全自动精浆果糖检测方法的建立及主要性能评价

目的建立全自动精浆果糖检测方法并对其准确度、精密度及线性范围等进行评价。方法在全自动特定蛋白分析仪上利用己糖激酶法检测精浆果糖,评估该方法的准确度、精密度及线性范围,并与临床上常用的吲哚显色法进行比较。结果果糖质控品检测结果在其定值范围内。回收试验结果获得回收率分别为96.15%和103.37%。全自动己糖激酶法测定精浆果糖精密度高,批内精密度与批间精密度的CV值分别为0.63%和1.27%。精浆果糖浓度在0.065~4.16mmol/L范围内,具有良好的线性关系(r~2=1.00)。分别采用吲哚显色法与全自动己糖激酶法检测105个精浆标本的果糖浓度,两种方法的检测结果因其方法学不同而存在差异(P0.01),但两种方法的检测结果呈显著正相关(r~2=0.96,P0.01),线性回归方程为:y=1.19x+1.67(R~2=0.93,P0.01)。结论本研究建立的全自动精浆果糖检测法具有良好的准确度与精密度,与临床常用方法有较好的相关性。该法操作简单,安全快速,更适用于临床大批量样本的检测,建议在男性学实验室推广。     

赖氨肌醇维B12口服溶液中赖氨酸与维生素B12含量测定

目的建立赖氨肌醇维B12口服溶液中赖氨酸与维生素B12含量测定方法。方法采用电位滴定法测口服液中盐酸赖氨酸含量；高效液相色谱法测定维生素B12的含量，色谱条件为C18柱，以乙腈-0．05mol／L磷酸二氢钠（16：84）用磷酸调节pH=3．3为流动相，流速1mL／min，检测波长210nm。结果电位滴定法测定口服液中盐酸赖氨酸的回归方程为V=0．1055G-0．3425，r=0．9996。精密度试验的RSD％为0．44％，溶液稳定性试验的RSD％为0．59％，低中高三个浓度的平均回收率分别为99．54％、100．08％、99．71％，3批样品含量测定分别为100．72％、99．45％和99．76％；测定维生素B12的回归方程为A=0．8407C-0．0425，r=0．9998，精密度试验RSD为0．99％，溶液稳定性试验RSD为1．08％，最低检出限与定量限分别是0．12μg／mL和0．40μg／mL，低中高三个浓度平均回收率分别是98．20％、99．00％和99．07％，对3批样品的检测结果分别是100．81％、99．43％、98．25％。结论本研究测定盐酸赖氨酸和维生素B12的方法均准确可行，可用于本口服液的质量控制。     

两种双能X线吸收法骨密度仪测量骨块模型的精密度和灵敏度比较

目的　了解扇形束 (HologicQDR 450 0A)和笔形束 (LunarDPX IQ)DXA骨密度仪测量结果之间的关系 ,探讨两者的数据换算关系。方法　 1 6个骨块模型分别在HologicQDR 450 0A型和Lu narDPX IQ型DEXA仪上测量 3次 ,比较两者的灵敏度。选取其中 3个骨块模型连续测量 2 0次求变异系数 ,比较两仪器的批内精密度。每天测 5次连续 2 0d求变异系数 ,比较两仪器的批间精密度。人体腰椎骨块模型每天测 5次连续 8d,建立两仪器之间数据换算关系。结果　 (1 )LunarDPX IQ型DEXA仪的灵敏度高于HologicQDR 450 0A型DEXA仪。 (2 )用小动物软件测量BA、BMC、BMD ,HologicDEXA仪的批内精密度分别为 0 57%、0 8%、1 1 % ;LunarDPX IQ型DEXA仪分别为 2 2 %、1 0 0 %、1 0 4%。HologicDEXA仪的批间精密度分别为 1 2 %、2 8%、2 4% ;LunarDPX IQ型DEXA仪分别为2 0 %、1 0 3 %、1 0 5 %。结果均显示HologicDEXA仪的精密度高于LunarDEXA仪。 (3)两仪器之间的BA、BMC、BMD绝对值差异明显 (P <0 0 5) ,但可用线性回归方程进行数据换算 :①BMD :Hologic值 =0 80 2×Lunar值 +0 31 8(r=0 991 ;P <0 0 0 1 ;SEE =0 0 3g/cm2 ) ;②BMC :Hologic值 =1 2 0×Lunar值 +1 685(r=0 984;P <0 0 0 1 ;SEE =0 81 6g) ;③BA     

电化学发光免疫法与放射免疫法检测甲状腺激素结果比较

目的:比较电化学发光免疫法与放射免疫法对甲状腺激素的检测效果.方法:利用两种方法分别检测血清TT3、TT4、TSH、FT3、FT4,并进行均值、相关性、精密度和准确度对比分析.结果:两种方法的均值结果差异无统计学意义(P均＞0.05);TT3和FT4检测结果的两种方法相关有统计学意义(P＜0.01);ECLIA法对各指标测定的平均批内及批间变异为1.69%和3.68%,均低于RIA法的3.35%和5.04%;对两种方法的回收率作t检验,t值为7.138,P＜0.01,差异有统计学意义,ECLIA法的准确度优于RIA法.讨论:ECLIA法的精密度、准确度均优于RIA法,适合于临床应用.     

半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的研究

目的:建立半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的方法。方法:同时用半自动生化分析仪法(速率法)和手工葡萄糖氧化酶法检测51例精液常规分析参数均正常的男性精浆α葡糖苷酶活性,计算批内和批间变异系数以及正常参考值范围,并分析两种方法检测结果的相关性。结果:2例α葡糖苷酶活性不同的精浆样本用半自动生化分析仪法检测的批内变异系数分别为12.63%和9.13%,批间变异系数分别为10.67%和13.49%,正常参考值范围为102.28～555.08U/L。半自动生化分析仪法和手工法检测的精浆α葡糖苷酶活性呈显著正相关(r=0.792,P<0.01)。结论:半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性法简便、省时,节省试剂,结果稳定可靠。建议在男科实验室推广使用半自动生化分析仪法检测精浆α葡糖苷酶活性。     

两种精浆酸性磷酸酶检测方法的比较与评价

目的:对检测精浆酸性磷酸酶(ACP)活性的常规方法(磷酸苯二钠法)和试剂盒方法进行比较,并探讨试剂盒方法取代常规方法用于常规检测的可能性。方法:79份不育男性的精浆,分别用常规方法和试剂盒方法检测其ACP活性。取1份精浆标本用于两种方法的批内检测,另取2份标本用于两种方法的批间检测。随机留取10份精浆标本,稀释后立即或放置30 m in后检测ACP活性。另随机留取10份精浆标本,同时由2位技术人员分别用常规方法检测ACP活性。结果:试剂盒方法所测ACP活性与常规方法显著相关(r=0.745,P=0.000)。试剂盒方法与常规方法相比,两者批内CV(13.72%;10.66%)比较接近,而批间CV(13.8%和15.49%;24.43%和21.04%)明显较低。精浆稀释后放置30 m in,无论是常规方法还是试剂盒方法,所测结果都显著降低(P<0.05)。而2位技术人员用常规方法所测精浆ACP活性无显著区别(P=0.165)。结论:试剂盒方法检测精浆ACP活性优于常规方法,可以取代常规方法。     

四味清口含片的质量标准研究

目的：建立四味清口含片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法（TLC）定性鉴别四味清口含片中的桂心、甘草、细辛、广陈皮,采用高效液相色谱法（HPLC）测定四味清口含片中桂皮醛的含量。色谱条件为Hypersil ODS（C18）色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,检测波长为290 nm,流动相为甲醇-φ=0.1%磷酸水溶液（35∶65,v/v）,流速为1.0mL/min,柱温为30℃,理论板数以桂皮醛峰计算不低于3000。结果 TLC法能分别检出四味清口含片中桂心（肉桂）、甘草、细辛、广陈皮,均具有良好的鉴别特征,阴性未见干扰;桂皮醛进样量在0.010～0.500μg 范围内与峰面积积分值线性关系良好,r=0.9999。在精密度试验、稳定性试验、重复性试验中峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为1.03%、1.27%、1.23%。加样回收率为97.23%～101.54%,平均值为99.43%,RSD为0.99%（n=9）。结论本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率试验符合要求,能准确、稳定地对四味清口含片进行定性鉴别和定量测定,可用于该制剂的质量控制。     

ABC-ELISA检测抗精子抗体方法的探讨

本文探讨ABC-ELISA检测抗精子抗体的实验条件。结果提示:最适包盖精子浓度为10×10~9/ml;最适血清稀释度为1:400;甲醛与戊二醛固定效果无显著性差异(P>0.05),10％FCS-PBS封板并不显著降低非特异反应(P>0.05);批内和批间误差分别为2.1％～4.3％和6.4％～9.4％;比较检测男,女阳性血清灵敏度,AEC-ELISA较普通ELISA敏感4倍,较Franklin-Dukes试验敏感100倍;比较检测兔抗人精子免疫血清灵敏度,则分别敏感8倍和400倍。本法具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点,作者认为,不仅可用于循环抗体的检测,而且在局部抗体检测上也具有应用前景。     

实时定量PCR与COBAS Amplicor定量检测血清HBV DNA的方法比较

目的 比较实时定量PCR法与COBAS Amplicor法定量检测血清HBV DNA.方法 自国家药品生物制品鉴定所与国家临检中心随机选取158例临床血清标本,比较了两种检测方法 的线性范围、准确度、重复性、实验时间及成本.结果 实时定量PCR的批内差和批间差分别为0.3%～3.8% 和 1.4%～8.1%.实时定量PCR法与COBAS AMPLICOR 法具有良好的相关性(r=0.948),实时定量PCR法成本低且检测范围更宽.结论 实时定量PCR是监测慢性乙型肝炎患者HBV DNA水平的有效方法 .     

HPLC法测定茴拉西坦咀嚼片的测定方法建立

目的:对利用HPLC法测定茴拉西坦咀嚼片测定方法的建立进行分析和探讨。方法:采用HPLC法,色谱柱为HeshinDK-C18,以甲醇水为流动相,分别配置内标溶液、对照品溶液以及供试品溶液,通过实验得出理论板数及分离度;之后进行辅料干扰实验、检测限、线性实验、回收率实验、精密度实验、样品溶液稳定性实验,并检测样品含量。结果:检测限浓度范围在10～11g,0.027～0.428mg/mL的线性关系良好,平均回收率达99.5%。结论:方法学实验证实,利用HPLC法对茴拉西坦咀嚼片含量进行测定的方法灵敏度及可靠性高,操作简便快捷。     

两种方法检测NT-proBNP的方法学评价及临床应用

目的:评估全自动化学发光免疫分析法和POCT法检测血清中NT-proBNP方法学和临床应用价值。方法:分别对全自动化学发光免疫分析法和POCT法进行检测的灵敏度、精密度和准确度试验,同时用两种方法对我院53例心脑血管患者血清NT-proBNP进行了临床诊断价值的比较。结果:化学发光法的高、低两个浓度的CV分别为7.90%和8.1%,平均CV为8.0%。化学发光法的平均稀释回收率为90%～110%。结论:化学发光法简便、快速,结果准确、可靠;快速法与化学发光法比较存在显著差异,符合率低,结果不可靠。     

HPLC法测定吉祥草中β-胡萝卜素

目的:建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法.方法:以丙酮-石油醚(1∶1v/v)的混合溶液浸提吉祥革中β-胡萝卜素.色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速:1.0ml·min-1;柱温20℃;检测波长为450nm.进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察.结果:β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074～0.0666μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.33%,稳定性400分钟内RSD=1.94%.结论:该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法.     

三波长-分光光度法测定山楂叶、果总黄酮的含量

采用三波长-分光光度法测定山楂叶和果中黄酮的含量,消除了由于山楂叶和果中黄酮光谱吸收峰不对称给定量分析造成的影响,并校正了由于干扰组分的吸收光谱具有线性吸收产生的基线倾斜.实验结果:回归方程ΔA=88.795C-0.206 0;相关系数r=0.999 4;黄酮质量浓度在0～40.6 μg/mL范围内,分别在波长λ1=463 nm、λ2 =417 nm、λ3 =382 nm测吸光度时,则ΔA与质量浓度C之间呈良好的线性关系,可按标准曲线法进行定量分析.回收率为96.86%～102.46%;变异系数小于0.136%.方法的准确度与精密度较好,且操作简便易行.     

IGF-Ⅱ、IGFBP-2在肝癌病人血清的表达及其对评价经皮肝动脉化疗栓塞治疗效果的意义

目的 检测原发性肝癌(简称肝癌)病人血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2的表达,探讨经皮肝动脉化疗栓塞(transhepatic artery chemoembolization,TACE)治疗前后IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平变化的临床意义.方法 采用ELISA法检测正常人群与肝癌病人以及肝癌病人TACE治疗前后血清IGF-Ⅱ和IGFBP-2的表达水平.采用电化学发光法测定肝癌病人TACE前后血清AFP的表达水平;对比两组人群及肝癌病人TACE治疗前后血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平差异,比较肝癌病人血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平与AFP表达水平的相关性.结果 在正常人群与肝癌病人两组血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2水平存在显著差异(F=32.63,P＜0.01;F=26.84,P＜0.01),肝癌病人血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平明显高于正常人群组(P＜0.01).血清IGF-Ⅱ、1GFBP-2和AFP诊断肝癌的敏感性分别为61.22%、53.06%和73.46%,特异性分别为79.78%、76.53%和85.39%.AFP阴性肝癌病人IGF-Ⅱ和IGFBP-2阳性检出率分别为38.46%和61.53%.肝癌病人组血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2水平与AFP呈正相关(r=0.446,P＜0.01;r=0.180,P＜0.05).肝癌病人采用IGF-Ⅱ、IGFBP-2和AFP单独检测的阳性率分别为61.22%、53.06%和73.46%,而采用血清IGF-Ⅱ+IGFBP-2+AFP联合检测的阳性率则高达93.87%.TACE治疗前血清IGF-Ⅱ和IGFBP-2水平显著高于TACE治疗后,差异有统计学显著性(P＜0.05).结论 检测正常人群和肝癌病人血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平有助于肝癌的早期诊断,可弥补AFP阴性病人之诊断不足;肝癌病人TACE前后血清IGF-Ⅱ、IGFBP-2表达水平检测和AFP一样可用于TACE治疗临床疗效的评价.     

定量PCR法测定人精子中DAZ基因的相对含量

目的 :建立测定人精子中DAZ基因相对含量的定量PCR法。　方法 :应用定量PCR法测定了 90例精子发生正常男性精子DNA中DAZ基因的相对含量 ,并确定其正常值范围。　结果 :以ZFX/ZFY基因为外部参照 ,精子发生正常男性精子DNA中DAZ基因的相对含量正常值为 1 47± 0 2 93。重复性试验结果表明其批内变异系数分别为 5 8%、6 5 % ,批间变异系数分别为 9 5 %、10 8%。　结论 :定量PCR法测定人精子中DAZ基因的相对含量是一种切实可行的检测方法。     

精浆酸性磷酸酶和γ-L-谷氨酰转肽酶检测的比较及其与精液参数的相关性研究

目的:对精浆酸性磷酸酶(ACP)和γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测进行比较,并分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。方法:133例精浆标本,分别检测ACP活性和γ-GT活性。随机留取2例精浆标本,1例用于ACP批内检测,另1例用于γ-GT批内检测。随机留取4例标本,2例用于ACP批间检测,另2例用于γ-GT批间检测。用计算机辅助的精液分析(CASA)系统分析精液标本的精液量、pH、精子密度、活动率、a+b级活动精子百分率等参数。同时分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。结果:精浆ACP活性和γ-GT活性呈显著性正相关(r=0.570,P=0.000)。ACP的批内变异系数(CV)为13.72%,批间CV分别为13.80%和15.49%。γ-GT批内CV为7.68%,批间CV分别为7.76%和9.73%。精浆ACP活性和γ-GT活性均与pH值呈显著负相关(r=-0.330,P=0.000;r=-0.388,P=0.000)。γ-GT活性与精子密度呈显著正相关(r=0.165,P=0.045),而ACP活性与精子密度无显著相关(r=0.048,P=0.546)。ACP活性和γ-GT活性均与精子活动率、(a+b)级活动精子百分率、精液量、禁欲时间以及年龄无显著相关性。结论:精浆γ-GT活性检测的精确性高于ACP活性检测,两者与精液参数的相关性基本类似。提示精浆γ-GT活性检测比ACP活性检测更适合用来评价前列腺功能。     

尿液中前列腺小体外泄蛋白检测两种ELISA方法的比较

目的:比较两种尿液中前列腺小体外泄蛋白(PSEP)ELISA检测方法。方法:收集100例ⅢA型前列腺炎患者和100例正常人尿液标本,采用ELISA双抗夹心法和间接法进行检测;同时用稀释液基质(0.1 mol/L PBS缓冲液)标曲系统和尿液基质标曲系统测试30例临床尿液标本,验证标准品与待测标本在不同基质情况下的一致性。结果:ELISA双抗夹心法和间接法两种检测方法,其灵敏度分别为89%和87%,特异度分别是91%和90%,总符合率分别为90%和88.5%,两者无统计学差异。以稀释液基质标曲系统和尿液基质标曲系统测试的结果散点图显示,R~2=0.999,具有良好的线性,稀释液基质与临床尿液样本没有明显的基质差异,互换性良好。结论:根据PESP其自身特性,PSEP检测试剂盒ELISA间接法用于临床检测前列腺炎患者尿液标本切实可行。     

定量聚合酶链反应法对不育患者精子中DAZ基因缺失的诊断

目的 :建立测定人精子 DAZ基因相对含量的定量聚合酶链反应 ( PCR)法并应用于检测不育男性精子中 DAZ基因的相对含量 ,以分析其病因。方法 :应用定量聚合酶链反应 ( PCR)法测定了 90例精子发生正常男性和 50例少、弱、畸精子患者精子中 DAZ基因的相对含量。结果 :以 ZFX/ ZFY基因为外部参照 ,精子发生正常男性精子中 DAZ基因的相对含量正常值为 1 .47± 0 .2 93。重复性试验结果表明定量 PCR法批内、批间变异系数分别为 5.8%～ 6.5%、9.5%～ 1 0 .8%。对不育男性的检测结果发现其中 1例少精子症患者 DAZ基因相对含量为 0 .5,明显低于正常值下限 ,其他不育患者未见明显异常。结论 :定量 PCR法测定人精子中 DAZ基因的相对含量是一种切实可行的检测方法 ,部分精子中 DAZ基因的缺失可能为男性不育的病因。     

发光免疫法测定全程叶酸

目的:建立一种简便、快速、同步测定全血叶酸、红细胞叶酸和血浆叶酸的方法。方法:用深圳新产业全自动发光免疫分析仪检测血浆叶酸的方法。结果:本法测定零标准品的灵敏度为0.13ng/ml;批内精密度试验表明:高、低两个浓度的不精密度CV分别为7.20%和9.66%,平均CV为8.43%。准确度试验表明:本法的平均稀释回收率为99.95%。最适抗原浓度确定表明:在抗体浓度不变情况下,全血被稀释到101倍时,全血叶酸(442.6ng/ml),血浆叶酸(4.383ng/ml)和红细胞叶酸(438.7ng/ml)含量最高。结论:本法简便、快速,结果准确、可靠。测定红细胞叶酸不需要反复洗涤红细胞,吸取压积红细胞、测定红细胞比容及其众多因素带来的各种偏差。     

RP-HPLC法测定人精液中维生素E的含量

目的 :建立测定人精液维生素E含量的反相高效液相色谱法。　方法 :用正己烷萃取人精液维生素E ,氮气吹干 ,以甲醇定容 ;以维生素E作外标 ,用紫外检测仪检测 ,波长为 2 0 5nm。　结果 :线性关系为y =0 .30 2 9+0 .0 0 730x,r=0 .9994,回收率在 85 %～ 115 %之间 ,检测限为 4.5 35× 10 -2 μmol/L ,测定 1份样品约需 12min。　 结论 :本法与比色法或荧光法比较 ,测定人精液中维生素E含量准确 ,特异性强 ,灵敏度高 ;结果提示不育病人精子密度越高精液维生素E含量越高。