重组梅毒螺旋体抗原的研究进展

在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下,基因克隆(即DNA重组)技术的出现为该病原体的研究开辟了一条新的途径。应用基因工程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原,这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨、疫苗的研制、以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义,为梅毒的预防和控制提供了更加有效的手段。     

一种梅毒螺旋体重组抗原胶体金的制备

目的制备一种可以特异、准确的检测血清中梅毒螺旋体抗体的胶体金免疫层析试纸。方法利用原核表达系统构建一种包含梅毒螺旋体多个免疫表位的重组抗原B1,采用ELISA的方法对重组抗原进行活性检测。胶体金标记重组抗原B1,制备胶体金免疫层析试纸。结果重组抗原B1在BL21表达载体中有较高表达,ELISA结果显示B1与梅毒患者血清能特异、敏感的结合,与乙型肝炎病毒血清及阴性血清无交叉反应。应用B1蛋白制备的胶体金诊断试纸检测100份梅毒标准血清,结果均为阳性,与乙型肝炎患者血清及健康人群血清无交叉反应。结论梅毒螺旋体胶体金快速诊断试纸具有良好特异性和敏感性,可以快速、准确的诊断梅毒螺旋体的感染。     

ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用

目的探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体在诊断梅毒中的应用。方法临床诊断或怀疑为梅毒的97例患者和74例非梅毒患者的血清同时接受ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体和TPPA试验两种检测。结果ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体具有较高的敏感性和特异性。结论ELISA抗梅毒螺旋体抗原的特异性IgG/IgM抗体适合于大样本的筛查和确诊。     

梅毒螺旋体Nichols株45KD多肽成分的研究及其在梅毒临床诊…

应用单克隆抗体和免疫印迹技术分析Ｎｉｃｈｏｌｓ株梅毒螺旋体４５ＫＤ多肽成分，证明其具有多个抗原决定簇，与其它７种螺旋体无交叉反应。并应用印迹技术诊断梅毒作对比。符合率为９８．７５％。正常人对照均为阴性。     

胶体金法检测梅毒螺旋体特异性抗体的初步观察

检测梅毒螺旋体抗体有两种,一种是检测非特异性抗体,另一种是检测其特异性抗体。目前胶体金标记金黄色葡萄球菌Ａ蛋白(ＳＰＡ)法检测梅毒螺旋体非特异性抗体已见报道[1]。我们采用基因重组梅毒螺旋体抗原点样于醋酸纤维薄膜上、胶体金标记ＳＰＡ快速检测血清中梅毒螺旋体特异性抗体,现将结果报道如下。一、材料和方法1.梅毒螺旋体特异性抗原的制备:选用公认的42000膜蛋白(ＴｍｐＡ)作为梅毒螺旋体特异性抗原[2,3],聚合酶链反应(ＰＣＲ)人工合成或者将其基因片段植入大肠埃希菌内大量合成其ＴｍｐＡ蛋白,本抗原及醋酸纤维薄膜由Ｔｒｉｃｏｎ…     

基因工程技术制备梅毒螺旋体重组抗原的研究

目的 用基因工程技术制备梅毒螺旋体特异蛋白抗原,以梅毒螺旋体不能体外培养而难以获得足量的纯梅毒螺旋体特蛋白抗原的难题。方法 以PCR技术克隆出目的基因,重组后通过DNA序列测定验证重组质粒中连结有目的基因片段;以pMAL^TM-e2为质粒载体,TB1大肠杆菌为宿主菌进行目的基因的转化、诱导和表达,并对表达产物进行蛋白印迹试验检测其血清学活性。结果 PCR克隆出梅毒螺旋体15000、17000以及47000蛋白的基因克隆,其中梅毒螺旋体17000以及47000在TB1大肠杆菌中得到稳定的表达,且表达产物显示与梅毒患者血清有非常特异的血清学反应。结论 梅毒螺旋体之目的基因在大肠杆菌中得到了成功表达,并具特异的血清学活性,从而为建立为国产化梅毒血清学诊断的新方法奠定了基础。     

关于梅毒血清学检查的几个热点问题

梅毒血清试验包括非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清试验,二种方法需结合使用,前者主要用来判断疗效,后者用作确证诊断。本文讨论了关于梅毒血清学检查的几个热点问题,包括梅毒血清试验假阳性、假阴性、术前梅毒血清检查阳性、血清固定及其处理等。     

梅毒螺旋体Nichols株45KD多肽成分的研究及其在梅毒临床诊断的应用

应用单克隆抗体和免疫印迹技术分析Ｎｉｃｈｏｌｓ株梅毒螺旋体４５ＫＤ多肽成分，证明其具有多个抗原决定簇，与其它７种螺旋体无交叉反应。并应用印迹技术诊断梅毒作对比，符合率为９８．７５％。正常人对照均为阴性。     

ELISA在梅毒血清学诊断中的应用

酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)是一种利用酶标记抗原或抗体检测相应抗体或抗原的免疫学检测方法 ,目前已广泛应用于各种抗原和抗体的测定。在梅毒的免　 [作者单位 ] 1湖北医科大学附属第二医院皮肤科 ,湖北武汉　430 0 71　 2湖北医科大学附属第二医院检验科疫学检测中 ,用非致病性螺旋体作为抗原成分的ＥＬＩＳＡ方法已用于先天梅毒的诊断和梅毒的抗心磷脂抗体与其它疾病的抗磷脂抗体的鉴别 ,而以梅毒螺旋体为抗原成分的ＥＬＩＳＡ试验也已应用于梅毒血清学的诊断[1] 。我们采用ＥＬＩＳＡ方法以梅毒螺旋体为抗原对临床 116份血清作了特…     

梅毒螺旋体抗体IgG酶联免疫吸附试验的建立

梅毒螺旋体抗原试验,如荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)等的敏感性和特异性高,但试剂昂贵,操作较复杂,所需时间较长,现不用于筛查而用于确证。为探讨既可用于筛查又可用于确证的梅毒螺旋体抗体检测方法,我们用基因重组技术表达的梅毒螺旋体蛋白(Treponema pallidum protein,Tp)17和Tp44.5为抗原,以辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体为酶结合物,建立了梅毒螺旋体抗体IgG的间接ELISA法(ELISA-Tp-IgG),经临床观察和献血员筛查,效果较好,现报道如下。     

间质型神经梅毒6例临床分析

目的：总结间质型（脑膜及血管型）神经梅毒的临床特征，以提高对该病的认识。方法：回顾性分析6例间质型神经梅毒的临床表现、实验室检查和影像学特点。结果：6例间质型神经梅毒主要以脑卒中起病，实验室检查脑脊液示3例快速血浆反应素试验阳性，5例梅毒螺旋体抗原凝集试验阳性，6例脑脊液蛋白异常；头颅MRI表现脑动脉炎或脑梗塞等改变。结论：间质型神经梅毒临床表现多急性发病，影像学检查缺乏特异性，脑脊液梅毒螺旋体抗原凝集试验可能可以在神经梅毒中的应用，神经梅毒的诊断应结合临床表现及辅助实验检查综合分析。     

神经梅毒

各期梅毒均可发生中枢神经系统损害.实验室检查显示非梅毒螺旋体抗原试验及梅毒螺旋体抗原试验阳性,脑脊液性病研究实验室玻片试验(VDRL)阳性,脑脊液白细胞计数≥10x106/L、蛋白定量>500 mg/L,可诊断为神经梅毒.水剂青霉素是目前治疗神经梅毒的最好选择.脑脊液中细胞计数是疗效观察的敏感指标,并发HIV感染者脑脊液异常时间可能延长.     

江苏省梅毒检测实验室发展现状及分析

目的：分析梅毒检测实验室现状。方法：2008—2010年，江苏省辖区内在“中国疾病预防控制信息系统”上报过梅毒确诊病例的所有医疗卫生机构和艾滋病筛查实验室，填写调查信息表。结果：620家医疗卫生机构上报梅毒确诊病例，其中综合性医院为82．3％，疾病预防控制机构为8．5％；参加梅毒实验室能力验证的比例为：综合性医院47．6％，疾病预防控制机构32．1％；620家医疗机构3年来接受过性病专业培训为72．7％；梅毒螺旋体抗原血清学实验和非梅毒螺旋体抗原血清学实验的检测都开展的66．9％；使用水平旋转仪开展非梅毒螺旋体抗原血清学实验检测的医疗卫生机构仅为12．7％。结论：我省梅毒检测实验室发展很不均衡，应推进梅毒确证实验室建设，为完成《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）》的各项指标奠定基础。     

陕西省2014年梅毒血清学检测室间质评效果评价

目的：明确2014年陕西省梅毒血清学检测室间质量评价的效果。方法：梅毒盲样统一采购,分发至341个医疗单位实验室,由各实验室按照梅毒血清学检测规范操作,结果反馈,统一判定。结果：上报质评结果的医疗单位332个,上报率为97.4%。其中梅毒螺旋体抗原血清学检测总体合格率为96.99%,非梅毒螺旋体抗原血清学检测总体合格率为69.88%。结论：陕西性病诊疗医院梅毒实验室检测质量仍有待改进。     

2010-2019年海南省梅毒血清学试验室间质量评价结果分析

目的：了解海南省医疗机构实验室梅毒血清学检测水平。方法：2010-2019年每年组织一次全省梅毒血清学试验室间质量评价，给每个参评单位发放梅毒考核品，按照要求进行非梅毒螺旋体抗原血清学定性、定量试验和梅毒螺旋体抗原血清学定性试验，在规定的时间内检测和回报结果。结果：2010-2019年参评单位每年梅毒血清学检测平均得分从2010年的66.63上升到2019年的96.31。结论：2010-2019年海南省实验室梅毒检测能力逐年提高。     

临床梅毒螺旋体菌株兔感染模型构建

目的：构建临床梅毒螺旋体菌株梅毒兔感染模型。方法：收集梅毒患者梅毒螺旋体菌株，制备菌悬液，将悬液注入新西兰兔睾丸并连续分离传代，观察新西兰雄兔临床症状及血清学变化情况。结果：共收集临床梅毒螺旋体菌6株 (A-F)，接种成功5株—A、C、D、E、F菌株，分别于接种后第28天、7天、14天、32天、35天检测到TPPA转阳。将获得的临床菌株A继续传代，接种6天开始睾丸出现肿胀，平均7.7天TPPA转阳。结论：通过兔睾丸接种的方法，可以成功分离传代临床梅毒螺旋体菌株。     

梅毒螺旋体Nichols株的液氮冷冻保存及不同传代周期的结果观察

194 8年Ｎｅｌｓｏｎ等[1] 首先建立了梅毒螺旋体制动试验 (ＴＰＩ) ,到 70年代至今已被更为敏感、特异性良好、既经济又简便的荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(ＦＴＡ ＡＢＳ)、梅毒螺旋体血凝试验 (ＴＰＨＡ)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (ＴＰＰＡ)所代替。这类特异性试验试剂盒的研制都是以梅毒螺旋体Ｎｉｃｈｏｌｓ株作为特异性抗原的 ,因此 ,Ｎｉｃｈｏｌｓ株的保存、传代、抗原纯化是特异性试验试剂盒研制的关键。我们性病中心的梅毒螺旋体Ｎｉｃｈｏｌｓ株是 1978年自ＷＨＯ引进 ,采用家兔睾丸传代和液氮内保存至今 ,按常规我们每隔 3～ 4…     

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析^[1],通过重组技术已制备多种重组Tp抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发^[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析,选取抗原性较强的Tp外膜蛋白GPd进行克隆表达,并以重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA法,评价其在梅毒血清学诊断中的应用价值。     

TRUST与USR、RPR在梅毒筛选试验中的对比观察

ＴＲＵＳＴ与ＵＳＲ、ＲＰＲ在梅毒筛选试验中的对比观察董雅荣，李桂娥，马季，李晓春，木克达斯，金雁指导张昆新疆地方病防治研究所（邮政编码８３０。。２）梅毒血清学试验根据所用抗原不同可分为螺旋体和非螺旋体试验。ＲＰＲ、ＵＳＲ、ＴＲＵＳＴ均属于非螺旋体试验...     

梅毒患者及其性伴的梅毒血清学检测分析

梅毒的血清学检测目前多用类脂质抗原试验作为筛选试验，而将梅毒螺旋体抗原血清试验作为证实试验。我们于1993年5月～1994年11月通过12例梅毒患者及性伴共24份血清RPR和TPHA的检测，对其在梅毒实验诊断中意义进行了初步探讨。材料与方法病例12对被检者中夫妻11对，男性同性恋1对。首诊12例患者中二期显性梅毒10例，硬下沉1例（梅毒螺旋体阳性），另1树无临床症状因“USR（＋）”转入会诊而确诊（RPR＋、TPHAI：256O）。性伴12例仅1例有二期梅毒疹，余均无皮损。性伴均在首诊病例确诊后1周内进行血清学检测。试剂RPR试剂为武汉生物…