卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱及穗花杉双黄酮的含量测定研究

目的 建立卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱分析方法并进行穗花杉双黄酮的含量测定.方法 采用HPLC方法测定24批不同产地的卷柏及垫状卷柏药材,分析两者的指纹图谱特征及穗花杉双黄酮的含量.结果 以穗花杉双黄酮为主的不同的7个特征峰分别共同构成卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱概貌,卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别为1...     

HPLC法测定11种卷柏属药材中穗花杉双黄酮的含量

采用HPLC法测定11种卷柏属药材中穗花杉双黄酮的含量。色谱柱:Krom asil(250×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液系统,梯度洗脱,0→28 m in,甲醇50%→58%,30→35 m in,甲醇58%→70%;柱温:40℃;流速:1.0 m l/m in;检测波长:330 nm。结果表明,穗花杉双黄酮在153~767 ng范围内峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.03%,RSD为0.80%(n=5)。     

HPLC法同时测定江南卷柏中3种双黄酮成分

目的建立江南卷柏中3种双黄酮成分的含量测定方法。方法色谱柱为Shim-pack VP-ODS C_(18)柱;流动相为2%冰醋酸(A)乙腈(B),梯度洗脱;检测波长为337 nm。结果穗花杉双黄酮、2,3-二氢穗花杉双黄酮、银杏双黄酮的线性范围分别为0.019 72~0.788 8、0.012 44~0.497 6、0.003 16~0.126 4μg;平均加样回收率分别为101.74%、101.86%、102.87%。结论该方法简便准确、重复性好,可用于江南卷柏的质量控制。     

垫状卷柏中双黄酮抑制黄嘌呤氧化酶的活性研究

目的:探寻垫状卷柏中抑制黄嘌呤氧化酶的活性部位。方法:采用黄嘌呤氧化酶体外抑制实验测定各组分的半数抑制浓度IC50。结果:三个双黄酮成分的混合物Fr5对黄嘌呤氧化酶有强抑制作用(IC50=1.1μg/ml),Fr5继续分离得到的两个组分Fr5-1(IC50=2.9μg/mL)和Fr5-2(IC50=24.0μg/mL),其纯度增高但活性不及Fr5,当重新组合这两个组分时,活性仍然不能恢复或增强。结论:垫状卷柏中对黄嘌呤氧化酶抑制作用最强的部分是三个双黄酮类成分的混合物,继续分离活性减弱。     

HPLC法测定江南卷柏片中穗花杉双黄酮的含量

目的：建立高效液相色谱法测定江南卷柏片中穗花杉双黄酮的含量。方法：C18柱（250mm×4．6mm，51μm）；流动相：乙腈（A）-0.5％冰醋酸溶液（B），梯度洗脱；检测波长：338nm；流速：1ml/min。结果：穗花杉双黄酮在5.25～262．5μ/ml间，峰面积与其质量呈良好的线性关系，回归方程为A=62621C＋39、79，r^2=1；平均回收率为97．1％，RSD为1．9％。结论：该方法可以用来控制江南卷柏片的质量，方法简便、准确。     

深绿卷柏中的穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的反相高效液相色谱法同时测定

目的测定深绿卷柏中穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的含量。方法采用梯度洗脱的反相高效液相色谱法,选用Agilent ZORBAX-SB C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,以乙腈-0.1%冰醋酸为流动相,在25℃柱温,检测波长为254nm时检测,建立了深绿卷柏药材的质量评价标准。结果穗花杉双黄酮、橡胶树双黄酮分别在0.33～3.3μg/ml和0.27～2.7μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为r=0.993和r=0.990;回收率分别为:95.36%(n=6,CV=1.79%)和95.49%(n=6,CV=2.61%)。结论 RP-HPLC法同时测定深绿卷柏中穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的含量,方法灵敏、简便、准确;可用于评价深绿卷柏药材的品质。     

不同产地卷柏药材中总黄酮的含量测定

目的研究不同产地卷柏中总黄酮的含量测定方法。方法以阿曼托双黄酮为对照品,绘制标准曲线,将卷柏95%乙醇回流提取液,在337 nm波长下测定吸收度。结果总黄酮含量为1.52%,平均回收率为99.90%,RSD=1.35%（n=6）,线性范围1.92～11.52μg.m l-1,r=0.999 8。结论该法测定卷柏总黄酮含量,简单、迅速、准确,可用于卷柏的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮的含量

目的 建立测定不同产地卷柏中阿曼托双黄酮含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Agilent ZORBOX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸(40:60),柱温30 ℃;流速为0.8 ml·min-1;检测波长337 nm.结果 阿曼托双黄酮含量为1.197%,平均回收率为99.30%,RSD=0.98%(n = 9),线性范围0.1～0.6 μg·ml-1(r=0.999 8).结论 该法快捷、灵敏、准确,可作为评价卷柏药材质量的参考依据.     

江南卷柏及同属植物的HPLC指纹图谱鉴别及穗花杉双黄酮测定研究

目的建立江南卷柏及同属植物的HPLC指纹图谱并同步进行穗花杉双黄酮的含量测定。方法色谱柱:ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.5%冰醋酸水溶液(B)梯度洗脱;检测波长:270nm;流速:1.0mL·min-1;穗花杉双黄酮含量测定与指纹图谱同步进行。结果以穗花杉双黄酮为主的18个特征峰共同构成江南卷柏的HPLC特征指纹图谱概貌;穗花杉双黄酮含量为0.8%～1%。结论13批江南卷柏具有高度的相似性,相似度大于0.98。5种卷柏属植物全草的色谱与江南卷柏的指纹图谱接近,结合主成分分析可与江南卷柏归为一类,推测有类似的生理活性。另3种(黑顶卷柏、薄叶卷柏、翠云草)指纹图谱有明显差异,不宜与江南卷柏混用。     

卷柏的止血作用

报道2种商品卷柏类药用植物的止血实验。结果表明，卷柏和垫状卷柏止血作用确凿，以垫状卷柏效果稍佳。其水溶性碱性成分能显著缩短出血时间（小鼠剪尾法），是止血的有效部位。两者经炒炭炮制后止血作用均减弱。     

卷柏中雌激素类成分的提取

目的:对不同提取方法所得的卷柏提取物进行雌激素活性筛选,探索卷柏发挥雌激素作用的活性部位。方法:采用小鼠子宫增重试验,将卷柏分别以70%乙醇回流所得总部位经聚酰胺柱分离;95%乙醇回流药渣经水提取;药渣水提物去除多糖等所得的卷柏各组分进行雌激素活性筛选。运用HPLC指纹图谱技术对卷柏95%醇提物、药渣水提物进行分析。结果:70%乙醇回流所得的卷柏总部位、药渣水提物高剂量、药渣水提物去多糖组与空白组比较,均能显著性增加小鼠子宫系数(P<0.01),卷柏其余各组与空白组相比无明显作用;HPLC指纹图谱显示卷柏95%醇提物中穗花杉双黄酮为其主要成分,而药渣水提物中基本不含穗花杉双黄酮。结论:95%乙醇回流药渣水提法与聚酰胺柱分离法相比,前者更适合于卷柏雌激素活性物质的提取分离;水溶性除多糖物质为卷柏中发挥雌激素样作用的有效部位;HPLC指纹图谱结果提示,穗花杉双黄酮不是卷柏发挥雌激素作用的成分。     

卷柏提取物对去势大鼠股骨中羟脯氨酸含量的影响

目的:采用柱前衍生化法对去势大鼠股骨中羟脯氨酸(HyP)的含量进行测定,观察卷柏提取物对去势大鼠股骨中HyP含量的影响。方法:Wistar雌性大鼠摘除卵巢后1周开始ip卷柏总提物665 mg·kg-1,卷柏正丁醇部位85 mg·kg-1,卷柏水部位490 mg·kg-1,持续11周后处死,取其股骨,采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化反相高效液相色谱法,观察卷柏提取物对去势大鼠股骨中HyP含量的影响。结果:HyP 0.125～2.00 g.L-1线性关系良好(r=0.999 4),精密度试验RSD<1%,24 h内稳定性试验RSD<5%,加样回收率均在90%～110%;卷柏水部位和正丁醇部位均能增加去势大鼠股骨中HyP含量。结论:卷柏提取物能增加去势大鼠股骨中HyP含量,其中卷柏水部位和正丁醇部位,对去势大鼠骨质疏松具有一定的干预作用。     

千里光与欧洲千里光非生物碱部位HPLC特征指纹图谱比较研究

目的:建立千里光Senedo scandens和欧洲千里光S.Scandens非生物碱部位的HPLC特征指纹图谱分析方法,并对二者进行比较研究.方法:采用HPLC-UV方法对7批千里光药材和6批欧洲千里光药材的指纹图谱进行了比较,并分别以绿原酸、金丝桃苷为对照品,对指纹峰进行了半定量分析;采用Shiseido Capcell Pak MG Ⅱ C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.2%乙酸,梯度洗脱.结果:2种千里光属植物HPLC非生物碱部位的特征指纹图谱差异显著,分别在千里光和欧洲千里光指纹谱中检出11个共有峰,HPLC-DAD及HPLC-MS分析结果表明上述共有峰主要为有机酸类(包括绿原酸类和原儿茶酸类化合物)和黄酮类化合物.半定量分析的结果表明千里光中有机酸和黄酮类化合物的含量较高,其平均含量分别为欧洲千里光中的2.39,15.56倍.结论:所建立HPLC方法稳定可靠,同时适用于千里光属植物千里光和欧洲千里光的指纹图谱研究,可用于千里光药材的质量评价.     

江南卷柏提取物脱脂工艺优选

目的: 优选江南卷柏提取物的石油醚脱脂工艺,为该植物的资源开发与利用提供参考. 方法: 以穗花杉双黄酮提取量和浸膏得率为评价指标,通过正交试验考察石油醚用量、提取时间和提取次数对脱脂工艺的影响.采用HPLC测定穗花杉双黄酮含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~5 min,25%A;5~12 min,25%~35%A;12~17 min,35%~45%A;17~25 min,45%~50%A;25~40 min,50%~55%A;40~45 min,55%~70%A;45~50 min,70%~100%A;50~55 min,100%A;55~60 min,100%~25%A),检测波长330 nm. 结果: 最佳脱脂工艺为加6倍量石油醚回流提取2次,每次1 h;穗花杉双黄酮提取量72.77 mg,浸膏得率11.04%. 结论: 该脱脂工艺稳定可行,适用于江南卷柏提取物的纯化.     

HPLC同时测定北五味子中5种木脂素的含量

目的:建立同时测定北五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法:以Symmetry(C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,0～36 min(60∶40～66∶34);36～65min(66∶34～80∶20);65～70 min(80∶20),70～75 min(80∶20～100∶0),流速0.5 mL.min-1,检测波长254 nm。结果:五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素分别在0.021～4.160,0.020～4.000,0.021～4.240,0.020～3.960,0.021～4.200μg呈良好的线性关系(r=0.999 9);平均加样回收率分别为104.8%,104.2%,102.7%,104.6%,104.5%。RSD值均小于3%。结论:本方法稳定易行、重复性好,可用于北五味子药材的质量评价。     

广西多叶越南槐HPLC指纹图谱的建立及与山豆根HPLC指纹图谱一致性比较研究

目的: 建立多叶越南槐的HLPC指纹图谱分析方法,为科学评价和有效控制多叶越南槐药材的质量提供参考依据;并通过指纹图谱比较多叶越南槐与山豆根的相似性,为多叶越南槐与山豆根同源性研究提供参考数据. 方法: 采用反相高效液相色谱法,Agilent Eclipse-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(用三乙胺调pH 6.4)梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长215 nm,柱温30℃,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版软件进行数据处理. 结果: 建立的多叶越南槐指纹图谱有14个共有峰,指认了7个共有峰;各批药材指纹图谱比较相似度大部分在0.90以上,基本符合指纹图谱研究技术的要求;多叶越南槐与山豆根指纹图谱相比较,相似度均在0.90以上. 结论: 该方法精密度、稳定性及重复性较好,特征性及专属性强,可以有效地用于多叶越南槐药材的质量控制,为开发和利用多叶越南槐药材资源提供科学依据,通过多叶越南槐与山豆根指纹图谱的比较,可推测出多叶越南槐与山豆根成分相似,亲缘关系相近.     

HPLC同时测定罗布麻叶药材及其 提取物中6种黄酮的含量

目的:建立同时测定罗布麻叶药材及其提取物中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素和山柰酚含量的方法.方法:采用HPLC法,Shim pack ODS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温40℃,以0.2%磷酸水溶液和0.2%磷酸乙腈溶液为流动相进行液相色谱梯度洗脱,检测波长360nm,流速1.0mL·min-1.结果:6种黄酮成分在40min内均达到基线分离,线性关系良好(R2＞0.9997,n=6),日内、日间精密度RSD≤2.0%.该法成功地应用于罗布麻药材及其提取物中6种黄酮含量的测定,药材和提取物样品溶液中6种黄酮的平均回收率分别为97.30%～105.8%(RSD≤3.6%)和98.70%～103.1%(RSD≤2.2%).结论:本方法操作简单、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为罗布麻叶药材及其提取物质量控制提供了一个很好的依据.     

HPLC同时测定菊花中6种活性成分含量

目的:利用HPLC同时测定菊花中绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、异绿原酸C、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量.方法:以Phenomenex Gemini-NX C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温25℃,检测波长350 nm.结果:6种活性成分均达到基线分离,线性关系良好(Γ≥0.999 7);平均加样回收率为100.6%～102.4%,RSD＜3%.除异绿原酸A外,其他5种成分在蒸制样品中均显著高于直接晒干样品.蒸制后,半开放菊花绿原酸和异绿原酸A含量分别比全开放菊花高53%和41%.结论:本方法方法灵敏、准确、可靠、重复性好,可用于菊花药材的质量评价.     

HPLC-DAD同时测定柘树和构棘根与茎中4种黄酮类成分的含量

目的:分析比较柘树与构棘根及茎中花旗松素、柑桔素、槲皮素、山柰酚的含量,为品种鉴定与质量评价提供科学参考.方法:采用高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD),色谱柱为Agilent C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1％磷酸溶液梯度洗脱(0 ～ 15 min,35％ ～50％ A;15 ～30 min,50％ ～65％A),检测波长290 nm(花旗松素、柑桔素)和365 nm(槲皮素、山柰酚),柱温30℃.结果:花旗松素、槲皮素的含量柘树根明显高于构棘根,柘树茎明显高于构棘茎,种间含量差异大;柑桔素、山柰酚的含量构棘根高于柘树根,柘树茎与构棘茎含量相当,种间含量差异小,同种药用部位间含量差异大.结论:4种成分的含量在柘树和构棘及其药用部位根和茎都存在一定的差异,在临床上不可混淆使用.     

HPLC同时测定人参须根中人参炔醇和人参环氧炔醇的含量

目的:建立同时测定人参须根中人参炔醇和人参环氧炔醇含量的方法。方法:采用Elite C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长230 nm,柱温室温。结果:人参炔醇和人参环氧炔醇分别在0.70～3.50μg(r=0.999 5)和0.64～3.20μg(r=0.999 9)呈良好线性关系,平均回收率分别为99.1%(RSD1.7%),99.3%(RSD 1.2%)。结论:该方法快速简便,重复性好,为人参须根的综合开发提供质控依据。