NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB表达的上调作用

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达。结果显示:缺血再灌注组CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);NGF组CREB和p-CREB表达高于缺血再灌注组(P<0.05)。以上结果表明NGF明显上调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过上调CREB和p-CREB的表达来实现。     

CGRP对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的上调作用

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB（p-CREB）表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型，应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组大鼠顶叶皮质CREB表达少于假手术组，CGRP组大鼠顶叶皮质CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。假手术组右侧顶叶皮质p-CREB表达很少，缺血再灌注组顶叶皮质p-CREB表达多于假手术组，CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠右侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达，CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的影响

目的探讨单唾液酸神经节苷脂(GM1)对脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为:假手术组(Sham,8只)、神经节苷脂治疗组(GM1,32只)、缺血再灌注组(I/R,32只)。GM1治疗组和I/R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为6h、12h,24h、3d,共4个小组。应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠海马CREB蛋白的表达。结果免疫组织化学方法检测时发现,缺血处理后,CREB表达水平迅速增高,在6h时最高,之后持续激活,至12h时开始降低,与假手术组相比,CREB阳性产物的平均光密度值(MOD)显著升高(P0.01);与相同时间点的缺血组比较,GM1治疗组的CREB蛋白阳性表达水平明显升高(P0.01)。Western blot方法也得到了相同的结论。结论 GM1对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用可能与上调CREB蛋白的表达相关。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的上调作用

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化的CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、W estern B loting和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和磷酸化CREB表达。结果假手术组海马CA1区CREB有明显表达,缺血再灌注组CA1区表达较假手术组减少,NGF组CA1区的CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组海马CA1区p-CREB表达很少,缺血再灌注组p-CREB表达多于假手术组,NGF组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NGF上调海马CREB和p-CREB的表达,对缺血神经元起保护作用,CREB和p-CREB参与NGF对缺血神经元的保护作用机制。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑cAMP反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响.方法 用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA表达.结果 假手术组右侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA有明显表达,缺血再灌注组右侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA阳性产物吸光度值减少,CGRP组缺血侧海马CAl区和顶叶皮质CREB mRNA表达的吸光度值比缺血再灌注组增高(P＜0.05).结论 CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现.     

CGRP及NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)及神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果缺血再灌注组海马CA1区CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);CGRP组和NGF组CA1区的CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组(P<0.05);CGRP与NGF联合应用时CREB和p-CREB表达分别高于CGRP组和NGF组(P<0.05)。结论CGRP及NGF上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP与NGF联合应用则作用更强,CGRP及NGF对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,CGRP与NGF对缺血神经元的保护有协同作用。     

SH2-Bβ在局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质的表达

目的研究信号分子SH2-Bβ在局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑顶叶皮质表达情况为阐明脑缺血的演变的分子机制从而为临床治疗提供理论依据。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,动物随机分为假手术组和缺血再灌注组,应用免疫组织化学SABC法和图像分析方法检测大鼠顶叶皮质SH2-Bβ表达情况。结果假手术组右侧顶叶皮质SH2-Bβ有很少的表达,而缺血再灌注组3 h时间点SH2-Bβ在右侧顶叶皮质的平均光密度值比假手术组明显增高,持续到24 h,到48 h时间点开始下降,到72 h已逐渐下降但仍高于假手术组(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质SH2-Bβ被诱导而表达增高,SH2-Bβ可能参与NGF对缺血神经元的保护作用机制,促进神经元存活和损伤的修复。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马CHOP mRNA及蛋白表达的影响

探讨NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马神经元CHOPmRNA及蛋白表达的影响。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),应用原位杂交方法检测CHOPmRNA的表达;应用免疫组织化学SABC法检测CHOP蛋白表达;应用显微图像分析系统进行分析。结果显示:假手术组大鼠海马CHOPmRNA及蛋白表达极少;缺血组较假手术组CHOP表达mRNA和蛋白均显著增加(P<0.01),缺血再灌注3h后CHOPmRNA表达明显增加,24h达高峰,48h开始显著下降,72h接近对照组水平,CHOP蛋白在缺血再灌注12h时明显表达增高,24h达到高峰,72h显著下降,但仍高于对照组水平(P<0.01);在缺血再灌注12、24、48h,NGF组CHOPmRNA及蛋白表达明显低于缺血组(P<0.01)。本研究表明,外源性NGF能显著抑制局灶性脑缺血再灌注后CHOPmRNA及蛋白表达,提示NGF可能对脑缺血再灌注损伤后的海马神经元有保护作用。     

CGRP和NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马p53蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马p53蛋白表达的影响,用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,应用免疫组化和显微图像分析方法检测脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区p53蛋白的表达。结果如下:假手术组海马CA1区未见p53阳性细胞,而脑缺血再灌注组阳性细胞明显增多。分别注射CGRP或NGF后海马CA1区p53阳性细胞平均灰度值均明显高于缺血再灌注组(P<0.05),二者联合应用时平均灰度值较单独应用高(P<0.05)。以上结果提示:CGRP和NGF下调缺血神经元p53蛋白的表达,二者合用作用更强,可能对缺血神经元的恢复有促进作用。     

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk mRNA表达的调节作用

目的　检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节蛋白激酶信使RNA(ErkmRNA)的表达,探讨降钙素 基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织的保护作用。　方法　采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺 血再灌注模型,采用原位杂交及显微图像分析方法检测海马及皮质内Erk的表达。　结果　大鼠缺血再灌注海马 及皮质内ErkmRNA较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后ErkmRNA明显高于缺血再灌注组(P< 0.01),两者联合应用效果更加显著(P<0.05)。　结论　CGRP及NGF可能参与缺血神经元ErkmRNA的调节,两 者对缺血神经元有协同修复作用。     

CGRP和NGF对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质Caspase-3蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽 ( CGRP)和神经生长因子 ( NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达的影响 ,在全脑缺血后再灌注模型上 ,应用免疫组织化学结合显微图象分析方法检测了 Caspase-3蛋白表达。结果发现 ,假手术组大鼠纹皮质未见 Caspase-3表达 ;缺血组较假手术组 Caspase-3表达显著增加 ( P<0 .0 1) ;CGRP组和 NGF组 Cas-pase-3表达均弱于缺血组 ( P<0 .0 5 ) ;CGRP和 NGF合用组 Caspase-3表达明显弱于缺血组 ( P<0 .0 1) ,分别弱于 CGRP组 ( P<0 .0 5 )和 NGF组 ( P<0 .0 5 )。缺血组缺血后再灌注 3 h Caspase-3开始表达 ,1d达高峰 ,3 d时减弱 ,CGRP和 NGF合用组 Cas-pase-3表达随着缺血后再灌注时间的延长而逐渐减弱。以上结果提示 :CGRP和 NGF分别抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,联合应用则能显著抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,二者对保护缺血神经元可能有协同作用     

多巴胺耗竭对纹状体神经元在缺血再灌注损伤中的保护作用

为探讨全脑缺血再灌注损伤过程中多巴胺对纹状体内各类神经元的影响 ,本实验用 6 -OHDA损毁大鼠一侧黑质多巴胺能神经元以耗竭该侧纹状体内的多巴胺 ,再进行 4血管结扎造成全脑缺血模型 ,3 0 min后分别复灌 6、12、2 4h,行连续冰冻切片 ,以焦油紫染色进行形态学分析 ,用 calbindin-D2 8k及 parvalbum in两种钙结合蛋白抗体进行免疫组化反应。结果显示 :(1)焦油紫染色 :缺血 3 0 min复灌 6 h即可见多巴胺未耗竭侧纹状体内神经元损伤比耗竭侧者明显加重 ,复灌 12及 2 4h组双侧差别更为显著 ;图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞面积总和 ,各实验组两侧间均有显著性或极显著性差异 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ;(2 ) calbindin-D2 8k免疫组织化学染色 :各组内多巴胺未耗竭侧纹状体 calbindin-D2 8k阳性反应明显比耗竭侧减弱 ,阳性神经元数量减少、染色变浅 ,图象分析显示其光密度明显低于耗竭侧 ;(3 ) parvalbumin免疫组化反应 :同时间组双侧纹状体 parval-bumin阳性神经元的形态和数量无明显差别 (P>0 .0 5 ) ,但随复灌时间的延长 ,双侧阳性细胞数均有降低。以上结果提示 :脑缺血时大量释放的 DA是纹状体神经元缺血性损伤的重要因素之一 ;纹状体内的 calbindin-D2 8k投射神经元对脑缺血及 DA含量的变化敏感 ,?     

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）和神经生长因子（NGF）对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响。方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法。结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱；缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强（P〈0．01）；CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）。假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达；缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强（P〈0．01），缺血后再灌注3h强，1d、3d时弱；CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3h时强，1d、3d时弱。结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，两者对保护缺血神经元可能有协同作用。     

大鼠局灶性脑缺血损伤神经元BCL-2、BAX及FOS蛋白的表达

为了了解ＢＣＬ ２,ＢＡＸ 及ＦＯＳ蛋白表达量的变化与局灶性脑缺血、再灌流损伤和功能恢复之间的关系,以大鼠单侧血管内栓线法建立局灶性脑缺血再灌流实验动物模型,采用免疫组织化学方法显示不同脑区在不同时相与病理分区中三种基因的表达变化,并以假手术动物脑区作对照。用Ｈ Ｅ 染色观察神经元的病理变化。结果表明：各脑区在缺血１．５ ｈ、再灌２４ ｈ 后三种基因的表达变化最明显。中心梗塞区神经元消失,无任何基因表达;梗塞边缘区神经元缺血变性较重,ＢＡＸ 表达较ＢＣＬ ２ 明显;缺血反应区神经元缺血变性较轻,ＢＣＬ ２ 表达较ＢＡＸ 明显。ＦＯＳ蛋白在缺血反应区内的表达较显著。ＢＡＸ 表达神经元的变性程度比ＢＣＬ ２ 者严重,ＦＯＳ蛋白表达的神经元核着色均匀,未显固缩和碎裂现象。以上结果提示,ＢＣＬ ２ 和ＢＡＸ 所代表的两类分子的比例可能最终决定细胞的死亡或存活的结局。损伤神经元ＦＯＳ蛋白的表达是对损伤刺激的早期反应。