体外沉默Rce1对舌鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默Rce1基因,探讨Rce1对舌癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法 体外培养舌鳞状细胞癌Cal-27和SCC-4细胞,设计合成Rce1基因的小干扰RNA（siRNA）,采用脂质体载体瞬时转染沉默Rce1基因。根据转染的siRNA不同,将实验组分为Rce1-siRNA-1组、Rce1-siRNA-2组、Rce1-siRNA-3组,脂质体载体分别转染相对应序列的siRNA。脂质体转染siCON作为阴性对照组,不转染siRNA作为空白对照组。采用实时定量聚合酶链反应检测各组Rce1、RhoA以及K-Ras基因的表达,蛋白质印迹法（Western blot）检测Rce1、RhoA、K-Ras、金属基质蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的表达,采用体外侵袭实验检测Cal-27和SCC-4的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实时定量聚合酶链反应及Western blot检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组的Rce1基因及蛋白表达均下调（P<0.05）,RhoA、K-Ras基因及蛋白表达无统计学差异（P>0.05）,MMP-2、MMP-9表达下降（P<0.05）。体外侵袭实验表明,与对照组相比,实验组在聚碳酯膜上的细胞总数明显减少（P<0.05）。细胞划痕实验表明,实验组划痕处细胞闭合时间明显长于对照组（P<0.05）。结论 体外沉默Rce1可以有效下调其在舌癌细胞Cal-27和SCC-4中的表达水平,降低迁移和侵袭能力。     

沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC50的影响

目的:评价LASP1 对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析。方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系。RT-PCR 和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达。慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8 法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化。建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤。CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC₅₀变化。采用SPSS 11.0 软件包对数据进行统计学分析。结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关。LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡。沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC₅₀显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC₅₀无显著变化。结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药。     

ADAR1对口腔鳞癌细胞生物学特征的影响

检测RNA编辑酶1（ ADAR1）在口腔鳞癌细胞中的表达,探讨其对口腔鳞癌细胞生物学行为特征的影响及作用机制。方法：利用实时定量RT?PCR、Western Blot检测ADAR1在口腔鳞癌细胞中的表达;化学合成siRNA（ si?ADAR1）转染细胞,观察其迁移和侵袭能力;检测ADAR1敲减后口腔鳞癌细胞中上皮间质转化指标（ Vimentin、E?cadherin）、干性指标（ Sox2、Oct4）以及 onco?microRNAs （ miR?21?3p、miR?18a?3p、miR?210?3p、miR?155?5p、miR?181a?3p、miR?19a?3p ）表达水平。结果：ADAR1在口腔鳞癌细胞中高表达;ADAR1敲减后的口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力下降（P＜0．05）,上皮间质转化指标 E?cadherin低表达、Vimentin高表达,干性指标（ Sox2、Oct4）及口腔鳞癌相关onco?MicroRNAs低表达。结论：ADAR1与口腔鳞癌细胞的生物学行为密切相关,推测 ADAR1可能通过促进口腔鳞癌相关 onco?microRNAs成熟影响口腔鳞癌细胞的生物学行为。     

丹参素在体外条件下对口腔鳞癌细胞 CAL-27抑制作用的研究

[摘要] 目的 探讨丹参素在体外条件下对口腔鳞癌细胞CAL-27的增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 丹参素处理CAL-27细胞,MTT法检测丹参素对CAL-27细胞活性的影响。划痕实验检测丹参素对CAL-27细胞的迁移能力的作用。Transwell实验检测其对细胞的侵袭能力的作用。结果 MTT显示,在丹参素浓度为40 μg/mL、60 μg/mL和80 μg/mL时,丹参素对CAL-27细胞增殖的抑制可呈剂量和时间依赖性。划痕实验中,24h组与对照组相比,具有显著差异性（P<0.01）。Transwell侵袭实验结果表明,丹参素可降低CAL-27细胞的侵袭能力。结论 在体外条件下,丹参素在一定浓度范围内可抑制CAL-27细胞的增殖,降低CAL-27细胞的迁移及侵袭能力。     

体外沉默法尼基转移酶对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过RNA干扰沉默法尼基转移酶（FTase）,探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法 针对FTase设计并构建3条小干扰RNA（siRNA）,转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞（实验组）,同时设置阴性对照组（转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,HRAS的mRNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）,p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降（P<0.05）,p65蛋白表达无明显变化（P>0.05）;实验组的细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。结论 体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。     

上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 构建上皮膜蛋白1（EMP1）基因真核表达载体pEGFP-N1-EMP1,探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用逆转录聚合酶链式反应（PCR）扩增EMP1基因,双酶切法连接至真核表达载体pEGFP-N1双酶切产物大片段,构建pEGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导法将pEGFP-N1-EMP1重组质粒和pEGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞,荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 成功克隆EMP1全长基因,经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体pEGFP-N1,转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示,pEGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组,Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于pEGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示,EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论 成功构建了EMP1真核表达载体,并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OSCC患者（55例）癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株（NOK）细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数（CCK-8）及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹（Western blot）检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1（AFAP1）及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞（P<0.001）。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）,AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者（P<0.05）。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OSCC患者（55例）癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株（NOK）细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数（CCK-8）及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹（Western blot）检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1（AFAP1）及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞（P<0.001）。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）,AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者（P<0.05）。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。     

Expression of fibroblast growth factor receptor like 1 protein in oral squamous cell carcinoma and its influence on tumor cell proliferation and migration

目的 检测成纤维细胞生长因子受体样蛋白1（FGFRL1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达情况,并探究其在OSCC细胞增殖和迁移中的作用。方法 利用Western blot检测FGFRL1蛋白在OSCC组织、癌旁正常组织、OSCC细胞株及正常上皮细胞中的表达;通过FGFRL1小干扰RNA（siRNA）干扰HN4细胞,影响FGFRL1蛋白的表达,利用CCK-8及Ki67实验检测FGFRL1对肿瘤细胞增殖能力的影响;细胞划痕及Transwell实验检测FGFRL1对肿瘤细胞迁移能力的影响;利用Western blot检测其对上皮间充质转化（EMT）相关指标蛋白的影响。结果 FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织（t=2.820,P=0.047 8）;FGFRL1蛋白在OSCC细胞系中的表达量高于在HOK细胞中的表达量。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）结果显示,FGFRL1 RNA在HOK细胞中的表达量低于在OSCC细胞系中的表达量。将FGFRL1 siRNA转染的HN4细胞作为实验组,NC siRNA处理的HN4细胞作为对照组。Ki67免疫荧光试验结果显示,实验组与对照组在48 h（P=0.478 1）及72 h（P=0.334 2）细胞增殖活力差异无统计学意义。细胞划痕实验结果显示,在12 h（P=0.022 8）、24 h（P=0.005 1）及36 h（P=0.009 5）实验组细胞划痕面积百分比均比对照组小。Transwell实验结果显示,实验组在16 h（P=0.008 7）及24 h（P=0.008 6）细胞迁移数较对照组少。FGFRL1 siRNA干扰使得HN4细胞神经性钙黏附素蛋白和波形蛋白的表达量下降,上皮钙黏附素蛋白的表达量上升。结论 FGFRL1蛋白在OSCC组织中的表达量高于癌旁正常组织,在OSCC细胞株中的表达量高于正常上皮细胞。FGFRL1基因沉默对肿瘤细胞增殖无影响,但对肿瘤细胞EMT和细胞迁移具有一定的抑制作用。     

沉默DNA结合抑制蛋白-1基因对腺样囊性癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨DNA结合抑制蛋白-1(Id-1)基因在腺样囊性癌细胞生长和侵袭行为中的作用.方法以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M和ACC-2为研究对象,免疫荧光检测Id-1基因的表达;用小干扰RNA进行Id-1基因的RNA干扰:于干扰前后应用RT-PCR和Western blot检测2个细胞系Id-1表达情况:于干扰前后应...     

体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶基因对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响.方法 通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCC CAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性对照组(转染NC-siRNA)和空...     

肿瘤抑制蛋白Maspin在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌（OSCC）发生发展过程中的作用,为临床应用提供理论依据。方法采用鼠抗人Maspin单克隆抗体及SP免疫组化法检测45例OSCC、33例癌旁组织及15例正常口腔组织中Maspin蛋白的表达水平,用半定量积分法判断结果。结果在正常口腔组织、癌旁组织和OSCC组织中Maspin蛋白表达阳性率分别为86.67％（13/15）、72.73%（24/33）和37.78%（17/45）。Maspin蛋白在OSCC组织、癌旁组织和正常口腔组织中表达逐渐增高,其中OSCC组织和正常口腔组织、OSCC组织和癌旁组织、癌旁组织和正常口腔组织之间表达差异有统计学意义（P<0.05）。Maspin蛋白的表达与OSCC淋巴结转移和组织学分级有关（P＜0.05）,与TNM分期无关（P＞0.05）。结论Maspin蛋白在OSCC的发生发展过程中可能起着重要作用,检测OSCC组织中Maspin蛋白的表达水平可能有助于对淋巴结转移潜能的预测。     

蛋白激酶D1对口腔鳞癌细胞在肿瘤微环境中生长代谢的调控

目的 探讨在酸性缺氧微环境中,蛋白激酶D1（PKD1）对口腔鳞癌HSC-4细胞生长、代谢的调控作用和相关分子机制。 方法 口腔鳞癌HSC-4细胞稳定转染PKD1,将未转染组、对照组和转染组细胞分别置于酸性或缺氧环境下进行培养,Western blot检测细胞中PKD1敲除率及细胞自噬相关蛋白和糖酵解相关蛋白表达情况,CCK8试剂盒检测细胞增殖。结果 实验成功建立了PKD1基因沉默的稳定细胞株;酸性环境下,PKD1沉默后细胞自噬活性升高;缺氧环境下,相对于对照组,PKD1基因沉默后细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和糖酵解中丙酮酸激酶（PKM2）的表达均显著降低;酸性和缺氧环境下,相对于对照组,PKD1基因沉默后细胞的生长速度显著降低。结论 在酸性和缺氧环境下,PKD1基因沉默可促使口腔鳞癌细胞凋亡性自噬活性升高,且下调PKD1基因表达可抑制口腔鳞癌细胞糖酵解,进而抑制肿瘤细胞增殖。揭示PKD1在口腔鳞癌代谢和生长中的作用,使其成为口腔鳞癌治疗的可能靶点。     

蛋白激酶D1对口腔鳞癌细胞在肿瘤微环境中生长代谢的调控

目的 探讨在酸性缺氧微环境中,蛋白激酶D1（PKD1）对口腔鳞癌HSC-4细胞生长、代谢的调控作用和相关分子机制。 方法 口腔鳞癌HSC-4细胞稳定转染PKD1,将未转染组、对照组和转染组细胞分别置于酸性或缺氧环境下进行培养,Western blot检测细胞中PKD1敲除率及细胞自噬相关蛋白和糖酵解相关蛋白表达情况,CCK8试剂盒检测细胞增殖。结果 实验成功建立了PKD1基因沉默的稳定细胞株;酸性环境下,PKD1沉默后细胞自噬活性升高;缺氧环境下,相对于对照组,PKD1基因沉默后细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和糖酵解中丙酮酸激酶（PKM2）的表达均显著降低;酸性和缺氧环境下,相对于对照组,PKD1基因沉默后细胞的生长速度显著降低。结论 在酸性和缺氧环境下,PKD1基因沉默可促使口腔鳞癌细胞凋亡性自噬活性升高,且下调PKD1基因表达可抑制口腔鳞癌细胞糖酵解,进而抑制肿瘤细胞增殖。揭示PKD1在口腔鳞癌代谢和生长中的作用,使其成为口腔鳞癌治疗的可能靶点。     

TEAD4与口腔鳞癌预后和细胞迁移侵袭的研究

目的:研究TEA转录因子4(TEAD4)在口腔鳞癌(OSCC)组织中的表达与临床病理参数、预后的关系。方法:免疫组化检测79例原发性OSCC标本和21例口腔正常上皮黏膜中TEAD4的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。使用小干扰RNA(siRNA)转染沉默Cal27细胞内源性TEAD4,通过Western blot、qRT-PCR、划痕试验、Transwell侵袭等实验探究TEAD4沉默对OSCC细胞系Cal27迁移、侵袭的影响。结果:免疫组化结果显示TEAD4在OSCC组织中表达明显高于正常口腔黏膜(P<0.05)。TEAD4高表达与患者颈淋巴结转移、临床分期和患者总体生存率相关(P<0.05)。TEAD4沉默后Cal27细胞侵袭、迁移能力明显减弱。结论:TEAD4高表达与OSCC恶性表型及预后有关,参与OSCC细胞迁移、侵袭表型的调控。