川芎嗪对肝星状细胞TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA与NF-κB表达的影响

目的：探讨中药单体川芎嗪（TMP）对肝星状细胞（HSC）核因子-κB（NF-κB）、转化生长因子-β1（TGF-β1）及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达的影响。方法：体外培养人肝星状细胞,免疫细胞化学法检测HSC中NF-κB表达以及核迁移情况,RT-PCR法检测HSC中TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA表达。结果：TMP组NF-κB表达量较少并且主要位于细胞质,很少发生核迁移。RT—PCR显示,与阴性对照组相比,TMP组TGF-β1 mRNA相对表达量均有显著性差异（P〈0．01）;TMP200mg／L、800mg／L组TβRⅠ mRNA相对表达量降低,其差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01）;TMP200mg／L、800mg／L组TβRⅡ mRNA相对表达量均有显著性差异（P〈0．01）。结论：川芎嗪可降低HSC中NF-κB表达并抑制其核转移,降低TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA表达,表明川芎嗪可抑制HSC活化,这可能与阻断NF-κB信号通路、阻断TGF-β／Smad通路的信号传导有关。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

大黄虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β_1的影响

目的 :探讨大黄虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF β1)的影响。方法 :用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型 ,同时分别给予 3种剂量大黄虫丸治疗 ,免疫组化方法观察TGF β1、α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的合成表达及纤维化程度分级。结果 :经给予大黄虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF β1、α SMA表达与模型组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,但双倍剂量组和三倍剂量组TGF β1、α SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :大黄虫丸较大剂量能抑制肝星状细胞增殖和分泌TGF β1,减少胶原生成 ,从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应 ,这可能是大黄虫丸抗肝纤维化作用的主要机制之一。     

大黄虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的：探讨大黄Zhe虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法：用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄Zhe虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级。结果：经给予大黄Zhe虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P>0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P相似文献   

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用及对蛋白TGF-β1和a-SMA表达的影响

目的 研究荔枝核总黄酮(TFL)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及其作用机制.方法 MTT法测定TFL对HSC-T6的增殖抑制;吖啶橙染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期.Western Blot检测细胞中TGF-β1和a-SMA蛋白表达.结果 MTT结果显示,TFL对HSC-T6具有增殖抑制活性(P＜0.05),其半数抑制浓度(IC50)为101.98 mg/ml;吖啶橙染色显示,药物组细胞中出现核浓缩、核碎裂及致密浓染亮绿色凋亡小体.流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞G1期细胞比例为(47.68±2.92)％,G2期为(19.58±2.93)％,S期为(32.75±2.09)％;TFL药物处理组细胞G1期细胞数量增加,而G2期细胞显著减少,与对照组比较,P ＜0.05.Western Blot检测结果显示,细胞中TGF-β1和a-SMA蛋白,随药物浓度增加,其表达呈下降趋势,与对照组比较,100 mg/ml及120 mg/ml药物浓度组的TGF-β1和a-SMA蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TFL在体外对HSC-T6的增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过抑制细胞TGF-β1和a-SMA蛋白表达,达到阻滞细胞增殖周期和诱导细胞凋亡.     

大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的:探讨大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄(*虫)虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级.结果:经给予大黄(*虫)虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P＞0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P＜0.05,P＜0.01).结论:大黄(*虫)虫丸较大剂量能抑制肝星状细胞增殖和分泌TGF-β1,减少胶原生成,从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应,这可能是大黄(*虫)虫丸抗肝纤维化作用的主要机制之一.     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGFβ1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素大鼠肝纤维化模型,给予壮肝逐瘀煎灌胃,取血清及肝组织做检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清TGF-β1含量,实时荧光定量PCR技术对肝组织TβR Ⅰ/ⅡmRNA进行定量分析.结果:治疗6周后,与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,TGF-β1及TβR Ⅰ/ⅡmRNA明显降低(P＜0.01).结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎抑制TGF-β1及TβRⅠ/Ⅱ mRNA表达有关.     

川芎嗪对肝星状细胞的增殖及凋亡的影响

目的:考察川芎嗪对肝星状细胞的细胞周期与凋亡的影响,并探讨潜在的分子机制。方法:以MTS试验分析川芎嗪对肝星状细胞增殖的影响;3H-TdR渗入法分析肝星状细胞的DNA合成速度;以LDH释放实验检测川芎嗪的毒性;以流式细胞术检测肝星状细胞周期;以Western blot检测肝星状细胞内Cyclin D1、p21、p27、p53蛋白的表达;以免疫荧光染色检测各时间点p53的表达;以JC-1试剂盒检测肝星状细胞线粒体膜电位;以Western blot检测川芎嗪作用后的肝星状细胞内Bcl-2、Bcl-x L、Bak、Bax、cleavedcaspase 8、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及cleaved-PARP-1以及细胞质内Cyt c的表达。结果:MTS结果显示40μmol/L川芎嗪能显著抑制肝星状细胞活力;3H-TdR掺入法显示川芎嗪显著抑制肝星状细胞的DNA复制;LDH实验表明川芎嗪高达100μmol/L时可对肝星状细胞产生毒性;流式细胞术显示川芎嗪(10、20、40μmol/L)可诱导细胞周期停滞在G0/G1期;Western blot实验表明川芎嗪可抑制Cyclin D1而促进p21、p27和p53的蛋白表达;20μmol/L川芎嗪诱导p21与p27蛋白表达的作用可被p53抑制剂PFT削弱;JC-1线粒体膜电位检测结果显示川芎嗪能浓度(10~40μmol/L)依赖性地增强肝星状细胞绿色荧光强度;Western blot结果显示川芎嗪抑制Bcl-2和Bcl-x L表达而促进Bak、Bax、cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及cleaved-PARP-1以及细胞质内Cyt c的蛋白表达。结论:川芎嗪抑制肝星状细胞增殖并促进其凋亡。     

川芎嗪对人肝星状细胞凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1 mRNA表达的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对人肝星状细胞(HSC)凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法:采用人肝星状细胞株LX-2作为理想的肝星状细胞研究模型,LX-2细胞经不同剂量TMP(终浓度为50、100、200、400mg/L)作用48h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测TMP对LX-2细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测TMP对LX-2细胞TIMP-1 mRNA表达的影响。结果:TMP可显著促进LX-2细胞凋亡,细胞早期凋亡率随TMP浓度增加而提高,与空白对照组相比凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05);同时TMP可显著降低LX-2细胞TIMP-1mRNA的表达,与空白对照组相比差异显著(P<0.01)。结论:促进HSC凋亡,抑制其TIMP-1 mR-NA的表达是TMP抗肝纤维化的部分机制。     

瑶药猛老虎提取物对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-1和TGF-β1表达的影响

目的：观察瑶药猛老虎提取物对大鼠肝星状细胞（HSC）Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶（MMP-1）和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法：制备猛老虎乙酸乙酯部位分离物药物血清,分离培养大鼠肝HSC,温育HSC,EIJSA法检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;MTT检测HSC的生长情况;逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法观察MMP-1的表达;免疫组化法观察TGF-β1的表达。结果：猛老虎乙酸乙酯部位各分离物和秋水仙碱药物血清对体外培养的HSC细胞增殖无抑制作用。与空白对照血清组比较,无显著性差异（P〉0．05）。分离物E中和高剂量组的药物血清均能明显促进体外培养HSC细胞MMP-1基因表达水平、抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌和TGF-β1表达并呈现剂量依赖关系,与空白对照血清组比较,均具有显著性的统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,效果与秋水仙碱相当。结论：瑶药猛老虎抗肝纤维化作用不是直接抑制HSC的增殖,而是与其促进HSC细胞MMP-1基因表达水平、抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌和TGF-β1的表达有关。     

基于Smad通路研究软肝丸对TGF-β1诱导的肝星状细胞的影响

目的:探讨软肝丸对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肝星状细胞增殖、凋亡和Smad通路的影响.方法:将肝星状细胞分为空白组、模型组、软肝丸低浓度组(0.17 μg·L-1)、软肝丸中浓度(0.34 μg·L-1)组、软肝丸高浓度(0.68 μg·L-1)...     

金三莪对肝纤维化大鼠TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA与Smad3、Smad7表达的影响

目的:观察中药金三莪抗大鼠肝纤维化的疗效及作用机制.方法:采用金三莪治疗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型.RT-PCR检测肝组织TGEβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡ mRNA;免疫组化技术检测Smad3及Smad7在肝内的表达及定位,肝组织HE染色检测病理改变.结果:与模型组大鼠比较,RT-PCR显示经该中药组方治疗,大鼠肝内TGFβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡ mRNA(P＜0.05,P＜0.01),以及Smad3表达明显降低;而Srmad7的表达增加.Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达.肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄.结论:金三莪组方能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度,其机理与抑制肝内TGFβ1、TGFR Ⅰ与TGFRⅡmRNA及Smad3表达,并促进Smad7表达有关.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀３１９方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ＥＬＩＳＡ法测定培养上清的Ⅰ型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达,ＲＴＰＣＲ法分析Ⅰ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的Ⅰ型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞ＴＧＦβ１与蛋白表达。结论：扶正化瘀３１９方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞Ⅰ型前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响

目的研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF—β1表达的影响，探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法建立wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型，通过免疫组化及图像分析等方法，观察补肾化瘀方对肝脏病理组织学、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达的影响。结果经补肾化瘀方治疗后，用药组肝组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达显著降低（p〈0.05），与模型组比较有显著性差异。结论补肾化瘀方可能通过抑制肝组织TGF—β1的表达，使HSC的增殖活化受到抑制，胶原合成减少，而起到抗纤维化的作用。     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:观察中药复方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织细胞因子TGF-β1mRNA表达的影响,分析鳖甲煎丸的治疗作用,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理;并与西药秋水仙碱作对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据.方法:雄性Wistar大鼠90只随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型.各组于10周后取10只大鼠断头处死,取肝组织,用原位杂交法检测肝组织内TGF-β1mRNA.结果:鳖甲煎丸能够明显减少TGF-β1mRNA的表达,作用接近或优于秋水仙碱,显示它具有明显的抗纤维化作用.鳖甲煎丸和秋水仙碱的预防效果同治疗效果相比差异均不显著.     

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β_1的影响

目的 :观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF β1表达的影响。方法 :用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型 ,同时给与三七总皂甙治疗 ,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,纤维化程度分级。结果 :三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,减轻肝纤维化程度。结论 :三七总皂甙具有抗肝纤维化作用 ,其机理尚待进一步研究     

乌梅丸对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝组织细胞因子TGF-β1及其mRNA的影响

目的探求乌梅丸抗肝纤维化的作用机理。方法选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,观察经方乌梅丸对免疫损伤性肝纤维化模型大鼠肝组织TGF-β1及其mRNA表达的影响,分析乌梅丸的治疗作用,并以秋水仙碱、小柴胡汤作对照。结果乌梅丸能够明显减少TGF-β1及其mRNA的表达,作用优于秋水仙碱及小柴胡汤。结论乌梅丸具有明显的抗纤维化作用。     

肝星状细胞与肝纤维化

肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝脏纤维结缔组织的过度沉积,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和降解不平衡的结果,是各种慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径。而肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是ECM产生的主要细胞来源,它的激活、凋亡受到众多细胞因素及细胞内信号转导系统的调节,因此阐明肝星状细胞的生物学特性与功能及其在肝纤维化中的作用机制,对肝纤维化的预防和治疗都有