坐骨神经缺损1周背根神经节组织中microRNA的表达变化

目的：研究大鼠坐骨神经缺损后背根神经节中microRNA（miRNA）的表达变化。方法：采用miRNA芯片检测神经缺损0 d（对照组）和7 d（实验组）背根神经节组织中miRNA的表达情况,应用Real time Taqman PCR对芯片结果进行验证。结果：实验组与对照组比较发生上调1.4倍和下调〉1%以上的miRNA分别有13个和5个,Real time TaqmanPCR检测的4个miRNA的表达变化与芯片一致（上调：miR-21,miR-221;下调：miR-500,miR-551b）。结论：大鼠坐骨神经缺损1周后背根神经节组织中miRNA的表达谱发生改变。     

坐骨神经缺损后神经组织再生早期信号调控研究

目的:采用基因芯片技术结合信号传递调控网络(Signal-Flow)分析技术,探讨坐骨神经缺损近端神经组织早期分子信号调控机理。方法:SD大鼠坐骨神经缺损0h、0.5h、1h、3h、6h和9h后,取0.5cm近端神经组织进行mRNA芯片检测,进行差异基因的筛选和信号传递调控网络分析,并采用qRT-PCR对相关基因行表达趋势验证。结果:共筛选差异显著性基因2850个,抗凋亡相关因子和紧密连接蛋白等构成信号传递调控网络的核心部分。Birc2、Birc3和Tnfrsf1a早期上调抑制凋亡相关基因,紧密连接蛋白cldn14促进与其家族成员的结合。结论:抗凋亡因子和紧密连接蛋白可能是坐骨神经缺损后神经组织再生的内在早期调控分子,推测与神经组织损伤后内在的再生能力调控机制相关。     

大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经TNC表达变化及功能分析

目的:研究大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经组织中胞外基质分子TNC(tenascin-C)的表达变化及初步功能分析。方法:采用冰冻切片和免疫荧光染色法,检测神经缺损0d(对照组),4d(实验组)损伤近端神经组织TNC的表达变化及表达位置;并利用体外共培养施万细胞/成纤维细胞及细胞划痕实验初步研究TNC的作用。结果:免疫荧光染色发现TNC在损伤后4d处于高表达状态,并在神经外膜处与波形蛋白(Vimentin)共定位状况良好;体外细胞共培养实验发现下调成纤维细胞中的TNC可以降低与之共培养的施万细胞的迁移速度。结论:在神经损伤后成纤维细胞分泌TNC并比对照组表达大幅上调,且体外实验发现TNC可促进施万细胞的迁移速度。     

缺血再灌注损伤大鼠肾脏miRNA表达谱的筛查与分析

目的 筛查可能与肾脏缺血再灌注损伤病理生理过程相关的miRNA。方法 利用SD大鼠构建肾脏缺血再灌注损伤模型,12 h后心脏穿刺取血检测血尿素氮与肌酐水平,并利用miRNA芯片检测肾脏miRNA表达谱的变化,最后通过生物信息学检索的手段初步探讨差异表达miRNA可能的作用靶点。结果 肾脏缺血再灌注12 h后血清尿素氮与肌酐水平显著升高,芯片检测结果显示肾脏有36条miRNA出现差异表达,其中差异在2倍以上的miRNA有15条。实时定量PCR验证的结果与芯片基本相符,表达上调的miRNA包括miR-290、miR-894、miR-292-5p、miR-327、miR-374、miR-98、miR-352、miR-132、miR-146b和miR-196a,下调的miRNA包括miR-145、miR-329、miR-375、miR-140*和miR-29a。生物信息学检索显示,这些miRNA可能与炎症反应、细胞死亡与增殖、血管再生和纤维化有关。结论 肾脏缺血再灌注损伤时多条miRNA表达发生了改变,其可能通过调控炎症反应、细胞死亡与增殖、血管再生和纤维化影响肾脏损伤的发生与发展,但具体机制有待进一步研究证实。     

内毒素血症大鼠心肌组织miRNA差异表达

目的分析内毒素又称脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）血症大鼠心肌组织miRNA表达谱变化,探讨miRNA在内毒素血
症心肌损伤中的作用。方法20只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）和LPS组（n=10）。LPS组腹腔注射LPS 10 mg/kg,对照
组腹腔注射等量生理盐水。24 h后颈脱臼处死大鼠,取心肌组织。Real-time PCR检测TLR4、TNF-α、IL-1β表达水平,透射电镜
观察其超微结构变化。miRNA芯片筛选心肌组织中差异表达的miRNA,Real-time PCR验证候选miRNA实际表达水平。结
果LPS组大鼠心肌组织TLR4、TNF-α、IL-1β表达明显升高,心肌细胞发生胞质空泡,线粒体水肿、结构破坏等超微结构改变。
芯片技术及Real-time PCR 证实LPS 组大鼠心肌组织中miR-194-3p,miR-344a-3p,miR-465-3p,miR-501-5p,miR-3596c,
miR-185-3p,miR-877显著上调,miR-208b-3p,miR-547-3p,miR-141-3p,miR-28-5p,miR-3585-5p显著下调。结论内毒素血症
大鼠心肌组织中发现的这些差异表达miRNA可能与其心肌损伤发生有关。
     

microRNA在大鼠肥胖模型心肌中的变化

目的建立高脂饮食诱导肥胖易感（obesity prone，OP）大鼠模型，筛查肥胖大鼠心脏微小RNA（microRNA，或miRNA）的表达变化，寻找肥胖诱发心肌损伤及心律失常相关的miRNA。方法高脂饲料喂饲健康雄性SD大鼠10周后，筛选出肥胖大鼠动物模型。实验结束后，测量体脂肪含量，并收集血清，以检测血脂水平，同时取心脏组织常规抽提总RNA，采用含有468种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析。结果肥胖大鼠睾周脂肪、肾周脂肪、网膜脂肪、体脂肪含量均显著高于基础对照组，甘油三酯水平和总胆固醇显著高于基础对照组；与基础组相比，肥胖模型组的miRNA表达谱中明显差异表达的miRNA共有7个，其中miR-196a、miR-205、miR-369-5p表达上调，miR-206、miR-483、miR-341和miR-204表达下调。结论在大鼠肥胖模型中，部分心肌miRNA的表达发生明显变化，提示miRNA可能参与肥胖诱发心肌损伤和心律失常的调节作用。     

miRNA在哮喘儿童支气管肺泡灌洗液细胞中的表达和作用研究

目的探讨miRNA参与儿童哮喘发病的可能作用机制。方法选取2016年1月至2017年2月在浙江大学医学院附属儿童医院呼吸内科住院的哮喘患儿15例为哮喘组,同期在本院确诊为支气管异物的12例患儿（均在24h内取出异物）为对照组。使用miRNA芯片检测支气管肺泡灌洗液细胞中miRNA的表达水平,并用qRT-PCR进行验证,通过生物信息学数据筛选出可能靶基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）,检测其表达水平。结果哮喘组患儿支气管肺泡灌洗液细胞中有65个miRNA与对照组存在差异表达,包括43个表达下调和22个表达上调的miRNA。其中miR-34/449家族的6个miRNA和miR-200家族的7个miRNA占所有表达下调miRNAs的30.2%。应用qRT-PCR验证两个miRNA家族中存在差异表达的miRNA,证实有10个miRNA与miRNA芯片结果一致,包括miR-34b-5p、miR-34b-3p、miR-34c-5p、miR-34c-3p、miR-200a-5p、miR-200a-3p、miR-200b-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-141-3p。与对照组相比,miR-34/449家族和miR-200家族的预测靶基因E-cadherin在哮喘组中呈低表达（P＜0.05）。结论部分miRNA参与了哮喘的发病,其中miR-34/449和miR-200家族可能通过调节E-cadherin的表达参与儿童哮喘的发病,为儿童哮喘的治疗提供新方向。     

大鼠肺缺血急性期肺组织microRNA的表达变化

目的检测大鼠缺血肺组织中microRNA(miRNA)表达变化,寻找与肺缺血相关的miRNA。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组和缺血组,每组6只。缺血组参照改良Eppinger方法建立大鼠肺缺血模型(缺血1h)。建模1h后取材提取RNA,应用miRNA芯片技术检测两组大鼠肺组织中miRNA的表达。结果同假手术组相比,缺血肺组织中有4个miRNA表达上调≥2倍,21个miRNA表达下调≥2倍。结论在肺缺血过程中,miRNA的表达发生明显变化,可能对缺血肺组织中细胞凋亡起着重要的调节作用。     

雷米普利对2型糖尿病大鼠microRNA表达谱的影响

目的:建立链脲霉素(streptozocin,STZ)+高糖高脂饮食诱导2型糖尿病大鼠模型,并以血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)药物雷米普利处理,筛查用雷米普利后2型糖尿病大鼠胰腺组织microRNA(miRNA)表达的变化,并进行实时定量PCR验证芯片结果,寻找与2型糖尿病功能改善相关的miRNA?方法:STZ(40 mg/kg)腹腔注射+高脂高糖饲料喂饲健康雄性SD大鼠,测随机血糖≥16.7 mmol/L成模后1周,雷米普利50 mg/(kg·d)灌胃28 d?实验结束后,取胰腺组织常规抽提总RNA,miRNA芯片检测miRNA表达谱的改变?结果:2型糖尿病大鼠经雷米普利处理后,miRNA表达谱中出现明显差异表达(1.5倍以上)的miRNA共有27个,其中20个表达上调,7个表达下调?结论:在2型糖尿病大鼠模型中,用雷米普利处理后部分胰腺miRNA的表达发生明显变化,提示miR-1?miR-30c可能参与胰腺功能改善的调节?     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的 分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法 利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-Time PCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431*、miR-550*、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b*和miR-638。Real-Time PCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论 胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

他汀类药物可降低不稳定性心绞痛患者血浆中炎症相关microRNAs的表达水平

目的：评估服用他汀类药物对不稳定性心绞痛患者血浆中microRNAs（miRNAs）表达谱的影响。方法:采用miRNAs TLDA（Taqman low density array）芯片对长期规律服用他汀类药物的不稳定性心绞痛患者（他汀治疗组,n=6）及未曾服用过他汀类药物的不稳定性心绞痛患者（非他汀治疗组,n=6）血浆中差异表达的miRNAs表达谱进行筛查,并选择部分差异表达的炎症相关的miRNAs在非心源性胸痛患者（对照组,n=20）、未曾服用过他汀类药物的不稳定性心绞痛患者（非他汀治疗组,n=26）、长期规律服用他汀类药物的不稳定性心绞痛患者（他汀治疗组,n=19）中采用real-time PCR的方法进行验证。结果: 他汀治疗组患者血浆中miRNAs的表达谱与非他汀治疗组患者相比差异有统计学意义,包括miR-106b、miR-21、miR-25、miR-451以及 miR 92a等炎症相关miRNAs在内的21种血浆miRNAs水平显著降低（组间差异倍数>3,错误发现率<0.0001%）,选取miR 106b、miR 21、miR 25、miR 451以及 miR 92a进行real-time PCR验证的结果与芯片筛查结果一致,与未曾服用过他汀类药物的患者相比,长期规律服用他汀类药物可降低上述5种炎症相关miRNAs的表达水平（P<0.05）,而非他汀治疗组患者血浆中上述5种炎症相关miRNAs的表达水平高于对照组（P<0.001）。结论:服用他汀类药物可显著降低不稳定性心绞痛患者血浆中一组炎症相关的miRNAs的表达水平。     

大鼠坐骨神经缺损后背根神经节组织lncRNA表达变化

目的:研究大鼠坐骨神经缺损后背根神经节中长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)的表达变化。方法:建立SD大鼠坐骨神经损伤0天、1天、4天和7天模型,取背根神经节组织进行lncRNA检测,进行差异基因的筛选,并应用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(qRT-PCR)对芯片结果进行验证;利用lncRNA与mRNA特异性表达的标准化信号强度,构建基因共表达网络。结果:共筛选出24个显著下调的lncRNAs,qRT-PCR检测的lncRNA AF130881和AB020616的表达变化与芯片一致。得到与lncRNA AF130881和AB020616正向或负向共表达的蛋白编码基因25个。结论:大鼠坐骨神经缺损后背根神经节组织中lncRNA的表达谱发生改变。     

miR-143和miR-520d-5p在胃癌组织中的异常表达

目的 应用MicroRNAs （miRNAs）芯片技术筛选胃癌组织中差异表达的miRNAs,研究与胃癌相关的miRNAs.方法 从3对手术切除的胃和相配对的正常胃组织中提取总RNA,miRNA芯片检测miRNA表达情况,然后在47例配对的胃癌和正常胃组织中,用Real-time RT-PCR（Taqman）对部分差异表达miRNA进行验证.结果 芯片结果显示：与配对的正常胃组织相比,有62个miRNAs在胃癌中异常表达,其中42个miRNA高表达,20个miRNA低表达.用Real-time RT-PCR（Taqman）验证显示：miR-143在胃癌组织中表达显著降低（JP=0.002 9）;miR-520d-5p在胃癌组织中表达显著提高（P =0.032）.结论 miR-143和miR-520d-5p可能参与了胃癌的发生过程.     

周围神经挤压伤后转化生长因子β的表达

目的　观察大鼠坐骨神经挤压伤后转化生长因子 β(TGF β)蛋白表达的变化 ,了解TGF β在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法　取 2 1只Wistar大鼠 ,造成坐骨神经挤压伤 ,伤后 6h、1、3、7、14、2 1d取材分别进行组织学、免疫组化观察。结果　 3d时神经挤压伤处TGF β抗原呈阳性反应 ,7d时损伤处的雪旺细胞明显增多 ,且TGF β表达的量也增多 ,以后TGF β表达的量有所减少。 结论　TGF β参与周围神经的损伤病理过程。     

miRNA在小鼠着床前胚胎的表达

目的:研究小鼠发育过程中miRNA表达水平的变化,探讨miRNA对着床前胚胎发育过程的作用。方法:建立小鼠超排、交配系统,收集着床前胚胎提取低分子量RNA;采用miRNA特异RT引物进行反转录,采用SYBR Green实时定量PCR技术,研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化。结果:着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a、miR-295和miR-181b;随着胚胎发育进程,miR-295的表达呈逐渐上升的趋势;miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势,以后随发育进程呈逐渐上升趋势。结论:小鼠着床前胚胎中表达miRNA,着床前胚胎的发育和分化过程可能受到miRNA的调控。     

肺移植后闭塞性细支气管炎大鼠模型建立及其miRNA表达谱分析

目的 探索建立大鼠原位气管移植模拟肺移植后闭塞性细支气管炎（obliterative bronchiolitis,OB）的病理生理过程,为研究肺移植后OB中microRNA （miRNA）表达谱分析提供理想的动物模型.方法 通过近交系大鼠原位气管移植,建立模拟肺移植后发生OB的动物模型.模型成功后使用HE染色对气管移植模型进行评估;提取移植气管组织进行microarray芯片检测,同时应用实时定量RT-PCR（RT-qPCR）验证miRNAs芯片结果的可靠性.结果 成功建立了大鼠原位气管移植的模型26/30例（成功率为86.67％）;术后4周移植气管病理检查提示“移植气管炎症细胞浸润和纤维组织增生”,模型OB的发生率为100％.miRNA芯片筛选出移植气管OB组织中表达上调15个和下调14个;验证其中显著上调miR-146a、miR-155和显著下调miR-451结果与检测结果具有较好的一致性.结论 原位气管移植能够稳定形成模拟肺移植后OB的气道阻塞性病变,可适用于肺移植后OB的miRNA表达谱分析研究的动物模型.     

抗结核药物肝毒性对血浆miRNA分子表达的影响

目的探讨抗结核药物肝毒性（ATDH）对患者血浆中微RNA（miRNA）分子表达的影响。方法对3例活动性肺结核患者用药前和发生ATDH后的血浆标本进行miRNA芯片检测。对存在差异性表达的miRNA分子,采用Real Time-PCR进行验证。应用互联网miRNA靶基因预测软件对经证实存在差异性表达的miRNA进行靶基因预测,采用PANTHER蛋白分类系统查找靶蛋白基因本体（GO）功能分类。结果ATDH发生后,血浆中共筛选出22个与用药前比较差异性表达的miRNA分子,表达上凋和下调的miRNA各11个。RealTime-PCR验证结果显示：ATDH发生后,患者血浆中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-378i、miR-125b-5P、miR-1224-5P、miR-194-5P和miR-34a-5P;下调的miRNA有3个,分别为miR-1260a、miR-338．3P和miR-4286。结论ATDH发生患者血浆中存在与用药前比较差异性表达的miRNA分子,这些分子的存在可能与ATDH的发生有关。     

144例维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌微小RNA表达特点及临床意义

目的 分析144例女性子宫内膜癌微小RNA(microRNA,miRNA)的表达特点,对比其在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达差异及其与临床病理特点的内在关联性,阐述临床意义。方法 144例维吾尔族与汉族女性(包括62例维吾尔族和82例汉族),采用Taqman低密度芯片对比两者子宫内膜癌miRNA的表达特点,选取5种miRNA,采用实时定量PCR法验证并分析这些miRNA的表达特点。结果 miRNA表达谱分析显示,Ⅱ型癌突出的特点是许多miRNA在一个民族中表达升高或降低,而在另一个民族中不表达或变化轻微。144例女性的子宫内膜癌miR-141、miR-200a、miR-205表达均升高,维吾尔族女性Ⅰ型癌miR-141/200a表达升高的肿瘤更具侵袭性,而汉族女性Ⅰ型癌的特点相反,miR-200a表达升高的肿瘤侵袭性呈减弱趋势,但Ⅱ型癌miR-200a表达升高的肿瘤趋向更具侵袭性。miR-145、miR-143在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达特点相反,在维吾尔族表达升高,在汉族显著降低(P<0.05)。维吾尔族中Ⅱ型癌miR-145、miR-143升高更明显,侵袭性相对弱的肿瘤的miR-145表达水平更高,肌层浸润深度<1/2组差异有统计学意义(P=0.042)。汉族女性Ⅰ/Ⅱ型癌中miR-145和miR-143的表达均降低,侵袭性强的Ⅰ型癌中两者降低得更明显,但差异无统计学意义;Ⅱ型癌不具此特点。结论 维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌miRNA表达存在一定差异性,miR-141/200a/205在子宫内膜癌中普遍表达升高,但miR-141/200a在维吾尔族与汉族Ⅰ/Ⅱ型子宫内膜癌中扮演的角色可能不尽相同。miR-145/143在维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌中的表达特点相反,但可能均发挥抑癌作用。