莪术醇通过降解ECM改变细胞周期抑制A549细胞增殖

目的:探讨莪术醇抑制A549细胞增殖作用及分子机理。方法:MTT法观察莪术醇对A549细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法检测莪术醇对A549细胞层分泌胶原的影响;流式细胞术检测细胞周期阻滞。结果:莪术醇对A549细胞增殖有抑制作用,并能抑制细胞胶原分泌;细胞周期分析显示,莪术醇作用细胞24h,主要通过增加G1期细胞比例来抑制细胞增殖,作用48h主要影响了细胞的G2期。结论莪术醇能抑制肺腺癌A549细胞增殖,其机制可能是与莪术醇抑制ECM中胶原的分泌、诱导细胞周期阻滞有关。     

葛根素对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的观察葛根素对体外培养人胚肺成纤维细胞增生和凋亡以及细胞外基质形成的影响。方法用0～400gg／mL浓度的葛根素作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞，24～96h后观察不同浓度的葛根素对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性，天狼猩红染色观察胶原生成情况。流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果80～400gg／mL浓度作用下24～72h范围内，葛根素可剂量和时间依赖性地抑制人胚肺成纤维细胞的增生（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果发现，随着浓度的增大，G0／G1期细胞百分比逐渐上升，S期细胞百分比逐渐下降，说明细胞阻滞于G0／G1期。结论葛根素可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞的增生，并诱导其凋亡，降低胶原的合成，作用呈时间和剂量依赖性。     

平肺口服液抑制肺成纤维细胞生长和诱导凋亡

目的采用血清药理学方法,研究平肺口服液对人胚肺成纤维细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。方法平肺口服液10g/kg和20g/kg分别灌服大鼠,第1～7天每日一次,第8～10天每日两次,于第11天早上末次灌服后2h腹主动脉无菌采血制备含药血清。采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测平肺口服液含药血清对人胚肺成纤维细胞(CCC-HPF-1)增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果平肺口服液20g/kg灌服所得大鼠含药血清作用96h和120h分别能抑制CCC-HPF-1细胞增殖(P0.01);流式细胞术检测表明该含药血清作用96h能诱导CCC-HPF-1细胞发生凋亡(P0.05)和G1/G0期阻滞(P0.05)。结论平肺口服液能抑制肺成纤维细胞增殖,诱导细胞凋亡以及使细胞周期阻滞于G1/G0期,这可能有助于其预防放射性肺损伤。     

莪术醇抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨莪术醇在体外对人肝癌HepG2细胞的增殖和细胞周期的影响及其分子机制.方法:体外培养HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察莪术醇对HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析莪术醇处理后HepG2细胞的周期分布,TaqMan探针实时荧光定量PCR法及Western印迹检测细胞周期调控相关基因的表达水平.结果:莪术醇对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,且在一定范围内(2.5～10mg·L-1)呈浓度和时间依赖性;莪术醇诱导HepG2细胞发生G1期阻滞,伴随cyclin D1,CDK2,CDK8,pRB1,p27KIPl mRNA表达水平增高,而cyclin A1的水平则下调,cyclin E1和CDK4的表达不受影响,p53及其下游调控蛋白p21WAF1和Wip1表达水平增高.结论:莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞G1期阻滞、抑制细胞增殖,其作用可能通过激活p53与pRB通路,抑制cyclin A1基因的表达和上调p21 WAF1,p27KIP1以及CDK8基因的表达而实现的.     

黄芪多糖对人胃癌细胞系MKN45的生长抑制作用及细胞周期的影响

目的:研究黄芪多糖对胃癌细胞MKN45的生长抑制作用及细胞周期的影响。方法:用RPMI 1640培养液对人胃癌细胞MKN45进行传代培养,采用MTT法检测黄芪多糖对MKN45的生长抑制作用,采用流式细胞术检测黄芪多糖对MKN45细胞周期的影响。结果:MTT法实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,效应均呈浓度和时间依赖性。结论:黄芪多糖能抑制胃癌细胞增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G0/G1期。     

苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的：观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法：选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升（P〈0.05）。结论：苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞周期及P21wapl/cipl和P27kipl表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wapl/cipl和P27kipl在其中的作用和意义.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wapl/cipl、P27kipl mRNA和蛋白表达.结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18士2.01)nmol/L.雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少.经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wapl/cipl和P27kipl的mRNA和蛋白表达水平明显上调.结论 雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wapl/cipl和P27kipl的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的.     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞周期及P21wap1/cip1和P27kip1表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wap1/cip1和P27kip1在其中的作用和意义。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wap1/cip1、P27kip1 mRNA和蛋白表达。结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18±2.01)nmol/L。雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少。经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wap1/cip1和P27kip1的mRNA和蛋白表达水平明显上调。结论雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wap1/cip1和P27kip1的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的。     

雷公藤醇提物对骨髓细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察雷公藤醇提物对大鼠骨髓细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:体外培养大鼠股骨骨髓细胞,经不同浓度的雷公藤醇提物作用后,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响;采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测对骨髓细胞凋亡的影响。结果:雷公藤醇提物可明显抑制正常骨髓细胞增殖,并且此抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性。细胞周期进程的结果显示,与正常对照组相比,雷公藤组G0/G1期细胞比例显著增多,S期和G2/M期细胞比例显著减少,细胞增殖指数显著降低,早期凋亡率显著升高。结论:雷公藤醇提物可明显抑制骨髓细胞增殖,使骨髓细胞阻滞于G0/G1期,并能诱导细胞凋亡。     

莪术醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的影响

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用及对PI3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt信号通路相关蛋白的影响。方法采用MTT法检测不同浓度莪术醇以及临床常用抗肿瘤药物顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;Western blotting法检测莪术醇、顺铂及其两者联合诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡过程中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt)的表达。结果莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞具有生殖抑制作用,其生殖抑制作用呈剂量-时间正效应关系;莪术醇可以促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,细胞凋亡率随着莪术醇浓度增大而增强;不同质量浓度莪术醇处理SKOV3细胞48 h后,细胞周期分布发生明显改变,药物的作用将肿瘤细胞的生长阻止在G0/G1和S期;莪术醇、顺铂及其两者联合在诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡时,下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,且莪术醇和顺铂联合应用时具有协同效应,联合组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论莪术醇可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活来阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期,诱导细胞凋亡,进而阻止肿瘤细胞的生长或诱导其分化。     

枳实消痞丸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:从细胞增殖、凋亡和周期角度研究枳实消痞丸治疗胃癌的机制.方法:胃癌SGC-7901细胞阴性对照组加完全培养基,1 ×104细胞/孔接种于96孔板,将枳实消痞丸分为4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-15个质量浓度加入,分别作用24,48,72 h,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,加入2,0.5,0.125 g·L-13个质量浓度的药物,分别培养48,72 h,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果:枳实消痞丸4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-1质量浓度作用于胃癌SGC-7901细胞,抑制率依次降低;作用于24,48,72 h,抑制率渐增.枳实消痞丸增加了G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,高、中浓度强于低浓度.结论:枳实消痞丸抑制了细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,其机制可能与药物阻滞细胞于G0/G1期和诱导细胞凋亡有关.     

半夏泻心汤及其拆方对胃腺癌SGC-7901细胞周期和凋亡的影响

目的:从细胞增殖、凋亡、细胞周期角度,研究半夏泻心汤治疗胃癌机制。方法:把半夏泻心汤拆分为苦降、辛开和补益3个组方,1×104细胞/孔接种于96孔板,药物浓度为4,2,0.5,0.125 g·L-1,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,全方和苦降高、低浓度为0.5,0.125 g·L-1,辛开和补益高、低浓度为4,2 g·L-1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。观察半夏泻心汤及其拆方对胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)比较。结果:半夏泻心汤全方及苦降、辛开组方能够抑制SGC-7901细胞增殖,全方IC50为1.645 g·L-1,苦降组为1.446 g·L-1,辛开组为3.867 g·L-1;它们增加SGC-7901细胞S期和G0-G1期百分比,促进细胞凋亡,高浓度强于低浓度,但补益组方对此没有作用。结论:半夏泻心汤及其拆方能够一定程度的抑制细胞增殖,以苦降组为最,补益组作用甚微,其机制可能与药物阻滞细胞至G1/S期和诱导细胞凋亡有关。     

汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响

目的:研究汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响。方法:以不同浓度的汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞,检测细胞抑制率、凋亡及细胞周期。结果:MTT法测得汉黄芩素的IC50为24.7 mg.L-1,能够明显抑制SPC-A-1细胞的集落形成能力。汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞后,荧光倒置显微镜下观察到细胞凋亡的形态学改变。Annexin V-FITC/PI双标法证实汉黄芩素可以诱导SPC-A-1细胞凋亡,并具有剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,不同浓度汉黄芩素使SPC-A-1细胞周期出现显著的变化,10,20 mg.L-1汉黄芩素可将周期阻滞在G0/G1期,30,40 mg.L-1汉黄芩素则使细胞周期堆积在S期,并且随着给药剂量的增加,凋亡峰显著升高。结论:汉黄芩素能明显抑制SPC-A-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并对细胞G0/G1和S期具有阻滞效应,具有抗肿瘤作用。     

莪术油对肺腺癌A549细胞周期及组织蛋白酶K表达的影响

目的 :探讨莪术油对A549细胞增殖抑制作用及组织蛋白酶K表达的影响。 方法 : MTT法观察莪术油对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期阻滞;Western blot检测组织蛋白酶K的表达情况。 结果: 莪术油作用后①MTT法结果显示莪术油在60 mg ·L^-1~200 mg ·L^-1对A549细胞增殖有抑制作用, IC50随作用时间的延长显著前移。②流式细胞术结果出现凋亡峰,与未处理组细胞相比,给药组细胞G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。③Western blot结果显示,莪术油处理细胞24 h后,组织蛋白酶K表达明显上调,100 mg ·L^-1达最大值。 结论 : 莪术油能抑制肺腺癌A549细胞增殖,阻滞细胞周期的作用,其机制可能与上调组织蛋白酶K表达水平有关。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的：探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法：用一定质量浓度的Rg3 处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC₅₀)；Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态；流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率；免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化；琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果：Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC₅₀为125.5 mg·L^-1；经150 mg·L^-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加；并呈时效依赖关系；用75 mg·L^-1Rg3处理细胞24,48,150 mg·L^-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G₂/M期的细胞比率增加,G₀/G₁的细胞比率下降；凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)% 和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论：Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。     

人参皂苷Rg3抑制腺样囊性癌细胞SACC-83增殖作用研究

目的:探讨Rg3抑制人腺样囊性癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法:用一定质量浓度的Rg3处理人腺样囊性癌细胞系SACC-83细胞,MTT法检测细胞增殖活力,荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪分析细胞周期和细胞增殖指数,免疫组织化学观察hTERT的表达变化。结果:Rg3抑制SACC-83细胞生长,呈时间-浓度效应关系;经20 mg.L-1 Rg3处理细胞24,48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光;用不同浓度的Rg3处理细胞72 h后,均诱导了细胞凋亡和细胞周期的改变,G0/G1的细胞比率增加,S期和G2/M期的细胞比率下降,细胞增殖指数降低,并与Rg3浓度有明显依赖关系;免疫组化染色显示Rg3抑制了SACC-83细胞的hTERT蛋白表达。结论:Rg3可通过诱导人腺样囊性癌细胞SACC-83细胞凋亡和下调细胞的端粒酶活性,使细胞增殖受到抑制。     

莪术醇联合5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨莪术醇(curcumol)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌Lo Vo细胞增殖和凋亡作用的影响,以及药物处理后,Lo Vo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)表达量的变化情况。方法:莪术醇(50 mg·L-1)单独或联合5-Fu(2 mg·L-1)作用大肠癌Lo Vo细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组药物对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析各组对细胞凋亡作用的影响,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中,增殖和凋亡相关蛋白PCNA,Bcl-2蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,莪术醇,5-Fu单独给药以及联合用药,均可以有效抑制大肠癌Lo Vo细胞的增殖,促进细胞凋亡(P0.05),同时可以降低PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05);与单独给药组比较,联合用药后,凋亡的促进作用更为明显(P0.05)。与空白组比较,各药物组可以更有效的抑制PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:莪术醇联合5-氟尿嘧啶能有效抑制人大肠癌Lo Vo细胞的增殖和凋亡,与单独用药组比较,联合用药可以使癌细胞的敏感性增强,极大程度的促进人大肠癌Lo Vo细胞凋亡,且这些机制可能与下调PCNA,Bcl-2蛋白表达有关。     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.