抗白念珠菌保护性抗体免疫

许多临床资料及实验室研究结果显示,在白念珠菌感染中,存在有保护性抗体免疫。现就抗体免疫在抗白念珠菌感染中的地位、抗体免疫的保护作用、抗白念珠菌保护性抗体的研究进展及其抗体免疫的保护机理综述如下。     

抗白念珠菌人鼠嵌合抗体真核表达载体的构建与表达

目的构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达。方法从含有单克隆天然抗白念珠菌抗体3B4可变区基因的载体pMDT-V2H和pUC-VL中PCR克隆单抗3B4的可变区VH和VL基因,依次插入含有人免疫球蛋白κ轻链恒定区基因和γ1重链恒定区基因的真核表达载体pMH-CA。经DNA序列测定正确后,电穿孔转染J558L细胞进行嵌合抗体表达,RT-PCR,ELISA方法对抗体表达进行鉴定。结果成功构建了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体,转染真核细胞后RT-PCR显示人鼠嵌合抗体重链和轻链mRNA的转录,ELISA证实了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的表达以及对白念珠菌的识别。结论成功构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并表达出具有结合活性的基因工程抗体。     

抗白念珠菌感染特异性免疫实验研究

目的　了解细胞免疫和体液免疫在机体抗白念珠菌感染中的作用。方法　分别观察过继免疫T淋巴细胞、抗体和吞噬细胞的免疫功能低下小鼠抵抗腹腔白念珠菌感染情况。结果　过继上述 3种免疫成分的小鼠的腹腔、脾脏和肾脏的白念珠菌菌落数均少于没有过继免疫的小鼠 (P <0 .0 5 ) ;过继免疫T淋巴细胞组的小鼠腹腔菌落数少于免疫抗体小鼠 (P <0 .0 5 ) ;过继免疫抗体 +吞噬细胞组的小鼠肾脏白念珠菌菌落数明显少于单纯过继免疫吞噬细胞组的小鼠 ,差异有显著性 (P =0 .0 3 7)。结论　细胞免疫、体液免疫都参与机体抗白念珠菌免疫反应 ;在抗白念珠菌局部感染中细胞免疫占主导地位 ;体液免疫参与阻止白念珠菌血液播散。     

重要条件致病真菌感染组织免疫组化研究

目的 探索在组织中鉴定重要条件致病真真的组织病理学方法。方法 以实验小鼠白念珠菌感染组织和可疑念珠菌、隐球菌和曲霉感染的临床组织病理标本进行ＰＡＳ染色和免疫组化染色，并比较了两种方法的敏感性。结果 兔抗白念株菌多克隆抗体、兔抗新生隐球菌多克隆抗体和鼠抗曲霉单克隆抗体可以分别鉴定组织中的白念珠菌、新生隐球菌和曲霉。免疫组经和ＰＡＳ染色的敏感性差异无显著性。结论 免疫组化为组织中确定真菌和鉴定真菌种属     

白念珠菌烯醇化酶的抗原特异性研究

目的 探讨白念珠菌烯醇化酶的抗原特异性。方法和结果 （1）免疫印迹显示烯醇化酶是白念珠菌非糖基化蛋白中可以和感染兔血清发生反应的主要蛋白质。（2）以纯化的白念珠菌烯醇化酶免疫家兔获得最高效价为1：6400的多克隆抗体（ELISA法测定）。（3）与另外3种多克隆抗体相比,抗烯醇化酶抗体在检测白念珠菌菌体抗原时显示出较高的特异性。结论 白念珠菌烯醇化酶是一种值得进一步研究的特异性抗原。     

单克隆天然抗体384抑制白念珠菌芽管形成的机制初探

目的观察单克隆天然抗体384对白念珠菌芽管形成的影响，并进一步分析其结合于白念珠菌的部位及成分。探讨其发挥作用的机理。方法将纯化的单克隆抗体3B4与白念珠菌共孵育，计数形成芽管的数量。采用间接免疫荧光方法和流式细胞仪分析抗体384与白念珠菌结合的部位；将白念珠菌用蛋白酶K、氢氧化钠等分别处理后，观察3134对其的结合情况，初步确定其结合成分。结果相对于同型对照，抗体3134作用组白念珠菌芽管生成率显著下降并有统计学差异。流式细胞仪和间接免疫荧光检测均发现3134可以与白念珠菌的芽管相结合，而与酵母相的结合很弱；蛋白酶K、氢氧化钠等处理后，3134对芽管相和酵母相白念珠菌均不发生结合，提示抗体3134结合的成分是主要表达于菌丝相的一种糖蛋白。结论单克隆天然抗体3134可能通过与主要表达在芽管上的一种糖蛋白结合而抑制其芽管形成。     

银屑病患者血清中链球菌抗体的研究

为了进一步证实链球菌感染与银屑病的关系,我们应用免疫印迹法测试了银屑病患者血清中抗链球菌、抗金黄色葡萄球菌及抗白念珠菌抗体含量.发现点滴型银屑病患者的抗链球菌抗体含量不仅显着高于正常人对照组(P<0.01),亦高于慢性斑块型银屑病患者(P<0.05);但其抗金黄色葡萄球菌、抗白念珠菌抗体含量与对照组相比,结果均无显着性差异(P>0.05).本研究证明了链球菌感染与点滴型银屑病密切相关.     

系统性白念珠菌病患者血清中芽管抗体的检测

目的 探讨一种诊断深部白念珠菌病的新方法.方法 以间接免疫荧光法测定白念珠菌系统感染患者血清中芽管抗体的滴度,并与常规真菌检测结果及菌株磷脂酶活性相比较.结果 血清中芽管抗体检测与常规检测方法(镜检+培养)阳性率比较,有较好的一致性(P<0.001).磷脂酶活性测定结果显示,感染组患者分离株较定植组的磷脂酶活力差异有统计学意义(P<0.05);磷脂酶活性与芽管抗体滴度具有相关性,P<0.001.结论 检测白念珠菌芽管抗体在系统件白念珠菌感染诊断中具有一定的诊断意义.     

抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其对血清芽管诱导率的影响

目的制备并鉴定抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株,观察该单抗对白念珠菌菌相转换的影响。方法白念珠菌ATCC-90028标准株带芽管孢子做抗原,运用细胞融合技术,制备抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,并鉴定。将该单抗参与白念珠菌芽管血清诱导,对比其芽管诱导率与血清芽管诱导率。结果建立1株持续分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株M cAb03.2C1-C2。其小鼠腹水单克隆抗体效价达1∶25 600;抗体重链属IgG1亚类,轻链属λ型;证实M cAb03.2C1-C2的靶位是位于白念珠菌芽管胞壁外膜上分子量为156kD的抗原成分。间接免疫荧光(IIF)可见单抗能与白念珠菌芽管特异性地结合,与白念珠菌的孢子相不发生反应。单抗能明显降低芽管诱导诱导率。结论本研究建立的M cAb03.2C1-C2对白念珠菌致病相-芽管有高度的特异性,为早期、快速地诊断系统性白念珠菌感染提供了新的前景。M cAb03.2C1-C2对菌相转换有明显的抑制作用,可能在抗白念珠菌系统性感染中起保护性作用。     

白念珠菌保护性单抗的研究

目的 探讨抗白念珠菌单克隆抗体在系统性念珠菌感染动物中的保护作用。方法 制备抗白念珠菌单抗,观察单抗对系统性念珠菌感染小鼠存活时间,组织病理改变以及组织中菌落形成单位的影响。结果 制备出3株抗白念珠菌胞壁外膜抗原单克隆抗体-1B5、3E8、4C7;1B5、3E8两株单抗能显著延长致死量白念珠菌感染小鼠存活时间,减少感染小鼠主要脏器组织中白念珠菌菌落形成单位,减轻组织病理改变;1B5单抗能识别白念珠菌胞壁外膜上相对分子质量约为32000抗原;并在体外能抑制白念珠菌孢子对人颊粘膜上皮细胞,胎儿脐静脉内皮细胞的粘附。结论 1B5、3E8是具有保护作用的抗白念珠孢子对人颊粘膜上皮细胞,胎儿脐静脉内皮细胞的粘附。结论 1B5、3E8是具有保护作用的抗白念珠菌单抗;其中1B5是抗白念珠菌胞壁外膜上相对分子质量为32000的抗原的单抗;1B5单抗可通过抑制白念珠菌对上皮细胞,内皮细胞的粘附,降低该菌的侵袭力。     

白念珠菌抗体疫苗研究进展

白念珠菌是免疫力低下患者黏膜和系统的真菌致病源,侵袭性念珠菌感染有很强的致死性.即使是健康的个体,也容易感染阴道念珠菌病和其他皮肤黏膜念珠菌病.传统抗真菌药的疗效有一定的局限性和毒副作用,并且容易产生耐药.近年来,一些新型抗体疫苗已经研发并应用于动物模型和临床,表现出很好的对抗白念珠菌和协同传统抗真菌药物的作用.尽管其疗效和安全性还需要进一步验证,念珠菌抗体疫苗仍具有较好的临床应用前景,有望成为念珠菌病的辅助治疗手段.     

EnVision免疫组织化学二步法在诊断深部真菌感染上的应用

观察微波EnVision免疫组织化学二步法检测临床常见的几种深部真菌感染的敏感性与特异性，选用鼠抗曲霉单克隆抗体、免疫新生隐球菌及兔抗白念珠菌多克隆抗体，分别对34例深部真菌感染的福尔马林固定，石蜡包埋切片进行PAS染色、微波EnVision免疫组织化学标记。结果示免疫组织化学染色示16例可疑曲霉感染14例阳性，11例可疑隐球菌感染全部阳性，7例念珠菌感染6例阳性，菌体染色清晰几无背景。结论：微波EnVision免疫组化二步法应用于深部真菌感染检测具有高敏感、低背景、快速简便的特点，在真菌病的临床病理诊断中具有很好的应用价值。     

单克隆天然抗角蛋白抗体384抑制白念珠菌芽管生成的研究

目的观察单克隆天然抗角蛋白抗体384与自念珠菌结合及对芽管生成的影响。方法采用ELISA和流式细胞仪检测单克隆天然抗角蛋白抗体384与白念珠菌结合，并将抗体与真菌共孵育，检测白念珠菌芽管生成的变化。结果ELISA和流式细胞仪检测均发现384可以与白念珠菌结合；相对于同型对照组，384作用组真菌芽管生成率显著下降，两组差异有统计学意义。结论单克隆天然抗角蛋白抗体384可以与白念珠菌结合并抑制其芽管生成，提示天然IgM在机体抗真菌天然免疫中可能具有一定的作用。     

单克隆天然抗体3B4抑制白念珠菌芽管形成的机制初探

目的观察单克隆天然抗体3B4对白念珠菌芽管形成的影响,并进一步分析其结合于白念珠菌的部位及成分,探讨其发挥作用的机理。方法将纯化的单克隆抗体3B4与白念珠菌共孵育,计数形成芽管的数量。采用间接免疫荧光方法和流式细胞仪分析抗体3B4与白念珠菌结合的部位;将白念珠菌用蛋白酶K、氢氧化钠等分别处理后,观察3B4对其的结合情况,初步确定其结合成分。结果相对于同型对照,抗体3B4作用组白念珠菌芽管生成率显著下降并有统计学差异。流式细胞仪和间接免疫荧光检测均发现3B4可以与白念珠菌的芽管相结合,而与酵母相的结合很弱;蛋白酶K、氢氧化钠等处理后,3B4对芽管相和酵母相白念珠菌均不发生结合,提示抗体3B4结合的成分是主要表达于菌丝相的一种糖蛋白。结论单克隆天然抗体3B4可能通过与主要表达在芽管上的一种糖蛋白结合而抑制其芽管形成。     

白念珠菌芽管特异性抗原快速检测方法的建立和初步评价北大核心CSCD

目的建立白念珠菌芽管特异性抗原快速检测系统,探讨其特异性和敏感性。方法以单克隆抗体McAb03．2C1-C2作为一抗,辣根过氧化物酶标记McAb03．2C1-C2为二抗,建立双抗体夹心ELISA实验方法并检测6只动物模型和5例系统性白念珠菌感染患者的血清标本。结果筛选出McAb03．2C1-C2最佳稀释度和检测包被抗原浓度分别为l：4000和1．25-40μg,／ml;双抗体夹心ELISA检测动物模型的特异性和敏感性分别为95％、92％,其对阳性临床标本的检测结果与常规鉴定方法一致。结论初步建立白念珠菌芽管特异性抗原的双抗体ELISA快速检测系统,动物模型实验证实该系统有较好的特异性和敏感性。     

抗白介素10单克隆抗体抗小鼠系统性白念珠菌感染的研究

目的 探讨抗白介素10单克隆抗体在抗系统性白念珠菌感染中的作用。方法 建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型,设置对照组(单纯白念珠菌感染组)与处理组(白念珠菌感染同时注射抗白介素10单克隆抗体)。用平皿稀释法检测肾脏,脾脏组织菌落形成单位(cfu)数目;制作肝、肾、脾脏组织病理学标本,评估其病理学分级;并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脾脏干扰素γ分泌水平。结果 感染后2d、3d、7d,处理组肾脏cfu值明显低于对照组(P<0.05);脾脏组织cfu值也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。肾脏组织病理学评分处理组低于对照组,处理组较对照组感染程度减轻,差异有显著性(P<0.01);脾脏组织病理学评分处理组也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。同时检测脾脏干扰素γ分泌水平处理组明显高于对照组,具有统计学意义。结论 抗白介素10单克隆抗体在小鼠系统性白念珠菌感染中具有治疗作用。     

抗白念珠菌卵黄免疫球蛋白对白念珠菌生长及黏附的影响

白念珠菌黏附于宿主上皮是其在宿主中形成集落及入侵体内的第一步,也是其具有强致病性的标志,因此,抑制其黏附和生长是防治念珠菌病的有效途径。抗白念珠菌卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of egg yolk,IgY）是白念珠菌免疫产蛋母鸡后从鸡蛋中提取的一种卵黄抗体,能与白念珠菌特异性结合。为此,笔者通过黏附试验观察了IgY对白念珠菌黏附于人口腔颊黏膜细胞的影响,并观察IgY对体外培养白念珠菌生长的影响．现报告如下。     

巨噬细胞集落刺激因子应用于抗白念珠菌感染的研究进展

巨噬细胞集落刺激因子是近年来国外学者密切关注的具有抗白念珠菌感染作用的细胞因子，它能促进骨髓造血祖细胞分化发育成单核巨噬细胞，并增强巨噬细胞粘附蚕噬白念珠菌的能力。实验室及临床Ⅰ／Ⅱ期研究表明，巨噬细胞集落刺激因子在临床抗白念珠菌感染方面具有良好的应用前景。     

小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型局部ToII样受体2和4 mRNA表达的研究

目的：研究小鼠口腔黏膜白念珠菌感染后局部组织Toll样受体(TLR)2、4mRNA表达的变化规律,探讨其在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中的作用。方法：采用局部接种的方法建立小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型。在不同时间取口腔组织．用半定量逆转录(RT)-PCR检测口腔组织TLR2、TLR4 mRNA表达水平。结果：接种前口腔组织内有微量的TLR2、TLR4 mRNA表达．接种后6h组织中TLR2、TLR4 mRNA表达开始增加,12～24h表达水平达峰值。TLR4 mRNA表达于24～48h开始下降．72h趋于接种前水平,而TLR2 mRNA表达则持续增加至72h。结论：白念珠菌感染可迅速上调局部组织TLR2、TLR4的基因表达,TLR2、TLR4在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中可能起重要作用。     

用葡萄球菌A蛋白增强的念珠菌因子抗体鉴定人体念珠菌

用葡萄球菌A蛋白菌体试剂（SPA）结合“CANDIDA CHECK”试剂盒中因子抗体，并作100倍稀释，与218株人体念珠菌作凝集试验，血清法对非血清法的总符合率为87．2％。常见菌种白念珠菌和热带念珠菌的符合率为97．1％和98．7％，少见菌种的符合率较低。此外，仅检出白念珠菌血清B型1株，未发现类星形念珠菌。本文表明采用SPA协同凝集法可以很大地节约原因子抗体量，血清法与非血清法结合可显著提高鉴定率。