辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究

[目的]通过检测辐射损伤所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定辐射损伤所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,基于代谢组学的方法考察血虚证证本质及四物汤的作用机制。[方法]C57小鼠按体质量随机分为正常组、辐射造模组、四物汤反证组。造模7d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物。[结果]主成分分析结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。[结论]四物汤治疗血虚证的机制可能与稳定细胞膜,维持细胞内外渗透压平衡;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢以及增强机体抗氧化能力、免疫力有关。     

综合放血法所致血虚证小鼠模型及 四物汤反证的代谢组学研究

目的:通过检测综合放血法所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定综合放血法所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,从代谢组学角度研究血虚证证本质及四物汤的作用机制.方法:C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、综合放血模型组、四物汤反证组,每组10只.造模10 d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物.用600 MHz超导傅立叶变换核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.01进行分段积分并归一化,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析.结果:与对照组相比,模型组的血清及各组织的内源性代谢物中乳酸、胆碱、牛磺酸、丙氨酸、低密度脂肪酸、甘油、不饱和脂肪酸、肌醉、乙酞乙酸盐、丙氨酸及庄β-羟基丁酸的含量有明显变化,这些变化在四物汤治疗组中有不同程度的回调.上述代谢物可以作为潜在的生物标记物进行相关机制的研究.结论:综合放血法制作的血虚证小鼠的糖有氧氧化受到抑制,无氧酵解减弱,脂肪动员加强,淋巴细胞增殖受到抑制及机体免疫功能受损.四物汤能够对上述血虚证病理结果进行逆转.     

灵芝多糖对辐射损伤小鼠影响的胸腺代谢组学分析

目的:运用代谢组学方法分析灵芝多糖对辐射损伤小鼠内源性物质代谢的影响,寻找潜在的生物标志物并分析其代谢途径,探讨其作用机制。方法:将30只小鼠随机分为正常组、模型组和灵芝多糖组(给药剂量96 mg·kg^-1),每组10只,前两组给予生理盐水,连续灌胃14 d,在第7天灌胃后2 h,除正常组外,模型组和灵芝多糖组小鼠以X射线进行全身照射。利用UPLC-Q-TOF-MS检测胸腺组织中内源性小分子代谢物,利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLSDA)比较正常组、模型组以及灵芝多糖组内源性小分子代谢物的变化情况,对差异代谢物进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路分析。结果:鉴定出34个潜在生物标志物,与模型组相比,发现灵芝多糖组对L-谷氨酸、牛磺酸、磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱(Lyso PC)等均具有显著的逆转趋势,分别参与牛磺酸和亚牛磺酸代谢、甘油磷脂代谢以及D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢。结论:灵芝多糖可能通过改善辐射模型小鼠胸腺中相关潜在生物标志物表达及其相关代谢通路来发挥辐射防护作用。     

不同造模方法所致血虚证及四物汤干预的代谢及蛋白质组学研究

四物汤为经典的补血剂,血虚证为临床多见证候,四物汤及血虚证的现代实验研究常用的动物造模方法分为放血法、溶血法、辐射损伤法、化学损伤法和综合造模法。基于系统生物学的研究,总结不同造模方法所致血虚证模型及四物汤干预的代谢及蛋白质组学的研究,对于四物汤的疗效评价及其方证相关性研究具有重要意义。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证治疗后的代谢组学研究

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方法:将C57小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、环磷酰胺模型组、四物汤给药组(10 g.kg-1.d-1),每组10只,连续给药7 d后股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓。用600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.04进行分段积分并归一化后,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析。结果:正常对照组、环磷酰胺模型组和四物汤给药组的血清代谢物组成、胸腺、脾脏、骨髓提取物的成分明显不同。其中环磷酰胺导致血清中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调,低密度脂蛋白、亮氨酸/异亮氨酸含量上调;胸腺提取物中的牛磺酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,乳酸含量下调;脾脏提取物中的乳酸,3-羟基丁酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,牛磺酸的含量下调;骨髓提取物中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调。给予四物汤后,以上各成分在不同程度上得到有效逆转。结论:环磷酰胺所致血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。经典补血方剂治疗血虚证的机制可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。     

大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

脾气虚证代谢综合征大鼠血清脂质代谢生物标志物代谢组学研究

目的:通过脾气虚证代谢综合征大鼠血清样本脂质代谢物进行非靶标脂质组学分析,寻找脾气虚证代谢综合征早期诊断相关的特征性脂质生物标志物,探索其微观物质基础。方法:将30只大鼠随机分为正常组、模型组,每组15只。模型组通过劳倦加饮食不节法造模。运用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)检测模型组和正常组生物样本血清的代谢轨迹,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)寻找各组代谢物差异,筛选潜在内源性标志物。结果:潜在生物标志物主要有溶血磷脂酰胆碱、2-羟基丁酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸、亚油酸、花生四烯酸等。结论:脾气虚证代谢综合征大鼠模型存在明显脂质代谢紊乱,游离脂肪酸是脂质代谢中最活跃的成分。     

基于液相色谱质谱联用系统的维吾尔医异常黑胆质证哮喘病的血清代谢组学研究

利用液相色谱质谱联用技术开展维医异常黑胆质证哮喘的血清代谢组学研究,血清样品经4倍体积乙腈沉淀蛋白处理,对采集的谱图进行峰提取、峰匹配和缺失值过滤后,采用主成分分析和偏最小二乘－判别分析进行数据解读。结果发现,异常黑胆质证哮喘病人的代谢表型发生了显著变异,主成分分析得分散点图中健康对照组与患病组分类良好;偏最小二乘－判别分析发现了15个表征代谢表型变异的生物标记物,对其中9个进行了结构鉴定,预测了其余6个的分子式。与健康对照组比较,肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱、十五酰溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰溶血磷脂酰胆碱、二十碳三烯酰溶血磷脂酰胆碱、油酰溶血磷脂酰胆碱、十七酰溶血磷脂酰胆碱、单棕榈酸甘油酯、N－十四酰二氢鞘氨醇和未知代谢物C20H43NO2、C22H47NO3在患病组的含量显著下降,而硬脂酰胺和未知代谢物C16H35NO、C16H33NO、C27H3O14、C20H39NO的含量显著升高。异常黑胆质证哮喘中溶血磷脂酰胆碱的降低可能与炎症介导的肺表面活性物质的功能异常有关,这为进一步认识维医异常黑胆质的发病机制与维医独特的治疗原则提供了初步基础。     

基于液相色谱质谱联用系统的维吾尔医异常黑胆质证哮喘病的血清代谢组学研究

利用液相色谱质谱联用技术开展维医异常黑胆质证哮喘的血清代谢组学研究,血清样品经4 倍体积乙腈沉淀蛋白处理,对采集的谱图进行峰提取、峰匹配和缺失值过滤后,采用主成分分析和偏最小二乘-判别分析进行数据解读。结果发现,异常黑胆质证哮喘病人的代谢表型发生了显著变异,主成分分析得分散点图中健康对照组与患病组分类良好;偏最小二乘-判别分析发现了15个表征代谢表型变异的生物标记物,对其中9 个进行了结构鉴定,预测了其余6 个的分子式。与健康对照组比较,肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱、十五酰溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰溶血磷脂酰胆碱、二十碳三烯酰溶血磷脂酰胆碱、油酰溶血磷脂酰胆碱、十七酰溶血磷脂酰胆碱、单棕榈酸甘油酯、N-十四酰二氢鞘氨醇和未知代谢物C20H43NO2、C22H47NO3 在患病组的含量显著下降,而硬脂酰胺和未知代谢物C16H35NO、C16H33NO、C27H45N3O14、C20H39NO 的含量显著升高。异常黑胆质证哮喘中溶血磷脂酰胆碱的降低可能与炎症介导的肺表面活性物质的功能异常有关,这为进一步认识维医异常黑胆质的发病机制与维医独特的治疗原则提供了初步基础。     

基于代谢组学技术的白芍养血柔肝作用机制研究

目的通过分析血虚肝郁模型大鼠血清内源性代谢物的变化,利用代谢组学技术研究白芍对异常代谢物的调节作用,探讨白芍养血柔肝功效的作用机制。方法采用辐照复合慢性束缚应激方法建立大鼠血虚肝郁模型,以液质联用为核心技术,以主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)方法为数据分析的主要手段,筛选出可能的生物标志物,并分析白芍的干预机制。结果白芍通过影响磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、神经酰胺、脱氧胞苷、甜菜碱等21种小分子代谢物,对体内代谢轨迹的扰动起到一定的回调作用,能够改善大鼠因外界刺激因素(如辐照、束缚、孤养)诱发的血虚肝郁状态。结论白芍养血柔肝功效的作用机制可能与鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、α-亚油酸代谢等相关代谢通路有关。     

三类传统方剂治疗5-氟尿嘧啶所致大鼠贫血的研究

目的:比较四物汤、四君子汤和八珍汤对贫血(血虚证)大鼠的治疗作用和可能机制,初步探索补血、补气和气血双补方剂对中医血虚证型的疗效差异与作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、八珍汤组、四物汤组和四君子汤组(2.3,3.0,1.2 g·m L-1),每组8只。除正常组外,其他4组按大鼠体重150 mg·kg-1尾静脉注射5-氟尿嘧啶(5-FU)造模,观察3种方剂对贫血大鼠的外观体征,脾指数和胸腺指数,血红细胞(RBC),血红蛋白(HGB),血小板(PLT),白细胞(WBC)数量,网织红细胞和骨髓象的影响,并应用RT-PCR技术检测肝肾中促红细胞生成素(EPO)mRNA含量。结果:与正常组比较,模型组脾指数和胸腺指数明显降低,RBC,HGB,PLT,WBC数量明显降低(P0.01),骨髓增殖能力降低,EPO mRNA的表达降低;与模型组比较,八珍汤与四物汤组明显改善贫血大鼠外观、提高脾指数和胸腺指数,升高RBC,HGB,PLT,WBC数量(P0.05,P0.01),提高骨髓增殖能力,并上调EPO mRNA的表达。结论:三方中,气血双补方剂(八珍汤)疗效最好,补血方剂(四物汤)疗效优于单纯补气(四君子汤)组,实验结果为补气、补血、气血双补治疗血虚疾病提供了实验依据,一定程度上说明了临床治疗贫血症(血虚证)辨证施治理论的合理性。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤不同提取工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤水提工艺、水提醇沉工艺及50％乙醇渗漉工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响.方法:将小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性(复方阿胶浆)组、四物汤药物组1号(水提组)、2号(水提醇沉组)、3号(50％乙醇渗漉组).四物汤药物组每日ig给予四物汤1,2,3号(12 g生药·ks-1),阳性组给予复方阿胶浆(20 mL·kg-1),正常对照组与模型组给予等容量生理盐水,连续给药(生理盐水)8d.除空白对照组外,其余各组分别于第2,5日sc乙酰苯肼20,40 mg·kg-1,从第5日起,每日ip环磷酰胺40 mg·kg-1,连续4d.空白对照组同时注射等容量生理盐水.检测四物汤不同提取工艺药物组对血虚小鼠外周血象、脾脏和胸腺指数、骨髓有核细胞数的作用.结果:四物汤药物组1,2,3号均能升高血虚小鼠红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数及骨髓有核细胞数,其中水提组和50％乙醇渗漉组差异性显著(P＜0.05);四物汤药物组1,2,3号均能显著增加血虚小鼠脾脏指数和胸腺指数(P＜0.01),其中水提组、50％乙醇渗漉组有强于水提醇沉组的趋势.结论:由3种提取工艺制得的四物汤对改善血虚模型小鼠的造血功能均有作用,以水提组和50％乙醇渗漉组较优.     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

采用雌性SD大鼠探索建立适宜于气滞血瘀证妇科疾病特点的模型评价体系

目的:建立适宜于气滞血瘀证妇科疾病特点的动物模型评价体系,以临床经典方反证模型证候特点,从宏观生物体征评价模型专属性及可靠性.方法:选用SD雌性大鼠,采用2周皮下注射盐酸肾上腺素及随机昼夜颠倒、冰水游泳、烘箱热烘、噪音刺激、悬尾慢性不可预见性刺激复制模型,灌胃香附四物汤、少腹逐瘀汤及阳性对照药阿司匹林,以血液流变学、凝血4项指标、四诊信息(爪、尾、舌数码拍照;体温检测;体重;摄食量;心电图采集;旷场自主活动)、证候积分综合评价模型.结果:与正常组相比,模型组在血液流变学、凝血4项指标、动物行为学、体重、饮食量、证候积分、心率方面均有明显变化;拍摄舌象、爪像经Photoshop 7.0分析所得大红色(r)、绿色(g)、蓝色(b)的百分含量与正常组相比有显著性差异;阿司匹林及香附四物汤给药组在血液流变学、凝血4项、动物行为学、体重、饮食量、心率、证候积分及舌、尾r,g,b有显著改善作用,而少腹逐瘀汤未见明显改善作用.结论:本文建立了适宜于气滞血瘀证妇科疾病特点的动物模型评价体系,为气滞血瘀证模型评价体系研究提供借鉴.     

凉血活血颗粒对小鼠辐射损伤的防治作用

目的观察凉血活血颗粒对辐射损伤小鼠模型的防治作用。方法雄性BALB/c小鼠50只,随机分为即正常组、模型组、凉血活血颗粒高、中、低剂量组,每组10只,采用6.0 Gy 60Coγ放射源照射除正常组外的动物,建立辐射损伤动物模型。照前45 min至照后10 d,凉血活血颗粒高、中、低剂量组小鼠分别给予4、2、1 g/kg灌胃,正常组及模型组用等体积蒸馏水灌胃,均为每日1次。观察照后小鼠的一般情况,照后10 d检测血常规、骨髓DNA、骨髓有核细胞、胸腺指数、肺脏指数。结果 与正常组比较,模型组小鼠接受6.0 Gy 60Coγ射线照射后10 d外周血白细胞、红细胞、血小板数量,骨髓DNA、骨髓有核细胞计数、胸腺指数显著降低,肺脏指数显著增高。与模型组比较,凉血活血颗粒高剂量组能升高外周血白细胞、血小板、骨髓DNA、骨髓有核细胞的数量,提高胸腺指数,降低肺脏指数。结论凉血活血颗粒对小鼠辐射损伤具有良好的防治作用。     

地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠胸腺细胞增殖 …

目的：研究中药复方地甘口服液对免疫介导再生生贫血小鼠模型胸腺淋巴细胞增殖周期的影响。方法：选用Ｂａｌｂ／ｃ小鼠为实验对象,在接受亚致死剂量射线照射后,立即注射ＤＢＡ／２小鼠胸腺、淋巴结混合细胞,形成免疫介导再障小鼠模型,分组处理后,摘取胸腺制成单细胞悬液,然后采用流氏细胞仪（ＦＡＣＳ）进行分析。结果：免疫介导再障小鼠胸腺细胞绝大部分停留在Ｇ０／Ｇ１期,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期细胞显著减少,与正常对照组比较     

四物二陈汤及其拆方治疗痰瘀阻络型血管性痴呆临床研究

目的 :观察四物二陈汤及其拆方治疗痰瘀阻络型血管性痴呆的临床疗效及作用机制。方法 :120例痰瘀阻络型血管性痴呆患者按就诊先后顺序分为4组:四物二陈汤组、二陈汤组、四物汤组、茴拉西坦组,每组各30例,分别予以四物二陈汤、二陈汤、四物汤、茴拉西坦胶囊口服治疗。观察比较各组治疗前后长谷川痴呆量表(HDS)评分、Barthel指数(BI)及总胆固醇(TCH)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、血浆过氧化脂(LPO)的变化。结果:四物二陈汤组治疗后的HDS评分、BI显著高于本组治疗前及其他各组治疗后,差异有统计学意义(P0.01);四物二陈汤组治疗后的血清TCH、TG、LPO值明显降低,HDL、SOD值明显升高,与本组治疗前及其他各组治疗后比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:四物二陈汤治疗痰瘀阻络型血管性痴呆疗效显著,其作用机制与化痰化瘀相关。     

地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠胸腺细胞增殖周期的影响

目的 :研究中药复方地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型胸腺淋巴细胞增殖周期的影响。方法 :选用Balb/c小鼠为实验对象 ,在接受亚致死剂量射线照射后 ,立即注射DBA/2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞 ,形成免疫介导再障小鼠模型 ,分组处理后 ,摘取胸腺制成单细胞悬液 ,然后采用流氏细胞仪(FACS)进行分析。结果 :免疫介导再障小鼠胸腺细胞绝大部分停留在G0 /G1期 ,S期和G2 +M期细胞显著减少 ,与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。两种中药复方均能促进小鼠胸腺细胞的分化增殖 ,降低细胞的凋亡率 ,但地甘口服液的效果明显优于四物口服液 (P <0 0 5)。结论 :地甘口服液可明显促进免疫介导再障小鼠的胸腺淋巴细胞分化增殖 ,延缓免疫细胞的衰老凋亡 ,效果优于四物口服液组。