Staurosporine对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞表达t-PA与PAI-1的影响

目的 通过观察不同浓度Staurosporine (STS)对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)与1型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA及蛋白的影响,探讨尼古丁所致内皮细胞纤溶紊乱的机制.方法 将体外培养的3～6代HUVECs随机分为对照组、尼古丁组及不同浓度STS组,STS组分别以20、50、100μmol/L STS预处理细胞30 min,再与100 μmol/L尼古丁孵育24 h.酶联免疫吸附双抗体夹心法检测细胞上清液t-PA与PAI-1蛋白含量,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达.结果 尼古丁组PAI-1 mRNA与蛋白表达较对照组升高(P值均＜0.05);不同浓度STS组PAI-1 mRNA与蛋白表达较尼古丁组降低(P值均＜0.05),且呈浓度依赖性,以100 μmol/L STS组作用为著,但PAI-1 mRNA与蛋白表达仍高于对照组(P值均＜0.05).各组间t-PA蛋白差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 STS通过阻断蛋白激酶C通路的信号传导可部分减弱尼古丁诱导的血管内皮细胞纤溶功能紊乱.     

尼古丁对脐静脉内皮细胞释放IL-6及PAI-1的影响

目的:探讨尼古丁干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,白介素-6(IL-6)和纤溶酶原激活物抑制物-I(PAI-1)抗原的表达变化,并分析其相关性.方法:将4-6代HUVECs接种于24孔培养板.随机分为对照组与不同浓度尼古丁组.尼古丁浓度分别为0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L与100μmol/L.12h后收集各组细胞上清液.采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法(ELISA)定各组细胞上清液中IL-6、PAI-1抗原浓度.结果:各浓度尼古丁组HUVECs释放IL-6抗原呈浓度依赖性增高,各尼古丁组IL-6含量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).100μmol/L尼古丁组PAI-1含量与对照组比较升高(P<0.05).HUVECs释放PAI-1与IL-6呈正相关(P<0.05).结论在体外,尼古丁可诱导HUVECs释放IL-6、PAI-1增多,参与内皮损伤、炎症与纤溶活性紊乱.     

不同条件下香烟提取物对血管内皮细胞纤溶平衡的影响

目的 研究不同条件下香烟提取物(CSE)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)含量的影响.方法 选用第4代～6代HUVECs,接种于24孔培养板中,分为3组:①对照组;②不同浓度(5%、10%、20%)同一时间点CSE组:6 h后收集各组细胞上清液;③同一浓度不同时间点CSE组:5%CSE刺激HUVECs,于不同时间点(4 h、6 h、8 h、12 h、24 h)分别收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析(ELISA)法测定各组上清液中t-PA和PAI-1的抗原浓度.结果 与对照组相比,不同浓度(5%、10%、20%)同一时间点CSE组中,6 h后各浓度CSE组PAI-1含量均显著增高(P<0.05),但各组间差异无统计学意义,10%与20%CSE组t-PA含量变化明显降低,而5%CSE组t-PA含量变化无统计学意义.同一浓度不同时间点CSE组中,5%CSE组PAI-1含量较对照组升高,且呈时间依赖性;t-PA含量变化无统计学意义.结论 CSE可直接损伤血管内皮细胞,并抑制其纤溶活性,从而增加血栓病的发生.     

蛋白激酶C-胞外信号调节激酶1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路在尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)中的作用.方法 体外培养HUVECs,采用不同实验条件尼古丁进行干预,ELISA法测定细胞上清液中PAI-1的浓度,观察尼古丁作用的最佳浓度和时间.进一步分别用PKC的抑制剂星型胞菌素staurosporine (STS)和ERK的抑制剂PD98059干预HUVECs,观察PKC或ERK被阻断后对尼古丁诱导的HUVECs 表达PAI-1的影响,ELISA测定各组细胞上清液中PAI-1蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞PAI-1 mRNA的表达.结果 100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白水平[(22.6 ± 1.1)μg/L]明显高于对照组[(14.2± 2.8)μg/L,q=5.64,P＜0.05];以100 μmol/L 尼古丁分别与HUVECs孵育0、4、6、8、12及24 h,各组PAI-1蛋白表达呈时间依赖性升高,并在12 h达到高峰(F=32.063,P＜0.05);尼古丁组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.32±0.20),(21.08±0.83)μg/L]明显高于对照组[(0.73±0.10),(13.39± 0.93)μg/L,q=8.43、11.97,均P＜0.05];尼古丁+STS组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.07±0.10),(16.19±2.15)μg/L]较尼古丁组降低(q=5.61、7.61,均P＜0.05),但仍高于对照组(q=7.84、4.36,均P＜0.05);尼古丁+ PD98059组PAI-1 mRNA及蛋白表达[(1.12±0.11),(17.52±1.72)μg/L]低于尼古丁组(q=4.68、5.54,均P＜0.05),仍高于对照组(q=8.77、6.43,均P＜0.05).结论 PKC-ERK1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞PAI-1表达上调中发挥一定作用.

Abstract：

Objective To explore the role of protein kinase C (PKC)- extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 signal pathway in the process of plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) protein and mRNA expression in cultured human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) induced by nicotine. Methods HUVECs were cultured to examine the effect of nicotine on the expression of secreting PAI-1 in HUVECs on different experimental conditions. The expression of PAI-1 protein was measured by ELISA. PKC inhibitor staurosporine (STS)and ERK1/2 inhibitor PD98059 were used to detect PKC or ERK1/2 function on the expression of PAI-1 in HUVECs induced by nicotine. The PAI-1 mRNA expression was determined by RT-PCR. Results The expression level of PAI-1 protein in 100 μmol/L nicotine treated group [(22.6±1.1) μg/L] increased significantly compared to the control group [(14.2±2.8) μg/L; q=5.64,P<0.05]. After stimulation with 100 μmol/L nicotine for 0,4,6,8,12 and 24 h, the levels of PAI-1 protein increased over time and reached the peak at 12 h (F=32.063,P<0.05).The PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine treated group [(1.32±0.20), (21.08 ± 0.83) μg/L] increased significantly compared to the control group [(0.73±0.10), (13.39±0.93) μg/L; q=8.43,11.97,all P<0.05].Compared with nicotine treated group , the PAI-1 mRNA and protein expression in nicotine and STS treated group [(1.07±0.10),(16.19±2.15) μg/L] decreased significantly(q=5.61,7.61, all P<0.05), but still higher than the control group (q=7.84,4.36, all P<0.05). In nicotine and PD98059 treated group, the PAI-1 mRNA and protein expression [(1.12±0.11),(17.52±1.72) μg/L] decreased significantly compared to the nicotine treated group(q= 4.68,5.54, all P<0.05), still higher than the control group (q=8.77,6.43, all P<0.05). Conclusion PKC-ERK1/2 signal pathway may play a partial role in the up-regulation of PAI-1 induced by nicotine in HUVECs.     

血管紧张素Ⅱ及缬沙坦对培养人脐静脉内皮细胞产生纤溶因子的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）对内皮细胞纤溶功能的影响及缬沙坦的干预作用。方法用酶消化法收集并培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,将10^-6,10^-7,10^-8,10^-9mol／L AngⅡ分别与HUVECs共同孵育12h;10^-7 mol／L AngⅡ和HUVECs分别孵育0,2,6,12,24,48h;10^-7 mol／L AngⅡ和10^-5,10^-6,10^-7,10^-8 mol／L缬沙坦（与HUVECs孵育12h;10^-6 mol／L缬沙坦与HUVECs孵育12h）。用酶联免疫吸附法测定上清液中组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator,tPA）和1型纤溶酶原激活物抑制剂（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）抗原浓度。结果 AngⅡ呈浓度依赖性升高HUVECs的PAI-1水平,最大效应浓度10^-7 mol／L;10^-7 mol／LAngⅡ对HUVECs作用,孵育2h PAI-1含量即升高,12h达高峰（198μg／L）;缬沙坦呈浓度依赖性降低AngⅡ促HUVECs分泌PAI-1,缬沙坦最大效应浓度10^-6mol／L;AngⅡ和缬沙坦对HUVECs分泌tPA没有明显影响。结论 AngⅡ通过促进HUVECs分泌PAI-1而降低纤溶活性;缬沙坦通过抑制AngⅡ的促PAI-1分泌作用而提高纤溶活性,提示有助于动脉粥样硬化血栓性疾病的防治。     

血管紧张素II对培养的人脐静脉内皮细胞产生纤溶因子的影响

摘要：　目的 探讨血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)对内皮细胞纤溶功能的影响及缬沙坦的干预作用。方法 用酶消化法收集并培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，将10-6，10-7，10-8，10-9mol/L Ang II分别与HUVECs共同孵育12 h；10-7mol/L Ang II和HUVECs分别孵育0，2，6，12，24，48 h；10-7mol/L Ang II和10-5，10-6，10-7，10-8mol/L缬沙坦(与HUVECs孵育12 h；10-6mol/L缬沙坦与HUVECs孵育12 h。用酶联免疫吸附法测定上清液中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator，tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)抗原浓度。结果 Ang II呈浓度依赖性升高HUVECs的PAI-1水平，最大效应浓度10-7mol/L；10-7mol/L AngII对HUVECs作用，孵育2 h PAI-1含量即升高，12 h达高峰 198μg/L；缬沙坦呈浓度依赖性降低Ang II促HUVECs分泌PAI-1，缬沙坦最大效应浓度10-6mol/L； AngII和缬沙坦对HUVECs分泌tPA没有明显影响。结论 AngII通过促进HUVECs分泌PAI-1而降低纤溶活性；缬沙坦通过抑制AngII的促PAI-1分泌作用而提高纤溶活性，提示有助于动脉粥样硬化血栓性疾病的防治。     

尼古丁对血管内血栓形成的影响

目的 研究不同条件尼古丁介导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物-2(TFPI -2)的影响.方法 选用第4代～6代HUVECs,接种于24孔培养板中,随机分为5组.实验组分别于培养液中加入不同体积的尼古丁,使其终浓度分别为0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L及100μmol/L;对照组以相同体积的PBS液代替尼古丁同步培养,孵育12 h后收集各组细胞的上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析(ELISA)法测定各组上清液中TFPI -2的含量.结果 10 μmol/L、100 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);0.1 μmol/L、1 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05); 100 μmol/L尼古丁组较10 μmol/L尼古丁组TFPI -2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 尼古丁可以损伤血管内皮细胞,引起TFPI -2蛋白表达降低,影响其凝血功能,从而增加血栓的发生几率.     

溶栓及抗凝药物对内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物系统和组织因子表达的影响

目的 探讨重组尿激酶原,重组组织型纤溶酶原激活物及肝素对肺动脉内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u-PA)系统和组织因子(tissue factor,TF)表达的影响.方法 采用体外培养的人肺动脉内皮细胞,待细胞长满后饥饿12h,换液并加入不同药物与细胞孵育12h.根据不同的药物处理方式分为五组:正常对照组;凝血酶(1IU/ml)组;凝血酶(1IU/ml)+重组尿激酶原(150IU/ml)组;凝血酶(1IU/ml)+重组组织型纤溶酶原激活物(150IU/ml)组;凝血酶(1IU/ml)+低分子肝素(10IU/ml)组.孵育结束后,收集培养液,1000r/min离心10min.ELISA法检测细胞培养液中u-PA、u-PA受体(u-PA receptor,u-PAR)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plaminogen activator inhibitor-1,PAl-1)和TF的含量.结果 凝血酶(1IU/ml)组细胞培养液中PAI-1的含量较正常对照组显著增高,u-PA、u-PAR和TF的含量较正常对照组无显著改变.重组尿激酶原组细胞培养液中u-PA和u-PAR的含量较凝血酶组显著增加,PAI-1的含量较对照组显著下降,TF的含量较对照组无显著改变.重组组织型纤溶酶原激活物组细胞培养液中u-PA的含量较凝血酶组显著增加,PAI-1的含量较对照组显著下降,TF的含量较凝血酶组显著下降.低分子肝素组细胞培养液中TF的含量均较凝血酶组及对照组明显下降,u-PA、u-PAR和PAI-1较对照组无显著改变.结论 重组尿激酶原、重组组织型纤溶酶原激活物及低分子肝素都能影响人肺动脉内皮细胞的内源性纤溶和抗凝功能.重组尿激酶原能够促进肺动脉内皮细胞u-PA和u-PAR的表达和释放,抑制PAI-1的表达和释放.重组组织型纤溶酶原激活物不仅能够促进肺动脉内皮细胞u-PA的表达和释放,抑制PAI-1的表达和释放,而且能够抑制TF的表达和释放.肝素主要是抑制肺动脉内皮细胞表达和释放TF.     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法（1）将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分为10个实验组（0、10、50、200、500μmol／L Hcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组）,培养24h后,酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂（plasminogen activator,tPA）及纤溶酶原激活物抑制剂1（plasminogen activator inhibitor1,PAI-1）抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析（RT-PCR）法分析各组tPA及PAI-1的mRNA表达水平。（2）急性心肌梗死（AMI）患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI-1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果（1）500μmoL／L Hcy组PAI-1抗原及mRNA表达水平均明显增高（P〈0．05）。（2）以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高（P〈0．05）,而以10μmoL／L Hcy组为对照组时,500μmoL／L Hcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少（P〈0．05）。（3）500μmoL／L Hcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI-1抗原合成及mRNA表达（P〈0、05）。（4）AMI组Hcy、tPA及PAI-1均明显高于健康对照组（P〈0．05）。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI-1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI-1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。     

纤溶酶原激活物抑制因子-1对肝星状细胞活化及细胞外基质合成的影响

目的 探讨外源性纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)对人肝星状细胞(LX-2)活化及细胞外基质合成的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测培养液中加入PAI-1后LX-2细胞的增殖变化,确定PAI-1的最佳干预浓度.将LX-2培养液中加入PAI-1培养12 h,ELISA法检测细胞上清液中转化生长因子(TG...     

高尿酸对血管内皮细胞eNOS基因表达的调节作用及其对血管新生的影响

目的探讨高尿酸对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节作用及其对血管新生的影响。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)在600μmol/L尿酸溶液中培养,应用RT-PCR和Western印迹分别检测各组细胞eNOS mRNA和蛋白表达,应用硝酸还原法检测各组细胞上清液中一氧化氮(NO)含量,应用人工基底膜检测细胞的管腔形成能力,应用鸡胚尿囊膜试验检测细胞的血管新生能力,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组HUVECs的增殖,应用划痕试验检测各组HUVECs的迁移能力。结果与对照组比较,600μmol/L的高尿酸培养HUVECs 48 h后,细胞eNOS mRNA转录水平、蛋白表达量、NO浓度显著下降(P0.01);HUVECs有聚集倾向,但未能形成管腔样网络结构;CAM的血管新生面积比率降低49.78%(P0.01);同时,细胞的增殖能力降低63.68%(P0.05),细胞的迁移能力下降38.70%(P0.01)。结论高尿酸抑制血管内皮细胞eNOS基因表达和NO含量;高尿酸抑制细胞的血管新生能力,同时抑制细胞增殖与迁移,其抑制的可能机制与高尿酸下调eNOS的表达有关。     

急性冠脉综合征患者纤溶活性与脂蛋白（a）的关系探讨

目的 通过测定急性冠脉综合征(ACS)患者血浆中组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)抗原含量及脂蛋白(a)[Lp(a)]的水平,探讨纤溶活性与Lp(a)对冠脉血栓形成的影响及相互关系.方法 选取54例发病1 h～8 h以内的ACS患者作为病例组,并据病情分为不稳定型心绞痛(UAP)组及急性心肌梗死(AMI)组;42名健康体检者作为对照组.用ELISA法检测研究对象血浆t-PA、PAI-1抗原含量,用免疫透射比浊法检测Lp(a)的浓度,比较两组中各指标的变化.结果 UAP组及AMI组血浆t-PA、 PAI-1含量较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),t-PA在UAP组与AMI患者之间无统计学意义,而AMI组PAI-1含量较UAP组明显增高.UAP组及AMI组血浆Lp(a)浓度较对照组明显升高,AMI组又较UAP组明显升高.血浆Lp(a)水平与PAI-1含量存在着显著的正相关,而与t-PA含量之间无显著的相关关系.结论 冠脉血栓疾病发生时,血浆纤溶活性下降,t-PA、PAI-1抗原含量增加,以PAI-1增加为明显;血浆Lp(a)水平增高.Lp(a)促进PAI-1的分泌,抑制t-PA的分泌,减弱t-PA活性,打破了t-PA与PAI-1的动态平衡.     

尼古丁通过抑制JAK/STAT通路对HUVECs增殖和凋亡的影响研究

目的探究尼古丁通过抑制JAK/STAT通路促进人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的作用机制。方法将HUVECs分为4组,即对照组、尼古丁1组、尼古丁2组、尼古丁3组,分别在培养基中加入终浓度为0、10-8、10-7、10-6 mol/L的尼古丁培养24 h。显微镜观察细胞形态。CCK-8和流式细胞术分别用于检测细胞活力和凋亡。Western blot和PCR分别用于检测蛋白和mRNA的表达水平。结果显微镜观察尼古丁会使HUVECs呈现萎缩状态。尼古丁可剂量依赖性的抑制HUVECs活力,并且剂量依赖性的促进HUVECs凋亡。尼古丁可显著的抑制p-JAK/t-JAK和p-STAT/t-STAT的水平。尼古丁可显著的提高Caspase-3和Bax mRNA的水平,抑制Bcl-2 mRNA的水平。结论尼古丁可能通过下调JAK/STAT通路调节凋亡相关蛋白的表达,抑制HUVECs活力并促进其凋亡。     

救心胶囊对损伤内皮细胞PAI-1mRNA表达的影响

目的 观察救心胶囊对损伤的内皮细胞（CEC）纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）mRNA表达的影响。方法 采用EC体外培养方法，建立缺氧和LDL损伤EC模型。运用细胞原位杂交技术，检测EC的PAI-1 mRNA阳性率。结果 缺氧或LDL造成EC损伤后，PAI-1mRNA表达率皆显著升高（与正常组比较，P〈0.01；救心胶囊有降低PAI-1mRNA表达的作用（与损伤组比较，P〈0.01）。结论 救心胶囊能明显抑制EC在损伤状态下PAI-1mRNA表达率的升高，参与了抗血凝机制。     

不同浓度尿酸对培养人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的探讨尿酸对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能影响及可能机制分泌纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白的作用和可能的信号通路。方法分别用不同尿酸浓度〔蒸馏水(对照组)、119、238、476、952μmol/L〕(n=6)干预体外培养的HUVECS 24 h,观察其形态、增殖、培养液中PAI-1蛋白的影响。观察476μmol/L尿酸干预培养时,不同时间(1、3、6、12、24 h)对HUVECs培养液PAI-1蛋白及不同时间(15、30、60、120 min)细胞外信号调节激酶(ERK)1/2磷酸化水平的影响。用ERK1/2通路阻滞剂(PD98059,20μmol/L)阻断尿酸诱导HUVECS分泌PAI-1蛋白。结果与对照组比较,浓度476、952μmol/L尿酸使细胞增殖减少,培养液中PAI-1蛋白增加(P0.05)。浓度为476μmol/L尿酸作用HUVECs不同时间(1、3、6、12、24 h)对PAI-1蛋白的影响呈时间依赖性。不同时间(15、30、60、120 min)促ERK1/2磷酸化水平升高,与0 min组比较(P0.05)。预先给予PD98059(20μmol/L)作用后,尿酸476μmol/L+PD98059(20μmol/L)能阻断PAI-1蛋白生成(P0.05)。结论尿酸抑制HUVECs增生,增加PAI-1蛋白表达,同时增加ERK1/2磷酸化水平,ERK1/2通路阻滞剂PD98059部分抑制尿酸诱导HUVECS分泌PAI-1蛋白,尿酸通过ERK1/2信号通路诱导HUVECS分泌PAI-1蛋白。     

不同条件下尼古丁对致敏大鼠树突状细胞分泌白介素10及白介素12的影响

目的研究不同实验条件尼古丁对致敏大鼠树突状细胞（DC）及白介素10（IL-10）、白介素12（IL-12）表达的影响,从细胞水平探讨尼古丁加重哮喘的免疫学机制。方法制备致敏大鼠模型,培养骨髓来源的DC,接种于6孔培养板中,随机分为对照组及实验组,进行以下研究。①尼古丁作用的浓度依赖性研究：分别用50、100、200、400mg/L的尼古丁孵育细胞,72h后收集各组细胞的上清液;②尼古丁作用的时间依赖性研究：用400mg/L的尼古丁与细胞分别孵育0、4、8、12、24、72h,收集各组细胞的上清液。采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法测定各组细胞上清IL-10和IL-12的浓度。结果①DC与不同浓度尼古丁孵育72h后,200、400mg/L尼古丁组IL-10的表达较对照组均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）;400mg/L尼古丁组IL-12较对照组均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）;②DC与400mg/L的尼古丁分别孵育4、8、12、24、72h,其中12、24、72h组IL-10蛋白均较对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）,12h组IL-12与对照组比较明显升高,72h组IL-12与对照组比较明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论一定浓度的尼古丁可以抑制致敏大鼠DCIL-10及IL-12的表达,并且呈时间依赖性,这可能是吸烟加重和改变哮喘的气道炎症反应的免疫学机制之一。     

姜黄素对脂多糖刺激的肾小管近端上皮细胞分泌的相关炎症因子的影响

目的:本研究旨在观察姜黄素对脂多糖(LPS)刺激下的人肾小管近端上皮细胞分泌的单核细胞趋化因子(MCP-1)及白细胞介素8(IL-8)的表达水平变化,并初步探讨其作用机制. 方法:将肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组(1 ng/ml,100 ng/ml和10μg/ml),姜黄素干预组(LPS 100 ng/ml+姜黄素5 μM或50μM),分别培养4～24h后收集细胞,应用Real-time PCR检测各组细胞MCP.-及IL-8的表达.ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1及IL-8的表达. 结果:在不同浓度的LPS刺激HK-2细胞24h后即可明显升高MCP-1及IL-8的mRNA表达水平,随着LPS浓度(1 ng/ml,100 ng/ml和10 μg/ml)增加,MCP-1 mRNA表达分别上升为对照组的1.74、2.15和14.7倍(P<0.01);IL-8 mRNA表达上升为对照组的2.74、5.4和16.45倍(P<0.01).而以100 ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4～24h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素(5μM和50 μM)均可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1及IL-8 mRNA的表达,且以50μM姜黄素干预组为明显.同时ELISA检测细胞上清液中MCP-1蛋白水平,可见5μM姜黄素组在24h时较相应对照组下降9.5%(P<0.05),而50 μM姜黄素组在8h时即较相应对照组下降19.5%(P<0.01).而在4h和12h时,5μM的姜黄素干预组较相应对照组IL-8的表达下降的11..2%(P<0.05)和7.58%(P<0.01),在50 μM姜黄素干预组则为32.90%和18.79%(P<0.01). 结论:姜黄素可抑制LPS所诱导的肾小管上皮细胞MCP-1及IL-8的表达,提示姜黄素在肾脏炎症过程中具有抑制肾小管上皮细胞炎症因子分泌及潜在抗纤维化作用.     

替米沙坦对高血压大鼠纤溶功能的作用机制

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)促血管内皮细胞和平滑肌细胞合成与分泌纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的受体和受体后信号转导途径以及替米沙坦对高血压大鼠纤溶参数的影响和可能机制.方法 腹主动脉部分缩窄构建高血压大鼠模型,随机分成高血压组和替米沙坦组(3 mg/kg·d)6周,另设假手术组为对照组.检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中Ang Ⅱ含量,血浆与主动脉孵育液中纤溶酶原激活物(t-PA)、PAI-1活性,血管内皮细胞、平滑肌细胞胞外信号调节激酶(ERK)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)蛋白的表达.结果 ①高血压组血浆Ang Ⅱ含量、血浆PAI-1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1 R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.89～0.96,P＜0.01～0.001).主动脉匀浆Ang Ⅱ含量、主动脉孵育液PAI-1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.86～0.96,P＜0.01～0.001).②与高血压组比较,替米沙坦能明显抑制主动脉分泌PAI-1的能力(P＜0.05),降低血浆PAI-1活性(P＜0.05),升高血浆与主动脉孵育液中t-PA活性、t-PA/PAI-1值(P均＜0.05),明显改善纤溶参数.③替米沙坦组ERK和AT1R在血管内皮细胞和平滑肌细胞的表达较高血压组明显减少(P均＜0.05).结论 替米沙坦抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞ERK和AT1 R的表达,抑制Ang Ⅱ引起的PAI-1合成增加,可能是其改善纤溶功能的机制.     

α-硫辛酸对高糖作用下人脐静脉内皮细胞护骨素表达的影响

目的 观察α-硫辛酸对高糖作用下血管内皮细胞护骨素(OPG)mRNA表达的影响.方法 脐静脉内皮细胞株分别在5.5mmol/L葡萄糖、30mmol/L葡萄糖及30mmol/L葡萄糖+不同浓度α-硫辛酸(50、100、200μmol/L)条件下培养48h.取内皮细胞培养上清液,以黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,以硫代巴比妥酸为底物检测丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法检测内皮细胞OPG mRNA表达水平的变化.结果 高糖作用下内皮细胞SOD活性降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01),OPG mRNA表达水平显著上升(P<0.01);以不同浓度α-硫辛酸干预高糖组,SOD活性升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),OPG mRNA表达水平显著下降(P<0.05).结论 α-硫辛酸改善高糖环境下血管内皮细胞的氧化应激状态,下调OPG mRNA的表达水平.     

化瘀通络中药对5/6肾切除大鼠纤溶系统的影响

目的 观察化瘀通络中药肾络通对5/6肾切除大鼠纤溶系统的影响.方法 46只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组、肾络通组.复制5/6肾切除肾衰大鼠模型,采用免疫组织化学及原位杂交方法检测各组大鼠肾组织纤溶酶原激活物组织型(t-PA)、纤溶酶原激活物尿激酶型(u-PA)、纤溶酶原激活物的抑制物-1(PAI-1)及PAI-1 mRNA的表达,并进行病理学检测.结果 模型组t-PA、u-PA的相对含量及ILD值均显著低于假手术组(P＜0.01),而PAI-1及PAI-1 mRNA则显著高于假手术组(P＜0.01);肾络通组、苯那普利组与模型组相比,t-PA、u-PA的相对含量及ILD值均明显升高(P＜0.01或P＜0.05),而PAI-1及PAI-1 mRNA则明显降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 化瘀通络中药肾络通能纠正5/6肾切除大鼠纤溶系统的紊乱,延缓肾脏疾病的进程.