异甘草素对Hela细胞氧化还原状态的影响

目的 探讨异甘草素体外抗氧化作用及其对Hela细胞氧化还原状态的影响,考察异甘草素抑制宫颈癌Hela细胞增殖与活性氧的关系.方法 采用化学方法测定异甘草素对羟自由基,DPPH,超氧阴离子清除率和抑制脂质过氧化的抑制率,考察其抗氧化效果;SRB法测定细胞活力,以细胞内ROS荧光探针DCFH-DA,测定荧光强度以表征细胞内ROS水平,试剂盒测定细胞内SOD和CAT的活力,考察其对细胞内氧化还原状态的影响.结果 异甘草素具有强的体外抗氧化作用,并且呈浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖;随异甘草素浓度变化呈现1～7.5 mg/L抗氧化,高于7.5 mg/L浓度促氧化的变化.结论 异甘草素浓度依赖性地抑制宫颈癌Hela细胞的增殖;异甘草素低浓度时清除细胞内活性氧,高浓度时促进自由基的生成,促进Hela细胞凋亡.     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

百里醌抑制卵巢癌生长及其机制研究

目的研究百里醌对卵巢癌生长的影响及其作用机制。方法百里醌作用卵巢癌细胞株SKOV3后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blotting检测胞核蛋白Nrf2、胞浆蛋白Keap1、Akt、p-Akt、NQO1、GCLC的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中NQO1和GCLC mRNA水平。制备裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察百里醌对肿瘤生长的影响;免疫组化检测肿瘤组织Nrf2、NQO1和GCLC的阳性表达。结果与对照组比较,百里醌明显抑制SKOV3细胞生长(P0.05、0.01),并诱导细胞凋亡(P0.01);升高细胞内ROS水平(P0.05);下调胞核Nrf2蛋白及胞浆p-Akt蛋白表达(P0.05),上调Keap1蛋白表达(P0.001);下调NQO1、GCLC的mRNA和蛋白表达(P0.05、0.01)。百里醌抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的生长(P0.01),降低肿瘤组织中Nrf2、NQO1、GCLC的阳性表达(P0.05、0.01)。结论百里醌抑制卵巢癌生长,其机制可能是抑制胞核Nrt2蛋白表达,促进癌细胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡。     

川芎当归提取物对血管平滑肌细胞MAPK信号通路与周期蛋白的调控效应

目的揭示川芎当归提取物(ELCAS)抑制血管平滑肌细胞增生的分子机制。方法以体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞为研究对象,应用Westernblot方法检测不同质量浓度ELCAS对血管平滑肌细胞内的ERK、JNK、p38磷酸化水平的影响,以及周期蛋白CyclinD1和细胞周期抑制子p21的表达情况。结果ELCAS能显著抑制ERK、JNK和p38的磷酸化以及血清诱导的CyclinD1蛋白的表达,并表现出良好的浓度依赖性;同时ELCAS能剂量依赖性地促进细胞内周期蛋白抑制子p21过表达,并抑制pRb磷酸化水平和CyclinD1蛋白表达。结论ELCAS可通过抑制MAPK信号通路以及对周期蛋白的调控来抑制血管平滑肌细胞增生。     

红蓝方通过线粒体凋亡途径促进人肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的: 研究红蓝方( HLD) 对肺癌 A549 细胞的诱导凋亡作用,并基于线粒体凋亡途径探讨其效应机制。方法: 采用不同浓度 HLD 处理人肺癌 A549 细胞,使用 CCK-8 检测细胞毒性及增殖抑制作用;流式细胞技术检测细胞周期和凋亡; 活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧水平; 线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位; Western blot 检测细胞内线粒体 B 淋巴细胞瘤-2( Bcl-2) 家族以及凋亡相关蛋白的表达情况。结果: HLD 可明显抑制肺癌 A549 细胞的增殖,破坏线粒体膜电位,提高细胞内 ROS 水平,显著提高 Bcl-2 家族促凋亡蛋白 Bim_EL、Bim_L、Bax、Bok、Noxa 水平,降低抗凋亡蛋白 Bcl-2 水平以及 Mcl-1磷酸化水平,促进 A549 细胞凋亡。结论: HLD 可通过线粒体凋亡途径促进 A549 细胞凋亡。     

金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的:研究金复康口服液(JFK)诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮(MTT)比色法,考察不同质量浓度JFK(0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L~(-1))对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)考察JFK对裂解DNA修复酶(cleaved PARP),活化型半胱天冬酶-3(actived Caspase-3),Wnt/β-联蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L~(-1)JFK,分别干预24 h,30 min。结果:JFK在1.5~30 g·L~(-1)呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖(P0.01)。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15~30 g·L~(-1),其中JFK 30 g·L~(-1)时抑制A549细胞的平板克隆最显著(P0.01)。与空白组比较,JFK 15~30 g·L~(-1)可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡(P0.05),且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达(P0.05,P0.01)。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平(P0.05),同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平(P0.05)。结论:金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。     

Akt活性抑制对苍耳亭抗非小细胞肺癌活性的促进作用

目的:研究抑制非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞内的Akt激活对苍耳提取物苍耳亭(Xanthatin)抗肿瘤活性的影响。方法:MTT实验检测苍耳亭对A549细胞的抑制能力;Western blot实验检测苍耳亭对Akt、m TOR激活水平的影响;采用Akt1 siRNA干扰及Akt特异性抑制剂MK-2206研究Akt信号阻断对苍耳亭抗肿瘤效果的影响。结果:苍耳亭(2.5μmol/L~40μmol/L)能够剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,起效剂量为20μmol/L,24h的IC50值为14.52μmol/L;苍耳亭处理24h能够促进Akt、m TOR的磷酸化激活;采用Akt1 siRNA干扰或MK-2206(1μmol/L)阻断Akt通路后能够提高10μmol/L剂量的苍耳亭作用24h对A549细胞的抑制作用。结论:阻断Akt信号对于苍耳亭抗NSCLC效果的发挥具有促进意义。     

Nrf2点突变稳转肺癌细胞株构建及鉴定

目的构建核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)点突变逆病毒稳转细胞株,并检测其在A549人肺癌细胞中的表达效果,为基因靶向治疗提供研究基础。方法针对人Nrf2基因序列,扩增目的片段并与Teasy载体连接,构建Nrf2-Teasy重组质粒,用Fast Mutagenesis System对Nrf2进行定点诱变,使其第2号外显子有T35C和G37A的点突变。并将突变的Nrf2片段插入逆病毒载体pMSCV,构建pMSCV-MUT-Nrf2重组质粒。利用逆病毒系统将其稳转入A549肺癌细胞,运用RT-PCR技术检测Nrf2 mRNA表达水平。结果稳转后的A549目的细胞可观察到荧光,且其Nrf2 mRNA表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建点突变的逆病毒质粒,并有效感染目的细胞,为进一步研究Nrf2基因突变在肺癌中的作用提供细胞模型。     

长梗秦艽酮通过调节Akt和ERK1/2通路抑制人肝癌BEL-7402细胞生长

目的:研究长梗秦艽酮抑制人肝癌BEL-7402细胞生长与Akt和ERK1/2通路的关系.方法:采用MTT法观察BEL-7402细胞活性,Western blot蛋白质印记法检测Akt和ERK1/2磷酸化水平,流式细胞术分析细胞周期.结果:长梗秦艽酮能够抑制人肝癌BEL-7402细胞生长,诱导S期细胞周期阻滞,激活Akt和ERK1/2磷酸化,并凡Akt和ERK1/2抑制剂能够拮抗长梗秦艽酮对BEL-7402细胞的生长抑制和S期阻滞诱导作用.结论:长梗秦艽酮可以通过调节Akt和ERK1/2通路诱导肿瘤细胞周期阻滞,从而抑制肿瘤细胞生长.     

鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用研究

目的:探讨鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用及其机制。方法:利用CCK-8法检测BRU对H1299细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC_(50)),将H1299细胞分为对照组、BRU组(IC_(50))、X射线组(2 Gy)和BRU联合X射线组(BRU+2 Gy)。应用克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测照射后24 h细胞凋亡率和胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS);Western blotting技术检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路和线粒体凋亡通路相关蛋白表达;免疫荧光技术实现Nrf2蛋白定位。结果:BRU的IC_(50)为100 nmol/L,用该浓度处理H1299细胞24 h后,Nrf2表达量最低;100 nmol/L BRU联合2 Gy的X射线照射后,与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、Nrf2蛋白表达量降低,细胞核中Nrf2蛋白含量减少,线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高。结论:BRU联合X射线通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路,增加H1299细胞凋亡,从而增强H1299细胞的辐射敏感性。     

蝎毒多肽提取物对A549细胞增殖抑制作用机制研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对非小细胞肺癌细胞株A549的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度PESV对A549细胞生长与增殖的影响,下游实验将对数生长期的A549细胞分为阴性对照组、PESV低、中、高剂量组,应用流式细胞术、免疫细胞化学法、Western blot法检测PESV干预后细胞周期及VEGF,HIF-1α和PTEN蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,PESV在一定浓度范围内对A549细胞的增殖活性有明显抑制作用(P<0.01)。流式细胞法、免疫细胞化学法及Western blot法结果显示,PESV干预后能使A549细胞阻滞于G0/G1期,并显著下调HIF-1α,VEGF表达,上调PTEN表达。结论:PESV能够抑制A549细胞的增殖,其作用机制可能与影响血管生成因子VEGF,HIF-1α和PTEN的表达而直接抑制细胞增殖、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。     

Caffeoylserotonin Protects Human Keratinocyte HaCaT Cells against H2O2‐Induced Oxidative Stress and Apoptosis through Upregulation of HO‐1 Expression via Activation of the PI3K/Akt/Nrf2 Pathway

Caffeoylserotonin (CaS) has strong radical scavenging activity as well as antioxidant activities, protecting cells from lipid peroxidation, intracellular reactive oxygen species generation, DNA damage, and cell death. The molecular mechanism by which CaS protects against oxidative stress is not well understood. Here, we analyzed the cytoprotective activity of CaS in hydrogen peroxide (H₂O₂)‐treated keratinocyte HaCaT cells. H₂O₂ induced apoptosis in the cells through activation of pro‐apoptotic p21, Bax, and caspase‐3. Pretreatment with CaS inhibited apoptotic gene expression and activated the anti‐apoptotic gene, Bcl‐xL. Although CaS did not directly affect heme oxygenase‐1 (HO‐1) expression, pretreatment with CaS augmented HO‐1 expression through an increase in NF‐E2‐related factor (Nrf2) stability and stimulation of Nrf2 translocation to the nucleus upon H₂O₂ exposure. H₂O₂ also induced the phosphorylation and subsequent activation of ERK, p38 MAPK, and Akt. Analysis using specific inhibitors of p38 MAPK and Akt demonstrated that only Akt activation was involved in HO‐1 and Nrf2 expressions. In addition, PI3K and PKC inhibitors suppressed HO‐1/Nrf2 expression and Akt phosphorylation. These results demonstrate that CaS protects against oxidative stress‐induced keratinocyte cell death in part through the activation of Nrf2‐mediated HO‐1 induction via the PI3K/Akt and/or PKC pathways, but not MAPK signaling. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

银杏内酯诱导嗜铬细胞瘤细胞表达低氧诱导因子-1α

 目的研究银杏内酯(ginkgolides,Gin)对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响以及与其相关的信号通路。方法通过MTT比色法观察不同浓度Gin对PC12细胞活性的影响,RT-PCR和Western Blot法分析Gin对PC12细胞低氧诱导因子-1(αhypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达以及MAPK信号通路的影响。结果一定浓度范围的Gin可促进PC12细胞的活性,在37.5 mg·L^-1作用24 h效果最明显。37.5 mg·L^-1 Gin单独处理PC12细胞24 h可诱导HIF-1αmRNA表达增强和蛋白水平上调。Gin还引起p-ERK水平的明显提高。Gin增加PC12细胞HIF-1α蛋白的稳定性存在一定的时间和剂量依赖关系,PD98059可部分抑制Gin的增强作用,金雀异黄素可完全阻断之;与此相对应的是,Gin以时间和剂量依赖方式诱导PC12细胞p-ERK水平的增高,PD98059和金雀异黄素均能完全阻断Gin的诱导作用。结论Gin可诱导PC12细胞表达HIF-1α,主要与MEK-ERK信号通路激活有关,可能是其促进分化的PC12生长的原因。     

Fucoidan from Undaria pinnatifida induces apoptosis in A549 human lung carcinoma cells

Fucoidan, a sulfated polysaccharide, has various biological activities, such as anticancer, antiangiogenic and antiinflammatory effects; however, the mechanisms of action of fucoidan on anticancer activity have not been fully elucidated. The anticancer effects of fucoidan from Undaria pinnatifida on A549 human lung carcinoma cells were examined. Treatment of A549 cells with fucoidan resulted in potent antiproliferative activity. Also, some typical apoptotic characteristics, such as chromatin condensation and an increase in the population of sub-G1 hypodiploid cells, were observed. With respect to the mechanism underlying the induction of apoptosis, fucoidan reduced Bcl-2 expression, but the expression of Bax was increased in a dose-dependent manner compared with the controls. Furthermore, fucoidan induced caspase-9 activation, but decreased the level of procaspase-3. Cleavage of poly-ADP-ribose polymerase (PARP), a vital substrate of effector caspase, was found. The study further investigated the role of the MAPK and PI3K/Akt pathways with respect to the apoptotic effect of fucoidan, and showed that fucoidan activates ERK1/2 in A549 cells. Unlike ERK1/2, however, treatment with fucoidan resulted in the down-regulation of phospho-p38 expression. In addition, fucoidan resulted in the down-regulation of phospho-PI3K/Akt. Together, these results indicate that fucoidan induces apoptosis of A549 human lung cancer cells through down-regulation of p38, PI3K/Akt, and the activation of the ERK1/2 MAPK pathway.     

薯蓣皂苷元对肿瘤坏死因子诱导的单核细胞组织因子表达的抑制作用研究

目的：研究薯蓣皂苷元对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的THP-1细胞中组织因子（TF）促凝活性及表达的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用TNF-α（10ng．mL^-1）诱导THP-1细胞活化,采用改良的发色底物法测定TF的促凝活性;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）测定TF的mRNA表达;Westernblotting分析TF蛋白及相关信号通路激酶表达水平。结果：薯蓣皂苷元（0．01,0．1和1μm01．L^-1）预处理,可浓度依赖性地抑制TNF．6c诱导的TF促凝活性,经计算其Ic50为0．25μm01．L^-1;薯蓣皂苷元明显抑制TNF-d诱导的TFmRNA和蛋白表达。同时,著蓣皂苷元1gm01．L^-1对于TNF-α诱导的5～30minNF-κB／p65、IKKB、Akt、ERK和JNK的激活,也有一定的抑制作用。结论：薯蓣皂苷元可明显抑制TNF-α诱导的THP-1细胞TF的活性及表达,其机制可能与下调NF-κB／p65,IKKβ、Akt、ERK和JNK的磷酸化有关。     

Tetramethylpyrazine inhibits production of nitric oxide and inducible nitric oxide synthase in lipopolysaccharide-induced N9 microglial cells through blockade of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways,and suppression of intracellular reactive oxygen species

Aim of the study

To determine the inhibitory effect of tetramethylpyrazine (TMP) on lipopolysaccharide (LPS)-induced over-production of nitric oxide (NO) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in N9 microglial cells.

Materials and methods

N9 cells were pretreated with vehicle or TMP and then exposed to LPS for the time indicated. Cell viability was determined by methylthiazoyltetrazolium (MTT) assay. Nitrite assay was performed by Griess reaction. Expression of iNOS mRNA was examined by RT-PCR. Protein levels of iNOS, p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), ERK1/2, JNK, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and Akt were determined by western blot analysis. Formation of reactive oxygen species (ROS) was evaluated by fluorescence image system.

Results

TMP inhibited LPS-induced over-production of NO and iNOS in N9 cells. TMP also inhibited the NF-κB translocation from cytoplasm into nucleus of N9 cells. In addition, TMP showed blocking effect on the phosphorylation of p38 MAPK, ERK1/2, JNK and Akt, but not PI3K. Further, TMP suppressed the formation of intracellular ROS in LPS-induced N9 cells.

Conclusions

TMP inhibited production of NO and iNOS in LPS-induced N9 cells through blocking MAPK and PI3K/Akt activation and suppressing ROS production.     

NF-κB在马钱子碱抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2生成中的作用研究

目的:探讨马钱子碱抑制环氧化酶2(COX-2),从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制。方法:构建COX-2启动子若干转录因子缺失突变体与含COX-2 mRNA 3’-UTR的报告质粒,与Renillia共转染至非小细胞肺癌A549细胞,测报告基因luciferase活性研究COX-2启动子受马钱子碱抑制的最小顺式作用元件;采用蛋白质免疫印迹法研究马钱子碱对IκBα磷酸化与p65进核的影响。结果:马钱子碱显著性抑制LPS诱导的COX-2启动子的激活,而对COX-2 mRNA转录后调控影响不大,COX-2启动子-262位附近NF-κB是马钱子碱抑制COX-2启动子活性的重要顺式作用元件。马钱子碱能抑制IκBα的磷酸化,并能抑制p65的进核。结论:马钱子碱抑制NF-κB的激活,进而从转录水平COX-2的基因表达,促进A549细胞凋亡。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

Liquiritigenin inhibits serum-induced HIF-1α and VEGF expression via the AKT/mTOR-p70S6K signalling pathway in HeLa cells

Liquiritigenin (LQ) is a non-toxic dietary flavonoid with chemopreventive and anticancer properties. However, the mechanism of its antiangiogenesis remains unclear. Hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and its downstream target, vascular endothelial growth factor (VEGF), play a critical role in tumour angiogenesis and represent an attractive chemotherapeutic target. In this study, we investigated the effect of LQ on the molecular mechanism of angiogenesis. We found that LQ inhibited VEGF expression at both mRNA and protein levels. Liquiritigenin did not affect HIF-1α expression at the mRNA level, but it dramatically inhibited both serum- and mimicked hypoxic-induced HIF-1α protein accumulation in HeLa cells. Furthermore, we showed that LQ inhibited serum-induced expression of HIF-1α by reducing its stability and decreased the synthesis in a dose-dependent manner. Mechanistically, we demonstrated that LQ inhibited HIF-1α and VEGF expression involved in blocking the protein kinase B (PKB/Akt) signalling pathway, and the mechanisms correlated with dephosphorylation of the mammalian target of rapamycin (mTOR) and its effector ribosomal protein S6 kinase (p70S6K). In addition, LQ inhibited VEGF-induced formation of capillary-like structures in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Taken together, our study provided valuable insights into the mechanism of antiangiogenic effect of LQ.     

对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A诱导A549细胞骨架重组和迁移抑制的机制研究

目的 研究对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A诱导A549细胞骨架重组与迁移抑制的机制。方法 采用MTT、显微观察、免疫荧光染色、Western blotting、划痕实验等方法考察wangzaozin A对A549细胞毒性、细胞形态、细胞骨架、蛋白表达和细胞迁移的影响。结果 Wangzaozin A（0.2～0.8 μmol/L）处理A549细胞24、48、72 h后,细胞形态显著改变,细胞伪足增多并拉伸延长;细胞核扁化呈肾形改变;微管和角蛋白纤维网络的排布方式显著改变,表明细胞骨架经历了持续的重组过程。Wangzaozin A可显著上调细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）、微管相关蛋白4（microtubule-associated protein 4,MAP4）和角蛋白8（keratin 8,K8）的磷酸化水平（P<0.05、0.01）,ERK抑制剂U0126可显著抑制wangzaozin A诱导的ERK、MAP4和K8的磷酸化水平上调（P<0.05、0.01）。Wangzaozin A可显著抑制A549细胞的迁移,呈剂量和时间相关性。结论 Wangzaozin A可以通过激活ERK信号通路,上调MAP4和K8磷酸化水平,增加微管和角蛋白纤维的动态性,干扰细胞微管动力学过程,从而抑制A549细胞迁移。