中药血清药理学方法学研究——抗菌试验含药血清处理方案的研究

通过对用柴黄片制备的新鲜含药大鼠血清进行三种不同处理（灭活，未灭活，未灭活冻干）后抗菌试验结果的比较，探讨中药血清药理学抗菌试验时血清处理可选用的方法。结果发现，使用新鲜未灭活活血清直接加样结果优于经灭活及未灭活冻干处理的血清。     

茯苓甘草汤及单味中药对幽门螺旋杆菌体外抑菌实验研究

目的:通过观察茯苓甘草汤及其单味中药的水煎液和动物含药血清对Hp的体外抑菌的作用。方法:用药敏纸片琼脂扩散法和打孔法测量药物水煎液对Hp抑菌圈直径,将12只SD大鼠按照茯苓甘草汤原方及茯苓甘草肉桂方水煎剂大、中、小剂量的不同给其每天灌胃,连续灌胃7d,最后1d连续2次灌胃,中间间隔2h,末次给药3h后腹主动脉取血放置1h,离心、抽取血清,灭活除菌,制备含药血清。用打孔法测量含药血清的抑菌圈直径。结果:甘草、生姜、茯苓甘草汤原方及肉桂方对Hp敏感,茯苓甘草汤原方含药血清对Hp敏感,且敏感度不受灌胃药物浓度影响,肉桂方对Hp敏感,灌胃浓度低含药血清敏感度也随之降低。茯苓对Hp无明显抑菌作用。结论:茯苓甘草汤、茯苓甘草肉桂汤(等质量肉桂代替桂枝的肉桂方,以下简称肉桂方)对Hp有中度敏感的抑菌作用,高剂量肉桂方抑菌与原方无明显差异,考虑可用肉桂代替桂枝,进一步动物体内造模实验论证其治疗作用。     

复方八正散液灌胃大鼠尿液的体外抑菌和对左氧氟沙星增效作用的实验研究

目的：观察复方八正散液灌胃大鼠尿液的体外抑菌作用和对左氧氟沙星抗菌效果的增效作用.方法：大鼠给药后收集尿液,采用微量二倍稀释法和平板转染法测定复方八正散液灌胃大鼠尿液对尿路感染常见致病菌的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）和对左氧氟沙星抗菌效果的增效作用.结果：复方八正散液灌胃大鼠尿液体外能有效抑制和灭活大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌,与左氧氟沙星合用,增加后者的抗菌效果稀释度.结论：复方八正散液能抑制和灭活尿路感染常见致病菌,对左氧氟沙星的抗菌效果具有增效作用.     

中药血清药理学的方法学研究──含药血清低温保存和血清灭活的影响

以含头风饮（ＴＦＹ）血清抗血小板释放５ＨＴ和阻滞内皮细胞钙通道作用（１４Ｃ５ＨＴ释放法和４５Ｃａ２＋摄取法）为指标,探讨了含药血清低温保存和血清灭活的影响。结果显示：含药血清经长时间低温保存后药效均显著降低（Ｐ＜０．０１）;血清灭活后使其药效作用有所提高,但无明显差异。提示含药血清进行低温冰冻保存仍影响其药效,进行血清药理学实验以使用新鲜血清或保存时间较短的含药血清为宜     

藏药山生柳抑菌活性研究

目的：研究藏药山生柳水浸膏的抑菌活性。方法：小鼠连续灌胃,制备含药血清,纸片琼脂扩散法检测药物抑菌效应。结果：山生柳水浸膏、未灭活的含药小鼠血清均显抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌生长繁殖。结论：山生柳水浸膏及未灭活的含药小鼠血清在体外均具有抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌生长繁殖的作用。     

大黄■虫丸含药血清调控大鼠原代肝星状细胞BAMBI表达的研究

目的:研究大黄■虫丸含药血清对LPS诱导大鼠肝星状细胞(HSC)骨成形蛋白-激活素膜结合阻断因子(BAMBI)表达的影响及其作用机制。方法:体外培养并鉴定Wistar大鼠原代HSC,提取并制备大黄■虫丸含药血清,分别予空白对照血清、大黄■虫丸中药含药血清培养细胞,LPS刺激后,应用Western Blot法和免疫组化检测HSC中TLR4、MyD88、BAMBI蛋白变化;EMSA检测NF-κB结合蛋白的活性;结果:Western Blot法和免疫组化结果:与空白对照组比较,LPS处理组TLR4、MYD88表达升高,BAMBI表达降低。与LPS处理组比较,含药血清和LPS共处理组TLR4、MYD88降低,BAMBI表达升高。EMSA结果显示,LPS处理组NF-κB结合蛋白的活性增强,LPS与含药血清共处理组NF-κB结合蛋白的活性降低。结论:大黄■虫丸含药血清可通过抑制LPS诱导的HSCs中TLR4-MYD88的表达,进而减少NF-κB活化,促进TGF-β假受体BAMBI的表达,这可能是发挥其抗纤维化作用的机制之一。     

中药血清药理学的方法研究—含药血清低温保存和血清灭活的影响

以含头风饮（TFY）血清抗血小板释放5－HT和阻滞内皮细胞钙通道作用（^14C-5HT释放法和^45Ca^2 摄取法）为指标，探讨了含药血清低温保存和血清灭活的影响。结果显示：含药血清较长时间低温保存后药效均显较低（P＜0．01）；血清灭活后使其药效作用有所提高，但无明显差异。提示含药血清进行低温冰冻保存仍影响其药效，进行血清药理学实验以使用新鲜血清和保存时间较短的含药血清为宜。     

芪归银方对抗生素体外抑制多重耐药铜绿假单胞菌作用的影响

目的:探讨芪归银方含药血清联合抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法:运用二倍稀释法检测单用抗生素、空白血清、含药血清及血清联合抗生素的体外抑菌情况。结果:空白血清对多重耐药铜绿假单胞菌无体外抑菌作用,含药血清则具有明显的体外抑菌作用;抗生素联合含药血清较单纯抗生素和抗生素联合空白血清的抑菌情况有明显差异。结论:芪归银方含药血清能够降低抗生素的MIC值、MBC值,提高抑菌率,含药血清与抗生素具有体外协同抑菌作用。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响

目的:观察蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:蜂王浆冻干粉大鼠灌胃1d、3d10d的含药血清与小鼠B16BL6黑色素瘤细胞体外培养,MTT比色法观察对细胞增殖的影响。结果:给药10d组血清能显著抑制B16BL6细胞的增殖,不灭活血清作用强于灭活血清,其抑制效应呈剂量依赖性,40%浓度作用最强。而给药1d、3d组血清抑制效应不明显。结论:蜂王浆冻干粉含药血清能抑制B16BL6细胞的增殖,其效应随大鼠给药时间的延长而增强,提示蜂王浆刺激机体产生自体活性物质在其抑瘤效应中发挥重要作用。     

生姜油不同部位对肝损伤模型大鼠肝细胞保护作用的比较

目的 比较生姜油3个不同部位对四氯化碳(CCl4 )损伤培养的大鼠肝细胞的保护作用及可能作用机制.方法用大鼠制备含药血清.利用CCl4 体外诱导大鼠肝细胞损伤模型,用比色法检测肝细胞经含药血清处理后上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化.结果生姜油A 部位含药血清能显著降低ALT 和AST 水平,提高SOD 活力,抑制MDA 的产生;B 部位亦能显著降低ALT 和AST 水平,提高SOD 活力,但对MDA 未见有明显的影响;C部位仅能降低AST 水平,提高SOD 活力.结论生姜油3个不同部位的含药血清对CCl4 引起的大鼠肝细胞损伤均有不同程度的保护作用,但以A 部位的效果较好,其保护机制与其抗氧化作用有关.     

给予桂枝汤的大鼠血清灭活对HSV-1致细胞病变的影响

将灌服桂枝汤后大鼠血清灭活 ,观察灭活前后血清对HSV 1致CPE的作用。结论是在以给药后的动物血清进行体外试验时 ,①要设正常动物血清对照 ,以观察正常动物血清本身的作用 ,②采用灭活后的含药血清为好 ,以去除血清中抗体与补体。③可根据中药复方的特点 ,以相当于临床等效剂量为中心 ,多设几个剂量组 ,以便正确判断含药血清的真正药效。     

给予桂枝汤的大鼠血清灭活对HSV-1致细胞病变的影响

将灌服桂枝汤后大鼠血清灭活,观察灭活前后血清对HSV-1致CPE的作用.结论是在以给药后的动物血清进行体外试验时,①要设正常动物血清对照,以观察正常动物血清本身的作用,②采用灭活后的含药血清为好,以去除血清中抗体与补体.③可根据中药复方的特点,以相当于临床等效剂量为中心,多设几个剂量组,以便正确判断含药血清的真正药效.     

藏药十五味龙胆花丸的体外抑菌活性研究

目的:观察藏药十五味龙胆花丸的体外抑菌活性,为临床用药提供实验依据。方法:采用琼脂平板打孔法研究十五味龙胆花丸对3种标准菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、沙门菌CMCC50319)及12株临床菌株的抑菌作用,并检测小鼠含药血清对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。结果:十五味龙胆花丸对金黄色葡萄球菌有明显的体外抑菌作用,但对革兰阴性菌抑菌作用较弱。对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度介于6.25~12.5mg/ml。结论:十五味龙胆花丸对耐药性金黄色葡萄球菌有一定的体外抑菌作用。     

左金丸传统汤剂与超微剂对大鼠慢性胃炎的药效学研究

目的:探讨不同剂量的超微左金丸与传统左金丸对大鼠慢性胃炎的药效作用。方法:采用水杨酸钠结合饥饱失常等方法制成大鼠慢性胃炎模型,将造模成功的60只大鼠随机分为6组,即传统高、低剂量组(0.216g/mL、0.108g/m L),超微高、低剂量组(0.108g/mL、0.054g/mL),对照药组(0.00036g/mL奥美拉唑),模型组,并设空白组,每组10只。连续灌胃给药2周,每次每只2mL,每天1次,模型组继续给予水杨酸钠造模,空白组给予同等剂量的0.9%氯化钠注射液。用药后对大鼠胃酸、胃蛋白酶活性、血清SOD活力、MDA值以及病理切片进行比较分析。结果:与空白组比较,模型组胃液p H值和胃蛋白酶活性升高、血清SOD活力降低、MDA含量升高,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,超微和传统左金丸均可降低胃液p H值和胃蛋白酶活性、升高血清SOD活力、降低MDA含量,差异有统计学意义(P0.05),同时从病理切片结果显示其对胃黏膜有修复作用。结论:超微左金丸和传统左金丸对大鼠慢性胃炎有很好的效果,超微左金丸用量少、疗效优、使用方便,值得推广应用。     

扶正透邪方联合抗生素体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究

目的探讨扶正透邪方含药血清联合抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法运用二倍稀释法检测单用抗生素、空白血清、含药血清及血清联合抗生素的体外抑菌情况。结果空白血清对多重耐药铜绿假单胞菌无体外抑菌作用,含药血清则具有明显的体外抑菌作用;抗生素联合含药血清较单纯抗生素和抗生素联合空白血清的抑菌情况有明显差异。结论扶正透邪方含药血清能够降低抗生素的最低抑菌浓度值、最低杀菌浓度值,含药血清与抗生素具有体外协同抑菌作用。     

黄连与吴茱萸经典配伍系列抗氧化和抑菌活性对比研究

目的 研究黄连与吴茱萸不同组分配伍的抗氧化性和抗菌活性差异,为黄连与吴茱萸配伍系列经典类方的临床应用提供依据。方法 水提法制备黄连与吴茱萸经典配伍系列(左金丸、甘露散、茱萸丸、反左金丸),通过抑菌圈法测定不同配伍系列对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性,通过改良微量二倍稀释法测定不同配伍系列的最小抑菌浓度(MIC)。结果 4种配伍方剂对金黄色葡萄球菌有很强的抑菌作用,对大肠杆菌的抑菌作用较弱,抑菌效果顺序:左金丸甘露散茱萸丸反左金丸,并推测抑菌效果与黄连总碱含量降低相关。以Vc作为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS~+·)自由基清除试验对比各配伍系列对自由基清除活性。结果表明抗氧化作用大小为:反左金丸茱萸丸左金丸甘露散,并推测抗氧化作用的物质基础可能是总酚含量。结论 黄连与吴茱萸经典配伍系列中左金丸具有较强的抗菌活性,反左金丸的抗氧化性最强,差异机制可能与配伍比例改变后活性物质含量差异相关。     

复方黄连注射剂血清药理学研究

目的 通过血清药理学方法,探讨复方黄连注射剂的体内药效学.方法 以大白兔为实验动物,采用肌内注射复方黄连注射剂.给药后取不同时间的血液分离含药血清.采用反相高效液相色谱法测定含药血清中小檗碱含量,用微量稀释法和药敏纸片法测定复方黄连注射剂含药血清的抑菌能力.结果 复方黄连注射剂含药血清对耐药性金葡菌具有明显的抑制作用.结论 复方黄连注射剂具有体内抗菌作用.     

西黄丸含药血清干预人乳腺癌细胞增殖的药效强度及其与采血时间的关系

目的探讨西黄丸大鼠含药血清对人乳腺癌细胞增殖的作用特点。方法 SD大鼠48只随机分为空白对照组12只及西黄丸0. 5 h组、西黄丸1 h组、西黄丸2 h组、西黄丸3 h组各9只。西黄丸各时间组给予2. 4 g/(kg·d)西黄丸混悬液灌胃,每日2次,空白对照组大鼠给予等体积蒸馏水,连续给药7次。于末次给药0. 5、1、2、3 h后对相应组采血,制备含药血清。MDA-MB-435和MCF-7细胞分别设10%空白血清组、20%空白血清组、30%空白血清组、10%西黄丸血清组、20%西黄丸血清组和30%西黄丸血清组,每组6个复孔。加入相应含药血清培养后,采用MTT方法检测不同采血时间点、不同浓度的西黄丸大鼠含药血清对乳腺癌细胞株增殖的抑制作用。结果与其他时间点相比,西黄丸大鼠各浓度含药血清作用24、48 h均为采血时间2 h含药血清对MDA-MB-435细胞的抑制增殖作用最强;西黄丸大鼠各浓度含药血清作用24、48、72 h均为采血时间3 h含药血清对MCF-7细胞的抑制增殖作用最强(P 0. 05);且均为30%西黄丸含药血清对MDA-MB-435、MCF-7两种细胞株增殖的抑制作用最强(P 0. 05)。结论西黄丸采血时间2 h含药血清对MDA-MB-435细胞的抑制增殖作用最强,采血时间3 h含药血清对MCF-7细胞的抑增殖作用最强,且以30%含药血清抑制作用最强。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mg2+-ATP酶、G-6-P酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响.[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组.待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本.利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析.[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P＜0.05).鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P＞0.05).[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用.