光动力治癌新药血卟啉单甲醚（HMME）的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。     

线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。     

血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点

目的探讨血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点。方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20 h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率。结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20。HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为（18.22±3.53）%、（10.77±2.06）%、（7.44±1.06）%、（8.56±3.51）%,HaCaT分别为（11.90±1.46）%、（5.02±1.48）%、（3.82±0.54）%、（8.90±2.30）%。结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体。     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法治疗角膜新生血管的实验研究

目的：观察血卟啉单甲醚行光动力学疗法（photodynamic treatment，PDT）治疗角膜新生血管的疗效。材料与方法：碱烧伤有色兔角膜制作角膜新生血管模型。静脉注射血卟啉单甲醚5mg／kg，不同的能量密度（7．6～152．8J／cm^2）的氩绿激光照射角膜新生血管根部，不注射血卟啉单甲醚仅行同等能量密度的激光照射作为对照组，行角膜新生血管造影观察新生血管封闭情况。     

三种光敏剂介导的光动力疗法治疗上消化道肿瘤的疗效比较研究

目的分析比较三种光敏剂介导的光动力疗法治疗上消化道癌的近期疗效和不良反应。方法上消化道癌患者181例,分别应用血卟啉衍生物（67例）、血卟啉单甲醚（58例）及卟吩姆钠（56例）作为光敏剂,给药剂量分别为5、6和2mg／kg,于照光前6—24h静脉滴注。分别应用金蒸气激光和半导体激光作为治疗光源,功率密度200～400mW／cm^2,能量密度100～300J／cm^2。治疗1-5次后评价疗效：完全疗效（cR）、明显疗效（PR）、稍有疗效（MR）、无效（NR）。结果血卟啉衍生物组67例患者,cR5例（7．5％）,PR40例（59．7％）,MR16例（23．9％）,NR6例（9．0％）。血卟啉单甲醚组58例患者,CR5例（8．6％）,PR33例（56．9％）,MR14例（24．1％）,NR6例（10．3％）。卟吩姆钠组56例患者,CR6例（10．7％）,PR33例（58．9％）,MR12例（21．4％）,NR5例（8．9％）。三组病例均未出现严重不良反应。结论血卟啉衍生物、血卟啉单甲醚和卟吩姆钠三种光敏光动力疗效治疗临床各期上消化道癌疗效相近,不良反应轻,耐受性好,是较好的姑息治疗手段。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。     

HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效应的实验研究

目的 比较在血卟啉单甲醚(HMME)介导下C666-1和CNE2鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NTC)细胞对光动力疗法(pho-todynamic therapy,PDT)的杀伤效应和引起差异的可能因素.方法 利用荧光光谱测量技术和激光扫描共聚焦显微技术分别检测HMME在c666-1和CNE2细胞中的潴留浓度和亚细胞分布;用细胞克隆形成方法评估C666-1和CNE2细胞的PDT疗效.结果 C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着细胞和光敏剂的孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1细胞;随着孵育时间的增加,细胞对HMME的吸收趋于饱和.HMME主要分布在c666-1和CNE2细胞的细胞核外周.在相同实验条件下,HMME.PDT对C566-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1细胞.结论 HMME-PDT作用下C666-1细胞存活率明显高于CNE2细胞,其主要原因是CNF2细胞对HMME的吸收高于C666-1.细胞内光敏剂的潴留浓度是决定PDT疗效的一个关键要素.     

角膜新生血管光动力学疗法的实验研究

目的研究角膜新生血管的治疗方法,观察不同浓度的光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)所介导的光动力作用对兔角膜新生血管的影响,为探讨光动力学疗法治疗角膜新生血管的可行性和有效性提供初步的实验依据。方法采用角膜缝线的方法,诱导18只荷兰大耳白兔36只眼角膜新生血管形成。缝线后的第7天,将18只兔随机分成9组,将不同浓度的HMME分别注射于兔眼球结膜下,30min后用波长为632.8min的He-Ne激光照射不同的时间(即能量密度不同),观察每眼角膜新生血管损伤情况及角膜组织病理学改变。结果在HMME浓度为7.5mg/ml时,激光功率密度为30mW/cm2,能量密度为108,(?)m2,照射时间60min,兔角膜新生血管密度减低率(67.97±2.20)%,不但高于激光照射时间分别为15、30和45min,能量密度分别为27.54和81J/cm2时的新生血管密度减低率,其统计学差异有显著意义(P=0.001,P=0.002,P=0.031),而且高于HMME浓度为2.5mg/ml和5mg/ml2时的角膜新生血管的减低率,其统计学差异有显著意义(P<0.01,P<0.01);而HMME浓度为10m/ml时,睑球结膜损伤较大,不宜用于治疗眼部。PDT后组织病理学检查,电镜下见新生血管内皮细胞变性;HE染色角膜标本光镜下见新牛血管退缩。结论采用结膜下注射HMME,并用波长为632.8nm的He-Ne激光照射,     

瘢痕成纤维细胞对血卟啉单甲醚的吸收特性及其光动力效应

目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）对光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）的吸收特性和光动力疗法（PDT）的杀伤效应。方法取原代培养的HSF,经流式细胞仪（FCM）检测HMME浓度（0～40μg/ml）和孵育时间（0～120 min）对HSF细胞吸收HMME的影响;MTT法检测HMME-PDT对HSF细胞存活率的影响。结果在一定HMME浓度范围内（0～40μg/ml）,HSF细胞对HMME的吸收量随HMME浓度和孵育时间的增加而增大。实验范围内的HMME-PDT对HSF细胞的杀伤效应与HMME浓度和激光能量密度正相关。结论 HSF对HMME的吸收随HMME浓度和孵育时间的增加而增大,HMME-PDT处理HSF时,光敏剂HMME浓度和激光能量密度是影响细胞存活率的重要因素。     

光动力学疗法对Ⅰ型单纯疱疹病毒灭活作用的实验研究

目的 探讨血卟啉介导的光动力效应体外灭杀Ⅰ型单纯疱疹病毒的效果。方法 在保证正常细胞不受光动力效应影响的前提下，用两种不同光剂量(2．6J/cm^2)及特定的光敏剂浓度对体外培养的HSV-1进行处理，照射后将细胞置于37℃、5％CO2孵育箱培养5d，观察致细胞病变作用(cytophathic effect，CPE)，并用四唑盐(MTT)比色法测定细胞成活率。结果 PDT对Ⅰ型单纯疱疹病毒有灭活作用。结论 在选择合适的光敏剂剂量和光照射强度的前提下，光动力学疗法在体外能够有效地灭杀Ⅰ型单纯疱疹病毒。     

血啉甲醚对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞光动力杀伤作用的初步研究

探讨血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)对体外培养的类风湿关节炎患者滑膜细胞的光动力杀伤作用。方法：用四唑盐化色法（MTT）检测了不同能量的铜蒸气激光,不同浓度的HMME对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞的杀伤效应,并与血卟啉衍生物（hematoporphyrin derivative,HpD)进行比较。结果：（1）单纯照光及单加HMME,HpD对细胞存活率均无明显抑制作用。（2）各种浓度的HMME在不同剂理的激光作用下对细胞均有杀伤作用,浓度越高其杀伤作用越明显;HMME浓度一定,随着照光剂量的增大杀伤作用增强;不同浓度HMME介导的光动力杀伤作用所能产生的最大抑制率不同,此时所需的光剂量也不同。（3）HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受照光前孵育时间的影响。（4）相同浓度的HMME介导的光动力杀伤效应较HpD更强。结论：HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受光敏剂的浓度及照光能量密度的影响,且明显强于HpD,临床应用于滑膜切除术可能具有更大的优势。     

低功率光动力诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨低功率光动力治疗能更有效诱导宫颈癌细胞(Hela)凋亡的发生机制。方法:将光敏剂Photofrin 5μg/ml与Hela细胞共孵育16h后,应用波长为633nm氩离子激光器进行照射,能量密度3J/cm2,功率密度分别为3和30mW/cm2,采用荧光探针标记技术和细胞器的荧光强度比值法对细胞内     

儿童面部鲜红斑痣光动力疗法治疗疗效分析

目的:分析应用铜蒸气激光为光源的光动力学疗法治疗儿童鲜红斑痣的有效性及各种因素对疗效的影响。方法:鲜红斑痣患者142例。静脉推注血卟啉单甲醚5min内行铜蒸气激光照射。激光功率密度80～100mW/cm2,光斑直径8～9cm,照射时间20～40min,能量密度120～240J/cm2。治疗随访1～3个月分析疗效与患者鲜红斑痣分型、病变部位的关系。     

体外超声激活血卟啉单甲醚抗C6胶质瘤细胞的研究

目的 研究超声激活血卟啉单甲醚(HMME),对C6胶质瘤细胞的生物效应,为声动力疗法(sonodynamic therapy,SDT)治疗脑胶质瘤奠定实验基础. 方法实验分为SDT组(超声 HMME组)、超声组、HMME组及仅加入肿瘤细胞的对照组.HMME终浓度为10 μg/ml,SDT组、超声组进行超声照射(频率:1.0 mHz,声强度:0.5 W/cm2,时间:120 s)处理.采用噻唑蓝比色分析法(MTT法)观察SDT处理后6、12、24、48和72 h的抑瘤率;流式细胞学检测SDT处理后6 h C6细胞凋亡率及细胞周期百分比.结果 SDT组抑瘤率显著增高;超声组也有一定的抑瘤率;HMME组抑瘤率与对照组无明显差别.SDT后凋亡率升高,G0/G1期、G2/M期百分比降低,S期百分比升高、凋亡增殖比(APR)升高.结论 SDT能显著杀伤C6胶质瘤细胞,并诱导其凋亡,使细胞阻滞于S期→G2期.     

血卟啉介导光动力疗法联合PD-1抑制剂治疗食管癌的临床研究

目的 初步评价血卟啉介导光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)联合PD-1抑制剂治疗食管癌的近期疗效。方法 选择2020年9月至2022年3月,食管癌患者15例,均行PDT联合PD-1抑制剂治疗。其中,光敏药物为血卟啉注射液,给药剂量为4～5 mg/kg,于照光前24～48 h静脉滴注,应用波长630 nm激光进行PDT治疗,功率密度80～200 mW/cm²,能量密度80～216 J/cm²。PDT治疗前完成第一次PD-1抑制剂治疗,患者总计接受1～9周期PD-1抑制剂治疗。PD-1抑制剂治疗后进行疗效评价,记录疼痛、发热、呃逆以及白细胞升高等主要不良反应发生情况。结果 15例患者治疗后,2例进食无障碍者均完全缓解;4例部分梗阻性食管癌患者中,2例部分缓解、2例基本稳定;9例严重梗阻性食管癌患者中,6例部分缓解,3例基本稳定。所有受试者均未出现皮肤光毒性。1例发生严重不良事件(serious adverse event,SAE)为上消化道出血,判定与本研究采用的治疗可能无关。治疗期间,15例患者中10例出现疼痛、6...     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对鼠黑素瘤细胞杀伤的实验研究

目的:探讨应用国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)对鼠皮肤黑素瘤B16F10细胞株行光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)的效应和机制。材料与方法:采用HMME作光敏剂,对B16F10细胞用633nm波长的He-Ne激光机作光源(功率密度5mW/cm2),以不同浓度的HMME经不同光剂量照射后,MTT法测定PDT     

光动力学疗法诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)是指光敏剂选择性地聚集在肿瘤组织中,接受光照后在细胞内产生活性氧物质,而导致肿瘤细胞凋亡或坏死的一种治疗方法。迄今为止,加拿大、美国、法国、荷兰、德国和日本等国家已先后批准PDT用于一些恶性肿瘤的治疗[1]。随着PDT作用机制的深     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增殖的影响

目的：观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether，HMME）的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增殖的影响，为HMME-PDT用于临床银屑病的治疗提供初步的实验依据。     

光动力疗法对侧支根管内粪肠球菌杀灭作用的实验研究

目的观察光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对离体牙侧支根管内粪肠球菌的杀灭作用。方法选取人类单根管离体前牙60颗,随机分为3组。常规根管预备后,在牙的近远中面距离根尖孔3 mm处制备15#K锉直径(锉尖直径为150μm)的人工侧支根管,建立粪肠球菌感染模型。实验组为PDT组,以40μg/ml血卟啉单甲醚(Hemato-porphyrin monomethylether,HMME)为光敏剂,避光孵育5 min后用激光功率为80 mW的532 nm半导体激光在根管内上下提拉螺旋照射120 s;阳性对照组为5.25%次氯酸钠冲洗组;阴性对照组为生理盐水冲洗组。各组实验牙标本(每个离体牙近中面侧支根管作为实验前标本,远中面侧支根管作为对应的实验后标本)处理前与处理后即刻用20#K锉取侧支根管内碎屑,然后将碎屑转至含5 ml TPY液体培养基的试管中,10倍递增连续稀释后厌氧培养24 h,菌落计数并推算对应的菌液浓度。结果菌落计数统计结果显示:(1)与阴性对照组(生理盐水冲洗组)比较,HMME-PDT处理组和阳性对照组(5.25%次氯酸钠冲洗组)各侧支根管内细菌量均显著下降(P<0.01);(2)HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌的杀灭效果(92.56%)显著优于阳性对照组(76.93%),差异有显著意义(P<0.01)。结论 HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌有很好的杀灭作用,将为根管消毒提供一种新的有效途径。     

PSD-007-PDT对人肝癌细胞HepG2抗增殖效应的实验研究

目的:探讨癌光啉介导的光动力疗法(PSD-007-PDT)对人肝癌细胞HepG2的抗增殖效应。方法:实验分为细胞组、对照组(单纯PSD-007)及PDT组。利用荧光显微镜观察不同浓度PSD-007在细胞中的吸收;多功能酶标仪定量分析细胞内PSD-007在不同时间点的荧光强度;以PSD-007为光敏剂,波长630nm激光为光源的PDT作用于细胞,MTT法检测PDT对细胞增殖活性的影响。