miR-454-3p通过靶向STAT3调控CNE-2人鼻咽癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨miR-454-3p和STAT3在鼻咽癌组织中的表达情况,以及miR-454-3p靶向STAT3对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：收集2023年6月～8月右江民族医学院附属医院和百色市人民医院的鼻咽癌组织和正常组织各5例,采用qRT-PCR检测各样本中miR-454-3p与STAT3的表达情况;以未处理的鼻咽癌细胞CNE-2作为空白对照组(blank group),采用Lipofectamine^TM 3000将miR-454-3p mimics、mimics NC(negative control)、miR-454-3p inhibitor、inhibitor NC(negative control)分别转染CNE-2细胞作为miR-454-3p mimics组、mimics NC组、miR-454-3p inhibitor组、inhibitor NC组;利用Targetscan预测miR-454-3p与STAT3的靶向关系并用双荧光素酶实验验证;分别采用qRT-PCR检测转染效率及转染后STAT3的mRNA水平变化;划痕愈合实验、Transwel...     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

  目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物（inhibitor）和miR-490-3p模拟物（mimic）以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后，通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测，流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时，用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证，通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  （1）与HPDE正常细胞相比，SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低（P = 0.215）；（2）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P < 0.0001）。miR-490-3p 下调后，SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组（P < 0.0001）；（3）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著低于对照组（P < 0.0001）；miR-490-3p 下调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著高于对照组（P < 0.0001）；（4）HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT，从而影响胰腺癌的的发生发展进程，揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

目的 研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响.方法 通过实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达.通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物(inhibitor)和miR-490-3p...     

miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制

目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.     

miR-19a在鼻咽癌细胞上皮间质转化中的作用

目的 研究微小RNA-19a(miR-19a)在鼻咽癌细胞中的表达以及对体外鼻咽癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用.方法 利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-19a在鼻咽癌细胞株CNE2、SUNE-1、HNE1、58F及人正常鼻咽上皮细胞株NP69中的转录水平;使用miR-19a模拟物(miR-19a...     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

miR-409-3p靶向ZEB1负性调控卵巢浆液性癌HO-8910细胞上皮间质转化

目的 探讨miR-409-3p靶向ZEB1对卵巢浆液性癌HO-8910细胞上皮间质转化的影响及作用机制.方法 利用脂质体分别将对照mimics和miR-409-3p mimics转染入HO-8910细胞中,qRT-PCR检测其转染效率,Western blot检测各组细胞中ZEB1、E-cadherin、N-cadhe...     

miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的 研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制.方法 常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SK-OV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组...     

冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探究冬凌草甲素调控微小RNA200c(miR-200c)/组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375细胞活力的影响;将A375细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control组、miR-200c mimics组、冬凌草甲素+inhibitor control组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组,qRT-PCR检测miR-200c、EZH2 mRNA表达情况;免疫印迹法检测EZH2及EMT相关蛋白表达情况;黏附实验检测A375细胞黏附能力;Transwell实验检测A375细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测miR-200c与EZH2的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析EMT相关蛋白表达情况。结果 A375细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0.05),由于40μmol/L冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取40μmol/L冬凌草甲素进行后续实验;与对照组相比,冬凌草甲素...     

过表达miR-22-3p抑制肝癌Li-7细胞增殖、迁移和上皮间质转化

目的探讨miR-22-3p对肝癌Li-7细胞增殖、迁移及上皮间质化转变的影响。方法应用脂质体3000将miR-22-3p过表达质粒(GV251/miR-22-3p)转染至肝癌Li-7细胞,实验分别设置正常对照组(N)、阴性对照组(GV251/NC)和miR-22-3p过表达组(GV251/miR-22-3p)。应用浓度为200μg/mL G418筛选出miR-22-3p过表达稳转细胞株。CCK8实验检测细胞增殖能力变化;细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化;Real-time PCR和Western blot检测Bcl-2和Bax的表达以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志基因(E-cadherin、β-catenin、N-cadherin和Vimentin)mRNA和蛋白表达。结果与N组和GV251/NC组相比,GV251/miR-22-3p组miR-22-3p的表达显著升高(P<0.01),而且细胞的增殖和迁移能力在48h后均显著降低(P<0.01,P<0.01);与N组和GV251/NC组相比,GV25...     

miR-139-5p靶向Notch1抑制前列腺癌细胞上皮间质转化与转移

目的 探讨miR-139-5p靶向调节Notch1表达对前列腺癌(PCa)细胞上皮间质转化(EMT)和转移能力的影响。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科手术切除的PCa组织标本,购买PCa细胞系,分别以良性前列腺增生(BPH)标本和人前列腺上皮细胞系为对照。采用qRT-PCR实验和Western-blot实验分别检测组织和细胞中miR-139-5p和Notch1的表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Notch1的靶向关系;采用Western-blot实验检测细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Vimentin蛋白水平;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞的方式建模,评估肺部肿瘤转移灶的情况。结果 在组织学和细胞水平上,与BPH组织比较,前列腺癌miR-139-5p低表达,而Notch1高表达,差别有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高表达miR-139-5p的PC-3细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低;Tra...     

CXCL3/CXCR2调节乳腺癌细胞上皮-间质转化的作用机制研究

目的 探讨趋化因子3(CXCL3)及其受体趋化因子受体2(CXCR2)调节乳腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 在CXCL3对于乳腺癌细胞作用的实验中,将MCF-7细胞分为对照组A和CXCL3组A,对照组A为常规培养的MCF-7细胞,而CXCL3组A为加入10 ng/L CXCL3干预的MCF-7细胞.在...     

LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环调控胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环对SGC-7901细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析胃癌组织、癌旁正常组织、SGC-7901细胞、GES-1细胞中LncRNA CASC15、miR-153-3p和Nrf2的表达量...     

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的 观察特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,探讨其分子机制.方法 设计并合成针对Smoothened (SMO)基因特异性的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路.应用Matrigel/Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化;并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化.结果 稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后,人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低,p=0.020;上皮表型标志物E-cadherin表达明显上调,而间质表型Vimentin、Fibronectin、N-cadherin等的表达水平显著下调,P值分别为0.020、0.001、0.031和0.022;与对照组相比,SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调,P值分别为0.018和0.016.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性,可显著抑制Panc-1细胞EMT过程,其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关.     

FGF8b调控前列腺癌细胞上皮间质转化的分子机制

目的:探讨成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)促进前列腺癌DU145细胞上皮间质转化的分子机制。方法:先选取3组细胞,分别为空白对照组(DU145细胞)、阴性对照组[(DU145细胞转染空白质粒(简称pcDNA3.1/DU145)]和实验组[DU145细胞转染FGF8b(简称FGF8b/DU145)]。采用Western印迹检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路活性,然后将FGF8b/DU145细胞及DU145细胞在PD98059(ERK激酶抑制剂)作用下分为4组:A组为2%胎牛血清(FBS)处理的FGF8b/DU145细胞;B组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的FGF8b/DU145细胞;C组为2%FBS处理的DU145细胞;D组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的DU145细胞,培养观察细胞形态学的变化,最后Western印迹和Transwell小室检测各组细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的变化以及细胞的迁移能力改变。结果:实验组ERK1/2活性明显高于空白对照组和阴性对照组。给予PD98059后,B组与未给予PD98059组的A组相比,上皮细胞标志物上皮钙黏素蛋白表达量明显上调(P<0.05);间质标志物波形蛋白表达量明显下调(P<0.05)。细胞迁移试验结果提示:在给予PD98059后,B组FGF8b/DU145细胞的迁移能力与A组相比明显减弱。结论:FGF8b调控前列腺癌细胞DU145发生上皮-间质转化,可能由ERK激酶通路介导,MAPK激酶1作为该信号通路的关键因子之一,可能是干预前列腺侵袭转移的有效靶点。     

细胞上皮-间质转化发生的分子机制及临床意义

上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是上皮细胞通过特定程序从黏附细胞形态向具有间质表型游离细胞形态转化,并获得侵入细胞外基质能力的一系列转化过程。这种后天获得运动能力的细胞在移行过程中可再次向上皮细胞或其他细胞类型转变,即间质细胞上皮化(mes-enchymal-epithelial transition,MET)。EMT 与 MET 的相互转化与肿瘤的发生、发展、转移关系密切[1-2]。目前,EMT 与肿瘤关系及其临床应用已成为研究热点。     

结直肠癌组织中miR-767-3p表达水平与上皮-间质转化的关系分析

目的：分析结直肠癌组织中miR-767-3p表达水平与上皮-间质转化的关系。方法：选取江西省中西医结合医院病理科2017年1月-2021年12月收治的70例结直肠癌患者的资料纳入研究。检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中miR-767-3p表达水平和EMT指标：E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环素(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)的阳性率,并检查肿瘤浸润深度和是否发生淋巴结转移、远处转移。分析miR-767-3p与其他指标的相关性。结果：结直肠癌组织的miR-767-3p表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05);癌组织患者EMT各蛋白不同表达下的miR-767-3p的表达量均显著不同,E-cadherin(+)者,miR-767-3p的表达量明显更低,N-cadherin(+)者、β-catenin(+)者、Vimentin(+)者,miR-767-3p的表达量均明显更高(P<0.05);EMT各蛋白的表达在miR-767-3p高表达组和低表达组上分布有显著差异,高表达组的E-cadherin阳性率更低,而...     

上皮-间质转化发生机制的研究进展

上皮-间质转化（EMT）参与多种恶性肿瘤的发生、侵袭和转移,其发生机制是一个非常复杂的过程,由多种转录因子、信号通路等参与,同时与miRNA、肿瘤微环境、外泌体有关。本文就EMT发生机制的研究进展作一综述。     

胃泌素通过JAK2/STAT3信号通路调控胃癌细胞上皮间质转化

目的：观察外源性17肽胃泌素（gastrin-17, G-17）对人胃癌SGC-7901细胞E-钙黏素（E-Cadherin）及N-钙黏素（N-Cadherin）表达的影响并对相关机制进行初步探究。方法：体外培养胃癌SGC-7901细胞,使用G-17与胃泌素受体（cholecystokinin2 receptor,CCK2R）特异性抑制剂YM022处理胃癌细胞24 h后,Western blot检测E-Cadherin和N-Cadherin的表达;分别转染针对CCK2R的siRNA和过表达质粒,观察G-17处理对E-Cadherin和N-Cadherin表达的影响;Western blot检测G-17/CCK2R对JAK2/STAT3信号转导通路的活化情况;在分别使用JAK2特异性抑制剂AG490抑制JAK2/STAT3信号转导通路的激活或降低STAT3表达后,观察G-17对E-Cadherin和N-Cadherin表达的影响。结果：Western blot显示外源性G-17处理能降低SGC-7901胃癌细胞E-Cadherin的表达并上调N-Cadherin的表达,同时活化JAK2/STAT3信号转导通路,且这种效应能够被CCK2R特异性抑制剂YM022或siRNA所阻断,提示上述效应是由CCK2R所介导的。当使用AG490抑制JAK2/STAT3信号转导通路或下调STAT3表达后,G-17诱导的E-Cadherin下调以及N-Cadherin上调效应会部分被逆转。结论：外源性G-17可通过作用于胃癌SGC-7901细胞的CCK2R,进而激活JAK2/STAT3信号转导通路,下调E-Cadherin蛋白表达,上调N-Cadherin蛋白表达,诱导胃癌SGC-7901细胞的上皮间质转化。     

miR-186通过负调控Smad6对胶质瘤细胞迁移和上皮间质转化的影响

目的研究miR-186通过负调控Smad6对人胶质瘤细胞迁移和上皮间质转化的影响。方法 qRTPCR检测星形胶质细胞及胶质瘤细胞中miR-186和Smad6的表达,Western blot检测Smad6蛋白的表达水平;细胞分四组:空白对照组(U251)、模拟物组(miR-186 mimics)、质粒组(pc-Smad6)、共转染组(miR-186 mimics+pcSmad6)。Western blot检测各组细胞Smad6、上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达水平;划痕实验检测各组细胞的迁移情况。结果与正常星形胶质细胞比,人胶质瘤细胞系U251中miR-186表达明显降低,而Smad6表达明显升高(P 0.05)。较对照组,Smad6蛋白在miR-186 mimics组细胞中的表达显著下降,而在pcSmad6组细胞中的表达则明显增加(P0.05); miR-186 mimics组细胞迁移能力显著降低,而pc-Smad6组明显增强(P0.05); miR-186 mimics组E-cadherin蛋白的表达显著升高,而Vimentin蛋白表达明显降低(P 0.05),在pcSmad6组中两种分子的表达情况相反(P 0.05)。对比pc-Smad6组,miR-186 mimics+pc-Smad6组Smad6蛋白的表达水平明显降低(P0.05); miR-186 mimics+pc-Smad6组细胞的迁移能力明显降低(P0.05); miR-186 mimics+pc-Smad6组Vimentin表达明显降低,而E-cadherin的表达显著升高(P 0.05)。结论 miR-186可通过调控Smad6的表达而抑制人胶质瘤细胞迁移和上皮间质转化。