儿童骨肉瘤患者保留骨骺的灭活再植术

目的探讨在有效大剂量化疗前提下的保留骨骺灭活再植术的可行性。方法自1999年开始在MMIA方案(由甲氨喋呤、异环磷酰胺、阿霉素组成)的有效大剂量化疗保护下对2例儿童骨肉瘤患者行保留骨骺的灭活再植术。术前严格遵循新辅助化疗的原则,行2个疗程的MMIA化疗。化疗后患者疼痛消失,肿块缩小,AKP、LDH 明显下降,X线片及MR示左股骨下端病变局限,边缘清晰,硬化及骨化明显,骨骺未受侵蚀。术后继续应用2疗程化疗。结果2例患者术后切口均一期愈合。随访分别为3年和4年,无复发和转移,肢体功能恢复理想。结论保留骨骺的灭活再植术是治疗儿童骨肉瘤的一种新方法,其在不增加局部复发率的前提下避免术后双侧肢体不等长,并改善了术后患者的肢体功能。但严格掌握手术适应证是至关重要的,否则将导致灾难性后果。     

儿童骨肉瘤患者保留骨骺的灭活再植术(英文)

目的探讨在有效大剂量化疗前提下的保留骨骺灭活再植术的可行性。方法自1999年开始在 MMIA 方案(由甲氨喋呤、异环磷酰胺、阿霉素组成)的有效大剂量化疗保护下对2例儿童骨肉瘤患者行保留骨骺的灭活再植术。术前严格遵循新辅助化疗的原则,行2个疗程的 MMIA 化疗。化疗后患者疼痛消失,肿块缩小,AKP、LDH明显下降,X 线片及 MR 示左股骨下端病变局限,边缘清晰,硬化及骨化明显,骨骺未受侵蚀。术后继续应用2疗程化疗。结果 2例患者术后切口均一期愈合。随访分别为3年和4年,无复发和转移,肢体功能恢复理想。结论保留骨骺的灭活再植术是治疗儿童骨肉瘤的一种新方法,其在不增加局部复发率的前提下避免术后双侧肢体不等长,并改善了术后患者的肢体功能。但严格掌握手术适应证是至关重要的,否则将导致灾难性后果。     

肢体骨肉瘤瘤段灭活再植的术后并发症

目的：分析骨肉瘤患接受瘤段灭活再植的术后并发症，评价该术式的临床价值。方法：1986年11月到1989年7月，39例肢体骨肉瘤患行瘤段灭活再植术，平均随访43．5个月。瘤段灭活方法为液态氮冷冻24例，^60Co照射13例，煮沸2例。结果：（1）29名患发生了41例次的术后并发症，发生率为74．4％。11名患因术后感染、肿瘤局部复发等原因而截肢。术后总评优良率为41．0％。（2）瘤段灭活再植术后主要并发症的发生率：肿瘤局部复发33．3％，术后感染15．4％，皮瓣坏死7．7％，骨折25．6％，骨不连10．3％。结论：采用液态氮冷冻、^60Co照射、煮沸等方法行瘤段灭活再植，术后并发症发生率高，患肢体功能较差。     

保留骨骺灭活再植术治疗儿童股骨远端骨肉瘤的远期疗效

目的探讨保留骨骺灭活再植术的远期临床疗效及并发症的治疗。方法回顾10年间随访超过5年的5例股骨远端骨肉瘤患者,男1例,女4例。平均年龄9．2岁。MR分型：I型3例,II型2例。1例合并病理骨折。治疗方法均采用术前化疗2疗程＋保留骨骺灭活再植手术＋术后化疗。结果5例患者平均随访82个月（60～126个月）。无复发、转移和死亡。3例发生灭活骨骨折,均再次行植骨内固定术,再次术后半年骨愈合良好。患膝屈曲≥110°3例,90°1例,70°1例。双下肢等长1例,患肢短缩〈2cm3例,8cm1例。肢体功能评分为13～30分,平均25．6分。结论保留骨骺的灭活再植术是一种可行的手术方法,可有满意的临床疗效。关节活动受限和灭活骨骨折是该手术的最常见远期并发症。     

选择性个案化疗与瘤段骨超声灭活再植治疗骨肉瘤—临床前瞻性随？…

为实施手术前后多种有效药物的个案化疗，并增加瘤段灭活的彻底性。缩短其术中灭活时间，本文进行了选择性个案化疗与瘤段骨超声灭活再植治疗骨肉瘤临床前瞻性随机对照研究。结果表明，观察组瘤段骨术中灭活时间明显缩短，随访期内无瘤生存率高于对照组」手术前后固定方案化疗加常规酒精灭活再植术；经Ｘ＾２检验Ｐ〈０．０５」。     

骨肉瘤瘤段灭活方法

骨肉瘤是一种最常见的恶性骨肿瘤,恶性程度高,且容易复发和转移,死亡率高,致残率高,70年代以来,随着新辅助化疗在临床的开展,患者的保肢率和生存率都大幅度提高,文献报道目前5年生存率最高能达到79%。当前骨肉瘤的治疗主要以保肢术结合大剂量化疗为主。其中保肢术又以3种方法最多，即肿瘤切除灭活再植、人工假体置换及同种异体骨移植，国外主要以后两种方法为主，我国由于骨库不多且因经济等各方面的原因，     

选择性个案化疗与瘤段骨超声灭活再植治疗骨肉瘤——临床前瞻性随机对照研究

为实施手术前后多种有效药物的个案化疗，并增加瘤段骨灭活的彻底性，缩短其术中灭活时间，本文进行了选择性个案化疗与瘤段骨超声灭活再植治疗骨肉瘤临床前瞻性随机对照研究。结果表明，观察组瘤段骨术中灭活时间明显缩短（约２０分钟），随访期内（２．５年）无瘤生存率（６５．０％）高于对照组［手术前后固定方案化疗加常规酒精灭活再植术（３３．３％）；经χ２检验Ｐ＜０．０５］。其术后合并症、局部复发及转移或死亡的发生率较对照组减低，但无统计学差异（Ｐ＞０．０５）；术后患肢功能评定结果两组间无差异。提示选择性个案化疗与瘤段骨超声灭活再植术是一种方法简便、疗效较好、经济节俭的骨肉瘤保肢综合治疗的有效方法之一。     

医用灭菌剂量超声波对人骨肉瘤组织的灭活作用

目的研究医用灭菌剂量超声波在不同介质和作用时间内，对人骨肉瘤组织的杀伤和灭活作用。方法采用瘤组织碱性磷酸酶染色分级计数和瘤细胞存活度计数方法，观测１０００Ｗ，１８０ｋＨｚ超声波在生理盐水（实验组Ⅰ）或９５％酒精溶液（实验组Ⅱ）中０～３５ｍｉｎ内对新鲜人骨肉瘤组织标本的杀伤和灭活作用，并与未用超声波的生理盐水（阴性对照组）和９５％酒精（参比对照组）进行比较。结果超声作用２０ｍｉｎ时，置于生理盐水中的瘤组织标本，其酶染色较淡，范围较小，平均瘤细胞存活数明显减少（与阴性对照组比较，Ｐ＜００１）；同时置于９５％酒精溶液中的瘤组织标本，基本无酶染色可见，且几乎无存活瘤细胞（与阴性和参比对照组比较，Ｐ＜０００１～００１）。瘤组织标本在不同溶液介质中超声作用和密闭静置２０ｍｉｎ时，其平均瘤细胞存活数依次为：阴性对照组＞实验组（Ⅰ）＞参比对照组＞实验组（Ⅱ）（组间比较，Ｐ＜０００１～００５）。结论医用灭菌剂量超声波在生理盐水中一定时限内对人骨肉瘤组织具有直接杀伤和灭活作用，并可促进９５％酒精溶液对瘤组织的灭活作用。     

microRNA-192 抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响*

目的：探讨miR-192 抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_ 9607细胞增殖和凋亡的影响。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_ 9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-192 抑制物（hsa-miR-192 inhibitors ）抑制SOSP_ 9607细胞内miR-192 的活性。结果：与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_ 9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性（P<0.01）。 随着浓度从50nmol/L 逐渐增加至200nmol/L ,抑制率逐渐增高（P<0.01）。 与对照组相比,实验组细胞周期G0/G1 细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S 期细胞比例显著减少（P<0.01）。 实验组凋亡率（13.6 ± 2.1）% 与阴性对照组凋亡率（7.1 ± 0.5）% 相比明显增高（P<0.01）。 结论：miR-192 抑制物通过抑制SOSP_ 9607细胞中miR-192 的活性对SOSP_ 9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用,可能成为骨肉瘤生物治疗的新靶点。     

骨肉瘤保肢手术的几个问题探讨

骨肉瘤是最常见的骨原发恶性肿瘤，20世纪70年代以来，化疗大大提高了骨肉瘤患者的生存率；新辅助化疗的开展，不仅对微转移灶有效，同时使原发灶变小、边界清楚，有利于保肢手术的进行。目前90％的肢体骨肉瘤可以选择保肢手术，同时保肢手术的技术也快速发展。现对保肢手术的几个热点问题做一探讨。     

TRAIL联合三氧化二砷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：研究TRAIL和三氧化二砷共同作用于骨肉瘤OS732细胞对其产生的的杀伤作用,来探寻临床上骨肉瘤的治疗新策略。方法：选取骨肉瘤OS732细胞作为研究对象,将TRAIL及三氧化二砷分别独自或者共同作用于骨肉瘤细胞,对骨肉瘤细胞的杀伤作用通过MTT法来测定,以抑制率的形式体现出来,并在倒置显微镜、荧光显微镜下分别观察肿瘤细胞的形态改变。结果：50ng/ml的TRAIL与2μmol/L三氧化二砷共同作用于骨肉瘤细胞24小时后,肿瘤细胞抑制率为51.32%±4.71%,此作用明显强于单独应用TRAIL（50ng/ml）时的9.85%±0.97%及单独应用三氧化二砷（2μmol/L）时的20.36%±3.84%（P〈0.01）。从细胞形态结构的改变上体现出此种杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的。结论：TRAIL与三氧化二砷可以协同杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的。     

PUMA通过线粒体途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:研究p53上调凋亡调控因子(PUMA)对骨肉瘤细胞凋亡的影响及机制。方法:在骨肉瘤细胞F5M2中转染PUMA过表达载体,同时转染对照阴性载体,以qRT-PCR和Western blot法测定转染后细胞中PUMA表达情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,以Western blot法测定线粒体和胞浆中细胞色素C（Cyt C）蛋白表达情况,同时检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水 解酶3（Cleaved Caspase-3）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:转染PUMA过表达载体后的F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平升高,而转染对照阴性载体对F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平没有影响。过表达PUMA后的F5M2细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电位下降,线粒体中Cyt C蛋白水平降低,胞浆中Cyt C蛋白水平升高,同时细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,与未做转染的F5M2细胞比,差异有统计学意义（P<0.05）。转染对照阴性载体后的细胞凋亡率、线粒体膜电位、线粒体和胞浆中Cyt C蛋白水平、Cleaved Caspase-3蛋白水平、Cleaved Caspase-9蛋白水平与未做转染的F5M2细胞相比没有明显变化（P>0.05）。结论:PUMA通过促进线粒体中Cyt C释放,降低线粒体膜电位,激活Caspase-3诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

不同温度对HOS——8603细胞株的热灭活

目的：为了探索临床热灭活恶性骨肿瘤细胞的适宜温度。方法：应用MTT法测定SDH活性及肿瘤干细胞集落形成法对HOS-8603细胞株进行体外热灭活(42℃-50℃)实验研究。结果：45℃60min或50℃10min以上时，HOS-8036已基本失去细胞集落形成能力。SDH的活性随温度升高及时间延长面下降，与细胞集落形成能力有较好的相关性。结论；以上研究提示临床上无需采用煮沸方法．灭活温度在50℃左右即可将肿瘤细胞杀灭。     

足叶乙甙联合氨甲喋呤治疗骨肉瘤的实验研究

目的探讨足叶乙甙联合氨甲喋呤治疗骨肉瘤的理论和实验依据,为临床设计新的化疗方案奠定基础。方法应用MTT比色法测定足叶乙甙及氨甲喋呤对OS-732和R-OS-732细胞活性的影响,比较两种化疗药物对骨肉瘤细胞的敏感性。应用免疫组化检测TOPO-Ⅱ在骨肉瘤中的表达。临床在采用日本国立癌中心化疗方案的基础上联合应用足叶乙甙治疗骨肉瘤5例,随访2～5年。结果氨甲喋呤的IC50值,OS-732为596.85mg/ml±0.85;R-OS-732为5170.965mg/ml±1.45(OS-732与R-OS-732相比差异显著P<0.05)。而足叶乙甙的IC50值,OS-732O1.25ug/ml±0.04;R-OS-732为1.45ug/ml±0.03(OS-732与R-OS-732相比差异不显著P>0.05)。TOPO-Ⅱ在骨肉瘤术前化疗组明显高于术前无化疗组,分别为60%(3/5)和40%(2/5)。经足叶乙甙联合氨甲喋呤治疗的5例骨肉瘤均存活,最长存活5年,其他仍在随访中。结论足叶乙甙联合氨甲喋呤治疗骨肉瘤是有效的,尤其是对于复发病例效果会更好。     

体外RNA干扰抑制Ezrin表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:细胞膜-细胞骨架联接蛋白(埃兹蛋白,Ezrin)参与了许多细胞的功能,包括细胞黏附、细胞运动以及细胞的生存.最近的许多研究表明Ezrin参与调控了肿瘤的侵袭与转移.然而,在骨肉瘤中,Ezrin所扮演的重要角色还没有被很清晰的阐明.本研究拟探讨Ezrin蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:以骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对Ezrin编码基因设计小干扰RNA片段,重组其shRNA(short hairpin RNA)表达载体转染入细胞,筛选稳定表达的克隆,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-Blot)方法检测转染后Ezrin的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化.结果:RT-PCR和Western blot检测显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著下调作用.骨肉瘤细胞生长速度减慢,处于分裂期的细胞比例有明显的下降,由25.05%下降到18.36%,而G1期细胞比例则由60.57%上升到67.65%.穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少,由35.9±5.6减少为22.5±2.8(P＜0.01).结论:Ezrin在骨肉瘤的增殖和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子.     

TRAIL联合多柔比星作用于骨肉瘤的实验研究

背景与目的：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是近年发现的肿瘤坏死因子家族新成员，显著特点是它仅诱导肿瘤细胞凋亡，对正常细胞无毒性作用。TRAIL可作为骨肉瘤靶向治疗的潜在有效药物，但单独使用时已被证明作用有限。而多柔比星可对肿瘤细胞产生广泛的生化效应，为细胞周期非特异性药物，有强烈的细胞毒性作用，可嵌入DNA而抑制核酸的合成导致细胞死亡。本研究旨在探讨TRAIL联合低剂量化疗药物多柔比星对骨肉瘤MG-63细胞的凋亡诱导效应。方法：MTT法测定TRAIL和多柔比星对MG-63细胞单独及联合作用的细胞凋亡率，DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：1000ng／ml的TRAIL与4．3μmol／mL多柔比星合用于MG63细胞24h时后，测细胞抑制率为36．65％，明显高于单用TRAIL（1000ng／ml）时的21．67％及单用多柔比星（4．3μmol／ml）时的10.25％（P〈0．01）。细胞超微结构观察及凋亡率测定均显示，合用比单用有更多的骨肉瘤细胞凋亡。TRAIL联合应用多柔比星能显著增强对MG-63的杀伤、抑制增殖及诱导凋亡作用，明显高于单独应用TRAIL组或多柔比星组（P〈0．05），并且这种作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强。结论：TRAIL是一种有望应用于临床的新型生物制剂。TRAIL与多柔比星对诱导骨肉瘤细胞凋亡具有协同作用，能高效杀灭骨肉瘤细胞。     

Muramyl tripeptide (mifamurtide) for the treatment of osteosarcoma

Osteosarcoma is an ultraorphan disease. There are approximately 1000 new patients diagnosed with osteosarcoma each year in the USA and Europe. Current treatment for osteosarcoma utilizes multiagent chemotherapy and surgical resection of all clinically detectable disease. Current treatments for osteosarcoma achieve 60–70% event-free survival (EFS) for patients with localized disease and approximately 20% EFS for patients who present with metastasis. These results have been stable for two decades. The addition of muramyl tripeptide (mifamurtide) to chemotherapy resulted in a trend towards improved EFS and a one-third reduction in the risk of death from osteosarcoma. Mifamurtide has been approved in Europe for the treatment of newly diagnosed osteosarcoma in combination with chemotherapy.     

CXCR7在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

目的：探讨趋化因子受体7（CXCR7）在骨肉瘤组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化检测48例骨肉瘤组织标本、10例骨软骨瘤组织中 CXCR7的表达,分析其表达与患者临床病理参数之间的关系。结果：CXCR7在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织的阳性表达率是分别为75％和20％,差异具有统计学意义。CXCR7的表达与临床分期、有无转移密切相关（P ＜0．05）,与性别、年龄及肿瘤分化程度无明显关系（P ＞0．05）。结论：CXCR7在介导骨肉瘤侵袭及转移过程中可能起重要作用,有望作为骨肉瘤治疗的分子靶点。