腺苷、白介素-1及茶碱对哮喘患者外周血单核细胞A2腺苷受体mRNA表达的影响

目的通过研究腺苷、白介素(IL)-1、茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)表达A2a及A2b腺苷受体(A2aAR及A2bAR)mRNA的影响,探讨A2aAR及A2bAR在哮喘发病中的作用,为临床使用茶碱提供理论依据。方法11例正常人及哮喘患者PBMCs经Ficoll液分离,分对照组、腺苷组、腺苷+IL-1组及腺苷+茶碱4组,体外培养18小时,收集细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和图象分析半定量法检测A2aAR及A2bARmRNA表达。结果正常人及哮喘患者各组PBMCs表达A2aARmRNA无明显差异(P>0.05)。哮喘患者PBMCsA2bARmRNA表达较正常人增加(P<0.01);腺苷、IL-1促进哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA(P<0.05);茶碱对正常人及哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA均有抑制作用(P<0.01)。腺苷及IL-1对哮喘患者PBMCsA2bARmRNA表达的影响与血清TIgE水平呈正相关(P<0.05),与FEV1%呈负相关P<0.05)。结论哮喘患者PBMCs表达A2bARmRNA增加,腺苷及IL-1促进其表达,且与患者机体过敏状态及气道阻塞程度相关,茶碱能抑制A2bARmRNA表达;腺苷、IL-1及茶碱对PBMCs表达A2aARmRNA无明显影响。     

哮喘患者外周血单个核细胞A1腺苷受体mRNA表达的初步研究

目的通过研究腺苷、白细胞介素(IL)-1及茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)A1ARMrna表达的影响,探讨A1AR在哮喘发病中的作用,从基因水平为茶碱治疗哮喘提供理论依据。方法用Ficoll-Hypaque液分离PBMCs,分对照组、腺苷组、腺苷加IL-1组及腺苷加茶碱组,体外培养18h,收集细胞,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法和图像分析半定量法检测PBMCsA1ARmRNA的表达。结果腺苷或IL-1促进哮喘患者PBMCsA1ARmRNA表达明显增加,与哮喘患者对照组比较差异有显著性(P＜0．01);茶碱抑制哮喘患者PBMCsA1ARmRNA的表达,与腺苷组及腺苷加IL-1组比较,差异有显著性(P＜0．01)。哮喘患者各组A1ARmRNA表达与健康人对照组比较,差异均有显著性(P＜0．01)。腺苷或IL-1对哮喘患者PBMCs表达A1ARmRNA的影响与血清TlgE班水平呈显著正相关(r=0．74或r=0．71;P＜0．05),与第一秒用力呼气容积实测值占预计值的百分率(FEV1％)呈明显负相关(r=-0．62或r=-0．65;P＜0．05)。结论哮喘患者PBMCs表达A1ARmRNA增加;腺苷、IL-1促进哮喘患者PBM-CsARmRNA表达与机体过敏状态及气道阻塞程度有关;茶碱抑制PBMCs表达A1ARmRNA。     

哮喘患者外周血单个核细胞A_3腺苷受体mRNA表达的研究

目的 :通过研究腺苷、白细胞介素 (IL) 1及茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMCs)A3 腺苷受体 (A3 AR)mRNA表达的影响 ,探讨A3 AR在哮喘发病中的作用 ,从基因水平为茶碱应用于治疗提供理论依据。方法 :用Ficoll Hypaque液分离PBMCs ,并将其分成对照组、腺苷组、腺苷加IL 1组及腺苷加茶碱组 ,体外培养 18h ,收集细胞 ,采用逆转录 多聚酶联反应 (RT PCR)法和图像分析半定量法检测PBMCsA3 ARmRNA表达。结果 :哮喘患者PBMCs腺苷加IL 1组A3 ARmRNA表达较对照组、腺苷组明显增加 (P <0 .0 1) ;腺苷加茶碱组A3 ARmRNA表达减少 ,与腺苷加IL 1组比较差异显著 (P <0 .0 1)。哮喘患者PBMCs各组A3 ARmRNA表达与正常人对应组比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。腺苷或IL 1对哮喘患者PBMCs表达A3 ARmRNA的影响与血清总免疫球蛋白 (TIg)E水平呈显著正相关 (r =0 .65 ,P <0 .0 5 ;r =0 .78,P <0 .0 1) ,哮喘患者PBMCs表达A3 ARmRNA及腺苷、IL 1对其的影响与第 1秒用力呼气容积实测值占预计值的百分比 (FEV1% )呈明显负相关 (r =-0 .72 ,P <0 .0 5 ;r=-0 .91,P <0 .0 1;r=-0 .64 ,P <0 .0 5 )。结论 :哮喘患者PBMCs表达A3 ARmRNA增加 ;腺苷、IL 1对哮喘患者PBMCsA3 ARmRNA表达的影响与机体过敏状态及气道阻塞程度有关     

哮喘患者外周血单个核细胞A3腺苷受体mRNA表达的研究

目的通过研究腺苷、白细胞介素(IL)-1及茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)A3腺苷受体(A3AR)mRNA表达的影响,探讨A3AR在哮喘发病中的作用,从基因水平为茶碱应用于治疗提供理论依据。方法用Ficoll-Hypaque液分离PBMCs,并将其分成对照组、腺苷组、腺苷加IL-1组及腺苷加茶碱组,体外培养18h,收集细胞,采用逆转录-多聚酶联反应(RT-PCR)法和图像分析半定量法检测PBMCsA3ARmRNA表达。结果哮喘患者PBMCs腺苷加IL-1组A3ARmRNA表达较对照组、腺苷组明显增加(P<0.01);腺苷加茶碱组A3ARmRNA表达减少,与腺苷加IL-1组比较差异显著（P<0.01）。哮喘患者PBMCs各组A3ARmRNA表达与正常人对应组比较,差异均有显著性(P<0.01)。腺苷或IL-1对哮喘患者PBMCs表达A3ARmRNA的影响与血清总免疫球蛋白(TIg)E水平呈显著正相关(r=0.65,P<0.05;r=0.78,P<0.01),哮喘患者PBMCs表达A3ARmRNA及腺苷、IL-1对其的影响与第1秒用力呼气容积实测值占预计值的百分比(FEV1%)呈明显负相关(r=-0.72,P<0.05;r=-0.91,P<0.01;r=-0.64,P<0.05)。结论哮喘患者PBMCs表达A3ARmRNA增加;腺苷、IL-1对哮喘患者PBMCsA3ARmRNA表达的影响与机体过敏状态及气道阻塞程度有关;茶碱抑制PBMCs表达A3ARmRNA。     

哮喘病人外周血单个核细胞ICAM-1 mRNA表达测定

目的：探讨细胞间粘附分子－1（ICAM－1）在哮喘炎症反应中的作用，进一步了解哮喘发病机制。方法：采用免疫组织化学和RT－PCR方法检测10例支气管哮喘发作患者和10例正常人外周血单个核细胞（PBMCs)ICAM-1表达。结果：哮喘患者PBMCs ICAM-1及ICAM－1mRNA均较正常对照组增高（P＜0．05），哮喘患者PBMCs ICAM－1与ICAM－1 mRNA表达成正相关。结论：ICAM－1参与哮喘炎症反应的发生。     

雷公藤多甙对哮喘患者细胞因子的调控作用

目的：探索雷公藤多甙（TⅡ）对哮喘患者外周血单个核细胞（PBMCs）白细胞介素－4（IL－4）mRNA表达的影响。方法：采用逆转录－聚合酶链反应方法,测定TⅡ治疗前后哮喘患者PBMCsIL－4mRNA的表达情况,并与激素治疗组对照。结果：TⅡ治疗后,哮喘患者PBMCsIL4mRAN表达低于治疗前水平（P＜0．05）。并与激素治疗组对照无显著性差异（P＞0．10）。结论：TⅡ在基因转录水平抑制哮喘患者IL－4的表达,具有抗炎作用。     

白细胞介素10在系统性红斑狼疮中的异常表达及其意义的初步研究

目的：分析Th2型 细胞因子白细胞介素（IL）－10在系统性红斑狼疮（SLE）发生发展中的变化及其意义。方法：以37例符合美国风湿病学会（ARA）诊断标准的SLE患者为研究对象，与相匹配的正常人26名相对照，以ABC－ELISA法检测血清及细胞培养上清的IL－10水平，其中部分标本同时以荧光定量RT－PCR分析IL－10mRNA的表达。结果：SLE患者血清IL－10水平显著高于正常人（P＜0．01），伴狼疮性肾炎者和抗双链DNA抗体阳性者其IL－10水平更高，活动期与缓解期患者相比，IL－10水平有所升高，但在统计学上差异无显著性；血清IL－10水平与外周血单个核细胞（PBMCs）中mRNA水平呈正相关性，相对于正常人而言，SLE患者的IL－10 mRNA亦呈高表达。体外培养结果显示，SLE患者PBMCs自发分泌或植物血凝素（PHA）诱生IL－10的水平均显著高于正常人（P＜0．05）。结论：细胞因子IL－10的蛋白水平和mRNA转录水平，在SLE患者均明显升高，高水平的IL－10可能与狼疮性肾炎的姓有关。SLE患者PBMCs产生IL－10的能力异常增高。     

哮喘血清肿瘤坏死因子α和IgE水平及相关性研究

目的探讨哮喘患者血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）与血清总IgE（TIgE）水平变化及临床意义。方法哮喘患者发作期43例（A组），缓解期21例（B组）及正常人21例（C组），分别抽取其静脉血以酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TNF-α与总IgE（TIgE）水平，结果进行统计分析（P〈0、01，P〈0．05）。结果1．A组、B组患者血清TNF-α水平与C组的比较，差异非常显著（P〈0．01），且A组与B组比较，差异亦十分显著（P〈0．01）。2．A组患者血清的TIgE水平与B组及C组比较，差异非常显著（P〈0．01），但B组与C组比较则无差异性（P〉0、05）。3哮喘患者血清TNF-α与TIgE水平存在正相关（P〈0．01）。结论哮喘患者血清的TNF-α与TIgE水平较正常人高，提示TNF-α与IgE均参与哮喘的发病过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血T辅助细胞因子的表达

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中T辅助细胞因子Th1和Th2的表达情况。方法：用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了10例正常人和8例活动期SLE患者血清中的白细胞介素2（IL－2）、白细胞介素4（IL－4）、白细胞介素10（IL－10）、γ干扰素（INF－γ）的表达水平。结果：与正常人相比，活动期SLE患者外周血中IL－2的表达水平降低（P＜0．05），IL－10的表达水平增高（P＜0．01），而INF－γ与IL－4则无显著性差异（P＞0．05。结论：活动期SLE患者中Th12细胞因子表达为IL－2的下调，Th2细胞因子表达为IL－10的上调，可能在SLE发病机制中起一定的作用。     

初发SLE患者Th1/Th2及其调控因子基因的研究

目的：探讨未经药物治疗初发狼疮病人Th1/Th2细胞亚群分布及其调控细胞因子基因表达的差异。方法：运用三色荧光标记流式细胞术检测35例初发狼疮病人细胞亚群分布，并以10例正常人作对照；ABI 7700real-time PCR法同时检测38例病人和28例正常人IL－10、IL－12P40、IL18mPNA表达水平的差异。结果：1、初发狼疮病人Th1较正常人明显减低（P＜0．05），但Th1/Th2无显著性改变。2、与正常组相比，SLE组病人IL－12P35、IL－12P40、IL－18mRNA及其受体表达较正常人明显降低（P均＜0．05）；3、面部红斑组病人Th1/Th2、IL－12P35较正常组降低（P均＜0．05）；4、RNP阳性组病人IL－12P40较正常组升高，IL－12P35、IL－18较正常组降低（P均＜0．05）；5、有关节炎较无关节炎患者IL－18RmRNA表达升高（P＜0．05）。结论：SLE是一种以Th1细胞下降，Th2细胞相对占优势的自身免疫性疾病，源于诱导向Th1细胞分化的一系列细胞因子及其受体减少和细胞因子间失衡所致。     

慢性乙肝病毒感染各阶段患者外周血单个核细胞中IL-22mRNA的表达水平及其临床意义

目的: 分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)、慢加急性/亚急性重型肝炎(重型肝炎)、乙肝肝硬化和乙型肝炎病毒(HBV)相关性原发性肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素22(IL-22)mRNA的表达水平及其可能的临床意义。方法: 收集20名健康对照者(健康对照组)、33例CHB中度患者(CHB中度组)、21例CHB重度患者(CHB重度组)、16例重型肝炎患者(重型肝炎组)、16例乙肝肝硬化患者(肝硬化组)和40例HCC患者(HCC组)的临床资料。RT-PCR半定量分析各组研究对象PBMCs中IL-22mRNA表达水平;Pearson相关分析法分析IL-22mRNA表达水平与临床重要检测指标的相关性。结果: CHB中度、CHB重度和肝硬化组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平均高于健康对照组(P<0.001);重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P=0.830);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平明显低于健康对照组(P<0.001)。CHB重度组患者和重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与总胆红素(TB)水平呈明显负相关关系(r=-0.383,P=0.043;r=-0.619,P=0.028);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与血清甲胎蛋白(AFP)水平呈明显正相关关系(r=0.664,P=0.000)。结论: 慢性乙肝重症化过程中,患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平低下提示肝细胞再生障碍,且IL-22mRNA表达水平与TB一样能够反映患者病情严重程度。IL-22可能对HCC的发生发展起促进作用。     

卵巢癌患者外周血单个核细胞Toll样受体2的表达及其诱导的IL-10表达

目的:观察Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)在卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其诱导IL-10的表达水平,初步探索TLR2在卵巢癌发生发展中的作用机制?方法:收集20例卵巢癌患者?20例妇科良性疾病患者及20例同期健康体检女性EDTA抗凝外周全血,采用荧光定量PCR技术检测3组PBMC中TLR2的表达水平,并比较3组表达差异情况?TLR1?TLR2和TLR6相应配体刺激PBMC,细胞中细胞因子IL-10表达水平采用荧光定量PCR技术进行检测;流式细胞技术(FACS)检测各组IL-10分泌水平?结果:各组PBMC中TLR2均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2表达量显著高于良性疾病组和健康对照组(P < 0.05),良性疾病组TLR2表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达明显增强,分别为良性疾病组和健康对照组的2.25?2.33倍,妇科良性疾病组IL-10 mRNA表达水平与健康对照组间无显著差异;TLR6配体FSL-1刺激后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达水平分别为良性疾病组和健康对照组的1.95?2.16倍,差异具有统计学意义(P < 0.05),而良性疾病组与健康对照组间无显著差异?FACS结果显示各组PBMC经TLR1的配体Pam3CSK4刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值(M)分别为46.70?61.53?31.11 pg/ml,差异无统计学意义;经TLR2配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10分泌水平(M = 150.46 pg/ml)显著高于良性疾病组(M = 38.86 pg/ml)及健康对照组(M = 44.93 pg/ml),差异有统计学意义(P < 0.05),良性疾病组与健康对照组间无显著性改变;TLR6配体FSL-1刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值分别为20.20?31.12?35.48 pg/ml,3组间无显著差异?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2表达水平显著增高,经其介导的细胞因子IL-10表达水平的改变可能与卵巢癌的免疫抑制相关,在卵巢癌的肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用?     

原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2变化情况及其意义研究

背景　痛风不断攀升的高发病率已经成为重大的公共健康问题。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2（ABCG2）在尿酸代谢中的重要作用已经得到广泛关注,成为近年来研究的热点。因此,针对ABCG2的研究有利于发现痛风发病的分子生物学机制,为痛风的诊断、治疗提供新的思路。目的　观察原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞（PBMCs） ABCG2表达水平的变化情况,探究ABCG2在原发性痛风性关节炎中可能的作用。方法　选取2016年6月—2017年2月于川北医学院附属医院风湿免疫科门诊就诊及住院的男性原发性痛风性关节炎患者（GA组）82例,其中急性期痛风（AGA亚组）和间歇期痛风（IGA亚组）患者各41例。依据患者血尿酸水平进一步分为血尿酸<420 μmol/L痛风亚组（NUA亚组）31例、血尿酸≥420 μmol/L痛风亚组（HUA亚组）51例。另选取同期川北医学院附属医院体检中心的男性健康体检者（HC组）46例。检测患者血尿酸水平、肌酐水平、胱抑素C（Cys-C）水平、红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平;采用RT-qPCR、Western blotting法分别检测受试者PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平。结果　GA组PBMCs ABCG2 mRNA表达水平高于HC组（P<0.05）。IGA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于AGA亚组（P<0.05）;HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于IGA亚组（P<0.05）;AGA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）。HUA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于NUA亚组（P<0.05）;HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于HUA亚组（P<0.05）;NUA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）。男性原发性痛风性关节炎患者ABCG2 mRNA表达水平与血尿酸水平呈正相关（r=0.235,P=0.033）,与肌酐水平、Cys-C水平呈负相关（r值分别为-0.227、-0.229,P值分别为0.044和0.043）,与ESR、hs-CRP水平无直线相关关系（r值分别为-0.181、0.027,P值分别为0.112、0.824）。结论　ABCG2在原发性痛风性关节炎患者PBMCs中高表达,并参与尿酸的转运,但未发现其与原发性痛风性关节炎的炎症过程相关;且肾功能异常的原发性痛风性关节炎患者的PBMCs ABCG2表达下调。     

Regulation of epithelial sodium channel a-subunit expression by adenosine receptor A2a in alveolar epithelial cells

Background The amiloride-sensitive epithelial sodium channel a-subunit (a-ENaC) is an important factor for alveolar fluid clearance during acute lung injury. The relationship between adenosine receptor A2a (A2aAR) expressed in alveolar epithelial cells and aα-ENaC is poorly understood. We targeted the A2aAR in this study to investigate its role in the expression of αa-ENaC and in acute lung injury.Methods A549 cells were incubated with different concentrations of A2aAR agonist CGS-21680 and with 100 μmol/L CGS-21680 for various times. Rats were treated with lipopolysaccharide (LPS) after CGS-21680 was injected. Animals were sacrificed and tissue was harvested for evaluation of lung injury by analysis of the lung wet-to-dry weight ratio, lung permeability and myeloperoxidase activity. RT-PCR and Western blotting were used to determine the mRNA and protein expression levels of α-ENaC in A549 cells and alveolar type II epithelial cells.Results Both mRNA and protein levels of α-ENaC were markedly higher from 4 hours to 24 hours after exposure to 100μmol/L CGS-21680. There were significant changes from 0.1 umol/L to 100 μmol/L CGS-21680, with a positive correlation between increased concentrations of CGS-21680 and expression of α-ENaC. Treatment with CGS-21680during LPS induced lung injury protected the lung and promoted α-ENaC expression in the alveolar epithelial cells.Conclusion Activation of A2aAR has a protective effect during the lung injury, which may be beneficial to the prognosis of acute lung injury.     

原发性EB病毒感染患儿AIM2炎症小体通路的表达及与肝损伤的相关性

目的：探讨原发性EB病毒感染患儿黑素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体通路的表达及与肝损伤的相关性。方法：纳入2020年1月至2021年6月82例原发性EB病毒感染住院患儿（入院时EB-VCA-Ig M和EB-DNA检测均阳性）,按有无肝损伤分为肝功能异常组（52例）与肝功能正常组（30例）;同期选取门诊体检EBVIgG阳性（EB-VCA-IgG、EB-NA-IgG）而EB-VCA-IgM阴性的50例健康儿童为既往EBV感染组;门诊体检EBV-IgG和EBV-VCA-Ig M均阴性的50例健康儿童为对照组。实时荧光定量PCR技术检测外周血单个核细胞AIM2炎症小体（AIM2、ASC和caspase-1）m RNA表达,酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平。结果：原发性EBV感染患儿外周血AIM2、ASC和caspase-1 mRNA的表达量以及IL-1β和IL-18水平均高于既往EBV感染组、对照组（P<0.05）,并且血清EBV-DNA载量与AIM2、ASC和caspase-1 mRNA表达及IL-1β和IL-18水平呈正相关（r=0.712、0.49...     

维生素D受体与MCP-1在系统性红斑狼疮患者中的表达及意义

目的 观察维生素Ｄ受体（VDR）在系统性红斑狼疮患者（SLE）中的表达以及与单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的关系。方 法 共计纳入中南湘雅三医院肾脏风湿科住院SLE患者60 例和募集28 例健康志愿者作为研究对象。使用实时荧光定量聚合链反应方法（QRT-PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）的VDR mRNA和MCP-1 mRNA,Western blot检测VDR蛋白表达,ELISA法检测外周血MCP-1水平,使用单因素方差分析、Pearson相关分析进行统计学分析。结果 我们发现SLE患者PBMC的VDR mRNA及蛋白表达量均显著低于正常对照组（P<0.01）,活动组低于非活动组（P<0.05）;SLE患者PBMC的MCP-1mRNA及血清水平显著高于正常对照组（P<0.01）,活动组高于非活动组（P<0.01）;Pearson相关分析显示PBMC VDR mRNA与SLE疾病活动指数（SLEDAI）呈负相关（r=-0.417,P=0.001）;VDR mRNA与MCP-1 mRNA、VDR蛋白与血清MCP-1浓度分别呈负相关（r=-0.554,P=0.000;r=-0.400,P=0.028）。结论 本研究表明SLE患者PBMC的VDR表达下调与SLE疾病活动度成负相关,且可通过影响MCP-1的表达在SLE发病过程中发挥重要作用。