尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的:比较选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果:COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖(P<0.05),并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论:尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

PTPN6 基因对人食管鳞状细胞癌Eca109 和Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（non-receptor protein tyrosine phosphatase 6,PTPN6）基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响。方法：应用qPCR 法检测不同食管鳞癌细胞株（TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2）中PTPN6 mRNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6 质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2,应用qPCR和Wb法检测PTPN6 mRNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell 法检测过表达PTPN6 基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。结果：PTPN6 基因在5 种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调（均P<0.05）。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6 转染后,Eca109 和Yes-2 细胞均高水平表达PTPN6（P<0.05 或P<0.01）;过表达PTPN6 基因后,Eca109 和Yes-2 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制（均P<0.05）。结论：PTPN6 基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。     

食管鳞癌细胞系核苷酸还原酶亚单位M1的表达水平与细胞对吉西他滨敏感性的关系

目的 探讨食管鳞癌细胞系核苷酸还原酶亚单位M1(RRMI)表达水平与细胞对吉西他滨(GEM)敏感性的关系.方法 选用4个人食管鳞癌细胞系Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706,采用Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)枪测各细胞系的RRM1表达水平,采用细胞毒性试验检测各细胞系对GEM的敏感性.以50 nmoL/L GEM持续培养Kyse-450细胞,检测不同时点存活细胞RRM1表达水平的变化.应用RNA干扰技术下调RRM1表达水平后,检测细胞对GEM敏感性的变化.结果 GEM作用48 h,Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706细胞的IC50分别为(0.92±0.17)、(0.48±0.11)、(0.29±0.06)和(0.02±0.01)mmoL/L.RT-PCR和Western blot结果均显示,Eca-109细胞系的RRMI表达水平最高,其次是Kyse-150和Kyse-450,9706细胞系的RRM1表达水平最低.50 nmol/L GEM持续培养Kyse-450细胞后,存活细胞的RRM1水平随着培养时间的延长而逐渐增高.转染RRM1 siRNA的Kyse-450细胞RRMI蛋白的表达水平显著降低,而对GEM的敏感性提高了4.26倍.结论 食管鳞癌细胞系RRM1的表达水平与细胞对GEM的敏感性相关,RRM1表达水平低的细胞对GEM相对敏感.     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

氯离子通道蛋白1调控放射抵抗食管鳞癌细胞放射敏感性的机制

目的:探讨氯离子通道蛋白1(chloride intracellular ion channel 1,CLIC1)对食管鳞癌细胞获得放射抵抗特的影响及作用机制.方法:采用蛋白印记法及逆转录聚合酶链式反应法检测Eca109R50Gy细胞中CLIC1的表达水平.采用CLIC1小分子特异抑制剂IAA-94(indanyloxyacetic acid-94,IAA-94)抑制Eca109R50Gy细胞中CLIC1功能,通过克隆形成试验、流式细胞仪分析对比CLIC1功能抑制前后的细胞存活分数(SF)、细胞凋亡比率及细胞周期分布.结果:Eca109R50Gy细胞中CLIC1在转录水平及蛋白水平均呈现显著高表达(P＜0.001);CLIC1功能抑制组Eca109R50Gy细胞克隆形成能力明显受抑(SFIAA-94 vs SFcontrol,P＜0.001),而细胞凋亡比率显著增高(P＜0.01).CLIC1功能抑制组Eca109R50Gy细胞G2/M期细胞比例显著增加(P＜0.01).结论:CLIC1在放射抵抗的食管鳞癌细胞中高表达并与其获得放射抵抗特有关,抑制CLIC1功能可增强放射抵抗的食管癌细胞对放射线的敏感,其增敏机制与影响细胞周期分布有关.     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

miR-100对食管鳞癌细胞株Ec-109的抑制作用

目的 探讨miR-100对食管鳞癌细胞的调控作用。方法 构建携带GFP的miR-100表达质粒,脂质体转染食管鳞癌细胞株Ec-109。分别利用流式细胞仪、细胞划痕和Transwell实验检测miR-100对细胞周期、凋亡和迁移的调节作用。结果 在食管鳞癌细胞中高表达miR-100可诱导G₁期阻滞,即停留于G₁期的细胞数量增加,进入S和G₂/M期的数量减少;在无血清培养的条件下miR-100的高表达可促进细胞凋亡同时抑制食管鳞癌细胞迁移。结论 miR-100在食管鳞癌细胞株Ec-109中高表达可诱导细胞周期G₁期阻滞、抑制细胞的迁移并促进其凋亡。     

RNA干扰HIF-1α对低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的:观察低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,探讨HIF-1α对Eca109细胞放射敏感性的影响及其可能的分子机制。方法:以常氧组为对照。氯化钴(cobalt chloride,CoCl_2)模拟肿瘤低氧微环境,用RT-PCR检测体外低氧状态下Eca109细胞中HIF-1α和EGFR mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HIF-1α和EGFR蛋白表达水平。Western blot检测RNAi沉默HIF-1α对EGFR蛋白表达的影响、采用流式细胞术检测HIF-1α沉默后,Eca109细胞经放射线照射后的凋亡情况,评价其放射敏感性的变化。结果:与常氧组比较,低氧状态下,Eca109细胞中HIF-1αmRNA表达无明显变化(P0.05),HIF-1α蛋白表达增加。EGFR mRNA表达明显升高(P0.05),EGFR蛋白表达也相应增加。与未转染组和对照组比较,siRNA转染Eca109细胞可有效沉默HIF-1α蛋白在低氧状态下的表达(P0.05),EGFR蛋白的表达水平也明显下调(P0.05)。Eca109细胞在低氧状态下放射敏感性较常氧下明显降低(P0.05)。RNAi沉默HIF-1α可部分逆转低氧造成的Eca109细胞的放射耐受。结论:低氧可上调食管鳞癌Eca109细胞HIF-1α蛋白水平;HIF-1α增加Eca109细胞在低氧状态下的放射抗性,可能与HIF-1α上调EGFR mRNA及蛋白表达有关,有效抑制HIF-1α可增加Eca109细胞的放射敏感性。     

食管鳞癌中lncRNA uc061hsf.1的表达及对Eca109、KYSE450细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨uc061hsf.1基因在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中表达及其对Eca109与KYSE450细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法:本文对34例ESCC组织及癌旁组织进行RT-PCR检测，分析uc061hsf.1的表达与ESCC临床病理特征关系；通过在Eca109与KYSE450细胞系中沉默和上调uc061hsf.1表达，分别检测两组细胞增殖、凋亡、侵袭能力的变化。结果:uc061hsf.1在ESCC组织中低表达，其表达水平在分化差、淋巴结转移的患者中更低（P均＜0.05），与年龄、性别等无明显相关性；沉默uc061hsf.1可导致Eca109与KYSE450细胞系增殖及侵袭能力均明显升高，细胞凋亡无明显变化；相反，上调uc061hsf.1在这两组细胞系中的表达，则两组细胞系的增殖和侵袭能力均明显降低，且细胞凋亡率明显增加。结论:uc061hsf.1沉默可促进食管鳞癌Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭能力；而过表达uc061hsf.1能够抑制Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭，且促进细胞凋亡。     

CoCl2诱导缺氧对Eca109细胞细胞周期及放射敏感性的影响

Objective:To investigate the change of the cell cycle,apoptosis and radiosensitivity effect by CoCl2 induced hypoxia in esophageal cancer line Eca109 cells in vitro.Methods:The hypoxia culture model induced by 150 microM CoCl2 was established.The cell cycle and apoptosis were measured with flow cytometry (FCM).The radiosensitivity was analysized with clonogenic assay after irradiation alone or combined with hypoxia in Eca109 cells in vitro.Results:Eca109 cells were treated with 150 microM CoCl2 for 24 h,cell cycle arrest in G0/G1 phase increase and decreasing arrest in S phase with longer of hypoxiac time (0-24 h),the other rate of cell cycle and apoptosis did not change obviously.The G2/M phase block was arrested obviously in radiation alone comparing with the hypoxia plus irradiated group,apoptosis did not occur in Eca109 cell line following irradiation.The DO value and cell surviving fraction of Eca109 cell was 2.48 Gy,2.44 Gy and 97.33%,96.33% in hypoxia and control group,respectively;the Dq value of Eca109 cell was 2.89 Gy,0.52 Gy,the cell surviving fraction after radiation with 4 Gy was 48.3%,21.7% in hypoxia and control group,respectively.The hypoxia decreased the radiosensitivity in esophageal cancer Eca109 cells with clonogenic assay.Conclusion:Hypoxia induced by CoCl2 influences radiosensitivity of Eca109 cell through regulating cellular proliferation rates.     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

微小RNA 320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究#br#

目的探讨微小RNA 320（miR 320）对食管鳞癌（ESCC）放射敏感性的影响及可能机制。 方法采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE 150、TE 13和 Eca 109中miR 320和叉头框蛋白M1（FOXM1）的表达水平。采用脂质体法将miR 320 模拟物（mimics）及其阴性对照（NC）转染至Eca 109细胞,分为转染组和对照组。QPCR和Western blotting检测miR 320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR 320对FOXM1的调控作用。克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;Annexin Ⅴ FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl 2和cleaved caspase 3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR 320与FOXM1之间的靶向关系。 结果QPCR检测显示,Eca 109细胞中miR 320相对表达量最低,FOXM1相对表达量最高,故选取该细胞株进行后续实验。转染48 h后,转染组miR 320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜005）。与对照组相比,转染组Eca 109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义（P＜005）;转染组照射处理后1、6、24 h γH2AX焦点数增加,差异有统计学意义（P＜005）。转染组Eca 109细胞的凋亡率高于对照组（P＜005）。与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase 3表达增加,XIAP和Bcl 2表达降低,差异有统计学意义（P＜005）。在野生型 FOXM1 3’UTR质粒转染细胞中,miR 320 mimics转染组Eca 109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组（P＜005）;而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义（P＞005）。 结论miR 320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关     

lncRNA NUP50-AS1 在食管鳞癌组织中的表达及其对Eca109 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）NUP50-AS1 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer, ESCC）组织及细胞株中的表达及其对人食管癌Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取自2015 年1 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库的49 例ESCC手术患者的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR检测ESCC癌组织、癌旁组织及5 种食管癌细胞株（TE1、TE13、Eca109、Kyse150 和Kyse170）中NUP50-AS1 表达水平。shRNA 转染NUP50-AS1 后,选用sh2 -NUP50-AS1 进行后续功能实验。采用MTS法、克隆形成实验检测敲减NUP50-AS1 表达对Eca109 细胞增殖的影响,划痕实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞迁移的影响,Transwell 小室实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞侵袭的影响。结果：NUP50-AS1 在ESCC组织中的相对表达量显著高于癌旁组织(2.003±0.870 vs 1.000±0.000,P<0.05）;NUP50-AS1 在ESCC组织中的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关（均P<0.01）,NUP50-AS1 在5 株食管癌细胞系中相对表达量均明显上调（P<0.05）,其中Eca109 细胞的NUP50-AS1 表达水平最高。转染后,sh2-NUP50-AS1 转染组干扰效率最高,敲低NUP50-AS1 可明显抑制Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论：ESCC组织中lncRNA NUP50-AS1 表达明显高于癌旁组织,且与癌症分期和淋巴结转移有关,敲减其表达明显抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,NUP50-AS1 的高表达可能与ESCC的发生发展密切相关。     

EZH2和H3K27me3的表达对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:通过转染Zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)过表达或者敲低载体,探讨EZH2和Lys27位点三甲基化组蛋白H3(histone H3 methylated Lys27,H3K27me3)对食管麟状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:应用实时荧光定量PCR、Western blotting法检测ESCC细胞株KYSE30、KYSE170、TE1、Eca109中EZH2 mRNA水平,以及ESCC细胞过表达或者敲低EZH2对H3 K27me3表达水平的影响.用划痕实验及Transwell侵袭实验分析过表达或者敲低EZH2后ESCC细胞的迁移侵袭能力.用实时荧光定量PCR法分析ESCC细胞过表达及敲低EZH2对MMPs mRNA水平的影响.结果:食管癌Eea109及TE1细胞中EZH2和H3K27me3 mRNA和蛋白水平明显高于KYSE30及KYSE170细胞(P＜0.05).过表达EZH2的食管癌KYSE30及KYSE170细胞H3K27me3蛋白的表达水平显著升高(P＜0.05),敲低EZH2后Eca109及TE1细胞H3 K27 me3蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).过表达EZH2后,KYSE30及KYSE170细胞的穿膜数目明显增多[(281.33±4.10)、(241.67 ±4.04) vs(132.00 ±4.00)、(105.33 ±3.51)个,均P＜0.05]、迁移距离明显增大[(63.6±1.2)、(62.5±2.5)vs (23.0±2.3)、(21.2±1.0) μm,P＜0.05].敲低EZH2后Eca109及TE1细胞的穿膜数目显著减少(均P＜0.05),转染shEZH2后Eca109及TE1细胞迁移的距离明显减小(均P＜0.05).结论:EZH2可增加靶基因启动子上组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化,并增强ESCC细胞的迁移和侵袭能力.     

沉默长链非编码RNA HOTAIR对直肠腺癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA HOTAIR对直肠腺癌细胞株SW480和HCT116细胞增殖、放射敏感性和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量PCR检测直肠腺癌细胞株中lncRNA HOX转录反义RNA (lncRNA HOTAIR)的表达水平。应用RNA干扰技术沉默HOTAIR的表达,分析其在细胞增殖、细胞放射敏感性和凋亡中的作用。对细胞株进行梯度剂量照射后,检测其放射敏感性和细胞凋亡情况。结果 直肠腺癌细胞株SW480和HCT116中的lncRNA HOTAIR的相对表达水平明显高于直肠黏膜细胞系。克隆形成试验结果显示,与对照siRNA转染组比较,在细胞株SW480和HCT116中siRNA-HOTAIR的放射增敏比分别为1.58和1.33。沉默直肠腺癌细胞中的lncRNA HOTAIR可增加直肠腺癌SW480细胞株的凋亡率及放射敏感性。结论 直肠腺癌中lncRNA HOTAIR的表达水平与细胞放射敏感性之间存在相关性,其有可能是预测直肠腺癌细胞放射敏感性的指标之一。放射联合应用siRNA-HOTAIR对直肠腺癌细胞株SW480和HCT116有抑制细胞增殖、诱导凋亡和放射增敏的作用。