重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 研究NF-κB在高浓度葡萄糖(高糖)诱导的ECV-304血管内皮细胞凋亡中的作用。方法 用携有NF-κB抑制物IκBα突变体的IκBαM重组腺病毒(AdIκBαM)感染ECV．-细胞,利用Western Blot、EMSA、电镜、流式细胞仪等检测方法,研究NF-κB在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中所起的作用,以及阻断NK-κB活性对血管内皮细胞凋亡及细胞周期改变的影响。结果 高糖能诱导ECV-304细胞IκBα的降解和NF-κB的激活,G0/G1百分比增加,S和C2／M比例下降,延缓G0/G1向S期过渡,出现细胞凋亡的形态学改变,而感染AdIκBα的ECV-304／IκBαM细胞则能加速G0/G1向S期过渡,未出现细胞凋亡的形态学改变。结论 AdIκBαM能抑制高糖诱导的ECV-304细胞NF-κB的过度活化及对ECV-304细胞的致凋亡作用,加速细胞周期转换,证实NF-κB的激活在高糖所致的内皮细胞凋亡及生长周期的改变过程中起重要作用。     

血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF-κB的激活机制及其对PDGF-B基因转录的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF-κB的作用和对PDGF-B 基因表达的影响.方法　采用电泳迁移率移动分析法(EMSA)和免疫组化方法,包括共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术；荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern 印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活NF-κB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后PDGF-B mRNA的表达水平.结果　血管紧张素Ⅱ刺激后,在ECV304细胞内有NF-κB的激活及核易位过程,应用免疫荧光共聚焦显微镜,免疫电镜及Northern 印迹等方法均可观察到PDGF-B或其基因表达增高.变异型激酶质粒IKKα-KM,IKKβ-KM 及 NIK-KM 可抑制经AngⅡ刺激的转染细胞内与NF-κB启动相连的荧光素酶的表达.结论　AngⅡ可激活胞浆内NF-κB并出现核易位,激酶NIK、IKKα和IKKβ参与了此信号传递路径.血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF-B链mRNA水平增高.     

铁皮石斛多糖的超声提取工艺研究

目的确定铁皮石斛多糖的优选超声提取工艺条件。方法采用正交试验法，考察溶媒倍数、提取次数、超声时间对提取率的影响，并采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以获得其最佳提取工艺条件。结果所考察的因素中，铁皮石斛多糖的提取影响程度为：溶媒倍数〉超声时间〉提取次数。结论超声提取的最佳条件为：A3BMC，用25倍量水超声提取3次。每次30分钟。与常规的提取方法相比，具有提取时间短、方法简单、收率高且无需加热等优点。     

阿魏酸钠对缺氧致脑血管内皮细胞NF-κB、IκBα表达的影响

目的 研究阿魏酸钠对缺氧脑血管内皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)及IκBα表达的影响.方法 建立大鼠脑皮质微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell, BMEC)体外培养模型,并施加12 h缺氧条件,分为对照组、缺氧组、阿魏酸钠组.应用MTT法测定细胞活性,采用放射免疫方法测定内皮素(endothelin-1, ET-1)含量,采用免疫细胞化学法检测BMEC的NF-κB及IκBα表达.结果 阿魏酸钠(100 μg/ml)能抑制缺氧诱导的ET-1释放(P<0.01).缺氧刺激血管内皮细胞NF-κB的表达,降低IκBα的表达,阿魏酸钠可以显著抑制缺氧内皮细胞中NF-κB的表达及核移位现象,增加IκBα的表达和BMEC活性.结论 阿魏酸钠对大鼠脑皮质BMEC缺氧损伤具有保护作用,机制与其减少BMEC分泌ET-1,抑制NF-κB蛋白表达,促进IκBα蛋白表达有关.     

黄芪多糖对高血压病患者血清致伤血管内皮细胞TLR4、NF-κB表达的影响

目的 观察黄芪多糖(APS)对TLR-NF-κB信号转导通路的影响,探讨其对高血压病患者血清损伤的血管内皮细胞的保护机制.方法 用10%的高血压痛患者及健康人血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,实时荧光定量(PCR)法检测TLR4 mRNA表达.不同浓度的APS干预脂多糖(LPS)诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及核转录因子(NF-κB)活化(2 h),PCR法检测TLR4 mRNA及NF-κB mRNA的表达,免疫印迹(Western-blot)技术检测TLR4蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果 血清作用24 h后,高血压病组TLR4 mRNA的表达较健康组增高(P＜0.01).APS可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 mRNA高表达,抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和IκBα蛋白的降解(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血管内皮损伤的机制之一,APS可通过抑制其表达保护血管内皮细胞损伤.     

烧伤血清对内皮细胞IκBα降解和NF-κB活化的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-κB(NF-κB)活化的影响,进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制。方法 采用体外培养的内皮细胞,分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞。采用Western印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况,电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240min后NF-κB活性的变化。结果 烧伤血清刺激内皮细胞后30min,IκBα发生明显降解,刺激后60min达高峰,2h后表达逐渐升高;烧伤血清刺激内皮细胞后30min,NF-κB活性迅速升高,30~60min达高峰,2h后逐渐回复基础状态。PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化。结论 烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解,活化NF-κB,从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用。     

烧伤血清对内皮细胞IκBα降解和NF-κB活化的影响

目的 了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-KB(NF—KB)活化的影响，进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制。方法 采用体外培养的内皮细胞，分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞。采用Westem印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况，电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240min后NF—κB活性的变化。结果烧伤血清刺激内皮细胞后30min，IκBα发生明显降解，刺激后60min达高峰，2h后表达逐渐升高；烧伤血清刺激内皮细胞后30min，NF-κB活性迅速升高，30～60min达高峰，2h后逐渐回复基础状态。PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化。结论 烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解，活化NF—κB，从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用。     

一种核蛋白提取方法在血管内皮细胞NF-κB活性研究中的作用

目的探讨改良核蛋白提取方法在血管内皮细胞核因子-κB(NF-κB)活性研究中的作用及其优势。方法配制核蛋白提取液,提取血管内皮细胞核蛋白,用Bradford法测定样品蛋白含量,用凝胶迁移实验和Western blotting检测NF-κB活性。结果提取的血管内皮细胞核蛋白样品蛋白含量约2.5 g·L-1,受刺激核蛋白样品中有明显的NF-κB激活。结论本方法操作简便、快捷、经济,所提取的核蛋白,蛋白含量高,NF-κB活性好,适合大量细胞核蛋白提取和进一步对样品中NF-κB活性的分析研究。     

青藤碱对高糖处理下的血管内皮细胞功能的影响

目的:研究青藤碱(SN)对高糖处理的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)NF-KB和NO表达及细胞活力和凋亡的影响.方法:从新鲜脐带中分离培养HUVECs,观察不同浓度SN干预高糖处理的HUVEC的NO,NF-κB的表达以及细胞活力和凋亡的变化.结果:与基础状态相比较高糖可导致HUVECs释放NO改变、NF-κB的表达上调,细胞活力下降,细胞凋亡率上升,而SN在适当浓度可干预上述变化.结论:SN可抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞的损伤和凋亡.     

AGEs对老年大鼠内皮细胞NF-κB活性与Fn mRNA表达的影响

目的：探讨糖基化终末产物（AGEs）对老年大鼠内皮细胞中NF-κB活性及纤维结合蛋白fibronectin（Fn）mRNA表达的影响。方法：取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养．实验分为3组。A组葡萄糖（5mmol／L）的对照组;B组AGEs（25mg／L,48h）处理组;C组AGEs（50mg／L．48h）处理组。采用荧光免疫化学法检测NF-κB活性和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测Fn mRNA的表达。结果：与对照组相比,AGEs呈浓度依赖性地诱导NF-κB的激活（P〈0．05）和上调Fn mRNA表达（P〈0．05）。结论：AGEs呈浓度依赖性地诱导内皮细胞NF-κB的活化、Fn的基因表达上调,这可能与糖尿病慢性血管并发症的发生发展有关。     

NF-κB与角膜新生血管的研究进展

核因子NF-κB(nuclear factorκB,NF-κB)是一种广泛存在于体内多种细胞的核转录因子,目前已发现它调节着100 多种靶基因的表达,如细胞因子、化学趋化因子、生长因子、黏附分子等.目前,随着人们对NF-κB的研究日益重视并逐渐深入,它与眼科疾病的密切关系也进一步被证实,NF-κB的活化在角膜新生血管发生发展中发挥的重要作用也日益受到人们的重视.     

明党参多糖对NF-κB结合活性的影响

目的 :观察明党参多糖对转录活化核蛋白因子NF -κB(nuclearfactorofKappaB)结合活性的影响。方法 :在内毒素 (LPS)诱导J744 .a.1小鼠的巨噬细胞株 ,可诱生出较高的NF -κB活性 ,分别采用LPS先刺激、LPS后刺激和LPS与明党参多糖同时刺激等 3种方法对其处理 ,并分离核蛋白 ,行聚丙酰凝胶电泳及光密度扫描定量分析。结果 :发现明党参多糖在 3种情况下均可降低LPS刺激所致的NF -κB结合活性。结论 :明党参多糖可显著降低LPS刺激所致的NF -κB的结合活性     

LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞核因子κB活化的影响

目的探讨内毒素(lipopolysaccharide, LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVECs)核因子κB(NF-κB)活化的影响.方法 100 ng/ml LPS刺激PMVECs 0、0.5、1、2、4、6、8 h或1、10、100 ng/ml LPS刺激1 h后,凝胶电泳迁移率分析(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测NF-κB的活化,免疫细胞化学(ICC)观察其亚基p50、p65的核转位.并通过加入NF-κB活化阻断剂TPCK观察其对100 ng/ml LPS刺激1 h诱导活化的影响.结果 LPS的直接刺激能迅速活化NF-κB,诱导其p50、p65亚基核转位,1 h即达到高峰,且呈剂量依赖关系,后逐渐下降.TPCK能显著抑制其活化(P<0.01).结论 LPS的直接刺激能诱导NF-κB的活化,这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞NF-κB的激活及其机制的探讨

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管内皮细胞核因子-κB（NF-κB）的激活及其机制，以明确HCY在动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法从人脐静脉分离血管内皮细胞；用电泳迁移率和免疫荧光方法检测NF-κB的活性；用免疫印迹实验检测κB抑制蛋白（IκB-α）的磷酸化。结果电泳迁移率变动实验（EMSA）证明HCY可以时间依赖性和浓度依赖性地激活血管内皮细胞NF-κB；免疫荧光共聚焦显微镜可见在HCY刺激后的血管内皮细胞，大量的NF-κB-P65蛋白从细胞质转移入细胞核内，故NF-κB-P65蛋白染色在细胞核内呈强阳性，而细胞质内染色较弱；Western blot证明HCY能明显地诱导血管内皮细胞IκB-α的磷酸化。结论HCY可能通过增强IκB-α的磷酸化，抑制血管内皮细胞IκB-α的活性，从而激活NF-κB，在转录水平对下游的趋化因子和黏附因子产生调节作用，促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

亚低温对过氧化氢损伤后脑微血管内皮细胞NF-κB表达的影响

目的 研究亚低温对过氧化氢损伤后脑微血管内皮细胞核转录因子(NF-κB)表达的影响.方法 分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞,用过氧化氢损伤的方法建立脑出血后血肿周围炎症反应内皮细胞模型.将细胞分为实验组(ICH)和对照组(C).ICH组分为过氧化氢损伤常温组(ICH+ N)和过氧化氢损伤亚低温组(ICH+ H),C组分为常温对照组(C+N)和亚低温对照组(C+H).采用Western blot技术检测各组NF-κB的表达水平.结果 实验组NF-κB的表达水平均高于各自对照组(P＜0.01),ICH+N组蛋白表达水平高于ICH+H组(P＜0.01).结论 亚低温可有效降低过氧化氢损伤的脑微血管内皮细胞NF-κB的表达,从而减轻血肿周围炎症反应,发挥其脑保护作用.     

NF-κB与动脉粥样硬化的研究进展

核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）是一种具有基因转录多项调控作用的转录因子,能与靶基因的启动子或增强子部位的κB位点结合,启动基因的转录。NF-κB作为信号转导途径中的枢纽,与免疫、肿瘤的发生与发展、细胞凋亡的调节及胚胎发育有密切关系。     

铁皮石斛多糖降血糖作用研究

目的 研究铁皮石斛中多糖种类及其降血糖功能。方法 采用DEAE-纤维素阴离子交换色谱分离铁皮石斛粗多糖,三甲基硅醚衍生化法测定分离多糖的单糖组成,红外光谱表征分离多糖的结构。采用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型研究分离多糖对模型小鼠空腹血糖值、血清胰岛素水平及糖化血清蛋白含量的影响。结果 铁皮石斛中分离得到4种分离多糖,含量最高分离多糖DOP1的单糖组成为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖及甘露糖（摩尔比为3.5∶1.2∶1.5∶1.0）。红外光谱分析结果与单糖组成研究相符,同时显示4种分离多糖均为硫酸多糖。4种分离多糖在给药21d后能够显著降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖值（P<0.01）、提高血清胰岛素水平（P<0.05~0.01）以及降低糖化血清蛋白含量（P<0.01）,其中以DOP1作用最强。结论 铁皮石斛分离多糖具有显著的降血糖作用。      

过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 为了明确过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 将血管平滑肌细胞HA-VSMC分为正常对照组、NF-κB过表达组和空载组。通过构建NF-κB过表达载体,转染HA-VSMC细胞后,通过MTT检测各组HA-VSMC细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HA-VSMC细胞凋亡情况,WB 检测各组HA-VSMC细胞NF-κB相对表达情况。结果 通过酶切验证证明NF-κB过表达载体构建正确;成功转染HA-VSMC细胞后,MTT检测结果显示NF-κB被激活可以抑制HA-VSMC细胞增殖;流式检测细胞凋亡结果也证实NF-κB激活可以促进细胞凋亡。结论 NF-κB表达升高会抑制血管平滑肌细胞的增殖并促进血管平滑肌细胞的凋亡。