磷脂对HDL3介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出能力的 …

目的 研讨磷脂对ＨＤＬ３介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出能力的影响。方法 在卵磷脂（ＰＣ）或鞘磷脂（ＳＰＭ）存在条件下，观察ＨＤＬ３介导细胞胆固醇流出量的变化、细胞内磷脂含量变化及游离胆固醇／固醇酯平衡的变化。结果 ①ＢＳＡ组（对照组）、ＨＤＬ３组、ＰＣ组、ＳＰＭ组、ＰＣ＋ＨＤＬ３组和ＳＰＭ＋ＨＤＬ３组分别介导４．７０％、３１．５５％、７．３５％、８．０６％、４２．９５％和４６．９８％细胞胆固醇     

HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的：建立用高效液相色谱（HPLC）法测定载脂蛋白A‐1（apoA‐1）介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP‐1用160 nmol／L佛波酯（PMA）诱导24 h分化为贴壁巨噬细胞（PMA组）,再用50μg／mL乙酰化低密度脂蛋白（ac‐LDL）处理48 h ,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞（ac‐LDL组）;加入含apoA‐1的1640培养基培养24 h（apoA‐1组）。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用 HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA‐1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 T HP‐1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac‐LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于 PMA组（P＜0．01）。ac‐LDL处理细胞48 h后,ac‐LDL 组内总胆固醇水平为80．25μg／mg 细胞蛋白,胆固醇酯水平为47．65μg／mg 细胞蛋白,占总胆固醇的59．38％,与PMA组相比,差异有统计学意义（P＜0．01）。 HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA‐1介导泡沫细胞内apoA‐1组胆固醇流出率分别为5．63％和7．08％（P＜0．01）。结论本研究成功建立了酶促反应结合 HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。     

高密度脂蛋白介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出的机制

目的研究高密度脂蛋白-3(HDL3)介导大鼠皮肤成纤维细胞胆固醇(ch)流出机制。方法用N-乙酰咪唑修饰HDL,阻断HDL与细胞受体相互作用,观察其对HDL3介导细胞ch流出的影响。用FITC标记HDL示踪HDL3在介导细胞ch流出中自身代谢过程。结果牛血清白蛋白(对照组)介导4.74%细胞ch流出,HDL3组和N-乙酰咪唑HDL组分别为31.85%和8.41%。FITC-HDL3与细胞37-℃培养3h后,细胞内吞荧光强度(FS)占细胞结合FS的65.78%,其中93.5%FS存在于TCA可沉淀部分。细胞进一步37-     

血清LCAT与脂质改变和肝脏疾病

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)由肝脏合成,主要功能是催化卵磷脂分子中β位上脂酰基转移到游离胆固醇3位的羟基上,生成胆固醇酯及溶血卵磷脂。其反应式为:卵磷脂+游离胆固醇LCAT+APOA-I胆固醇酯+溶血卵磷脂。初生HDL分子内的卵磷脂与胆固醇为LCAT的作用底物,载脂蛋白(APOA-Ⅰ)为其必需的激活剂,APOA-Ⅵ、APOE、APOD也有激活LCAT的作用。     

PDTC对ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响。方法 60 nmol/L PMA孵育THP-1巨噬细胞24 h后,分为3组：对照组、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）组（100 μg/mL）和PDTC组（100 μg/mL ox-LDL+50 μmol/L PDTC）。用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出。 结果 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,明显降低细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量,增加载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇流出,但对HDL介导的胆固醇流出无明显影响。结论 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,促进apoA-Ⅰ介导的胆固醇流出。     

LCAT、CETP、LpAl在胆固醇逆向转运中的作用

周围细胞（非肝）获得胆固醇（Ch）的主要方式①细胞自身合成Ch；②介导受体系统摄取低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）中Ch-正向Ch转运（Forwordtransport）。周围细胞的Ch可通过血浆间隙各种脂蛋白（Lp）转运到肝──逆向Ch转动（Re－VerseCholesteroltrsnsport，RCT，见图1[1]。图1肝与周围组织间胆固醇的主要转运途径RCT过程为细胞表面游离胆固醇（FC）经卵磷脂胆固醇酞基转移酶（LCAT）酯化作用生成胆固醇酯（CE）转运至HDL中，在胆固醇酯转运蛋白（CETP）作用下，HDL（仅含APoA·1的HDL－LPAI）中CE…     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的 探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对THP-1源性巨噬细胞转化的影响.方法 体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组(n=6):对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、ox-LDL组(100μg/mLox-LDL)和高糖/ox-LDL(G-ox-LDL)组(30 mmol/L葡萄糖+100 μg/mL ox-LDL).应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质.结果 ox-LDL组和G-ox-LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50%.对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50%.结论 ox-LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞.提示ox-LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件.     

液相色谱-质谱联用法测定U937细胞内胆固醇

目的利用液相色谱-质谱联用法测定细胞内胆固醇及胆固醇酯,建立一种精确鉴定泡沫细胞的方法.方法用氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized loW density lipoprotein,oxLDL)干预U937巨噬细胞诱导泡沫细胞形成,然后用己烷/异丙醇(体积比3/2)抽提细胞内胆固醇及胆固醇酯,抽提液经真空干燥后再溶于甲醇,用液相色谱-质谱联用法直接测定细胞内游离胆固醇,胆固醇酯经胆固醇酯酶水解后测定总胆固醇,总胆固醇减去游离胆固醇即胆固醇酯.抽提脂质后的沉淀物溶于氢氧化钠溶液中,用BCA法测定蛋白含量,胆固醇及胆固醇酯用μg/mg细胞蛋白为单位来表示.结果氧化低密度脂蛋白干预后的巨噬细胞内存在高水平胆固醇及胆固醇酯的蓄积.在100μg的oxLDL处理组中,胆固醇酯与阴性对照组差异存在显著性[(25.733±2.970)μg/mg细胞蛋白vs(13.024±2.875)μg/mg细胞蛋白,P＜0.01],同样胆固醇的水平差异也存在显著性[(18.675±1.315)μg/mg细胞蛋白vs(24.428±2.370)μg/mg细胞蛋白,P＜0.01].结论液相色谱-质谱联用法测定细胞内胆固醇是一种鉴定泡沫细胞简便而精确的方法.     

同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成和胆固醇流出的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成和胆固醇流出的影响及其特点。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol.L-1浓度Hcy和100μmol.L-1Hcy+叶酸+维生素B12(VB12)干预24h,油红O染色检测泡沫细胞的形成;采用酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞胆固醇流出的影响,人ox-LDL;酶联免疫(ELISA)试剂盒检测泡沫细胞胞内ox-LDL的含量。结果 Hcy加剧了泡沫细胞的形成,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但不呈量效关系,以100μmol.L-1浓度的Hcy组效应最显著(P<0.01);在Hcy干预下泡沫细胞胞内TC、FC、CE的流出减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),以100μmol.L-1浓度的Hcy组效应最显著(P<0.01),同时100μmol.L-1Hcy+叶酸+VB12组与100μmol.L-1浓度的Hcy组比较显示前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多;在Hcy干预下泡沫细胞胞内ox-LDL的含量增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy促进THP-1单核细胞源性泡沫细胞的形成,减少胞内胆固醇的流出,在动脉粥样硬化的发生发展中起了重要作用。     

高密度脂蛋白氧化修饰对大鼠巨噬细胞胆固醇流出的影响及其机制

研究高密度脂蛋白-3（HDL3）氧化修饰对其介导大鼠腹腔巨噬细胞胆固醇（ch）流出功能影响及细胞Ch流出机制。HDL3和其组分载脂蛋白A－I（ApoA－I）经CU2+氧化修饰后分别与巨噬细胞（Mφ）一起培养，测定细胞ch流出量。结果：牛血清白蛋白（对照组）介导3.98％细胞ch流出，HDL3和氧化HDL3（Ox—HDL3）组分别为41．78％和17．43％，ApoA—I和Ox－ApoA一I分别为40％和17．33％。结论：1．HDL氧化修饰后介导细胞ch流出功能显著降低。2．HDL的这一功能是由其ApoA—I组分介导的。     

高密度脂蛋白对内皮细胞胆固醇流出的影响

目的 研究高密度脂蛋白(HDL)和氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆同醇流出的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与100μg/ml HDL或100μg/ml ox-HDL温育24 h.设PBS为对照组.采用RT-PCR、液体闪烁计数法分别检测人脐静脉内皮细胞ABCA1的mRNA水平及细胞内胆固醇流出功能.结果 HDL组及ox-HDL组的ABCA1 mRNA表达水平分别较埘照组增高58%和23%.差异有统计学意义(P<0.05);ox-HDL组较HDL组的胆同醇流出率显著降低(P<0.01).结论 HDL可显著上凋人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达并介导内皮细胞胆固醇流出;HDL经氧化修饰后对ABCA1表达的上调作用减弱.引起内皮细胞胆同醇外排障碍,是HDL氧化修饰后促进动脉粥样硬化发展的可能机制之一.

Abstract：

Objective To study the effects of high-density lipoprotein (HDL) and oxidized high-density lipoprotein (ox-HDL) on the expression of ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) and cholesterol efflux in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods In vitro cultured HUVECs were incubated in the presence of 100 μg/ml HDL or 100 μg/ml ox-HDL for 24 h, using PBS as the negative control. ABCA1 mRNA level and cholesterol efflux rate were determined using RT-PCR and a liquid scintillator, respectively. Results HDL and ox-HDL significantly elevated the level of ABCA1 mRNA by 58% and 23% relative to the control level, respectively (P<0.05). The cholesterol efflux rate in ox-HDL group was significantly lower than that in HDL group (P<0.01). Conclusion HDL increases ABCA1 expression and cholesterol efflux in HUVECs. Oxidative modification of HDL decrease cholesterol efflux by inhibiting the expression of ABCA1, suggesting a possible mechanism of ox-HDL in the pathogenesis of atherosclerosis.     

脂质体（ApoA—1：PC）的制备鉴定和功能研究

Liposome (ApoA-1: PC) was prepared by the deoxycholic acid dialysis method and identified by agarose gel electrophoresis, two dimensional thin-layer chromatography and electron microscopy. The purified liposomes manifested one band in Amino black 10B staining and no color in Oil red O staining due to the presence of phospholipid. Only one brown spot appeared in two dimensional TLC, and electron microscopy with 1% sodium phosphotungstate negative staining revealed discoidal shapes stuck together. All of the above indicate that the liposome consisted of ApoA-1 and PC. Liposomes were added to the medium of smooth muscle cell cultures and then LDL receptor expression and cholesterol efflux from the cells were observed. The results suggest that the ApoA-1:PC can enhance the expression of LDL receptors indirectly by stimulating cholesterol efflux from the cells.     

脂质体(ApoA-l:PC)的制备鉴定和功能研究

用脱氧胆酸透析法制备成功脂质体(ApoA-l:PC),并经琼脂糖凝胶电泳、双相薄层层析及电子显微镜鉴定。氨基黑10B染色呈一条区带,油红O染色阴性,双相薄层显示-棕黄色团,相当于磷脂酰胆硷位置,1％磷钨酸钠负染电镜下呈圆盘状粘着在一起,以上均显示脂质体由ApoA-l与PC组成。观察到脂质体加入量、LDL受体表达及胆固醇从细胞外流间的相关性,结果显示脂质体能增强受体表达作用,与脂质体能使细胞胆固醇外流有关。     

大鼠肝实质及非实质细胞VLDL和HDL受体的研究

Saturable high-affinity VLDL and HDL receptor on parenchymal cells (PC), and non-parenchymal cells (NPC) freshly isolated from rat liver were studied. The VLDL- and HDL-receptor could mediate liver PC and NPC to bind, uptake, and degrade 125I-labeled human VLDL and apoE-deficient HDL3, and the activities of these two receptors (expressed as ng/mg cell protein) on NPC were about 10- and 4-fold higher than those on PC, respectively. VLDL receptor on NPC with kd 15.0-34.2 micrograms/ml and Bmax 2170-2607 ng/mg cell protein could be inhibited by EDTA, and down-regulated by cell cholesterol content. HDL receptor on NPC with kd 10.1-17.7 micrograms/ml and Bmax 1004-2738 ng/mg cell protein could not be inhibited by EDTA, but could be up-regulated by cell cholesterol content. Competitive inhibition assay showed that VLDL receptor could not only bind VLDL and LDL, but also bind HDL3 to some extent. Unlabeled purified apolipoprotein CIII-1, but apoAI, CI, CII, could effectively inhibit 125I-labeled VLDL binding to NPC. These results suggest that liver NPC may be more active than PC in clearing VLDL and HDL from circulation, and apolipoprotein CIII play an important inhibitory role in these receptor-mediated processes.     

缩醛磷脂的分离 纯化和鉴定

目的　研究从猪心中提取和纯化缩醛磷脂 ,并测定其纯度 ,以利于进一步研究其生物学作用。方法　取新鲜猪心切块 ,绞碎 ,制成匀浆后 ,再经一系列过程包括①总脂的提取 ;②通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从总脂提取物中分离出磷脂酰乙醇胺 (PE)、磷脂酰胆碱 (PC)、磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰丝氨酸 (PS)和鞘磷脂 (SM ) ,并从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ;③碱水解制备缩醛磷脂酰乙醇胺 (plas PE) ;④通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从碱水解物中进一步纯化和鉴定 plas PE ;⑤分别用Iodinedisappearance法和Bartlett法检测 plas PE制剂中plas PE的含量及无机磷的含量 ,并计算出其纯度。 结果　①从总脂提取液中分离出下列几种磷脂并经标准品鉴定出为PE、PI+PS、PC和SM ,其Rf值分别为 0 .87、0 .75、0 .54和 0 .37;②从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ,并经碱水解 ,制备出plas PE ,其在薄板层析板上的Rf值为 0 .81 ;③plas PE制剂中无机磷含量为 3 .1 61 μmol/ml,plas PE含量为 3 .0 0 6μmol/ml,经计算 plas PE的纯度为 95 .1 0 %。 结论　猪心是缩醛磷脂含量丰富的器官 ,采用硅酸柱层析及碱水解分离是制备缩醛磷脂的有效流程     

血管外膜源一氧化氮对尾加压素Ⅱ诱导的血管平滑肌增殖的抑制作用

目的观察血管外膜生成的一氧化氮(NO)对尾加压素Ⅱ(UrotensionⅡ,UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法取大鼠胸主动脉,去除内皮,分以下几组进行组织孵育10h①完整外膜血管组;②单纯中膜组;③中膜与剥离的外膜共育组;④中膜与用L-N-硝基精氨酸(L-NNA)预处理的外膜共育组。每例胸主动脉剪为二段,分两个亚组UⅡ(10-7mol/L)组和对照组。3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测各组VSMC的细胞增殖。另取大鼠腹主动脉外膜,用10-8和10-7mol/LUⅡ刺激4h。Griess法测血管外膜生成的亚硝酸盐(NO2-)含量,3H-L-精氨酸(3H-L-Arg)标记的同位素法测定外膜一氧化氮合酶(NOS)活性。结果①各UⅡ亚组3H-TdR掺入比相应对照组分别增加62.9%～98.3%(均P<0.01)。②在10-7mol/LUⅡ刺激下,完整外膜组及中膜+外膜组的3H-TdR掺入分别比单纯中膜组低20.5%和20.3%(P<0.01);中膜+L-NNA预处理的外膜组3H-TdR掺入分别比中膜+外膜组及完整外膜组高27.1%和27.3%(P<0.01),而与单纯中膜组差异无显著性(P>0.05)。③与对照组相比,10-8和10-7mol/L的UⅡ使外膜NOS活性分别增加92.1%和177%(P<0.01);使外膜生成的NO2-含量分别增加88.7%和178%(P<0.01)。结论血管外膜生成的NO可抑制UⅡ刺激的VSMC的增殖,其抑制作用为UⅡ激活的血管外膜NOS/     

三磷酸腺苷结合盒转运体 A1 在肿瘤发生、发展及治疗中的研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运体 A1（ABCA1）是三磷酸结合盒转运体超家族的重要成员之一，促进细 胞内游离胆固醇和磷脂的流出，在胆固醇逆转运（RCT）和高密度脂蛋白（HDL）生成的起始步骤中起重要 作用。目前研究表明，脂质代谢在肿瘤生长中支持肿瘤细胞的特殊能量和结构需求，ABCA1 介导胆固醇外流 在抗肿瘤中起着一定的作用，ABCA1 在肿瘤治疗方面有望成为新的方向。该文主要综述 ABCA1 在肿瘤发生 发展及治疗中的研究进展。     

内源性高甘油三酯血症者血浆脂蛋白中脂质和载脂蛋白...

Lipids and apolipoproteins in plasma VLDL, IDL, LDL, HDL2 and HDL3 isolated by one-step density gradient ultracentrifugation from 7 subjects with endogenous hypertriglyceridemia (HTG) and 4 normalipemics were determined. HTG VLDL was enriched with cholesterol, and its triglyceride (TG), phospholipid (PL) and apo CII, CIII contents (mg/100 mg protein) were significantly higher than those in normal VLDL. ApoE content in HTG VLDL was prone to increasing, and apoB100 content had no apparent difference from that in normal VLDL. Compared with normal HDL2 and HDL3, the contents of total cholesterol (TC), apoAI, CII, and CIII in HTG HDL2, and apoCII, CIII in HTG HDL3 decreased. HTG HDL2 and HDL3 were rich in TG. By analysis of distribution of these lipids and apolipoproteins in various plasma lipoproteins, it was found that the abnormal composition of VLDL and HDL in HTG seemed to be a result of transport of TC, PL, and apoCII, CIII from HDL to VLDL. There was a significantly positive correlation between TC and apoAI, CII, CIII in HDL respectively, which indicated that apoCII and CIII were also associated with the alteration of HDL cholesterol. It is suggested that the elevated plasma VLDL-TG concentration in endogenous hypertriglyceridemia may induce abnormal redistribution of lipid and apolipoprotein among apoCII plasma lipoproteins, and and CIII may play an important role in these changes.     

人质膜型唾液酸酶对丁酸钠诱导细胞凋亡的影响及其机制

目的：研究人质膜型唾液酸酶(hmSD)对丁酸钠(NaBT)诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞(PC3细胞)凋亡的影响及其可能机制。方法：以前列腺癌细胞PC3和稳定转染hmSD的前列腺癌细胞(PC3-hmSD)为靶细胞,分别设对照组、NaBT 2.5 mmol•L^-1组、NaBT 5.0 mmol•L^-1组、NaBT 10.0 mmol•L^-1组,采用MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色方法检测细胞凋亡情况,DCFH-DA激光共聚焦法检测细胞内ROS,Western blotting方法检测Bcl-XL、P65和Caspase 9蛋白表达。结果：① NaBT作用48和72 h时,PC3-hmSD细胞的生存率明显高于PC3细胞（P<0.05）;② NaBT 5.0 mmol•L^-1作用4 h,PC3-hmSD组细胞凋亡数明显少于PC3细胞（P<0.05）;③ NaBT诱导细胞内活性氧产生,PC3-hmSD细胞与PC3细胞比较差异无显著性;④ NaBT作用下,与PC3细胞比较,PC3-hmSD细胞Bcl-XL、P65蛋白表达水平增强,而 Caspase 9蛋白表达水平减低（P<0.05）。结论：① hmSD具有抵抗NaBT诱导细胞凋亡的作用;② hmSD对NaBT诱 导活性氧产生无抑制作用;③ hmSD抗凋亡作用可能与Bcl-XL和P65表达上调、Caspase 9表达下调有关。