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相似文献
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1.
目的研究藤黄酸对人乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达及其转录调控基因C-myc的影响,以探讨藤黄酸对人乳腺癌细胞端粒酶活性的调控机制。方法藤黄酸作用于人乳腺癌细胞24h、48h、72h后,收集细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测MCF-7细胞生长抑制率,同时采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性、RT-PCR法检测hTERT mRNA的表达、Western blot技术检测C-myc蛋白的表达。结果藤黄酸能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7生长和增埴,对端粒酶活性、hTERT mRNA及转录调控基因C-myc的表达具有抑制作用,并呈明显的时效和量效相关性。结论藤黄酸能够明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,其机制可能是对MCF-7细胞的端粒酶活性及其端粒酶转录调控基因C-myc有较好的抑制作用,提示藤黄酸有可能成为高效低毒的抗肿瘤天然药物。  相似文献   

2.
3.
目的利用RNA干扰技术,研究靶向bcl-2的小干扰RNA(siRNA)在体内外对胃癌细胞生长的影响,探讨其对胃癌治疗的可行性。方法化学合成bcl-2基因的siRNA,脂质体法将bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞,采用实时定量PCR和Western印迹观察bcl-2 siRNA转染前后胃癌细胞bcl-2基因的表达变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、流式细胞检测技术和端粒重复序列扩增法(TRAP)分别检测胃癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性变化。并将转染bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种于裸鼠皮下,观察其在裸鼠体内成瘤及生长情况。结果数据经方差分析,bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,明显抑制bcl-2基因表达,并与其浓度和作用时间相关,以100 nmol/L bcl-2 siRNA对bcl-2基因表达抑制效果最佳。以该浓度的bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,bcl-2 mRNA和蛋白表达抑制分别为79.9%和85.3%;经bcl-2 siRNA作用的SGC 7901细胞生长明显缓于对照组(P<0.05),细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),端粒酶活性明显低于对照组(P<0.05)。转染100 nmol/L bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种裸鼠皮下后,肿瘤出现时间晚,体积小.生长受到明显抑制(P<0.05)。结论靶向bcl-2的siRNA可明显下调靶基因bcl-2的表达,在体内外抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,为探索胃癌基因治疗提供新的策略。  相似文献   

4.
扰质粒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组细胞端粒酶活性均显著下降(P<0.01);转染48 h后,各干扰质粒的抑制率依次为49%、79%、53%.干扰质粒转染ECA109细胞中hTERTmRNA的表达较对照质粒转染ECA109细胞中hTERTmRNA的表达量显著下降,仅为对照组的55.4 %.结论 成功构建载体介导的hTERT靶向RNA干扰重组体,能有效抑制ECA109细胞端粒酶活性及hTERTmRNA的表达.  相似文献   

5.
目的探讨靶向人端粒酶反转录酶(hTERT)siRNA对宫颈癌Hela细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法实验分为hTERT siRNA组、Control siRNA组、空载体组及空白细胞组,分别以hTERT siRNA、Control siRNA及空载体转染宫颈癌Hela细胞。采用real time-PCR法及Western blot法检测各组细胞hTERT mRNA及蛋白表达,MTT法检测24、487、29、6 h细胞增殖活性。并对上述各组细胞分别用不同浓度顺铂、博来霉素处理,MTT法检测细胞存活率及两种化疗药物的IC50。结果与其余各组相比,hTERT siRNA组hTERT mRNA及蛋白水平表达明显降低(P〈0.05),细胞增殖受到抑制,顺铂、博来霉素的IC50显著下降。结论 hTERT siRNA可显著抑制宫颈癌Hela细胞中hTERT基因的表达,抑制细胞增殖,并提高细胞对化疗药物的敏感性。  相似文献   

6.
目的 :研究初发急性白血病 (AL)患者骨髓、外周血单个核细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的表达 ,探讨其临床意义。方法 :采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 4例初治AL患者的端粒酶活性 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测hTERT基因mRNA的表达水平。结果 :在 2 4例初发AL患者骨髓、外周血样本中 ,18例 (75 .0 % )表达端粒酶活性 ,其吸光度 (A )均值分别为 0 .5 38± 0 .0 6 2和 0 .4 6 3± 0 .0 5 4 ,而 12例正常人外周血中只有 1例表达端粒酶活性 A 均值为 0 .16± 0 .0 12 ,前二者分别与后者比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。在 2 4例AL患者中 ,19例 (79.2 % )表达hTERT基因mRNA。 2 4例AL骨髓样本中 ,17例既有端粒酶活性表达 ,又有hTERT基因mRNA表达 ,端粒酶活性的表达和hTERT基因mRNA的表达具有明显的一致性。结论 :初发AL患者骨髓、外周血细胞端粒酶活性及hTERT基因mRNA表达明显高于正常 ;AL患者细胞端粒酶活化与其hTERT表达密切相关。  相似文献   

7.
端粒酶逆转录酶小干扰RNA对肝癌细胞的体外抑制作用   总被引:5,自引:2,他引:5  
目的 研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞SMMC-7721中抗肿瘤作用。方法 针对hTERT基因编码区及非编码区,采用T7转录系统在体外合成了2条siRNA,转染SMMC-7721细胞。以四甲基偶氮唑盐试验、逆转录聚合酶链反应及western blot观察其对SMMC-7721细胞增殖、hTERT mRNA及蛋白表达的影响。结果 2条siRNA以剂量依赖性方式抑制了SMMC-772l细胞增殖,当给药浓度为100nmol/L时,对hTERT mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用。结论 靶向hTERT的siRNA对hTERT基因表达有抑制效果,有可能发展为一种新的抗肿瘤药物。  相似文献   

8.
目的:研究TPX2基因特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对食管鳞癌EC9706细胞基因表达的抑制作用及对食管癌细胞生长的影响.方法:以食管鳞癌EC9706细胞为研究对象,利用Lipofectamine2000介导TPX2 siRNA分组转染EC9706细胞24,48,72,96 h(实验组),并设立阴性对照组和空白对照组.RT-PCR检测siRNA转染前后TPX2 mRNA的表达水平的变化:Western blot检测转染前后EC9706细胞中TPX2蛋白表达水平的变化;MTT法检测瞬时转染TPX2 siRNA对EC9706细胞增殖的影响.结果:导入有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示.TPX2 siRNA可使EC9706细胞中TPX2 mRNA水平及蛋白表达水平下降,至72 h时表达量最低,与空白对照组相比分别为0.31±0.08和0.39±0.12,差异有统计学意义(P<0.05);MTT实验显示细胞的生长增殖受到明显抑制,与对照组相比抑制率可达35.4%(P<0.05).结论:siRNA可以有效抑制EC9706细胞中TPX2的表达,并降低EC9706细胞的增殖能力.  相似文献   

9.
重组人肿瘤坏死因子调节端粒酶活性的体外研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的:研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)对端粒酶活性的调节作用,方法:将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1-6细胞,以TRAP-ELISA方法测定其端粒酶活性,采用Liofect脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位一端酶逆转录酶(hTERT)启动力质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞,2h后加入不同浓度的rhTNF,孵育48h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性,结果:在10-1000IU/ml浓度范围内,rhTNF可抑制端粒酶活性,同时在浓度范围内,rhTNF可显著抑hTERT启动子的表达,其抑制作用与rhTNF剂量呈正相关,结论:rhTNF杀伤肿瘤细胞的机制可能与其抑hTERT的表达有关。  相似文献   

10.
目的 采用RNA干扰技术(RNAi)抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP),观察抑制前后人脑胶质瘤细胞U251的生物学行为.方法 DNA重组技术合成针对人脑胶质瘤U251细胞XIAP基因三条siRNA(siRNA1,siRNA2,siRNA3),以脂质体2000作为载体进行转染,RT-PCR法检测XIAP的mRNA表达,选择特异性较高的siRNA,以此 siRNA为标准建立20 nmol/L、30 nmol/L、50 nmol/L3个浓度梯度,转染细胞,Western blot 检测XIAP基因的蛋白表达,选出最低有效浓度;流式细胞仪检测抑制前后细胞周期和凋亡率.结果 siRNA成功转染了人脑胶质瘤细胞U251,转染率达到80%以上;RT-PCR检测siRNA2特异性较高;Western-blot检测终浓度为30 nmol/L的siRNA抑制效率较高;流式细胞仪检测停滞在G0/G1期的细胞增多,在S期的细胞减少,并且细胞的凋亡率增加.结论 通过RNA干扰可以抑制人脑胶质瘤U251细胞XIAP的表达,促进人脑胶质瘤细胞凋亡,从而抑制细胞的生长.  相似文献   

11.
Wang X  Zhang Z  Xu Y  Chen S  Xiong W 《中华内科杂志》2002,41(3):175-178
目的 研究端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对肺癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 实验分为ASODN组、正义寡核苷酸(SODN)组和空白对照组,所用ASODN和SODN的浓度分别为10μmol/L,脂质体为16mg/L,采用端粒重复扩增法、逆转录-聚合酶链反应、Western Blot及流式细胞术分别观察各组端粒酶活性、hTERP mRNA和蛋白质表达以及细胞凋亡。结果 ASODN组显著下调或抑制肺癌细胞端粒酶活性和hTERT表达,但直到第21天才出现细胞凋亡增多。结论 端粒酶活性与hTERT表达密切相关。  相似文献   

12.
目的观察CD147基因沉默对甲状腺乳头状癌细胞株K1中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响,筛选有效的小干扰RNA(siRNA)序列。方法设计合成3对不同的CD147 siRNA,分别转染人K1为实验组(S1、S2、S3组),同时设不加干预者为正常组,siRNA阴性对照进行干预为阴性对照组。RT-PCR、ELISA法分别测定各组CD147 mRNA及其蛋白。筛选能有效沉默CD147 mRNA及其蛋白的siRNA序列。RT-PCR、Western blot法分别测定CD147表达沉默后K1细胞中的VEGF-C mRNA及其蛋白。结果 S1组CD147 mRNA及其蛋白表达量与正常组、阴性对照组相比,P均〉0.05。S2、S3组与正常组、阴性对照组相比,P均〈0.05。S2、S3组的siRNA序列可有效沉默CD147的表达而S1组不能。S2、S3组CD147 mRNA的表达抑制率分别为67.8%和72.5%;CD147蛋白表达抑制率为31.7%和35.4%。S2、S3组K1细胞中VEGF-C mRNA表达抑制率分别为66.4%和56.6%;其蛋白表达抑制率分别为51.9%和41.6%。结论筛选出了能有效沉默CD147基因表达的siRNA序列。CD147基因沉默后可降低K1细胞中VEGF-C的表达,可能影响肿瘤细胞的淋巴结转移能力。  相似文献   

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小干扰RNA抑制胃癌细胞环氧合酶-2的表达   总被引:10,自引:0,他引:10  
目的 观察瞬时转染环氧合酶-2特异性小干扰RNA(COX-2 siRNA)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响,探讨COX-2在胃癌发生中的作用和RNA干扰方法 对肿瘤的治疗作用.方法 以胃癌细胞系SGC7901为研究对象,瞬时转染COX-2 siRNA,转染后72 h用RT-PCR方法 分别检测COX-2siRNA组、无意义siRNA组及空白对照组的COX-2 mRNA表达;免疫组化法与Western blot检测3组细胞的COX-2蛋白质的表达;流式细胞仪检测3组的细胞周期和凋亡情况.转染后1周内每天同一时间用噻唑蓝比色分析法(MTr)检测3组癌细胞的活力并计算癌细胞的相对生存率.结果 COX-2siRNA对胃癌细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达均有明显抑制作用,胃癌细胞增殖受到抑制,凋亡增加,但细胞周期分布无明显变化.结论 在胃癌细胞中,COX-2表达的抑制可降低胃癌细胞的增殖速度,促进肿瘤细胞凋亡,COX-2在胃癌的发生中可能具有重要作用.  相似文献   

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