。结论　Trp3cDNA转染可能主要通过非CRAC(calciumreleaseactivatedcalcium )途径增加α1B AR引起的Ca2 + 内流 ,这一过程很大程度上依赖酪氨酸激酶的调控     

α_(1A)-和α_(1B)-肾上腺素受体介导HEK293细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶激活(英文)

目的:研究α_1-AR三种亚型对细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)的作用。方法:采用磷酸钙沉淀法进行转染,用放射配基结合实验测定α_1-AR表达量。用[~3H]胸腺嘧啶参入量测定细胞增殖,用免疫沉淀和髓鞘蛋白底物法测定CCDPK的活性。结果:三株表达α_(1A)-,α_(1B)-和α_(1D)-AR的细胞株表达受体密度约为0.6 nmol·g~(-1)。在普萘洛尔存在下,去甲肾上腺素(NE)作用24 h可浓度依赖地刺激HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成。NE 10 μmol·L~(-1)可促进HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成增加,刺激CCDPK活性的升高。NE不引起HEK293/α_(1D)-AR细胞DNA合成和CCDPK活性的显著改变。结论:在转染α_1-AR亚型的HEK293细胞中激动α_(1A)-或α_(1B)-AR可引起细胞增殖,激动α_(1D)-AR则无显著改变。