抗氧化剂对大肠癌细胞MMP-3表达的作用及机制

目的探讨NF-κB在大肠癌细胞MMP-3蛋白诱导表达中的作用及抗氧化剂对大肠癌细胞MMP-3蛋白诱导表达的影响及其机制。方法培养上清MMP-3蛋白含量用ELISA检测,EMSA法测定细胞核内NF-κB结合活性。结果抗氧化剂可抑制大肠癌细胞培养体系TNF-α诱导的MMP-3蛋白生成,TNF-α可诱导大肠癌细胞NF-κB的激活并被抗氧化剂阻断。结论TNF-α诱导的大肠癌细胞MMP-3蛋白表达依赖于NF-κB的激活;抗氧化剂可通过抑制NF-κB的活化而阻断MMP-3蛋白的诱导表达。     

甲状腺滤泡癌和乳头状癌细胞黏附分子与转移抑制基因nm23-H1蛋白表达的关系

目的 探讨黏附分子CD44、上皮性钙黏附蛋白（E-cad )和转移抑制基因nm23-H1与甲状腺滤泡源性癌分化、浸润转移的关系。方法 采用免疫组织化学SP法和EnVision法检测42例滤泡癌和54例乳头状癌中CD44、E-cad和nm23-h1的表达。结果 CD44主要表达于癌细胞及浸润淋巴细胞膜,低分化滤泡癌和有转移乳头状癌CD44表达分别高于高分化滤泡癌和无转移乳头状癌,E-cad阳性物质和nm23-H1阳性率高于滤泡癌,转移癌的阳性率和表达强度低于原发灶。甲状腺滤泡原性癌CD44检测阳性率高于E-cad和nm23-H1。在滤泡癌中E-cad与nm23-H1的表达之间呈正相关关系,而在乳头状癌中呈正相关趋势。CD44与E-cad的表达、CD44与nm23-H1的表达之间在滤泡癌和乳头状癌均呈负相关趋势。结论 综合检测CD44、E-cad和nm23对甲状腺滤泡源性癌的诊断、预后评估具有一定参考价值。     

MMP-9和Fas抗原表达与非小细胞肺癌侵袭、转移的关系

肿瘤的侵袭和转移是肿瘤患者的主要死因 ,也是肿瘤治疗所面临的一大难题。基质金属蛋白酶 9(ＭＭＰ 9)能降解细胞外基质 ,Ｆａｓ抗原是细胞凋亡过程中重要的信号传递分子 ,两者在肿瘤侵袭转移过程中起着重要的作用。笔者运用免疫组织化学Ｓ Ｐ法 ,检测非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)组织切片中ＭＭＰ 9和Ｆａｓ抗原的表达 ,探讨它们的表达与肺癌侵袭、转移的关系以及在肺癌患者预后中的意义。1　材料与方法1 .1　材料　选用ＮＳＣＬＣ手术切除标本 83例 ,其中鳞状细胞癌 (鳞癌 ) 35例 ,腺癌 36例 ,大细胞癌 1 2例。男性 62例 ,女性 2 1例 ;男女…     

转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用

目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用.方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrin mRNA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69.结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrin mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性.Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性.结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达.     

长链非编码RNA母系表达基因3对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:检测长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在结直肠癌细胞中的表达,并观察过表达MEG3对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:检测人正常结肠细胞NCM460及结直肠癌细胞SW48、Lo Vo中MEG3的水平,在SW48细胞和Lo Vo细胞中转染MEG3过表达质粒,利用Transwell小室及划痕实验观察过表达MEG3对细胞侵袭和迁移能力的影响,通过Western blotting检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族相关蛋白的变化。结果:结直肠癌细胞SW48和Lo Vo中MEG3的水平明显低于人正常结肠细胞NCM460;在SW48和Lo Vo细胞中过表达MEG3后能够明显抑制细胞的侵袭和迁移能力;Transwell侵袭实验和迁移实验显示MEG3表达组SW48细胞的穿膜数及Lo Vo细胞的穿膜数与对照组比较明显减少。划痕实验中过表达MEG3后细胞间距较对照组明显增大,提示细胞运动能力减弱。同时过表达MEG3可明显降低细胞中MMP-2及MMP-9的表达,增高金属蛋白酶组织抑制物2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)的表达。结论:结直肠癌细胞中MEG3水平较正常结直肠细胞明显降低;在结直肠癌中过表达MEG3可抑制细胞的侵袭、迁移运动能力,并且可能通过影响TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达发挥上述功能。     

TIMP-3在肝癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系

目的: 检测金属蛋白酶-3组织抑制剂(TIMP-3)在肝细胞癌患者血浆和肿瘤及正常肝组织中的表达并探讨其临床意义。方法: 收集56例肝细胞癌患者和30例对照组的血浆,从肿瘤大小、分化程度、肝外转移、门脉转移及淋巴转移几个因素比较TIMP-3蛋白表达水平;取手术标本包括30例原位癌组织标本、30例门脉癌栓组织标本、30例淋巴转移组织标本以及30例肝正常组织标本,采用RT-PCR和Western blotting法检测各个样本的TIMP-3mRNA及蛋白表达,结合临床病理资料分析其意义。结果: (1)有肝外转移患者的血浆TIMP-3蛋白表达水平明显低于无肝外转移者(P<0.05)。(2)TIMP-3 mRNA在原位肝癌组织中表达水平为0.52±0.09,在门脉癌栓组织中的表达水平为0.42±0.07,在淋巴转移灶的表达水平为0.40±0.08,在正常肝组织中表达水平为0.78±0.09;3组肿瘤组织与正常肝组织相比,TIMP-3 mRNA表达均降低,显著差异(P＜0.01)。(3)TIMP-3蛋白在原位肝癌组织中表达水平为77.04±8.83,在门脉癌栓组织中的表达水平为64.43±3.80,在淋巴转移灶的表达水平为62.80±3.73,在正常肝组织中表达水平为115.08±8.60;3组肿瘤组织与正常肝组织相比TIMP-3蛋白表达均降低,显著差异(P＜0.01)。结论: 肝癌患者血浆和组织中TIMP-3的表达水平明显下降,在转移灶中的表达下降更显著,提示TIMP-3的低表达与肿瘤细胞的侵袭转移能力有关。     

上调Foxp3抑制卵巢癌细胞Skov3侵袭和迁移及其机制的研究

目的:探讨Foxp3基因对卵巢癌细胞Skov3侵袭与迁移的影响及作用机制。方法:构建Foxp3基因过表达质粒,采用脂质体转染导入Skov3细胞;以空载体转染细胞株为对照,通过细胞增殖、侵袭、RT-PCR和Western blot实验,观察Skov3细胞Foxp3基因的表达情况,以及过表达Foxp3后细胞的侵袭与转移能力变化,检测MMP-2以及MMP-9基因表达变化。结果:导入过表达Foxp3质粒后,Skov3细胞的Foxp3表达显著升高;与空载体相比,过表达Foxp3基因显著抑制Skov3细胞的侵袭和迁移能力,并显著降低MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结论:上调Fox P3基因表达能通过下调MMP-2和MMP-9基因表达抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移行为,为深入研究Foxp3基因在体内的抑瘤作用和卵巢癌的基因治疗提供实验依据。     

MMP-2和VEGF-C在胃癌组织中的表达及其意义

浸润和转移是恶性肿瘤的主要两大特点,是导致患者死亡的直接原因。肿瘤细胞的侵袭、转移是一个复杂的多步骤、多环节的过程。在此过程中,肿瘤细胞对基底膜的破坏和细胞外间质的降解,以及肿瘤组织新生血管、新生淋巴管的形成是肿瘤细胞侵袭、转移的关键步骤。目前认为,     

Snail在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的研究Snail蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨Snail蛋白及其调控的上皮-间质转化(EMT)与乳腺癌恶性生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测20例正常乳腺组织、60例乳腺癌组织(非特殊性浸润性导管癌)及其中20例乳腺癌癌旁组织中Snail蛋白、上皮标记物E-cadherin蛋白、间质标记物Vimentin蛋白的表达;分析乳腺癌组织中3种蛋白表达强度的相关性,以及Snail蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移的关系。结果①在正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织、乳腺癌组织中,Snail蛋白表达逐渐递增,其阳性率分别为0、30%、53.3%;Vimentin蛋白表达亦逐渐递增,其阳性率分别为0、40%、63.3%;E-cadherin蛋白表达则逐渐减少,其阳性率分别为100%、75%、56.7%;正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织与乳腺癌组织间3种蛋白的表达差异均具有统计学意义(均P0.05)。②Snail蛋白表达与Vimentin蛋白表达呈显著正相关(r=0.536、P=0.000);Snail蛋白表达与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.413、P=0.001);3种组织中,E-cadherin和Vimentin蛋白两者的表达差异呈显著负相关(r=-0.526、P=0.000)。③Snail蛋白的表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移呈正相关,差异有统计学意义(r=0.600、P=0.000)。结论锌指转录因子Snail可能通过参与调控EMT过程从而在乳腺癌的发生和侵袭过程中发挥重要作用,并推动乳腺癌的远处淋巴结转移。     

ELMO蛋白家族与恶性肿瘤侵袭转移关系的研究进展

It is one of the main characters of malignant tumors that malignant tumor cells invade surrounding tissues and metastasize to distant tissues. Multiple factors are involved in this complicated dynamic process. Metastasis is the major factor influencing recurrence and prognosis. Therefore, it is important to explore the mechanism of invasion and metastasis for reducing recurrence rate and mortality of malignant tumors. Engulfment and cell mobility (ELMO) family is one kind of conserved protein in evolutional process. It includes 3 members, ELMO1, ELMO2 and ELMO3. The members of ELMO family play an important role in cell phagocytosis and cell migration, and they also have close correlation with malignant tumor cell invasion and metastasis. In this paper, we review the progress of the relationship between ELMO family and malignant tumor invasion and metastasis.     

整合素β3 mRNA表达与胃癌微血管密度、进展及预后的关系

目的　探讨整合素 β3mRNA在胃癌中的表达及其与肿瘤微血管密度 (MVD)、生长方式、浸润转移和预后的关系。方法　应用原位杂交和免疫组织化学技术 ,检测 10 5例胃癌组织中整合素 β3mRNA和CD3 4的表达。结果　整合素 β3mRNA在非肿瘤胃黏膜中的阳性表达率为 3 0 % (6/ 2 0 ) ,显著低于胃癌组 (61 0 % ,64/ 10 5,χ2 =8 85,P =0 0 3 7) ;在浸润性生长、T3 ～T4 期、有淋巴结转移和远处转移的病例中 ,阳性率分别为 70 2 % (40 / 57)、72 1% (44/ 61)、68 6% (48/ 70 )和 85 7% (3 6/ 42 ) ,均显著高于膨胀性生长 (χ2 =14 97,P =0 0 0 2 )、T1～T2 期 (χ2 =15 2 1,P =0 0 15)、无淋巴结转移 (χ2 =17 89,P =0 0 2 5)及无远处转移的病例 (χ2 =2 0 2 2 ,P =0 0 0 5;χ2 =2 1 3 5,P =0 0 3 5) ;同样 ,它们的平均MVD均显著高于膨胀性生长 (t =10 10 5,P =0 0 0 1)、T1～T2 期 (t=5 961,P =0 0 0 1)、无淋巴结转移 (t= 3 819,P =0 0 1)和无远处转移的病例 (t =10 578,P =0 0 0 1;t =7 882 ,P =0 0 0 1) ;阳性表达组的平均血管数 (41 0 2± 8 55)个 / 0 72mm2 明显高于阴性表达组的平均微血管数 (2 5 2 6± 11 2 5)个 / 0 72mm2 (t =11 2 5,P =0 0 2 5) ,两者之间呈显著正相关 (rs=0 3     

金属蛋白酶组织抑制因子—3的结构、表达调控和生物学功能

金属蛋白酶组织抑制因子 3(TIMP 3)是一种结合细胞外基质 (ECM)的非可溶性蛋白。TIMP 3参与正常组织的发育和重建过程 ,也参与了许多疾病的发生。TIMP 3一方面可以刺激成纤维细胞增殖 ,另一方面却诱导恶性肿瘤细胞的凋亡。由于TIMP 3能以 1∶1克分子比例与基质金属蛋白酶 (MMPs)非共价结合 ,抑制MMPs的活性 ,因此TIMP 3有抑制肿瘤生长、侵袭和转移的作用 ,肿瘤组织中TIMP 3表达水平的下调或丢失将促进肿瘤的进程。TIMP 3基因启动子区甲基化是其表达水平下调或丢失的主要原因。运用去甲基化因子可使TIMP 3启动子区去甲基化 ,使TIMP 3得以重新表达 ,这可能成为肿瘤治疗的新途径     

PLIN3在肺腺癌组织和细胞中的表达及与预后的关系

目的:研究围脂滴蛋白3(PLIN3)在肺腺癌组织和细胞中的表达情况,分析其与患者预后的关系,以及其对肺腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:使用HPA数据库预测与肺癌不良预后相关的基因,选中PLIN3为研究对象,并分析PLIN3表达与肺癌及肺腺癌患者生存率的相关性;运用GEPIA数据库验证肺腺癌中PLIN3的表达差异及其与肺腺癌患者生存率的相关性;运用Ualcan数据库进一步分析PLIN3在肺腺癌中的表达情况;Western blot实验检测PLIN3在肺腺癌细胞中的表达水平;构建敲减PLIN3表达的质粒siPLIN3,采用Transwell实验检测转染后A549细胞的侵袭能力。结果:PLIN3与肺腺癌患者生存率显著相关,其在肺腺癌组织中高表达,且与肿瘤分级、淋巴结转移和分期密切相关,与患者性别无关。PLIN3在肺腺癌细胞中高表达,敲减PLIN3表达后,敲减组细胞穿过Transwell小室的数量明显低于未敲减组。结论:PLIN3在肺腺癌组织中高表达,其表达水平与肺腺癌患者的预后相关;且PLIN3可以促进肺腺癌细胞的侵袭。     

过表达NEDD9对miR-193a-3p抑制结肠癌细胞SW480侵袭转移的影响

目的:观察转染miR-193a-3p结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力变化及过表达神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对其影响。方法:将购自美国菌种保藏中心结肠癌细胞SW480分为NC组、miR-con组、miR-193a-3p组、si-co组、si-NEDD9组、miR-193a-3p+pcDNA组、miR-193a-3p+pcDNA-NEDD9组,每组9例。采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测NEDD9、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;采用Transwell检测细胞迁移和侵袭数量。结果:转染miR-193a-3p后,miR-193a-3p组结肠癌细胞SW480存活率、迁移和侵袭数量及相关蛋白Cyclin D1、Ki-67、MMP-2、MMP-9表达水平明显低于NC组和miR-con组(均P<0.01)。沉默NEDD9时,si-NEDD9组上述指标检测水平显著低于NC组和si-con组(均P<0.01)。过表达NEDD9时,上述指标检测水平显著高于miR-193a-3p+pcDNA组(P<0.01)。过表达miR-193a-3p,E-cadherin表达水平较miR-con组升高,N-cadherin、Vimentin表达水平降低(P<0.01)。结论:转染miR-193a-3p可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,过表达NEDD9可能逆转这种作用。     

慢病毒介导的GOLPH3基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响*

 目的：通过体外实验探讨沉默高尔基体磷蛋白3（Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3）基因对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法：将携带GOLPH3 shRNA的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,建立稳定沉默GOLPH3的细胞株LV-GOLPH3-RNAi,分别用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测GOLPH3 mRNA 和蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖力,Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移力和侵袭力。结果：稳定沉默GOLPH3的细胞株构建成功;GOLPH3 mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-GOLPH3-RNAi组细胞的增殖力受到抑制（P<0.05）,迁移力(56.7±1.5 vs 186.0±3.4、183.3±4.2,P<0.05） 和侵袭力 （33.5±3.0 vs 85.0±3.9、83.1±4.4,P<0.05） 也明显受到抑制。结论：沉默GOLPH3基因的表达可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖力、迁移力和侵袭力,提示GOLPH3有可能成为潜在的肿瘤标志物和独立的预后因子。     

Ataxin-3相互作用蛋白A3IP的克隆与细胞及组织定位的初步研究

目的 根据前期筛选到的与ataxin-3蛋白羧基端相互作用的A3IP部分序列,进行A3IP基因的克隆,并探讨其细胞及组织定位情况.方法 应用生物信息学及Northern印迹方法克隆A3IP基因并检测其转录本在人体组织和人脑不同部位的表达情况；应用Western印迹及免疫荧光方法检测A3IP蛋白在细胞中的表达及定位情况；应用免疫组织化学染色方法检测A3IP蛋白在人体各组织和人脑不同部位的表达及定位情况.结果 对A3IP基因序列全长阅读框进行了cDNA克隆及序列拼接；检测了A3IP的3个转录本(1 kb、1.35 kb、6 kb)在人体不同组织和人脑不同部位的表达谱；获得了A3IP-pEGFP在COS-7细胞和人大脑皮质、小脑、肌肉、周围神经、肝脏、肾脏的表达及定位情况.结论 所克隆的A3IP基因编码ataxin-3的一种相互作用蛋白A3IP,其3个剪切本在人体多种组织和人脑不同部位广泛表达,是一种细胞胞浆蛋白.     

肝富集的转录因子与细胞色素P450基因的表达调控

细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)是含血红素酶家族,广泛存在于从细菌到哺乳动物中,参与氧化或还原代谢多种内源和外源化合物。如内源性甾体激素、维生素和脂肪酸衍生物的合成与分解,外源性药物、杀虫剂、环境污染物和致癌物的代谢[1]。CYP1-4家族主要代谢外源化合物,它们表现