FL联合TPO体外培养AC133+细胞表面标记的变化

目的:探讨脐血造血干/祖细胞的体外扩增.方法:免疫磁珠法分离纯化脐血AC133+细胞,在细胞因子FLT3配体、血小板生成素作用下,体外扩增,检测有核细胞扩增的倍数.采用流式细胞仪分析细胞表面标志的变化.结果:FLT3联合血小板生成素体外培养2周.有核细胞扩增(18±8)倍.CD34细胞扩增2.8倍,AC133+未获扩增,CD34细胞纯度由(56±23)%下降到(8±1)%,AC133+细胞由85%下降到(0.1±0.1)%.随着体外培养时间延长至4周,有核细胞,CD34+进一步扩增.分别扩增475倍和17倍.但细胞随之发生分化,CD34+细胞占有核细胞中的比例下降至2%,AC133+细胞消失.CD45细胞上升到1.3%.结论:FL联合TPO长期培养AC133+细胞能使CD34细胞扩增.     

IL-6/sIL-6R对人脐血CD34+细胞体外扩增的作用

背景和目的:造血干细胞具有自我更新、多向分化与重建长期造血的潜能,因此,造血干细胞广泛应用于干细胞移植、免疫治疗、基因治疗等领域.胎儿脐带血中富含造血干细胞,但单份脐带血中造血干细胞的数量有限,不能充分满足临床和科研需要,因此在体外培养使脐带血干/祖细胞数量扩增的研究日益受到重视.已知一些细胞因子可以在体外培养中使脐血干/祖细胞大量扩增.新近发现IL-6/sIL-6R(可溶性IL-6受体)或其融合蛋白可促使脐带血CD34+细胞中CD34+gp130+IL-6R-细胞亚群在体外培养中大量扩增.本实验旨在观察IL-6/sIL-6R在脐带血CD34+细胞体外扩增中的作用,并探讨合适细胞因子组合.方法:脐血CD34+细胞用Mini MACS分离,然后在含有不同细胞因子组合的液体培养基中体外培养7天或14天,培养前后分别进行有核细胞计数、用FCM(流式细胞术)测定CD34+细胞比例计算CD34+细胞总数及进行CFU-GM集落培养.根据不同细胞因子组合分为空白对照组,SCF组,SCF+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL组.结果:空白对照组和SCF组CD34+细胞数量在培养7天或14天后明显下降.SCF+IL-6/sIL-6R组培养7、14天分别使有核细胞及CD34+细胞绝对数扩增(7.1±2.4)倍、(39.0±14.0)倍及(1.8±0.7)倍、(4.8±2.4)倍;SCF+FL+IL-6/sIL-6R组(16.5±5.7)倍、(110.0±28.0)倍及(3.5±1.5)倍、(10.2±4.2)倍;SCF+FL组(17.3±3.8)倍、(104.0±21.0)倍及(3.6±2.1)倍、(8.4±3.5)倍.上述三组与对照组及SCF组差异均有显著性(P＜0.01),其中SCF+FL+IL-6/sIL-6R组和SCF+FL组扩增效果优于SCF+IL-6/sIL-6R组(P＜0.01),但是SCF+FL+IL-6/sIL-6R组和SCF+FL组之间差异无显著性(P＞0.05).增加sIL-6R浓度,当sIL-6R浓度为400 ng/ml时,细胞培养7天,SCF+FL+IL-6/sIL-6R组分别使有核细胞及CD34+细胞绝对数扩增(24.0±4.8)倍、(5.6±1.2)倍,优于SCF+FL组(P＜0.05).结论:IL-6/sIL-6R可以和SCF、FL产生协同作用,使人脐血CD34+细胞在体外扩增、并维持其分化潜能.但这种协同作用对sIL-6R的浓度存在一定依赖性.     

IL-6/sIL-6R对人脐血CD34+细胞体外扩增的作用

背景和目的:造血干细胞具有自我更新、多向分化与重建长期造血的潜能,因此,造血干细胞广泛应用于干细胞移植、免疫治疗、基因治疗等领域.胎儿脐带血中富含造血干细胞,但单份脐带血中造血干细胞的数量有限,不能充分满足临床和科研需要,因此在体外培养使脐带血干/祖细胞数量扩增的研究日益受到重视.已知一些细胞因子可以在体外培养中使脐血干/祖细胞大量扩增.新近发现IL-6/sIL-6R(可溶性IL-6受体)或其融合蛋白可促使脐带血CD34+细胞中CD34+gp130+IL-6R-细胞亚群在体外培养中大量扩增.本实验旨在观察IL-6/sIL-6R在脐带血CD34+细胞体外扩增中的作用,并探讨合适细胞因子组合.方法:脐血CD34+细胞用Mini MACS分离,然后在含有不同细胞因子组合的液体培养基中体外培养7天或14天,培养前后分别进行有核细胞计数、用FCM(流式细胞术)测定CD34+细胞比例计算CD34+细胞总数及进行CFU-GM集落培养.根据不同细胞因子组合分为空白对照组,SCF组,SCF+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL组.结果:空白对照组和SCF组CD34+细胞数量在培养7天或14天后明显下降.SCF+IL-6/sIL-6R组培养7、14天分别使有核细胞及CD34+细胞绝对数扩增(7.1±2.4)倍、(39.0±14.0)倍及(1.8±0.7)倍、(4.8±2.4)倍;SCF+FL+IL-6/sIL-6R组(16.5±5.7)倍、(110.0±28.0)倍及(3.5±1.5)倍、(10.2±4.2)倍;SCF+FL组(17.3±3.8)倍、(104.0±21.0)倍及(3.6±2.1)倍、(8.4±3.5)倍.上述三组与对照组及SCF组差异均有显著性(P＜0.01),其中SCF+FL+IL-6/sIL-6R组和SCF+FL组扩增效果优于SCF+IL-6/sIL-6R组(P＜0.01),但是SCF+FL+IL-6/sIL-6R组和SCF+FL组之间差异无显著性(P＞0.05).增加sIL-6R浓度,当sIL-6R浓度为400 ng/ml时,细胞培养7天,SCF+FL+IL-6/sIL-6R组分别使有核细胞及CD34+细胞绝对数扩增(24.0±4.8)倍、(5.6±1.2)倍,优于SCF+FL组(P＜0.05).结论:IL-6/sIL-6R可以和SCF、FL产生协同作用,使人脐血CD34+细胞在体外扩增、并维持其分化潜能.但这种协同作用对sIL-6R的浓度存在一定依赖性.     

纯化的自体CD34~+细胞移植治疗恶性血液病临床对照观察

 目的　分析CD34+ 纯化自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法　 11例病人进行了CD34+ 纯化自体造血干细胞移植 ,8例患者进行了未分选的自体造血干细胞移植 ,动员方案为CTX+Vp 16联合G CSF。CD34+ 细胞分选采用CliniMACS系统。结果　分选后CD34+ 细胞纯度达到(88.99± 6 .88) % ,回收率达到 (6 9.0 6± 17.0 7) %。 11例分选患者感染率为 (5 / 11例 ) ,复发率为 (1/ 11例 ) ,死亡率为 (3/ 11例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间为 (11± 1)天 ,血小板 >2 0× 10 9/L为(13± 3)天 ,8例未行CD34+ 分选患者的感染率 (4/ 8例 ) ,复发率为 (3/ 8例 ) ,死亡率为 (5 / 8例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间 (11± 1)天和血小板 >2 0× 10 9/L(14± 4 )天。结论　利用CliniMACs系统体外进行外周血CD34+ 细胞的富集与纯化纯度、回收率均满意 ,自体移植后造血功能重建顺利 ;与对照相比造血重建时间、感染率...     

脐血造血干/祖细胞体外扩增实验研究

目的:探讨人脐血造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSC/HPC)在适合临床移植条件下体外扩增以获得理想的造血干/祖细胞数量的最佳细胞因子组合及扩增时间,为脐血经体外扩增后成为高体重受者克服脐血移植细胞数量不足及缩短植入时间提供客观指标。方法:采集脐血4份,分离单个核细胞(mononuclear,MNC),免疫磁珠分选(MiniMACS)CD+34细胞,分别在细胞因子组合为A:SCF+FL+TPO、B:SCF+FL+TPO+IL蛳3及C:SCF+FL+TPO+G蛳CSF支持的无血清、无基质的液体培养基中扩增培养14 d,收集扩增前、扩增后7 d及14 d的细胞进行细胞表型分析、半固体集落培养及端粒酶活性分析。结果:在含细胞因子IL蛳3组扩增培养7 d及14 d,均获得了总有核细胞数(total nucleated cells,TNC)及集落形成细胞(colony蛳forming cell,CFC)最大的扩增倍数。扩增7 d,IL蛳3组的CD+34细胞扩增倍数为(10.11±7.21 )倍,较其他两组稍低,但无统计学意义;三组CD+33细胞、CD+41细胞、CD+71细胞也得到了较大程度的扩增,IL蛳3组高于其他两组;3组扩增后的细胞端粒酶活性均上调,7 d时A值达最高,IL蛳3组低于G蛳CSF组(P =0.008)。随着扩增时间的延长,扩增后的细胞端粒酶活性下降;CD+34细胞占TNC的比例也明显下降,部分定向祖细胞的比例也出现先升高后     

脐血CIK细胞的体外扩增特性研究

目的动态观察脐血CIK细胞体外扩增特性及其表面抗原变化,并对其细胞毒活性进行检测。方法提取健康足月产妇的胎儿脐带血单个核细胞,第0天加入rh-IFN-γ,第1天加入rhIL-2、抗CD3单克隆抗体来诱导培养CIK细胞,以后每3d更换培养液1次,并补加rhIL-2及抗CD3McAb。用流式细胞仪动态检测培养物的免疫表型变化,同时进行细胞计数,并使用MTT法检测各阶段脐血CIK细胞的细胞毒活性。结果脐血CIK细胞在培养2￣3周后大量增生,扩增约(64.4±16)倍,其中CD3+CD5+6细胞扩增约900倍,是CIK的主要效应细胞,且CD+3CD+8的T细胞达(74.7±10.42)%,CD2+5细胞比例也明显增加,而CD3+4细胞比例却减少。另外CD+3CD1+6CD5+6细胞比例升高最显著;脐血CIK细胞对白血病细胞株K562,HL-60及原代白血病细胞有较高的杀伤活性。结论脐血单个核细胞在体外可以被培养为CIK细胞,且扩增潜能极大,扩增倍数极高,细胞毒活性强,脐血CIK细胞有望应用于恶性肿瘤的生物免疫治疗。     

体外扩增的脐血细胞移植BABL/c小鼠的实验研究

目的探讨体外扩增后脐血单个核细胞(CBMC)的应用价值。方法随机分组的BABL/c小鼠经亚致死量照射后,每组分别由尾静脉注入新鲜CBMC悬液、不同细胞因子组合(TPO+FL+IL-6、TPO+FL+IL-6+IL-3)扩增后的CBMC悬液、脐血全血和生理盐水。比较各组小鼠的存活率及造血恢复情况,并应用PCR和免疫组化方法观察小鼠体内人源细胞植入情况。结果扩增前后CBMC均可在BABL/c小鼠体内植入并重建造血功能,且存活率与植入率无显著性差异(P>0.05)。实验组造血恢复情况优于对照组。含IL-3的细胞因子组合对CBMC的扩增效果(8.96±0.52倍)优于不含IL-3者(6.28±0.16倍)(P<0.01)。结论体外扩增后CBMC数量显著增加,且保持了其重建造血功能及植入潜能,比新鲜的CBMC有更大的应用价值。     

应用C1iniMACS细胞分选系统纯化自体外周血干细胞的探讨

目的 探讨应用CliniMACS细胞分选系统纯化自体外周血干细胞的效果。方法 4例非霍奇金淋巴瘤患者,经Vp-16+G-CSF动员后,采集外周血中造血干细胞,并用CliniMACS细胞分选系统作干细胞纯化分选,3例患者作2次采集后行1次分选,1例患者经3次采集后作2次分选。通过单个核细胞计数及流式细胞术测定CD34+细胞,分析纯化效果。结果 4例患者进行7例次干细胞采集,循环量6000～8 000ml,采集前体内CD34+细胞数为每千克体重(12.77±11.21)×106,经采集得到CD34+细胞数为每千克体重(4.70±4.17)×106,CD34+细胞采集效率为(40.91±33.35)％,对5例次磁珠分选结果,标记前CD34+细胞数为每千克体重(6.07±3.18)×106,分选后获得的CD34+细胞数为每千克体重(4.03±2.28)×106,CD34+细胞回收率为(64.19±13.35)％。终产物细胞悬液量为40～45 ml,CD34+细胞纯度为(83.18±6.76)％。结论 应用CliniMACS细胞分选系统获得纯化的自体造血干细胞,可应用于支持大剂量化疗治疗实体肿瘤。     

5氮2′脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:探讨胎肝AFT024细胞对人类脐血造血干细胞体外扩增的作用及对多药耐药基因(MDR1)转染效率的影响。方法:应用AFT024细胞支持下体外长期培养的方法将人类MDR1基因转入脐血CD34 细胞,观察细胞扩增倍数来检测AFT024细胞对造血干/祖细胞的扩增能力,采用RT-PCR、流式细胞术及耐药集落检测的方法测定基因转染效率、P-糖蛋白(P-gp)的表达及其功能活性。结果:(1)培养21d后AFT024细胞对有核细胞总数(TNC)的扩增没有明显作用,但CD34 细胞和集落形成细胞(CFC)的扩增倍数[(37.9±13.9)倍和(27.1±13.3)倍]均明显高于对照组[(9.1±2.3)倍和(7.7±3.6)倍],差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)RT-PCR法可在AFT024组的转染细胞中检测到较高的MDR1mRNA水平,AFT024组基因转染效率(46.0%)明显高于对照组(15.2%);两组P-gp的表达分别为(31.7±10.2)%和(12.6±3.9)%;Rhodamine-123排出试验显示,具有P-gp功能活性的细胞分别为(35.5±11.4)%和(16.6±3.2)%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:AFT024细胞具有较强的扩增造血干/祖细胞的能力,并能明显提高MDR1基因在脐血CD34 细胞中的转染效率。     

脐带血CD+34细胞体外扩增优化条件的研究

 目的　分析比较不同细胞饲养层、不同刺激因子、脐血CD+34 细胞的纯度和含量等因素对脐血CD+34 细胞在体外扩增的影响,以筛选其体外扩增的优化方案。方法　采用正交实验,通过MTT法、细胞计数法及流式细胞分析技术测定脐血CD+34 细胞的增生情况;并采用以上方法及半固体培养体系对该细胞优化条件下的增生情况及集落形成能力进行检测。结果　优化条件下脐血CD+34细胞增生10倍,明显高于对照组的2.8倍（P＜0.01）,集落形成（CFU-C 36.67±6.11）也较对照组强（CFU-C 16.33±1.53）（P＜0.01）。结论　该培养系统能促进脐血CD+34 细胞体外扩增并能较好保持脐血CD+34 细胞的干细胞性质。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.