乳猪肝细胞分离方法的建立

生物性人工肝作为暴发性肝衰竭的一种治疗手段正在不断的发展 ,理想的具有完整代谢活性的肝细胞是其关键的组成部分。我们在以往研究的基础上[1,2 ] ,建立起一种乳猪肝细胞的分离方法 ,现报道如下。一、材料和方法1.液体的配制 :(1)细胞分离液配制 :Ａ液 :含ＮａＣｌ 12 0ｍｍｏｌ/Ｌ、ＮａＨＣＯ32 5ｍｍｏｌ/Ｌ、ＫＣｌ 4.8ｍｍｏｌ/Ｌ、ＭｇＳＯ4 1.2ｍｍｏｌ/Ｌ、ＫＨ2 ＰＯ4 1.2ｍｍｏｌ/Ｌ。Ｂ液 :含ＣａＣｌ2 1.3 3ｍｍｏｌ/Ｌ、体积分数为 1.6%牛血清白蛋白的Ａ液。Ｃ液 :含葡萄糖5 .6ｍｍｏｌ/Ｌ、乙二胺四乙酸二钠 0 .5ｍｍｏｌ/…     

非核素标记检测端粒酶活性的研究

Ｋｉｍ[1]于1994年借助ＰＣＲ技术建立了灵敏的端粒酶检测方法———端粒重复片段扩增(ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｐｅａｔａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ)。我们对Ｋｉｍ的方法加以改进,建立了简便、非同位素的银染检测法,检测了脑瘤、肠癌、食管癌中端粒酶的活性。一、材料与方法1.总蛋白提取:手术后取下的活组织,液氮保存。(1)100ｍｌ提取液中含10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓＨＣｌ(ｐＨ7.5);1ｍｍｏｌ/ＬＭｇＣｌ2;1ｍｍｏｌ/ＬＥＧＴＡ,0.5ｍｍｏｌ/Ｌβ巯基乙醇;0.5%ＣＨＡＰＳ,体积分数为10%的甘油。(2)组织中提取总蛋…     

胰肾联合移植一例的麻醉处理

患者男 ,43岁 ,糖尿病史 2 2年 ,长期联合口服降糖药及肌注胰岛素治疗。2个月前出现肾功能衰竭尿毒症并行血液透析治疗至术前 2 4ｈ。ＢＰ2 3/12ｋＰａ,ＨＲ95次 /分 ,ＲＲ2 2次 /分 ;ＥＣＧ、Ｘ线摄胸片示正常 ,血肌酐 92 4 0 μｍｏｌ/Ｌ ,血尿素氮 2 2 4ｍｍｏｌ/Ｌ ,血钾 5 11ｍｍｏｌ/Ｌ ,血钠 143 3ｍｍｏｌ/Ｌ ,血氯 10 5ｍｍｏｌ/Ｌ ,血糖6 99ｍｍｏｌ/Ｌ。患者血型为Ｏ型。ＰＲＡ(群体反应抗体 ) :ＨＬＡＩ抗体 (- ) ,ＨＬＡⅡ抗体 :弱阳性。诊断 :(1)糖尿病Ⅰ型 ;(2 )慢性肾功能衰竭终末期尿毒症。入室后监测ＥＣＧ、ＢＰ、Ｓ…     

胰岛素依赖型糖尿病肾病患者红细胞膜钠锂交换活性测定及意义

探讨红细胞膜钠锂交换活性（ＳＬＣＡ）与胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）肾病之间的关系。方法采用Ｃａｎｅｓｓａ建立的方法，测定了１３例ＩＤＤＭ肾病，以及性别、年龄、糖尿病病程和体重指数（ＢＭＩ）等匹配的１２例正常白蛋白尿ＩＤＤＭ患者红细胞膜ＳＬＣＡ。结果ＩＤＤＭ肾病红细胞膜ＳＬＣＡ０．４６（０．３７～０．５４）ｍｍｏｌ·Ｌ－１·ＲＢＣ－１／ｈ显著高于正常白蛋白尿ＩＤＤＭ患者ＳＬＣＡ０．３０（０．２１～０．３９）ｍｍｏｌ·Ｌ－１·ＲＢＣ－１／ｈ（Ｐ＜０．００１）。结论ＳＬＣＡ可能是预测ＩＤＤＭ肾病最早的指标     

烧伤创面耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的动态观察

临床资料 :收集本科 1995～ 1999年 ,从住院患者创面分泌物培养的金黄色葡萄球菌 (ＭＳＳＡ) 16 8株。选择革兰阳性、葡萄状排列、触酶阳性、氧化酶阴性、还原硝酸盐、发酵葡萄糖产酸、血浆凝固酶阳性者确定为金黄色葡萄球菌。采用琼脂筛选法 ,在ＭＨ琼指中补足ＮａＣＬ到 6 0ｇ/Ｌ ,苯唑西林 0 0 0 4μｇ/Ｌ后倒板 ,将菌液 (浓度为 10 7ＣＦＵ/Ｌ)接种在培养基上 ,30℃孵育 4 8ｈ后观察结果。只要平板上有菌落生长 ,即视为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)。方法 :(1)应用碘纸条法定性 β内酰胺酶 ;(2 )应用Ｋ Ｂ法测定抗生素耐药性 ;…     

微载体培养L02人肝细胞应用于生物人工肝的初步研究

Ｌ0 2人肝细胞株组织学来源为人正常肝组织 ,具备一定正常肝细胞的生物功能。我们将高密度微载体培养的Ｌ0 2人肝细胞聚集体加入中空纤维生物反应器 ,构建简易体外生物人工肝装置并进行初步的应用研究。一、材料与方法1.材料 :Ｌ0 2人肝细胞株购于中国科学院上海细胞生物学研究所 ;Ｃｙｔｏｄｅｘ3微载体为Ｐｈａｒｍａｓｉａ公司产品 ;聚羟乙基异丁烯酸 (Ｐｏｌｙ ＨＥＭＡ )及ＤＭＥＭ、ＨａｍｓＦ12培养基均为Ｓｉｇｍａ公司产品。2 .Ｌ0 2人肝细胞的微载体培养 :( 1)取 1.4ｇＣｙｔｏｄｅｘ 3,水化处理[1] ;( 2 ) 12 %Ｐｏｌｙ ＨＥＭＡ…     

Mg^2＋对离体灌流环孢素A的大鼠肾脏血流动力学影响

了解血镁浓度与环孢素Ａ（ＣｓＡ）肾损害之间的关系。方法采用大鼠离体肾灌流模型，观察了Ｍｇ２＋对ＣｓＡ的急性肾脏效应的影响。结果正镁（１．２ｍｍｏｌ／Ｌ）时ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ灌流引起显著的肾血管痉挛和肾灌注不良，以及Ｃａ２＋聚积和Ｍｇ２＋耗竭；在低镁（０．１２ｍｍｏｌ／Ｌ）时，ＣｓＡ的作用明显增强；而高镁（４．８ｍｍｏｌ／Ｌ）时，ＣｓＡ的作用受到了有效的抑制。结论适当提高Ｍｇ２＋浓度能改善离体肾血流动力学和克服ＣｓＡ对肾脏的影响。鉴于使用ＣｓＡ的患者常有低镁血症，因此适当补镁对防治ＣｓＡ肾毒性具有一定意义。     

一氧化氮对烫伤大鼠肺血管通透性的影响

笔者以Ｎ -亚硝基左旋精氨酸甲酯 (Ｌ -ＮＡＭＥ)为研究手段 ,探讨了一氧化氮对烫伤后大鼠肺血管通透性的影响。材　料　与　方　法1.动物分组及致伤 :健康成年ＳＤ大鼠 90只 ,体重 2 80 30 0ｇ ,随机分为正常对照 (Ｃ组 )、单纯烫伤 (Ｂ组 )、及Ｌ -ＮＡＭＥ(Ｌ组 ) ,每组 30只。除Ｃ组外 ,其余各组背部脱毛后造成 30 %ＴＢＳＡⅢ度烫伤。致伤后立即予以 40ｍｌ/ｋｇ复方乳酸林格液、Ｌ组予以 10ｍｇ/ｋｇＬ -ＮＡＭＥ腹腔注射 ,并于伤前及伤后 0、4、12、2 4、48ｈ测定有关指标。2 .肺组织一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)活性测定 :采用双波长分光…     

LAMS拮抗肝癌细胞分泌物对T细胞转化的影响

昆布多糖硫酸酯 (ｌａｍｉｎａｒｉｎｓｕｌｐｈａｔｅ ,ＬＡＭＳ)是具有多种生物功能的昆布多糖衍生物〔1〕。本文旨在研究以ＬＡＭＳ拮抗肝癌细胞分泌物抑制Ｔ淋巴细胞 (ＴＬｃ)转化效果 ,为临床应用提供实验依据。材料与方法1.ＬＡＭＳ :按文献 2提取昆布多糖并制备昆布多糖硫酸酯。以苯酚 硫酸法〔3〕 测定其多糖为30 %。 16 40培养液稀释成所需浓度 ,0 2 2 μｍ滤器过滤。2 .肝癌细胞分泌物液 :取本科实验室常规培养ＳＭＭＣ 772 1、ＨｅｐＧ2细胞 72ｈ的培养液 ,离心 ,上清液置透析袋 ,用聚乙二醇 2 0 0 0 0浓缩为 6 ｇ/Ｌ ,0 2…     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

继发性阴囊坏疽2例报告

继发性阴囊坏疽极少见 ,我院 2 0 0 0年 3月收治2例 ,报告如下。1　病例报告例 1,64岁 ,有糖尿病史。入院前 1周因痔疮发作外敷中药 (膏剂 ,药名不详 ) ,3ｄ后出现阴囊肿痛。入院查体 :阴茎、阴囊高度肿胀 ,阴茎皮肤发亮、紫黑色 ,右侧阴囊前侧大面积皮肤呈黑色 ,有较多具特殊臭味浆液性液体渗出。实验室检查 :ＷＢＣ 15 .5× 10 9/Ｌ ;ＧＲＡ 84 .6% ;Ｈｂ 10 8ｇ/Ｌ ;ＡＬＴ 5 4Ｕ/Ｌ ;γ ＧＴ 77Ｕ/Ｌ ;ＴＰ 63ｇ/Ｌ ;Ａ1ｂ 32 ｇ/Ｌ ;ＢＵＮ 2 1ｍｍｏｌ/Ｌ ;ＣＯ2 ＣＰ 19ｍｍｏｌ/Ｌ ;Ｃｒ 4 13μｍｏｌ/Ｌ ;Ｇｌｕ 35 .6ｍｍｏｌ/Ｌ…     

白血病患者并发心肺疾病行骨髓移植一例

患者 ,男性 ,48岁 ,1999年 5月始出现鼻腔出血、高热、头晕、乏力 ,查血 :血红蛋白 110 ｇ/Ｌ ,白细胞38.7× 10 9/Ｌ ,血小板 2 6× 10 9/Ｌ ;骨髓细胞学检查诊断 :急性髓细胞白血病Ｍ2α型。既往有高血压病、高脂血症、糖尿病史 :自 1993年以来 ,血压持续在 140～ 15 0 / 90～ 10 5ｍｍＨｇ之间 ;血甘油三酯为3 .2～ 5 .6ｍｍｏｌ/Ｌ ;空腹血糖 6～ 8ｍｍｏｌ/Ｌ ,餐后 2ｈ达13ｍｍｏｌ/Ｌ ;心电图检查提示 :Ｉｏ 房室传导阻滞 ,偶发室早。予ＤＡ(柔红霉素、阿糖胞苷 )、ＥＭＡ(米托蒽醌、足叶乙甙、阿糖胞苷 )方案化疗各 1疗程达到完全缓…     

颅脑外伤脑脊液中兴奋性氨基酸测定及其意义

我们用高效液相色谱法测定 5 2例颅脑外伤患者脑脊液中兴奋性氨基酸———天门冬氨酸 (Ａｓｐ)和谷氨酸 (Ｇｌｕ) ,现报道如下。一、材料与方法1.仪器与试剂 :高效液相色谱仪包括 2 0 0型二元梯度泵、ＬＣ2 40荧光检测器、10 2 2小型工作站 ,保护柱 :ＯＤＳ 4.6ｍｍ× 5 0ｍｍ ,10 μｍ(兰州化学物理研究所色谱组 ) ,分析柱 :ｕｃｌｅｏｓｉｌＯＤＳ 6 .0ｍｍ× 2 0 0ｍｍ ,7μｍ (大连化学物理研究所色谱开发中心 ) ,邻苯二甲醛 (ＯＰＡ ,Ｆｌｕ ｋａ公司 ) ,氨基酸标准品 (Ｓｉｇｍａ公司 ) ,甲醇为分析纯经重蒸纯化 ,其余试剂均为分析纯 …     

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恶性肿瘤伴癌综合征的表现多样 ,作者将收治的 3例有特殊伴癌综合征表现的恶性肿瘤病人的诊治情况并结合文献复习报告如下。1　病例报告　　例 1 女 ,31岁。右上腹腹痛、腹胀、乏力 15ｄ ,于 1992年 3月 2 5日以“急性胆囊炎”入院。病人 10年前曾患肝炎。其父死于肝癌。体检 :肌张力减退 ,腱反射减弱 ,未及肝脾 ,右上腹压痛 ,Ｍｕｒｐｈｙ征阴性。 3月 2 8日Ｂ超示慢性胆囊炎。实验室检查 :ＷＢＣ 7 2× 10 9/Ｌ ,Ｎ 0 80。肝功能正常 ,ＨＢｓＡｇ阴性。血Ｋ2 2ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｎａ 138ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃｌ10 3ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃａ 2 5ｍｍｏ…     

苯乙酸对脑胶质瘤细胞超微结构的影响

本实验旨在观察诱导分化剂苯乙酸 (ＰＡ)对脑胶质瘤细胞形态及细胞周期的影响 ,在细胞水平探讨苯乙酸的作用机理。一、材料与方法1.细胞培养 :苯乙酸及ＩＭＤＭ培养基购于美国Ｆｌｕｋａ公司 ,小牛血清为长春生物制品所生产 ,胰蛋白酶为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,胶质瘤细胞Ｃ6购于美国菌种存储中心ＡＴＣＣ。Ｃ6细胞接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中常规单层培养 ,置于 37℃体积分数为 5 %的ＣＯ2 恒温恒湿培养箱中。2 .电镜观察 :Ｃ6细胞在培养瓶中传代培养 ,分别加入 0、2 .5、5 .0ｍｍｏｌ/Ｌ苯乙酸。 7ｄ后胰酶消化收集细胞 ,离心 ,取离心管底…     

小儿烫伤并发十二指肠穿孔一例

患儿男 ,2岁。因热液烫伤 5 0ｈ入院 ,院外未行补液。查体 :体温不升 ,脉搏 :15 6次 /ｍｉｎ ,呼吸 :2 8次 /ｍｉｎ。面色苍白 ,四肢冷 ,口干 ,尿量 7ｍｌ/ｈ ,反应差。创面分布于面、颈、胸及双上肢。血Ｎａ :12 3ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｋ :45 7ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｃｌ-:92ｍｍｏｌ/Ｌ ,Ｈｂ :12 6 ｇ/Ｌ。诊断 :(1) 18%ＴＢＳＡⅡ度烫伤 (2 )低血容量性休克。立即补液抗休克 ,抗感染 ,预防性使用甲氰咪胍 0 .2 ｇ静脉滴注 2次 /ｄ ,休克得以纠正。入院第 3天 ,呕吐淡红色血性胃内容物约 10 0ｍｌ,黑便及暗红色血便 4次 ,共约 5 0 0 ｇ ,并出现腹胀但腹…     

双荧光素染色检测5-氟尿嘧啶及羟基喜树碱诱导的肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

我们用 5 氟尿嘧啶 (5 Ｆｕ)、羟基喜树碱 (ＨＣＰＴ )在体外诱导人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1产生凋亡 ,并用双荧光染料吖啶橙 /溴乙锭 (ＡＯ/ＥＢ)染色结合ＤＮＡ电泳法进行观察 ,结果报道如下。一、材料与方法将 1× 10 8/ＬＳＳＣ 772 1细胞 (中国科学院上海细胞学研究所 )接种于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,于 3 7℃ ,体积分数 5 %ＣＯ2培养 2 4ｈ ,细胞铺满瓶底 ,呈对数生长时加入 5 Ｆｕ、ＨＣＰＴ使二者终浓度分别为75ｍｇ/Ｌ、1ｍｇ/Ｌ ,再继续孵育 ,分别于6、12、2 4、48ｈ观察结果。细胞孵育至特定时间 …     

果糖在微囊化肝细胞制作过程中的细胞保护作用

目的 为了减少肝细胞在微囊化过程中的缺氧损伤,研究在缺氧状态下果糖对肝细胞的保护作用。方法 将ＳＤ大鼠分为三组;Ａ组,细胞分离的灌流液和消化液中均加果糖２０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｂ,Ｃ两组不加果糖;细胞分离及微囊化后,检测细胞的活率,微囊化肝细胞体外培养,Ｃ组培养液中加果糖１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ａ,Ｂ两组不加。     

脑电频谱和心率变异与异丙酚全静脉麻醉/睡眠深度的临床研究

本研究通过观察异丙酚全静脉麻醉过程中脑电双频指数 (ＢＩＳ) ,边缘频率(ＳＥＦ)及心率变异指数 (ＨＲＶ)的变化 ,对异丙酚麻醉 /睡眠深度进行了临床研究。资料与方法10例ＡＳＡⅠ～Ⅱ级 ,年龄 38～ 6 5岁 ,体重 5 0～ 6 6ｋｇ ,无中枢神经系统疾患 ,行择期乳癌根治术的病人。术前药为哌替啶 5 0ｍｇ ,东莨菪碱 0 3ｍｇ肌注。病人入室后常规监测ＭＡＰ ,ＨＲ ,ＥＣＧ ,ＳｐＯ2 ,ＢＩＳ ,ＳＥＦ及ＨＲＶ(ＨＸＤ Ｉ多功能监护仪 )。脑电监测采用ＦＰ1 Ａ1,ＦＰ2 Ａ2 双导联脑电监测方法 ,使用 3Ｍ电极片 ,电极阻抗 <5ＫΩ。脑电监护仪 2 5…     

低分子肝素对老年维持性血液透析患者肾性骨病的影响

我们对 30例分别使用低分子量肝素 (ＬＭＷＨ)和标准肝素 (ＳＨ)抗凝的老年性维持性血液透析 (ＭＨＤ)患者的骨代谢状况进行了为期 3年的观察 ,现报告如下。资料和方法　选择 1995年 1～ 6月进入ＭＨＤ的老年患者 30例 ,ＬＭＷＨ组14例 ,男 8例 ,女 6例 ,年龄 6 0～ 71岁 ;ＳＨ组 16例 ,男 10例 ,女 6例 ,年龄 6 0～80岁。两组原发病、透析前病程、营养状况无差异。两组均采用碳酸氢盐透析 ,每周 3次 ,每次 4小时 ,透析用水均为反渗水。ＬＭＷＨ(平均相对分子质量45 0 0 ,抗凝效价 5 0Ｕ/ｍｇ)在血透前一次性按 10 0Ｕ/ｋｇ静注 ,不用维持量…