Selection of the Mimic Epitopes of Antigens from Schistosoma japonicum by Using Phage Display Techniques

Rat was a semi permissive host of Schistosoma. Accordingto the research of Yu XC[1], when rat was infected withSchistosoma japonicum (S.j), the egg granulomas in ratlivers were rarely observed, while majority of eggs wereripe eggs and black dead eggs, and the number of meanliver eggs per gram (LEPG) was 1393.46, apparently lessthan that in permissive host mouse. These results indicatedapparently natural resistance. In our laboratory, enzyme linked immuno electro transfer blot (EITB) …     

交叉保护性抗LPS多克隆抗体的制备与LPS多表位模拟肽的筛选

目的 获得具交叉保护性的抗细菌脂多糖(LPS)多克隆抗体与模拟LPS多表位的噬菌体展示环肽克隆。方法制备具交叉反应性的兔抗鼠伤寒沙门菌抗血清，鉴定抗血清对大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击小鼠的交叉保护性。以亲和纯化的多克隆抗体为靶，亲和筛选噬菌体随机环七肽库。双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆。结果兔抗血清能与多种来源的LPS反应，对用大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击的小鼠有显著的保护性。用亲和层析纯化的多克隆抗体为靶分子进行3轮筛选，随机挑选46个克隆，其中20个克隆显示与多抗结合。鼠伤寒沙门菌LPS可抑制阳性噬菌体克隆与多抗结合，所有克隆的IC50(达到50％抑制率的LPS浓度)为125ng/ml。挑选其中10个克隆测序并推导氨基酸序列，其中5个克隆具X-QFYP-X-A保守序列；3个克隆具LFTFAHY序列；2个克隆具YQYYPAA序列，所有序列非极性氨基酸含量平均值为80．0％。结论获得能与多种LPS反应且具交叉保护作用的兔多克隆抗体，筛选得到可模拟鼠伤寒沙门菌LPS多表位噬菌体展示环七肽。     

从噬菌体随机十五肽库中筛选类脂A模拟肽的研究

目的用具交叉保护性的针对类脂 A的单抗 (1B6 )筛选噬菌体十五肽库 ,旨在研究类脂 A的模拟肽。方法对噬菌体十五肽库进行亲合筛选 ,用噬菌体 EL ISA法鉴定阳性克隆。结果经 3轮筛选后 ,随机挑选 14个噬菌体克隆 ,做夹心EL ISA试验 ,其中 5个克隆显示较强的阳性结果。将上述 5个阳性克隆 DNA测序 ,序列均为 ACTCATTGGCATCAGTGGAGGCATCATCAGTTTCCTGCTCCTACT,相应的氨基酸序列为 THSHQWRHHQFPAPT。竞争性噬菌体 EL ISA的结果显示大肠杆菌 L PS和伤寒杆菌 L PS均可特异性抑制阳性噬菌体克隆与类脂 A抗体的结合。结论该噬菌体克隆展示肽具有 L PS表位的抗原性 ,且模拟了 L PS的共同部分类脂 A。     

Identification and characterization of peptides mimicking the epitopes of metalloprotease of Schistosoma japonicum

In an attempt to isolate and characterize peptides mimicking epitopes of metalloprotease and explore their immunological protection against Schistosoma japonicum （S. japonicum）, polyclonal anti-metalloprotease sera was prepared to screen a 12-mer random peptide library to isolate phages binding specially to antisera IgG. Then, phage ELISA, animal immunization, DNA sequencing, Western blotting and enzymatic activity neutralizing analysis were used to characterize the selected phage clones. All of ten randomly picked clones were shown to be positive. Five peptides of different amino acid sequences deduced from DNA sequences were obtained and two of them （peptides 2 and 3） could induce significant reduction （31.0% and 31.8%, respectively） in worm burden and high reduction （52.6% and 54.9%, respectively） in liver eggs per gram （LEPG）, while, unexpectedly, others （peptides 1, 4 and 5） could not elicit enough protection against infection of S. japonicum. Peptides 2 and 3 could be recognized by S. japonicum infected mouse sera （IMS） and could elicit neutralizing Abs. The results show that peptides 2 and 3 are antigenic and immunogenic. They are true mimics of epitopes of metalloprotease and useful as novel vaccine candidates against S.japonicum. Cellular ＆ Molecular Immunology. 2005;2（3）：219-223.     

Peptide mimics of two pneumococcal capsular polysaccharide serotypes (6B and 9V) protect mice from a lethal challenge with Streptococcus pneumoniae

Anti‐polysaccharide immunity is a key facet of protection against several bacterial pathogens. Problems exist with current polysaccharide vaccines and alternative strategies that deliver a protective response are needed. We have identified immunological peptide mimics of type 6B and 9V pneumococcal capsular polysaccharides that could be used as vaccine antigens. Peptides mimicking antigenic properties of serotype 6B capsular polysaccharide were obtained from a phage‐displayed peptide library expressing dodecameric peptides, using a human monoclonal antibody (Db3G9). A murine monoclonal antibody (206, F‐5) against the serotype 9V capsular polysaccharide identified three peptide mimotopes from the dodecameric peptide library and one from a random pentadecameric peptide library. In ELISA, binding of 206, F‐5 and Db3G9 to phage displaying the selected mimotopes was significantly inhibited by type‐specific pneumococcal polysaccharide. Peptides were conjugated to keyhole limpet haemocyanin and were used to immunise mice. Two peptides, MP13 and MP7, induced specific anti‐6B and 9V polysaccharide antibodies, respectively. Mice immunised with MP7‐keyhole limpet hemocyanin or MP13‐keyhole limpet hemocyanin conjugate were significantly and specifically protected against a lethal challenge with pneumococci of the appropriate serotype. This study provides strong in vivo evidence that peptide mimics are alternatives to polysaccharide vaccines.     

大肠杆菌脂多糖2630模拟位的研究

目的 :利用纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多抗筛选噬菌体环七肽库 ,以获得可模拟脂多糖 (LPS)表位的短肽克隆。方法 :以亲和层析纯化的抗大肠杆菌L2 6 30多克隆抗体为靶分子 ,筛选噬菌体随机环七肽库 ,用双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的抗原性。结果 :对噬菌体环肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个克隆 ,经鉴定其中 12个可与抗L2 6 30抗体结合 ,即为阳性克隆 ;其中有 5个阳性噬菌体克隆表现出与抗鼠伤寒沙门氏菌LPS多抗结合的活性 ,提示这 5个噬菌体展示的短肽具有模拟大肠杆菌LPS及鼠伤寒沙门氏菌LPS共同表位的性质。经DNA序列分析显示 ,其中 8个克隆的氨基酸序列具有X DGLL XX或X EDGLL X保守序列 ,其余 4个克隆的序列均不相同。结论 :筛选获得的噬菌体环七肽克隆具有模拟大肠杆菌LPS表位的活性 ,为大肠杆菌L2 6 30多表位模拟短肽。其中 5个阳性噬菌体克隆短肽具有模拟大肠杆菌LPS及鼠伤寒沙门氏菌LPS共同表位的活性     

噬菌体表达短肽模拟乙脑病毒糖蛋白的研究

为研究日本脑炎病毒 (JEV )E蛋白模拟肽 ,将抗JEVE蛋白的mAb 2H4淘筛噬菌体 15肽库。经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性克隆 ,测序并与JEVE蛋白同源比较。将阳性噬菌体免疫小鼠 ,检测血清中特异性抗体。ELISA结果显示筛选到的噬菌体能特异地与mAb 2H4结合 ,并且这种结合可被JEV天然抗原所竞争抑制。 10个阳性克隆的氨基酸序列相同 :—RQDPQWPYANSTIAR— ,同源分析得到的序列STXAR可能为mAb 2H4识别的模拟表位。阳性噬菌体表达的 15肽能够刺激小鼠产生特异性抗体。该噬菌体表达短肽模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

从噬菌体随机环七肽库筛选可模拟C1qR的C1q结合肽

为获得能结合C1q并模拟C1q受体 (C1qR )配体结合位点的短肽 ,以C1q为钓饵蛋白筛选噬菌体环七肽库 ,采用C1q结合ELISA、U937细胞配体结合抑制试验、多聚IgG (AIgG )竞争抑制试验鉴定阳性克隆 ,再进行单链DNA测序和分析。结果经 3轮筛选后 ,随机挑选 2 3个噬菌体克隆进行ELISA鉴定 ,10个克隆与C1q有较强的结合 ;利用U937细胞配体结合抑制试验 ,得到了 7个阳性克隆 ;从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸序列 ,获得 7个短肽序列 :QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP、GPMWWSY和NPFXLIL。     

EB病毒LMP1 CTAR23蛋白特异性结合短肽的筛选

目的利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒（EBV）LMP1 CTAR23蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析柱加酶切的方法纯化CTAR23蛋白．并用其筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA法分析噬菌体克隆与CTAR23蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析。结果对12肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR23蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列HVSLHKHYPTAS。结论噬菌体短肽HVSLHKHYPTAS为研究LMP1致瘤机理、开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物奠定坚实的基础。     

从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽

目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。     

用噬菌体肽库筛选IBDV单克隆抗体的模拟表位

目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结果:经过四轮淘洗,随机挑取30个克隆经间接ELISA鉴定,发现其中22个克隆结合活性较高。进一步应用竞争ELISA,获得14个噬菌体克隆,其抑制率高达50%以上。对这些噬菌体进行DNA测序,并分析比对了IBDV相应序列,确定了3个抗原模拟表位。结论:通过噬菌体随机肽库成功筛选出3个IBDV模拟表位,为进一步研究IBDV抗原性质奠定了基础。     

从噬菌体短肽库中筛选单克隆抗体识别的抗原表位

将随机合成的寡聚核苷酸重组到噬菌体表面单价表达载体，构建了噬菌体随机八肽库。以抗原识别性明确的单克隆抗体９Ｅ１０固相化，对噬菌体短肽库进行了４～５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，任选多个所获克隆进行ＥＬＩＳＡ检测。发现第４轮后６／２２个克隆可与９Ｅ１０结合，第５轮后１０／１０可与９Ｅ１０结合，此结合反应可被９Ｅ１０所针对的十肽抗原以及游离的９Ｅ１０特异性抑制。对所获阳性克隆进行ＤＮＡ序列测定发现，它们的序列可分为两种，其中一种序列与ｃ－ｍｙｃ十肽具有同源序列ＩＳＥｘｘＬ，而另一种的序列则完全不同。证实噬菌体表面单价表达体系用于构建噬菌体短肽库的有效性，为进一步筛选其它的具有高亲和力的特异性短肽打下了基础。     

Isolation and Characterization of 44.6 kDa Protein from Schistosoma japonicum Male Worm

Schistosomes are hermaphrodite. The male worm has somespecific antigen different from the female′s [1,2]. Explo ration and characterization of the male worm antigen com ponents may be of great importance to investigation andprevention of schistosomiasis…     

用噬菌体多肽库筛选日本血吸虫表膜抗原的模拟表位

为探索可用于诊断的模拟表膜抗原。采用纯化的兔抗表膜抗原IgG作探针 ,免疫筛选噬菌体随机十二肽库 ,经 3轮生物淘洗后 ,随机挑选 30个噬菌体克隆 ,用ELISA检测其与筛选抗体的特异性结合 ,选择两个阳性克隆进行DNA序列测定 ,并用斑点ELISA比较检测正常人和日本血吸虫病患者血清各 10份。结果显示 ,随机挑选的 30个克隆中有 9个噬菌体克隆与筛选的抗体有特异性的结合反应。DNA测序结果显示 ,两个阳性噬菌体克隆 (携带的抗原表位 )所演绎的氨基酸序列与GenBank已知的氨基酸序列无同源性。斑点ELISA结果显示两个抗原表位可被血吸虫病患者血清呈特异性识别     

基于人HMGB1-B box的抑制性小肽筛选及其抗炎功能分析

目的 从噬菌体构象型7肽库中筛选人HMGB1-B box的抑制性小肽.方法 以重组人HMGB1-B box为靶分子对噬菌体构象型7肽库进行6轮亲和筛选,获得B box结合的克隆,并经ELISA验证.选取亲和力高的克隆进行DNA测序,并推导出呈现的多肽序列,通过IL-6 ELISA检测噬菌体呈现的小肽对人HMGB1-B box致炎功能的抑制作用.结果 经过6轮亲和筛选,噬菌体的回收率增加,阳性克隆得到富集.挑选15个结合力强的克隆进行测序,推导出2个多肽序列.所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制人HMGB1-B box刺激THP-1细胞产生炎症因子的能力.结论 获得了噬菌体呈现的能够抑制人HMGB1-B box的两个小肽.     

Selection of the specific coalescent peptide of human CD59 by phage display techniques

To screen and identify the short peptides with specific binding activity to human CDS9 and to design the short-peptide clamp against tumor escape, the phage display peptide library containing 12 peptides was used to select the highly expressed specific coalescent peptide of human CD59 in CHO cells. Positive phage clones obtained after 5 rounds of biopanning and detected with ELISA were obtained , in which 8 of them with high binding activity to human CD59 were sequenced. The 3 sequences thus obtained showed high homology with each and certain homology with sequence with human CD2 (PubMed 339HGAAENSISPSS), and all contained primary structure HXAXXXXXXPXX, of which this sequence may be the mimic conformational epitope binding to human CD59. These results in the present study may be helpful to design the short-peptide clamp against the active sites of CD59 on tumor escape.     

从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽

目的 用抗JEVE蛋白的mAb2H4筛选噬菌体15肽库,以研究JEVE蛋白模拟肽。方法 用生物素标记的mAb2H4,对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选,经ELISA鉴定后,随机挑战取10个阳性噬菌体克隆测序,并与JEVE蛋白进行同源性比较,结果 筛选到的噬菌体能与mAb2H4特异地结合,并且这种结合可被天然JEV抗原所抑制,10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同,均为RQD-PQWPYANSTIAR,同源分析表明,在JEVE蛋白不同区域有两个同源性较高的序列：STXAR和WXXAXST,阳性噬菌体展示肽了能与抗天然JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论 筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

应用噬菌体肽文库筛选mAb F3特异性结合肽

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗（mAb） F3特异性结合的配体肽。方法 以F3mAb为筛选配基，对噬菌体展示和随机12肽文加进行3轮生物亲和淘选；用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过3轮生物淘选，能被抗体捕获的噬菌体克隆为21／22，ELISA测定显示，筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明，7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT；同源性分析显示，该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性。结论 本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据。     

用噬菌体展示随机12肽库筛选HCV B细胞抗原表位

目的用患者血清中抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体从噬菌体展示随机12肽库筛选HCV抗原表位。方法用硫酸铵粗提HCV患者血清中Ig后用DEAE—Sephadex A50层析纯化并作为筛选的配基;对噬菌体展示随机12肽库采用配基亲和富集、阴性血清吸收的方法进行生物淘洗;ELISA鉴定筛选克隆的结合特性;测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析。结果三轮生物淘洗后特异性克隆得到了富集。用第3轮淘洗出的26个克隆进行结合实验,其中有3个克隆与HCV患者血清结合力较高而与正常人血清结合能力较弱;序列分析发现2个序列与HCV蛋白第1082～1093和1954～1965位(1082YHGAGTRTIASP 1093和1954TQLLRRLHQWIS 1965)氨基酸有较高的同源性;计算机辅助分析提示这两个位点具有形成表位的性质。结论获得了两个HCV抗原表位,在HCV感染的检测中具有潜在的应用价值。     

从噬菌体随机肽库筛选CD137结合肽

目的应用噬菌体随机七肽库筛选与人CD137特异结合的肽序列。方法以重组人CD137作为筛选分子，对噬菌体展示随机七肽库进行亲和淘选。经过5轮淘选后，共随机挑选23个噬菌斑并对其进行了扩增和测序，据此推导随机多肽的氨基酸序列。经夹心ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与CD137的结合力。^3H-TdR法检测了噬菌体展示多肽对抗CD137Ab刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应影响。结果5轮淘选所得的噬菌体回收率逐步提高，显示淘选过程对随机肽库有一定的富集效果。通过对阳性克隆的测序和序列比较分析，得到RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF的相似序列和与CD137L具有同源SRS序列的SRSRVRY、HRRPSRS肽序列，ELISA结果显示这5个克隆都有良好的与CD137的结合力。RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF和SRSRVRY4个噬菌体展示肽均能在体外抑制抗CD137Ab刺激的淋巴细胞增殖反应。结论通过对噬菌体随机肽库的淘选，得到与CD137结合的相关多肽，为进一步研究CD137与配体结合的特异性位点及其拮抗性多肽药物设计提供了实验依据和结构基础。