雷公藤内酯醇对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及其作用机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,细胞融合达60％时培养基中加入不同浓度的雷公藤内酯醇和雷帕霉素。采用细胞计数法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测VSMCs内c-fos mRNA表达水平。结果雷公藤内酯醇和雷帕霉素均明显抑制血清诱导的大鼠VSMCs增殖,阻断细胞由G0／G1期向S期转化;RT-PCR检测显示,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,c-fos mRNA表达明显减少。结论雷公藤内酯醇能明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,而阻断细胞周期、下调原癌基因c-fos mRNA的表达可能是其药理机制之一。     

雷公藤内酯醇对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其作用机制.方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,细胞融合达60%时培养基中加入不同浓度的雷公藤内酯醇和雷帕霉素.采用细胞计数法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测VSMCs内c-fos mRNA表达水平.结果雷公藤内酯醇和雷帕霉素均明显抑制血清诱导的大鼠VSMCs增殖,阻断细胞由G0/G1期向S期转化;RT-PCR检测显示,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,c-fos mRNA表达明显减少.结论雷公藤内酯醇能明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,而阻断细胞周期、下调原癌基因c-fos mRNA的表达可能是其药理机制之一.     

他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖的抑制机制

他汀类药物 (HMG CoA还原酶抑制剂 )通过竞争性抑制HMG CoA还原酶 ,阻断HMG CoA还原成 3 甲基 3、5 二羟戊酸 ,导致胆固醇生成减少。而细胞内胆固醇含量减少 ,又可刺激细胞表面LDL受体合成增加 ,从而促进LDL、VLDL通过受体途径代谢降低血清LDL含量。甲羟戊酸 (mevalonate ,MVA)和胆固醇都是血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMC)增殖的物质基础 ,许多实验表明他汀类药物的非调脂作用在参与抑制VSMC的增殖过程中具有重要意义。现仅就HMG CoA还原酶抑制剂通过多种机制打破VSMC增殖与凋亡的平衡 ,从而抑制VSM…     

腺病毒介导gax基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖

目的　以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,探讨gax基因表达增强后VSMC增殖的变化。方法　以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体 (AdCMV gax)常规转染VSMC后 ,应用免疫细胞化学染色检测gax基因表达的变化 ;应用四唑盐 (MTT)比色试验、3H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入试验和流式细胞仪检测观察gax基因表达增强对VSMC增殖的影响。结果　①AdCMV gax转染前 ,PDGF BB下调Gax蛋白的表达 ,接近正常生理浓度的PDGF BB( 2ng ml)即可使VSMC的Gax蛋白表达率由 3 6.42 %显著降低至 2 2 .83 %(P <0 .0 5 ) ,随着PDGF BB浓度的升高 ,gax基因表达下降程度更加显著 ;AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高。②AdCMV gax转染使VSMC表达gax增强后 ,VSMC的MTT吸光度值和3H TdR掺入量均较未转染组显著降低 ,G0 G1期的VSMC比例较未转染组显著增高 (P <0 .0 1) ,G2 M期和S期细胞比例显著降低 (P <0 .0 1)。结论　增强gax基因表达可抑制由有丝分裂原刺激所引起的VSMC增殖     

黄色素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究黄色素（ＳＹ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及其作用机制。方法 以培养的家兔ＶＳＭＣ为材料，采用细胞计数和＾３２Ｐ掺入法，研究了ＳＹ对ＶＳＭＣ的增殖及ＶＳＭＣ中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性的影响。结果 ＳＹ对血清刺激的ＶＳＭＣ的增殖具有抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。１．０ｇ／Ｌ达到最大抑制，抑制率为５４．６％，４ｄ（１．０ｇ／Ｌ ＳＹ）达到最大抑制，抑制率为５２．０％，超过４ｄ     

熊果酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的： 研究熊果酸(UA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。 方法： 高糖(葡萄糖,25 mmol/L)诱导VSMC增殖为模型,MTT法检测UA对细胞增殖的影响,Cell-based ELISA 测定UA对p38MAPK磷酸化水平变化,采用SABC免疫组化法测定UA对细胞c-fos蛋白表达水平的影响。 结果： UA(20,40 μmol/L)能抑制高糖诱导的VSMC增殖作用(P<0.05)。UA组p38MAPK的磷酸化水平明显低于葡萄糖模型组(P<0.05),且c-fos 的蛋白表达水平较模型组也明显降低。 结论： UA可以抑制大鼠VSMC增殖,此作用可能与其抑制p38MAPK信号传导通路激活,从而下调c-fos蛋白表达有关。     

牛磺酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

以~3H-胸腺嘧啶参入和细胞计数的方法,观察牛磺酸对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制效应。结果表明,培养液中加入牛磷酸(5、10和20mmol/L)能明显抑制培养的自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)VSMC的~3H-胸腺嘧啶参入,降低其细胞计数。牛磺酸对血管紧张素Ⅱ(10~(-7)mmol/L)刺激的VSMC增殖亦呈剂量依赖地抑制效应。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞 (Vascularsmoothmusclecells ,VSMCs)的促增殖作用的量效和时效关系。方法　采用 4～ 10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。 0 .1,0 .5 ,1,3,10U/ml凝血酶刺激VSMCs 2 4h或 0 .5U/ml和 1U/ml凝血酶刺激VSMCs 0 ,1,6 ,12 ,2 4,48,72h ,采用MTS法和 β N 乙酰氨基己糖苷酶测定VSMCs细胞增殖率。结果　①不同浓度的凝血酶对VSMCs有明显促增殖作用 (P <0 .0 1) ;但凝血酶浓度为 0 .1～ 10U/ml在 2 4h时对VSMCs的促增殖作用无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;② 0 .5 (U/ml)和 1.0 (U/ml)两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组 ,在各时间段均有明显促增殖作用 (P <0 .0 5 )。增殖曲线呈双峰样改变 ,1h和 2 4h峰值说明凝血酶对VSMCs的促增殖作用不仅有迅速而短暂的作用 ,而且有后发迟缓的作用。结论　①凝血酶浓度在 0 .1～ 10U/ml之间促VSMCs增殖无浓度依赖性 ;②凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变。     

脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨脱氢表雄酮对大鼠血管平滑肌细胞活性及细胞周期的影响。方法培养大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞系,血小板源性生长因子(PDGF)刺激细胞增殖,采用CCK-8方法观察不同浓度脱氢表雄酮对血管平滑肌细胞活性的影响,用流式细胞分析法检测细胞周期分布。结果1.0、2.5、5.0μg/LPDGF增强大鼠血管平滑肌细胞活性,0.1、1.0、10、100nM脱氢表雄酮抑制细胞活性,两者的作用随浓度增加而增强;脱氢表雄酮可抑制PDGF的作用。脱氢表雄酮的作用增加G1期的细胞数量。结论脱氢表雄酮通过抑制细胞周期的进展,而减少血管平滑肌细胞的增殖。     

Inhibitory Effects of Roscovitine on Proliferation and Migration of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

Abnormal proliferation and migration of vascular smooth muscle cells （VSMCs） are the major cause of in-stent restenosis （ISR）. Intervention proliferation and migration of VSMCs is an im- portant strategy for antirestenotic therapy. Roscovitine, a second-generation cyclin-dependent kinase in- hibitor, can inhibit cell cycle of multiple cell types. We studied the effects of roscovitine on cell cycle distribution, proliferation and migration of VSMCs in vitro by flow cytometry, BrdU incorporation and wound healing assay, respectively. Our results showed that roscovitine increased the proportion of Go/G1 phase cells after 12 h （69.57±3.65 vs. 92.50±1.68, P=0.000）, 24 h （80.87±2.24 vs. 90.25±0.79, P=0.000） and 48 h （88.08±3.86 vs. 88.87±2.43, P=-0.427） as compared with control group. Roscovifine inhibited proliferation and migration of VSMCs in a concentration-dependent way. With the increase of concen- tration, roscovitine showed increased capacity for growth and migration inhibition. Roscovitine （30 μmol/L） led to an almost complete VSMCs growth and migration arrest. Combined with its low toxicity and selective inhibition to ISR-VSMCs, roscovitine may be a potential drug in the treatment of vascular stenosis diseases and particularly useful in the prevention and treatment of ISR.     

一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响及与细胞周期调节的关系

目的 :评价NO供体 (DETANO)抑制血管平滑肌细胞增殖的效应及其抗增殖效应与细胞周期抑制蛋白P2 7kip1的关系。方法 :将DETANO(10 -5～ 10 -3 mol·L-1)、DETA(10 -3 mol·L-1)及阴性对照 (DMSO)作用于体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察不同处理因素的抗增殖效应。应用蛋白杂交方法分析G0 期、增殖期和DETANO作用的平滑肌细胞中P2 7的表达水平。结果 :DETANO能抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,以 10 -3 mol·L-1浓度的DETANO效果最显著 ,而单纯DETA对细胞增殖无抑制效应。而且DETANO和DETA无细胞毒性效应。蛋白印迹分析表明处于G0期的细胞P2 7高水平表达 ,给予 10 %胎牛血清刺激 2 4h后 ,P2 7水平迅速下降。若预先给予DETANO(10 -3 mol·L-1)干预 ,则P2 7蛋白水平下调的效应减弱。结论 :DETANO能抑制血管平滑肌细胞增殖 ,其抗增殖机制与细胞周期调控和上调P2 7kip1相关。     

川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖中CaM和CaN活性的影响

目的探讨不同浓度川芎嗪在不同作用时间内对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMCs(VSMCs)增殖的抑制作用.方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对VSMCs中钙调蛋白(CaM)和钙调神经磷酸酶(CaN)活性影响.结果成功建立AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型,川芎嗪各组CaM和CaN活性随川芎嗪的浓度和作用时间的延长而显著下降(P＜0.01).结论川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖的抑制作用有剂量和时间依赖性,其抑制机制可能与其干预CaN依赖的信号转导途径有关.     

茶多酚抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及相关机制研究

目的:研究晚期糖基化产物(AGEs)对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖的影响及相关机制。方法:用AGEs处理A7R5细胞,相同条件BSA处理为对照组,Western blotting检测RAGE蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞活性。结果:AGEs处理A7R5细胞后,AGEs受体RAGE及细胞增殖水平均明显升高,但与EGCG共孵育能显著抑制AGEs诱导的RAGE表达增加及细胞增殖水平。结论:EGCG能够抑制AGEs诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖水平,这可能与EGCG抑制AGEs受体RAGE的表达相关。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对缺氧血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制的研究

目的:研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对缺氧大鼠胸主动脉平滑肌细胞(SMCs)增殖的影响,并探讨其作用机制是否与早期生长反应基因-1(egr-1)有关。方法:取第3~4代培养的大鼠胸主动脉SMCs制作缺氧模型,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞周期,蛋白印迹杂交方法检测Egr-1及血小板源生长因子(PDGF-A)蛋白表达情况。结果:与缺氧组比,反义寡核苷酸组及F2组比色吸光度A值、细胞周期S G2/M期比例均下降(P<0.01),Egr-1及PDGF-A蛋白表达均减少。结论:F2可通过抑制Egr-1蛋白表达来抑制缺氧SMCs的过度增殖。     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖及JNK磷酸化的影响

  【目的】 研究发现,三七总皂苷(TPNS) 具有抑制和促进细胞增殖的双向调节作用,但是具体的作用机制尚不明确&#65377;本研究旨在观察TPNS对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及经由何种信号通路介导&#65377;【方法】 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和蛋白印迹(Western blot)法观察了体外培养的大鼠VSMC在不同浓度及一定浓度不同作用时间TPNS作用下,VSMC增殖活性的变化及c*9鄄Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化的变化;并用DAPI染细胞核,观察TPNS作用后核形态的变化&#65377; 【结果】 MTT法观察到:TPNS的浓度为0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L时,无论是处于静息状态或50 mL/L血清刺激下,VSMC的代谢活性均增高;TPNS的浓度为3.0 g/L时,静息培养的VSMC的代谢活性没有明显的变化,而50 mL/L血清刺激的VSMC的代谢活性仍增高;TPNS的浓度为6.0 g/L,12.0 g/L时,静息培养或50 mL/L血清刺激下的VSMC的代谢活性均降低,并随着浓度的增大,代谢活性降低越明显&#65377;同时,Western blot 结果显示:TPNS能快速的激活JNK1/2,并呈时间和浓度依赖性&#65377;当TPNS的浓度为0.5 g/L时,即可引起JNK的磷酸化,并随着浓度的增大,磷酸化作用增强;当TPNS的浓度为1.5 g/L时,作用5 min,JNK呈现最大程度的激活,随后逐渐减弱&#65377; DAPI染核观察到,6.0 g/L TPNS作用48 h后,VSMC出现了核固缩&#65380;核碎片等细胞凋亡的特征&#65377;【结论】 较低浓度的TPNS可促进血管平滑肌细胞的增殖,而较高浓度的TPNS可抑制其增殖,JNK1/2磷酸化可能是引起细胞增殖受到抑制的机制之一&#65377;