二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的　研究二烯丙基二硫 (diallyldisulfide ,DADS)诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用MTT法、丫啶橙染色、流式细胞仪等方法检测DADS对MGC80 3的增殖抑制 ,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果　MTT法显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的抑制增殖作用 ,2 0、3 0、40mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞72h后 ,生长抑制率分别达 2 5 7%、58 6%、69% ;经 3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 48h后 ,用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变 ;流式细胞仪分析结果显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的G2 /M期阻滞作用 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 2 4h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多 ,且DADS呈时间依赖性诱导MGC80 3细胞凋亡 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞48h ,凋亡率从对照组的 3 5%升高到 3 9 5%。结论　DADS引起MGC80 3细胞G2 /M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一     

二烯丙基三硫对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用

目的　研究二烯丙基三硫 (DATS)在体外对胃癌MGC 80 3细胞的生长抑制作用。方法　采用MTT法、集落形成率及生长曲线绘制分别观察不同浓度DATS对胃癌MGC 80 3细胞生长的影响。结果　DATS处理后 ,培养的MGC 80 3细胞增殖抑制而稀少。不同浓度DATS对胃癌MGC 80 3细胞的作用 ,4、8、12、16、2 4mg·L-1的细胞生长抑制率分别为 2 6 %、4 6 %、6 5 %、76 %、89% ,其半数抑制浓度(IC50 )为 8 2mg·L-1。 8、12、16、2 4mg·L-1的细胞集落形成率和集落形成相对数各为 32 4 %和 5 8 7%、2 4 8%和4 2 5 %、19%和 33 5 %、8 8%和 15 1% ,皆具有明显的量效关系 ,且随着浓度增高 ,细胞生长曲线趋于低平。结论　DATS在体外对胃癌MGC 80 3细胞具有良好的抑制作用     

小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞(MOLT-4)凋亡的作用。 方法将处于对数生长期的MOLT-4细胞分为3组，A组加入小檗碱(10，100 mg·L^–1)，B组加入柔红霉素1 mg·L^-1，C组加入小檗碱＋柔红霉素，作用6 和24 h后，用MTT法检测细胞存活率；用流式细胞术、DNA电泳及光学显微镜观察小檗碱对MOLT-4细胞凋亡的影响。结果作用6，24 h后，A组(10 mg·L-¹)细胞存活率分别为81.80%，64.67%； B组为98.38%，38.46%，C组为68.35%，20.51%；C组与A、B组比较，在两个时间段差异均有显著性(P＜0.05)。小檗碱诱导MOLT-4细胞发生典型的细胞凋亡形态学变化，出现DNA规律性断裂，电泳呈典型的梯状条带变化。细胞周期分析提示小檗碱浓度在10，100 mg·L-1时作用24 h细胞凋亡率分别为5.83%，19.93%。结论小檗碱具有诱导白血病细胞凋亡的作用，且小檗碱可增强柔红霉素的抗肿瘤作用，为其临床应用提供了依据。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡与钙稳态失衡相关

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对人胃癌MGC803细胞的促凋亡作用及钙稳态失衡与该作用的相关性。方法体外培养MGC803细胞,采用MTT法,Tunnel法及流式细胞光度术分析经DATS处理后,对细胞增殖和凋亡的影响以及细胞内游离钙水平的改变。结果DATS处理后,培养的MGC803细胞增殖抑制。4、8、12、16、24mg·L-1的DATS对细胞生长的抑制率分别为0.231±0.037,0.305±0.036,0.455±0.029,0.607±0.058,0.751±0.019。Tunnel检测结果显示,对照组表达阴性,DATS处理组细胞呈阳性表达。流式细胞分析结果显示DATS呈浓度依赖性诱导胃癌MGC803细胞凋亡,16mg·L-1组凋亡率达0.242。细胞内游离钙水平呈浓度依赖性上升,16mg·L-1组荧光强度为对照组的4倍多。用细胞内游离钙特异性阻断剂BAPTAAM预处理细胞后,细胞内游离钙水平不再上升,且能抑制DATS诱导的凋亡。结论DATS能诱导胃癌MGC803细胞凋亡,DATS诱导胃癌MGC803细胞凋亡的作用与钙稳态失衡相关。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G_2/M期的阻滞作用

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)对人胃癌MGC80 3细胞G2 /M期的阻滞作用及分子机制。方法　体外培养MGC80 3细胞 ,采用MTT比色实验、细胞计数法 ,流式细胞光度术和Westernblot分析DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用 ,细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达。结果　MTT法显示 ,2 0mg·L-1DADS、30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 72h后 ,生长抑制率分别达2 5 7%、5 8 6 %。细胞计数法表明常规培养MGC80 3细胞群体倍增时间为 2 9 92h ,30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞后 ,其细胞群体倍增时间延长到 5 5 5 8h。流式细胞仪分析结果显示DADS呈浓度依赖性将MGC80 3细胞阻滞在G2 /M期。 30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 36h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多。Westernblot分析表明在G2 /M期阻滞同时有Cdc2 5C蛋白表达下降 ,但CDK1蛋白表达不受DADS作用的影响。结论　DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用与G2 /M期阻滞有关 ,DADS对MGC80 3细胞G2 /M期阻滞的分子机制可能与降低Cdc2 5C蛋白水平有关     

高三尖杉酯碱对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的　探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法　采用MTT法检测增殖抑制率和IC50 ,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和Hoechst 3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡。结果　不同浓度的HHT分别处理CNE 2Z细胞 2 4、48和 72h ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增高 ,其IC50 分别为(0 62 9± 0 0 3 9)、(0 483± 0 0 2 7)、(0 3 89± 0 0 2 7)mg·L-1,各IC50 间差异有统计学意义 (P <0 0 1)。 1、0 5mg·L-1HHT处理细胞 8h ,流式细胞术观察到凋亡峰 ,荧光染色可见凋亡形态学改变 ,流式细胞术和荧光染色检出的凋亡率均高于对照组 (P <0 0 1) ;1mg·L-1HHT处理细胞 8h ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论　HHT对CNE 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,此抑制作用具有剂量和时间依赖性 ;HHT可诱导CNE 2Z细胞凋亡     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对P糖蛋白表达的影响

目的研究环孢素A(cyclosporin A,CsA)诱导人胃癌MGC80-3细胞的凋亡作用以及对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,探讨细胞凋亡与P-gp表达的关系。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度CsA处理24、48、72h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色和An-nexin-V-FITC/PI双染分别于荧光显微镜和流式细胞仪(flowcytometry,FCM)分析CsA处理48 h后凋亡细胞形态的改变并计算细胞凋亡率,Western blot法检测MGC803细胞P-gp的表达。结果 CsA对人胃癌MGC80-3细胞增殖有抑制作用,在0～25.0μmol·L-1浓度范围和24～72 h时间范围内CsA对胃癌MGC80-3细胞增殖抑制作用与药物浓度和作用时间呈现明显依赖关系。AO/EB染色和Annexin V-FITC/PI双染FCM检测显示CsA处理MGC80-3细胞48 h后通过荧光显微镜观察可见细胞出现形态不规则、核染色质固缩等细胞凋亡形态学的改变,提高CsA作用剂量,导致细胞凋亡率增加,与control组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot表明CsA下调了MGC80-3细胞P-gp的表达,蛋白表达量呈现浓度依赖性降低(P<0.05或P<0.01)。结论 CsA能诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡和下调P-gp的表达,其诱导细胞凋亡作用可能与P-gp的表达相关。     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。     

三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制作用的实验研究

目的观察三肽化合物酪丝缬肽(tyroservaltide,YSV)对体外培养人肝癌BEL7402细胞增殖的抑制作用。方法建立人肝癌BEL7402及Chang氏肝细胞体外培养体系,用BrdU法、MTT法及LDH法,观察YSV对体外培养的BEL7402细胞、Chang氏肝细胞DNA分裂指数、MTT代谢率、LDH释放量的影响,用琼脂糖凝胶电泳观察药物对体外培养BEL7402细胞DNA片段化的影响。结果YSV对BEL7402细胞作用48h、72h时药物浓度为1mg·L-1和0.1mg·L-1组与阴性对照组比较:①能显著抑制肿瘤细胞DNA的合成(P<0.01),抑制率最高为药物浓度1mg·L-1作用72h时可达32.53%,②能表现出明显抑制细胞代谢的作用(P<0.05)其中YSV0.1mg·L-1作用72h时抑制率最高为19.12%,③能增加胞浆内LDH的释放(P<0.05),YSV(1mg·L-1)作用72h时抑制率最高,为36.13%,④能诱导BEL7402肝癌细胞DNA片断化成低分子量DNA,经1%琼脂糖电泳后显示为DNALadder。对正常肝细胞系Chang氏肝仅0.1mg·L-1在48h表现出抑制DNA合成能力的作用。结论YSV抑制人肝癌BEL7402细胞的增殖,对正常肝细胞系Chang氏肝没有影响。     

青藤碱通过COX-2/VEGF通路抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的研究

摘要：目的:探讨青藤碱对胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:将胃癌MGC803细胞随机分成4组:对照组、青藤碱300,600,1 200 mg·L-1组,采用划痕愈合实验检测细胞迁移率,Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,qRTPCR检测环氧合酶2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶2（MMP2） mRNA表达,Western blot检测COX-2、VEGF、MMP9、MMP2蛋白表达。结果:青藤碱300,600,1 200mg·L-1组胃癌MGC803细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数、COX-2、VEGF、MMP9、MMP2 mRNA和蛋白表达显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）。结论:青藤碱抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭,其机制与下调COX-2、VEGF、MMP9、MMP2表达有关。     

大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果大黄素（5～80μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用（P〈0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P〈0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G0/G1期。结论大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。     

槲皮素对胃癌MGC-803细胞生长及凋亡作用的研究

目的研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响及诱导凋亡作用。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度槲皮素对MGC-803细胞的增殖活性的效应;原位末端核苷标记(TUNEL)法检测槲皮素诱导细胞凋亡的凋亡指数(AI)。结果槲皮素浓度为40~100μmol/L时对MGC-803细胞增殖有显著的抑制效应,且呈剂量依赖性;细胞加入槲皮素诱导48h后AI明显高于未加入组(P<0.05)。结论槲皮素在一定浓度范围内能显著抑制MGC-803细胞的增殖并能诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖性。     

蒙药巴特尔-7体外对胃癌细胞生长的影响

目的观察蒙药巴特尔-7对体外培养的人胃癌MGC-803细胞生长的影响。方法 MGC-803细胞经不同浓度蒙药处理后,通过MTT比色法分析蒙药作用后细胞的增殖情况。在倒置光显微镜及荧光显微镜下,观察细胞形态的变化;应用琼脂糖凝胶电泳分析诱导凋亡作用。结果巴特尔-7能抑制MGC-803细胞的增殖,且抑制作用随药物浓度的增加而增加。光镜下见部分细胞呈现凋亡的形态改变,琼脂糖凝胶电泳未见明显的梯状带。结论巴特尔-7对胃癌MGC-803细胞生长具有明显的抑制作用。     

重组人p53腺病毒注射液逆转人耐药胃癌MGC-803细胞耐药性的体外试验研究

目的:研究重组人p53腺病毒注射液(rAd-p53)对体外人耐药胃癌MGC-803细胞的逆转作用及其可能的机制。方法:通过紫杉醇由低到高剂量诱导人胃癌MGC-803细胞内多耐药基因表达;不同剂量rAd-p53作用于人耐药胃癌MGC-803细胞不同时间后,MTT法检测细胞增殖抑制率,并计算半数有效抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,免疫组织化学法和蛋白质印迹法测定多药耐药基因mdr1表达蛋白P糖蛋白(MDR1-Pgp)的表达。结果:rAd-p53可明显抑制人耐药胃癌MGC-803细胞增殖,呈时间-剂量依赖关系,作用24、48、72h的IC50分别为1889.85、998.44、354.91MOI;rAd-p53可阻滞人耐药胃癌MGC-803细胞周期于G2/M期并诱导其凋亡,可下调MDR1-Pgp蛋白表达。结论:人耐药胃癌MGC-803细胞的耐药性可能与MDR1-Pgp的高表达有关;rAd-p53可显著抑制人耐药胃癌MGC-803细胞的增殖并诱导耐药细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖关系。     

Preliminary studies on anti-tumor activity of 2′,4′-dihydroxychalcone isolated from Herba Oxytropis in human gastric cancer MGC-803 cells

2′,4′-Dihydroxychalcone (TFC), one of the main components in Herba Oxytropis, belongs to the flavonoid group, which is known to have anti-tumor activity in vitro. In this study, the authors examined the effects of TFC on cell proliferation and apoptosis in human gastric cancer MGC-803 cells. The MTT assay results showed that TFC was able to induce cytotoxicity in MGC-803 cells in a concentration- and time-dependent manner. Acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining analysis indicated that the cytotoxicity induced by TFC was mediated by apoptosis, and flow cytometry analysis indicated an increase in apoptotic cells after treatment with TFC. Furthermore, typical apoptotic morphology such as condensed chromatin, irregular nuclei, vacuoles, and dispersed granular material in the nuclear compartment were also observed using a transmission electron microscope. These results suggested that TFC can inhibit the growth of MGC-803 cells and induce apoptosis. However, further studies are necessary to investigate the possible mechanism.     

靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异

目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

硫酸右旋糖苷对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

摘要： 目的 探讨硫酸右旋糖苷 （DS） 对人胃癌MGC-803细胞增殖、 集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法 培养人胃癌MGC-803细胞, 分为对照组 （PBS处理） 和实验组 （0.3%DS处理）; 应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响; 平板克隆形成实验检测DS对胃癌MGC-803细胞集落形成能力的影响; AnnexinⅤ-PI双染流式检测细胞凋亡的变化; 蛋白质印迹法 （Western blot） 检测细胞不同时间点 （2、 8、 12、 24 h） EZH2、 Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 EdU实验结果显示, 与对照组相比, DS明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖 （P＜0.01）。平板克隆形成实验结果表明, DS组集落形成能力较对照组显著降低 （P＜0.01）, AnnexinⅤ-PI双染流式结果显示, 实验组细胞凋亡率明显高于对照组 （P＜0.01）; Western blot结果表明, 实验组EZH2的表达较对照组明显下调 （P＜0.05）, Cleaved-caspase3的表达较对照组明显上调 （P＜0.05）。结论 DS能明显抑制人胃癌MGC-803 细胞增殖, 诱导凋亡, 其机制可能与抑制EZH2的表达有关。     

参附注射液和高乌甲素对小鼠肝癌细胞H22生长抑制及诱导凋亡作用

目的研究比较高乌甲素注射液和参附注射液对小鼠肝癌细胞株生长抑制及凋亡诱导作用。方法苔盼蓝计数,四甲基偶氮唑盐(MTT)法,流式细胞仪技术分析药物对细胞周期和凋亡指数的影响,琼脂糖电泳技术分析药物对DNA作用。结果氢溴酸高乌甲素注射液对H22作用、细胞数量与形态无明显影响;参附注射液可明显抑制小鼠肝癌H22的生长,细胞表现典型的凋亡形态,在浓度为50 mL/L时,出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳检测出现DNA ladder。结论参附注射液体外能抑制小鼠肝癌H22细胞株的增殖和诱导细胞凋亡,高乌甲素注射液体外对H22细胞的生长、凋亡没有影响。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。