洛伐他汀对SP2/0骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胆固醇自稳失调对SP2/0骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以去脂血清(LDLdeficientserum,LDS)和HMGCoA还原酶抑制剂洛伐他汀(lovastatin,LOV)处理SP2/0骨髓瘤细胞,采用生长曲线、MTT法检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率,DNA梯形带检测细胞凋亡。结果LDS和/或LOV能抑制细胞增殖和诱导凋亡,阻滞细胞于G2/M期,该作用有剂量─效应和时间依赖关系,甲羟戊酸(mevalonate,MVA)可以拮抗LOV引起的增殖抑制和诱导凋亡作用。结论LDS和/或LOV通过阻断小鼠SP2/0骨髓瘤细胞合成内源性胆固醇和摄取外源性胆固醇,使细胞胆固醇自稳失调,引起细胞增殖受抑,并诱导细胞凋亡。     

小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡

目的：研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2／0细胞凋亡的作用．方法：在Sp2／0细胞培养孔中,分别加入不同稀释度（1：6,1：12,1：24）的小鼠心肌上清液和环磷酰胺,24h后镜下观察细胞形态,并于48h后流式细胞仪检测凋亡细胞的比率;同时,Sp2／0细胞和小鼠心肌细胞共培养,10h后观察Sp2／0细胞形态学变化;并用不同稀释度（1：5,1：10,1：20,1：40）小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液及环磷酰胺诱导Sp2／0,HeLa,Hep-2和Vero细胞凋亡,并比较其差异．结果：不同稀释度的心肌裂解上清液均可诱导Sp2／0细胞的凋亡,尤以高稀释度更明显;小鼠心肌细胞与Sp2／0细胞共培养10h后,少部分Sp2／0细胞出现凋亡;小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液均可引起Sp2／0,HeLa,Hep-2和Vero细胞发生凋亡,但小鼠心肌裂解上清液作用明显,且作用时间持久．结论：小鼠心肌组织裂解上清液具有明显诱导小鼠骨髓瘤Sp2／0细胞凋亡的作用．     

重组人B7-H1IgV疫苗对小鼠骨髓瘤细胞的抑制作用

目的:探讨重组人B7-H1IgV融合蛋白对小鼠骨髓瘤的预防和治疗效果及其对荷瘤小鼠外周血中CD4 CD25 T细胞水平的影响.方法:用重组人B7-H1IgV融合蛋白免疫小鼠,待抗体产生后接种SP2/0肿瘤细胞作为预防组;用重组人B7-H1IgV融合蛋白免疫小鼠,同时接种SP2/0肿瘤细胞作为治疗组.监测小鼠体质量、肿瘤体积的变化及生存期;检测小鼠体内CD4 CD25 T细胞水平.结果:重组人B7-H1IgV融合蛋白在预防组和治疗组中均显示出了较好的抑瘤作用,并可显著降低治疗组小鼠体内CD4 CD25 T细胞水平.结论:重组人B7-H1IgV融合蛋白能够引起小鼠的体液免疫,并抑制SP2/0肿瘤细胞的生长,从而延长荷瘤小鼠的生存期.rhB7-H1IgV融合蛋白肿瘤疫苗有望成为一种肿瘤免疫治疗的候选者.     

The effect of spleen on the change of Treg cells during mouse pregnancy

Objective： To analyze the effect of spleen on the Treg cells during pregnancy. Methods： The mononuclear cells were separated from the peripheral, spleen and uterus or placenta blood. Flow cytometry was employed to analyze the percent of Treg cells in total T cells in different stages of pregnancy. Immunohistochemical staining was used to make sure the distribution of Treg in spleen in different stages of pregnancy. Results： The results of immunohistochemical staining showed that compared with spleen Treg cells in normal unpregnant mice, spleen Treg cells on day 7 and 14 of pregnancy significantly increased. After splenectomy, peripheral blood and placenta Treg cells on day 7 of pregnancy markedly decreased as compared with the normal pregnancy （P〈0.01）. And the cells on day 14 of pregnancy were markedly recovered as compared with the normal pregnancy. Conclusion： Our study indicated that the spleen and its Treg cells might play important roles in transient tolerance during pregnancy.     

冻融人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响

目的　探讨冻融的人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响。方法　蜕膜单层细胞解冻后接种获得冻融蜕膜单层细胞;观察昆明白小鼠单细胞受精卵与传代的、冻融的人早孕蜕膜单层细胞共培养 (A、B组)及仅用培养液培养(C组)的胚胎发育情况。分析A、B组与C组各期鼠胚的发育情况及 8 细胞期A类胚胎形成情况。结果　A、B、C组的2 细胞期形成率差异无显著性,A组在 4 细胞形成率上高于B、C组。A、B组 8 细胞期、桑椹期、早期囊胚形成率和囊胚孵出率高于C组(P<0 05)。而A、B组之间差异无显著性。A、B组在 8 细胞阶段A、B类胚胎形成率与C组相比,差异有显著性(P<0 05)。同样A、B组之间差异无显著性。共培养 20d的培养液经检查,细菌及真菌均阴性。结论　冻融的人蜕膜单层细胞与传代细胞一样在小鼠胚胎的发育中起到了促进作用,该结果说明了人胚胎与其冻融的自体子宫增殖晚期-分泌早期的内膜单层细胞共培养的可行性。     

Eg5通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌细胞的恶性增殖

目的：探究纺锤体有丝分裂驱动蛋白（Eg5）对去势抵抗性前列腺癌细胞株DU145生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移的调节作用及机制。方法：Eg5 shRNA干扰Eg5在DU145细胞内的表达,小分子抑制剂SB-743921抑制Eg5在DU145细胞内的功能。实验分为对照组、NC shRNA组、Eg5 shRNA组和SB-743921组,MTT实验和单克隆形成实验测定各组细胞生长;Annexin V-FITC和PI双染实验测定各组细胞凋亡;PI单染实验分析各组细胞周期;划痕实验分析各组细胞迁移能力;q-PCR和Western blot评价各组细胞内c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin、Vimentin及E-cadherin的表达情况。结果：NC shRNA组与对照组各指标差异均无统计学意义（P ＞0.05）。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组比,细胞增殖及迁移能力降低、细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G2/M期,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。Eg5 shRNA组、SB-743921组与对照组相比,细胞内c-Myc和SP1的表达量降低（P ＜0.05）,调控G2/M期基因CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B的表达降低（P ＜0.05）,同时调控细胞迁移基因N-cadherin和Vimentin的表达量降低,E-cadherin的表达量增加（P ＜0.05）。结论：有丝分裂驱动蛋白Eg5可能通过c-Myc/SP1/CDK1通路调节去势抵抗性前列腺癌的恶性增殖和侵袭转移,是治疗前列腺癌的潜在靶点。     

G_0S_2基因参与调节鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞分化

目的:探讨G_0S_2在调节鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞分化过程中的作用.方法:利用原代培养小鼠骨髓基质细胞(Marrowstrom cell,MSC),脂质体转染法将表达质粒pCAG-PPARγ2及含报告基因的pGL_2-COL_1A质粒共转染至MSC,G418筛选,RT-PCR检测PPARγ及G0S2mRNA表达,免疫组化检测PPARγ的表达,westen blot检测G_0S_2的表达,油红O染色检测细胞内脂滴.结果:MSC在未分化状态下不表达G_0S_2,经PPARγ基因转染后,G_0S_2开始表达,转染细胞最终分化为脂肪细胞.结论:PPARγ通过调节G_0S_2启动子调节后者表达,进而调节MSC向脂肪细胞分化,G_0S_2基因参与调节MSC向脂肪细胞分化.     

吡柔比星调控原钙黏蛋白10的表达对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡诱导的作用机制研究

目的探讨吡柔比星(THP)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 2014年4月-2019年3月在郴州市第一人民医院实验室进行实验。应用终浓度为0.1mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5 mg/L吡柔比星处理多发性骨髓瘤细胞KM3,记为THP 0.1mg/L组、THP 1 mg/L组、THP 2.5mg/L组、THP 5mg/L组;未经任何处理的KM3细胞作空白对照(Con)组;转染pcDNA3.1为pcDNA3.1组,转染pcDNA3.1-PCDH10为pcDNA3.1-PCDH10组,转染si-NC后用1 mg/L的THP处理为THP 1 mg/L+si-NC组,转染si-PCDH10后用1 mg/L的THP处理为THP1 mg/L+si-PCDH10组。MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot法检测蛋白表达。结果不同浓度THP处理后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax、PCDH10蛋白的表达水平显著升高(P <0.05);过表达PCDH10后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);抑制PCDH10表达后,THP处理的KM3细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,p21、Bax蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论吡柔比星可抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PCDH10表达相关。     

小鼠生后发育期间胃肠道5-羟色胺及生长抑素免疫反应细胞的形态学观察

目的:观察小鼠生后发育期间胃肠道内5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)免疫反应(immunoreaetive,IR)细胞和生长抑素(somatostatin,SS)IR细胞的分布、形态及数量变化.方法:应用免疫组化SP法对小鼠出生后5～60 d的胃肠道相邻切片进行染色.结果:生后5 d,十二指肠5-HT-IR细胞明显多于小肠其他段和结肠,而腺胃中5-HT-IR细胞最少.随生后发育成熟,5-HT-IR细胞数量旱持续性增加.腺胃中SS-IR细胞数量显著高于肠道各段.5-HT-IR和SS-IR细胞形态多样,可见免疫组化阳性染色的细胞突起伸抵腔面或伸至其他细胞之间.结论:小鼠生后发育期胃肠道5-HT-IR细胞及SS-IR细胞的分布及数量变化规律有其种属特异性,免疫反应阳性细胞的形态学特点为再一次证实这两种内分泌细胞同时具备外分泌和旁分泌作用提供了形态学依据.5-HT-IR细胞及SS-IR细胞所释放的激素可能与调节小鼠胃肠道的发育及某些生理活动有关.     

白藜芦醇对肝癌HepG2细胞中脂肪合成的抑制作用及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对肝癌HepG₂细胞脂肪合成的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养HepG₂细胞,分为Res组（40μmol·L^-1DMSO稀释的Res作用24h）和对照组（相同浓度的DMSO作用24h）。收集细胞上清,ELISA法检测2组细胞中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法分别检测2组细胞中脂肪合成酶乙酰辅酶A羧化酶（ACC1）、脂肪酸合成酶（FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1） mRNA和蛋白表达水平,采用Western blotting法检测2组细胞中氧链接N乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化水平。结果：与对照组比较,Res组细胞中TG和TC水平均下降,但差异无统计学意义（t₁=1.886,P<0.05;t₂=2.457,P>0.05）;与对照组比较,Res组细胞中ACC1、FASN、SCD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,O-GlcNAc糖基化水平明显降低（t=2.87,P<0.05）。结论：Res具有抑制肝癌HepG₂细胞脂肪合成的作用,其机制可能与降低细胞中O-GlcNAc糖基化水平和FASN表达有关。     

TMEFF2基因对SH-SY5Y细胞增殖的影响

目的探讨TMEFF2基因过表达对体外培养SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法克隆全长的TMEFF2基因,连接入pEGFP-N2载体。以脂质体包裹重组质粒转染SH-SY5Y细胞。在细胞中可表达生成TMEFF2-EGFP融合蛋白。经G418筛选,建立TMEFF2过表达细胞株,同时筛选作为对照的pEGFP-N2稳定转染细胞株。MTT法测定TMEFF2过表达细胞株和pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞增殖。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-TMEFF2,并筛选得到稳定表达细胞株。在细胞接种密度较高时,TMEFF2过表达细胞株的增殖较pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞株均明显降低。结论TMEFF2基因可以抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且抑制作用具有明显密度依赖性。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

绞股蓝多糖含药血清对四氯化碳肝细胞损伤的保护作用

目的 研究绞股蓝多糖(gynostemma pentaphyllum makino polysaccharide,PGP)含药血清对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝细胞损伤保护作用。方法 采用中药血清学方法收集PGP含药血清,用CCl4诱导肝HepG2细胞损伤,设正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度PGP含药血清保护组;细胞形态学观察细胞凋亡,MTT法检测细胞活力,生化法检测细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT/GPT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST/GOT)活性及western blot凝胶电泳检测细胞色素P450 2E1的表达。结果 各PGP含药血清保护组肝细胞损伤程度明显减轻;细胞存活率显著升高(P<0.05);上清液中ALT、AST活性显著降低(P<0.05);CYP 2E1表达量显著增加。以4~8mg·kg-1·d-1保护组效果最佳。结论 PGP含药血清对CCl4诱导的HepG2细胞损伤有明显保护作用,以4~8mg·kg-1·d-1含药血清作用最显著。     

PDTC逆转K562/AO2细胞多药耐药性机制研究

目的研究核因子κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米（Ver）预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化,采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1 mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果①K562/AO2细胞对阿霉素（ADM）的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度（IC50）显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%（P〈0.01）;②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞（P〈0.01）;PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达,伴随mdr-1 mRNA表达减少,呈时间依赖性。结论抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO细胞耐药性,其机制与mdr-1 mRNA转录表达减少有关。     

The effect of hyperthermia on DNA in mouse HepA cells — An analysis with computer and observation with EM

Summary A computer analysis system, automated imaging cytometry (AIC), flow cytometry (FCM) and EM, were used to study the relationship of apoptosis and the change of DNA in mouse HepA cells subjected to hyperthermia. Our results showed that pyknotic rate in the 44 C group was significantly increased (P < 0. 01) when compared with that in the 37 C group, both the diploid rate and aneuploid rate in the 44 C group were significantly decreased (P < 0. 01) when compared with that in the 37 C group. The pyknotic rate determined by ALC was in conformity with the apoptotic index (AI) determined by FCM. Under EM, ultrastructures of HapA cells appeared typical apoptosis changes in the 44 C group. We are led to conclude that (1) when the temperature is 42 C or 44 C for 2 h, it did not promote the necrosis of HepA cells; (2) when the temperature is 42 C for 2 h, it did not obviously induce the apoptosis of HepA cells, and the 44 C for 2 h obviously induced the apoptosis of HepA cells; (3) AIC method can be used as an aid for the measurement of apoptotic index. Further study is needed to established it as a novel, simple and convenient method for determining the apoptosis. This project was supported by the grant of Key Projects of National Natural Science Foundation of China (No. 59836240).     

miR-188-5p对胰岛素抵抗Hep G2细胞的改善作用研究

目的 探讨miR-188-5p对Hep G2细胞胰岛素抵抗的影响。方法 采用高浓度葡萄糖（30mmol/L）诱导处理人肝癌Hep G2细胞24h构建胰岛素抵抗细胞模型,实验分为6组：对照组、模型组、miR-188-5p mimic组、mimic-NC组、miR-188-5p inhibitor组及inhibitor-NC组。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）检测Hep G2细胞中miR-188-5p表达水平;MTT法检测细胞增殖率;生化实验检测细胞内葡萄糖及糖原含量;免疫荧光染色观察细胞中葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter type 4protein,GLUT4）的表达。结果 与对照组比较,模型组miR-188-5p表达、细胞增殖率、葡萄糖摄取及糖原含量均明显降低（P<0.05）,GLUT4蛋白表达减少。与模型组比较,miR-188-5p mimic组miR-188-5p表达、细胞增殖率、葡萄糖摄取及糖原含量均明显升高（P<0.05）,GLUT4蛋白表达也增加,而miR-188-5p inhibitor...     

猪血小板衍生生长因子的高效液相色谱分析及对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的：测定猪血小板衍生生长因子的相对分子质量和纯度并观察其对培养的人血管内皮细胞DNA合成的影响。方法：用高效液想象以谱凝胶过滤柱,标准蛋白制备标准曲线,测定猪血小板衍生生长因子的相对分子质量和纯度;采用培养的人脐静脉血管内皮细胞,应用^3H-TdR掺入的方法。观察猪血小板衍生生长因子对血管内皮细胞DNA合成的影响。结果：测得的猪血小板衍生生长因子的相对分子质量为29120,纯度为89.46%;猪血小板衍生生长因子可促进处于静止状态的人血管内皮细胞DNA的合成,在40ng/ml的质量浓度时DNA的全盛最为明显,且于血小板衍生生长因子作用48h时合成最为显。结论：猪血小板衍生生长因子的相对分子质量为29120,可明显促进培养的血管内皮细胞DNA的合成。