压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

基因扩增和3种表型筛查法检测耐甲氧西林葡萄球菌的应用评价

目的比较4种方法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的阳性检出率、灵敏度和特异度,以便临床检测MRS时选择。方法用Vitek-32全自动细菌鉴定仪法、苯唑西林琼脂稀释法、头孢西丁纸片扩散法和mecA基因检测法分别检测175株葡萄球菌中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),经行×列表资料的χ2检验比较阳性检出率,并以mecA基因检测法为"金标准"计算其他3种方法的灵敏度和特异度。结果4种方法检出MRSA的阳性率无差别(χ2=1.640,P>0.05),但检测MRCNS的阳性率有差别(χ2=9.478,P<0.05),其中Vitek-32全自动细菌鉴定仪法和苯唑西林琼脂稀释法检出MRCNS的阳性率高于mecA基因检测法;3种表型检测法检测MRSA的灵敏度和特异度分别为100%、96.3%、96.3%和88.2%、100%、100%,检测MRCNS的灵敏度均为100%,特异度分别为50%、46.1%和65.4%。结论最终判定MRS时,要考虑到mecA基因和苯唑西林最低抑菌浓度两个因素,并区别对待mecA基因介导的MRS和非mecA基因介导的MRS。     

6种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价

目的 对6种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法进行应用评价.方法 分别采用6种方法检测134株临床分离的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的情况:聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、琼脂稀释法检测苯唑西林最小抑菌浓度、琼脂稀释法检测头孢西丁最小抑菌浓度、显色培养基法.结果 以PCR检测mecA基因为“金标准”,65.7％的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林 ;苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性分别为95.5％和97.8％ ;头孢西丁纸片扩散法敏感性和特异性分别为97.7％和97.8％;苯唑西林和头孢西丁琼脂稀释法敏感性均为100％,特异性分别为97.8％和91.3％ ;显色培养基法敏感性和特异性分别为98.9％和97.8％.结论 6种检测方法具有较好的一致性.头孢西丁纸片扩散法简便、可靠,可作为临床实验室常规检测MRSA的方法.     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

婴幼儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染状况和耐药基因的研究

目的了解感染婴幼儿的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性和耐药基因,明确检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和甲氧西林耐药基因(mecA)的临床价值。方法用金黄色葡萄球菌乳胶凝集试验和梅里埃鉴定金黄色葡萄球菌,同时用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验。对头孢西丁的结果,按当年CLSI标准执行,用于判断菌株甲氧西林的耐药性。采用PBP2检测试剂盒检测PBP2a蛋白,PCR检测mecA基因。结果 2007-2009年婴幼儿共检出245株金黄色葡萄球菌,其中MRSA检出率为17.6%(43/245)。MRSA对庆大霉素、复方新诺明、克林霉素、红霉素、氯霉素的耐药性均显著高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(P<0.05),其余抗生素的差异无统计学意义(P>0.05),43株MRSA的PBP2a蛋白和mecA基因的检测结果全为阳性,阳性率为100%。结论用头孢西丁(30μg)能有效地筛查MRSA,检测PBP2a蛋白和mecA基因均能正确地确认MRSA。且检测PBP2a蛋白方便快捷,特异性好,值得临床推广。     

MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

三重聚合酶链反应快速诊断耐甲氧西林葡萄球菌感染

目的建立一种能快速有效地对葡萄球菌感染进行病原体诊断的方法.方法利用三重聚合酶链反应技术(Triplex PCR)同时检测葡萄球菌特异性16S rRNA 基因、金黄色葡萄球菌特异性Sa442基因和编码青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因.结果 84株葡萄球菌的16S rRNA 基因100%阳性,其中33株金黄色葡萄球菌的Sa442基因100%阳性,mecA基因阳性率为78.8%.51株凝固酶阴性葡萄球菌的Sa442基因100%阴性,mecA基因阳性率为76.5%.30株其他临床常见菌16S rRNA、Sa442、mecA基因100%阴性.结论该技术具有简便、快速、特异性强等特点,是一种非常有效的耐甲氧西林葡萄球菌感染快速诊断方法.     

应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

聚合酶链反应对耐甲氧西林葡萄球菌的监测

为了解同济医院临床各科室分离的金黄色葡萄球菌对甲氧西林类抗生素耐药性的状况，收集同济医院临床各科室1999年分离的金黄色葡萄球菌84株，通过设计的引物，利用扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因，用地高辛标记的特异性探针与PCR扩增产物杂交。84株金黄色葡萄球菌中获得8株扩增产物为阳性的菌株，用这些阳性产物与地高辛标记的探针进行Southern blot分析，杂交结果与PCR结果一致，故同济医院1999年金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药率为8．8％。将聚合酶链反应技术用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）其敏感性、特异性较高且重复性好，准确率比实验室常用纸片法更高，为指导临床应用抗生素提供了一个切实可行的方法。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

几种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的对三种检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法以PCR检测金黄色葡萄球茵甲氧西林决定因子A（mecA）为金标准,按临床实验室标准化委员会（CLSI）操作规程用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法对临床分离的155株金黄色葡萄球菌进行检测。结果155株金黄色葡萄球菌经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为61．9％（96／155）;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100％;苯唑西林纸片扩散法的敏感性为95．8％,特异性为91．5％;苯唑西林琼脂稀释法的敏感性为100％,特异性为98．3％;头孢西丁纸片扩散法优于苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林琼脂稀释法。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便、敏感性高、特异性好、结果可靠,可作为医院微生物实验室日常工作中检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。     

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性.方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性.结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112).头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%.结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法.     

耐甲氧西林溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌erm基因的检测与分析

目的 比较耐甲氧西林溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌erm基因的检出差异、以及与细菌药敏表型之间的关系。方法 用MicroScan auto SCAN4细菌鉴定仪进行鉴定和药敏试验、用聚合物酶链反应（PCR）法检测erm基因。结果 36株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）中表型耐红霉素的为35株，其中有34株检出erm基因，两者符合率为97．14％f24株耐甲氧西林溶血葡萄球菌（MRSH）中表型耐红霉素的为22株，其中有15株检出erm基因数，两者符合率为68．18％。两组细菌数据统计使用电于表格Microsoft Excel软件处理，组间率比较采用卡方检验，r〈0．05，差异非常显著。结论 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对红霉素的耐药机制主要是由erm基因编码甲基化酶，使药物作用靶位的改变。耐甲氧西林溶血葡萄球菌对红霉素耐药不仅存在erm耐药基因，还有着其他的耐药分于机制。     

Vitek-2药敏卡片检测MRSA的准确性评价

目的:评价Vitek 2 AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏感性的准确性.方法:对临床分离的菌株采用AST P535药敏卡片和头孢西丁纸片测定对苯唑西林的耐药性,以PCR测定MecA基因为金标准,评价两种方法的准确性.结果:采用PCR共检测125株金黄色葡萄球菌,其中MecA基因阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphy lococcus aureus,MRSA)89株,mecA基因阴性的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin susceptive Staphylococcus aureus,MSSA)36株,以此为标准,在89株MRSA中用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出81株,敏感度为91%,在36株MSSA中采用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出35株,特异性为97.2%;而采用头孢西丁纸片法检测出MRSA 87株,敏感度为97.8%,检出MSSA 36株,特异性为100%.结论:AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性具有良好的灵敏度和特异性,准确性能满足临床需要,同时采用头孢西丁纸片法检测可进一步提高检测的准确性.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌femA调控基因的研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA是否存在调控基因,以进一步揭示其耐药机制。方法用最低抑菌浓度法（MIC）筛选对苯唑西林高耐株、低耐株、敏感株;用头孢色芬纸片法（Nitrocephin）筛选出不产β-内酰胺酶菌株;用PCR筛选出含mecA的菌株。将含mecA不产酶的高耐株、低耐株、敏感株纳入进一步研究中;PCR扩增femA及femA5？上游基因;提取细菌总蛋白;生物素标记DNA探针;滞留电泳检测调控基因。结果滞留电泳检测对苯唑西林高度耐药不产β-内酰胺酶含mecA基因菌株均出现滞留条带。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA有调控基因存在。     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。