人血管内皮细胞生长抑制因子基因转移抑制角膜新生血管的实验研究

目的 探讨以阳离子脂质体介导重组人pcDNA4-血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)基因转移对角膜新生血管的抑制作用.方法 实验研究.40只健康成年新西兰大白兔(40只眼),采用随机数字表法分为4组:A组(10只兔)为阳离子脂质体-重组人pcDNA4-VEGI基因转染组;B组(10只兔)为空白载体转染组;C组(10只兔)为阳离子脂质体转染组;D组(10只兔)为空白对照组.自行构建真核表达的重组人血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)基因,并检测重组基因的正确性;角膜缝线法制作兔角膜新生血管模型,用结膜下注射的方法将阳离子脂质体包裹的VEGI重组质粒(pcDNA4-VEGI)转染入兔角膜,裂隙灯显微镜下观察记录各组兔角膜新生血管长出的时间、角膜新生血管的长度和数量,并分别于基因转染后1、3、7、14及21 d以免疫组织化学方法观察VEGI基因表达情况,观察其对角膜新生血管的抑制作用.采用SPSS 10.0单因素方差分析行数据统计.结果 计算机自动测序证实成功构建真核表达的重组人VEGI基因;动物实验中基因转染组角膜新生血管平均出现时间为6.3 d,对照组分别为3.1、3.2、3.2 d不等,差异有统计学意义(F=39.838,P=0.00);基因转染后第3天,转染组实验兔未出现角膜新生血管,对照组已有部分兔眼出现角膜新生血管;转染后第7天,转染组实验兔的角膜新生血管纤细,累及钟点数局限于缝线周围,对照组兔的角膜新生血管最长为2.9 mm,血管密集;转染后第14天,转染组兔角膜新生血管最长达4.0 mm,对照组新生血管最长达6.4 mm,累及钟点数为3.2个;各时间段基因转染组角膜新生血管长度、平均面积与对照组相比,差异均有统计学意义.A组角膜新生血管长度与B组相比,第7、14、21天q值分别为17.386、20.944、8.892,P值均＜0.01;与C组相比,第7、14、21天q值分别为19.488、19.795、7.483,P值均＜0.01;与D组相比,第7、14、21天q值分别为19.583、20.413、8.941,P值均＜0.01.A组角膜新生血管面积与B组相比,第7、14、21天q值分别为30.238、57.820、35.543,P值均＜0.01;与C组相比,第7、14、21天q值分别为32.607、57.843、36.653,P值均＜0.01;与D组相比,第7、14、21天q值分别为33.873、57.590、34.724,P值均＜0.01.免疫组织化学显示角膜上皮、基质、新生血管管壁细胞的VEGI表达阳性.结论 利用人工合成引物和聚合酶链反应方法可以将连接于原核表达载体的VEGI基因切下并连接于真核表达载体;阳离子脂质体能够介导重组人VEGI基因转染入角膜组织并使其分泌VEGI蛋白,对角膜新生血管有抑制作用.     

不同浓度重组人pcDNA4-VEGI基因对角膜新生血管的抑制作用

目的 探讨不同浓度的重组人pcDNA4-血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelia growth inhibitor,VEGI)基因转移对角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用.方法 角膜缝线法制作兔角膜新生血管模型,用结膜下注射的方法将阳离子脂质体包裹的VEGI DNA(剂量分别为10 μL、20 μL、30 μL、40 μL)重组质粒(pcDNA4-VEGI)转染入兔角膜,观察其对CNV的抑制作用.结果 基因DNA剂量为10 μL时VEGI对CNV的抑制作用不明显,20 μL和30 μL 2种剂量时VEGI作用显著,40 μL时作用反而降低.结论 阳离子脂质体能够成功介导重组人VEGI基因转染入角膜组织并使之成功分泌VEGI蛋白,20μL时即可对CNV起到较强抑制作用.     

转内皮抑制素基因治疗大鼠角膜新生血管

目的:探讨转染内皮抑制素(Endostatin)基因对酸烧伤引起的大鼠角膜新生血管的基因治疗。方法:通过限制性内切酶酶切反应、聚合酶链式反应、DNA测序及用NCBIBLAST软件与基因库序列比较的方法进行鉴定,鉴定后在大肠杆菌中扩增,用质粒纯化试剂盒抽提纯化;用750g/L硝酸银和250g/L硝酸钾混合烧灼液制作大鼠角膜新生血管模型,用结膜下注射脂质体包裹的质粒pBlast- hEndostatin来进行体内基因治疗。结果:实验证实质粒pBlast-hEndostatin含有人endostatin基因。结膜下注射脂质体包裹的质粒Tel押029-82245172Email押IJO.2000@163.compBlast-hEndostatin对酸烧伤引起的炎症性角膜新生血管有明显抑制作用,术后6,10,15d对角膜新生血管面积的抑制率分别为37%,40%,43%;对角膜新生血管密度也有明显的抑制作用,抑制率达40%。对角膜新生血管长度和角膜炎症细胞没有明显抑制作用。角膜新生血管面积与角膜水肿、角膜混浊呈正相关。结论:用结膜下注射脂质体包裹的内皮抑制素基因可以部分抑制酸烧伤引起的大鼠角膜新生血管。其作用机制是转基因产生的内皮抑制素蛋白直接抑制角膜新生血管的形成,而不是通过抑制炎症反应来抑制角膜新生血管的形成。     

VEGI和cyclo-VEGI抗眼部肿瘤的前景展望

血管内皮细胞生长抑制剂（vascular endothelial growth inhibitor，VEGI）和环状血管内皮细胞生长抑制因子（cyclo—VEGI）均可抑制血管内皮细胞增生及新生血管形成，产生强大抗肿瘤效应。但两者作用机理不同。VEGI诱导内皮细胞凋亡，激活核转录因子NF-KB和维持G0／G1期细胞生长停滞，而cyclo—VEGI抑制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和成纤维细胞生长因子-2（fibroblast growth factor-2，FGF-2）与各自受体结合及VEGF信号转导。将VEGI和cyclo-VEGI应用于以新生血管为靶点的眼部肿瘤治疗中，具有很高的研究价值。本文就其研究现状及应用前景作一综述。[眼科新进展2007；27（3）：226-228,232]     

体外转染人发状分裂相关增强子-1基因重塑视网膜新生血管的研究

目的 探讨体外转染人发状分裂相关增强子1（HESR-1）基因至视网膜血管内皮细胞并重塑视网膜新生血管的可行性。方法 将HESR-1克隆至pcDNA3．1＋载体内,组成pcDNA3.1＋HESR-1重组质粒,原代培养人视网膜血管内皮细胞,实验中加入10ng血管内皮生长因子（VEGF）刺激内皮细胞生长,模拟体内新生血管内皮细胞激活状态,以脂质体转染pcDNA3．1＋HESR-1重组质粒至培养的细胞内,应用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）第2受体（KDR）和紧密连接蛋白（occludin）表达的阳性率,采用免疫印迹法分析HESR-1对occludin表达的调控作用,体外建立视网膜血管模型,检测HESR-1对血管通透性的影响。结果 HESR-1基因成功转染至血管内皮细胞,KDR表达阳性率下降,occludin表达增强。重塑的体外血管样结构通过HESR-1的作用能降低血管通透性。结论 HESR-1基因能下调KDR的表达,增强occludin的表达,减少血管渗漏,达到重塑视网膜新生血管的目的;可为视网膜新生血管的治疗提供新的思路和方法。     

VEGI基因转移抑制角膜新生血管的实验研究

目的:探讨以阳离子脂质体介导重组人VEGI基因转移对角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法:角膜缝线法制作兔CNV模型,用结膜下注射的方法将阳离子脂质体包裹的VEGI重组质粒(pcDNA4-VEGI)转染入兔角膜,裂隙灯显微镜下观察记录各组兔CNV长出的时间、长度和数量,并分别于基因转染后3,7,14及21d以免疫组织化学方法观察VEGI基因表达情况,观察其对CNV的抑制作用。结果:基因转染组CNV平均出现时间为6.3d,对照组分别为3.1,3.2,3.2d不等,差异有统计学意义(F=39.838,P<0.01);基因转染后3d,转染组实验兔未出现CNV,对照组已有部分兔眼出现CNV;转染后第7d,转染组实验兔的CNV纤细,累及钟点数局限于缝线周围,对照组兔的CNV最长为2.9mm,血管密集;转染后第14d,转染组兔CNV最长达4.0mm,对照组新生血管最长达6.4mm,累及钟点数为3.2个;各时间段基因转染组CNV长度、平均面积与对照组相比,差异均有统计学意义(q=17.386,P<0.01)。免疫组织化学显示角膜上皮、基质、新生血管管壁细胞的VEGI表达阳性。各实验指标与对照组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:VEGI基因对CNV有抑制作用。     

血管内皮钙黏蛋白对实验性角膜新生血管的作用及机制

目的 探讨血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）在实验性角膜新生血管发生过程中的作用及机制。方法 动物实验研究。以碱烧伤诱导构建小鼠角膜新生血管模型;RT-PCR法检测VE-cadherin在碱烧伤角膜组织中的表达;碱烧伤1周后角膜局部应用阻断性抗小鼠VE-cadherin抗体进行干预,碱烧伤3周后大体观察角膜新生血管的发生情况以及全角膜铺片CD31荧光组织化学法检测角膜组织新生血管的面积;RT-PCR检测烧伤角膜组织内caspase-3 mRNA的表达;流式细胞术检测角膜组织血管内皮细胞凋亡数目;体外实验进一步验证VE-cadherin对血管内皮细胞（HREC）血管网形成的影响。采用成组t检验方法处理数据。结果 碱烧伤3周后,VE-cadherin抗体干预组角膜新生血管数目较对照组明显减少。RT-PCR结果显示VE-cadherin抗体干预组caspase-3基因水平表达增高;进一步流式细胞术检测结果显示VE-cadherin抗体干预后,角膜组织内凋亡的血管内皮细胞明显增多。体外实验证实VE-cadherin抗体明显抑制HREC细胞系血管网的形成。结论 VE-cadherin钙黏蛋白能通过维护细胞间黏附以及抑制细胞的凋亡等作用保护实验性角膜新生血管内皮细胞的生长,从而维持新生血管的发生发展。     

重组色素上皮细胞衍生因子抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管及兔角膜新生血管

目的:观察制备的重组色素上皮细胞衍生因子(rPEDF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管及兔角膜新生血管的抑制作用。方法:制备rPEDF,采用鸡胚绒毛尿囊膜分析,观察rPEDF抑制新生血管生长情况。利用碱烧伤制作兔角膜新生血管模型,观察rPEDF抑制角膜新生血管生长状况。结果:rPEDF能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长。rPEDF治疗组兔角膜新生血管长度及生长面积明显少于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:制备的rPEDF抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长,抑制兔角膜新生血管的形成。     

血管能抑素抑制新生血管生成的研究进展

血管能抑素是最新发现的一种内源性血管抑制因子,来源于Ⅳ型胶原.实验证明其在体外能显著抑制血管内皮细胞的增生和迁移,诱导其凋亡,在体内能抑制肿瘤新生血管生成.血管能抑素作为抗血管生成治疗的新策略,在眼科基因治疗方面有很好的应用前景,尤其是视网膜新生血管.本文就血管能抑素的发现、命名、生物学特性、作用机制及在眼科应用前景作一综述.     

Ad-PEDF对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的 研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)腺病毒载体注射后,对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法 构建、扩增及纯化PEDF病毒载体,注射入2型糖尿病模型大鼠玻璃体中,运用免疫组织化学、PAS染色及HE染色检测PEDF的表达,与对照组比较观察PEDF的表达水平,以及其对视网膜新生血管的抑制作用.结果 注射PEDF病毒载体后,PEDF表达量与对照组比较在各个时期均明显增多,同时PAS染色及HE染色均可发现注射组其视网膜新生血管较对照组明显减少.结论 注射PEDF腺病毒载体后,稳定表达的PEDF具有抑制新生血管生成,促进异常新生血管消退的作用.     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.