流式细胞技术在病毒检验中的应用

简要介绍了流式细胞术（FCM）在病毒抗原、病毒核酸、抗病毒抗体检测的应用。     

肾移植术后巨细胞病毒感染的诊断与治疗

肾移植病人因术后使用免疫抑制剂而致免疫功能低下,巨细胞病毒(CMV)活动性感染发生率很高。达50～70％。肾移植术后CMV感染者死亡率达25％,CMV肺炎患者死亡率高达50％。可见CMV感染是肾移植术后十分常见而严重的感染。 随着肾移植的普遍开展,我国每年肾移植例数逐年上升,由于肾移植术后CMV感染诊断方法的进展及特异性抗CMV药物的问世,肾移植术后     

异基因造血干细胞移植术后巨细胞病毒监测

为了解异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染(ＣＭＶＩ)和巨细胞病毒疾病(ＣＭＶＤ)发生率,指导临床决策,我们采用ＣＭＶｐｐ65单克隆抗体(单抗)免疫组化法对24例异体造血干细胞移植术后患者进行随访监测,初步肯定了ＣＭＶ抗原检测在早期诊断ＣＭＶＩ、提供治疗依据方面的应用价值。病例和方法1　病例　1998年8月～1999年6月在我院接受异基因造血干细胞移植术患者24例,其中慢性髓细胞白血病(ＣＭＬ)12例[慢性期(ＣＰ)11例,急性期(ＡＰ)1例],ＡＬＬ6例(ＣＲ15例,ＣＲ21例),急性髓系白血病(ＡＭＬ)3例(Ｍ1ＣＲ11例,Ｍ21例,Ｍ41例),非霍奇金淋…     

巨细胞病毒疾病的研究进展

巨细胞病毒(CMV)感染在免疫功能受抑制的患者中常见,而抗病毒药物的大量使用具有毒性和严重不良反应。近年来,研究者开始尝试CMV特异T细胞回输的免疫治疗,取得了一定的进展。为了更充分地了解CMV疾病的特点,现综述CMV疾病最近几年的研究进展,为今后的研究提供参考。     

输血相关的巨细胞病毒感染

巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)在免疫受损的个体中可引起很多且相当严重的并发症,虽然CMV引起的并发症的高人群是CMV血清学阳性个体,即CMV携带,但是CMV血清学阴性个体接受CMV血清学阳性供体的血液成分或器官移植时,可引起CMV的获得性感染,且致病相当普遍。感染CMV后,机体的免疫状态决定着疾病的发展与转归。因此防范输血获得性CMV感染,对于早产儿、器官移植、肿瘤化疗及需长期输血的病人等高危人群十分必要。本对CMV的一般情况、输血相关的CMV感染及预防做一综述。     

实时荧光定量PCR技术在肾移植术后巨细胞病毒性肺炎诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR检测巨细胞病毒在肾移植术后肺部感染诊断中的应用价值。方法应用实时荧光定量PCR检测2002年1月至2006年1月在本院行肾移植术后肺部感染患者39例,健康自愿者50人的血清CMV DNA载量,应用SPSS10 0软件对检测结果进行统计学分析。结果肺部感染患者组39份样本中,19份可以检测到数值(阳性率为49%),其病毒拷贝数值介于1.05×103~4.26×105之间,平均为2.23×104;对照组中仅一份检测到数值(阳性率为2%),且CMV DNA小于104,其余49份均低于检测下限,实时荧光定量PCR检测CMV结果对病情发展有预测价值。结论实时荧光定量PCR技术为肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的早期诊断提供了有效的试验手段,从而大大提高了肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的治愈率。     

实体器官移植受者巨细胞病毒感染的危险因素及实验室诊断方法

人巨细胞病毒(CMV)是一种重妻的条件致病病原体,属疱疹病毒β亚科的双螺旋DNA病毒,是人类疱疹病毒中最大的一组.因被它感染后的细胞肿胀很大,并有巨大包涵体而得名.巨细胞病毒在正常宿主感染后常呈现为潜伏感染或无症状的慢性感染.在器官移植受者中由于机体免疫力低下容易被巨细胞病毒感染,不同器官移植cMv病的发病率分别为:肾脏8%、心脏25%、肝胰29%、心肺39%[1].     

流式细胞术在红细胞免疫学中的应用

流式细胞术(flow cytometry．FCM)是以激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，对其定性或定量检测的一种现代细胞分析和分选技术。既可测量细胞大小、内部结构，又可检测细胞表面抗原抗体、细胞内部DNA、RNA含量等，对单个细胞和群体细胞均可区分．已广泛应用于医学基础、临床及科学研究中。荷兰红十字会的研究人员首先报道将FCM应用于血液免疫学研究。     

器官移植术后人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）属疱疹病毒8科，是一种有包膜的双链线性DNA病毒，直径大约200纳米，基因组长约220～245kb。同其他的疱疹病毒一样，HCMV对免疫力正常的个体不具有明显毒力，而在各种原因引起的免疫功能受到抑制的宿主中却可以被激活而发生感染。接受器官移植的患者因在术前和术后使用免疫抑制剂，所以容易发生HCMV感染。     

婴幼儿巨细胞病毒IgM抗体阳性结果分析及临床应用意义

目的通过对住院患儿血清巨细胞病毒(HCMV)抗体IgM阳性结果分析,了解本院儿科和新生儿科HCMV感染率及临床表现特点,为本院儿科和新生儿科诊治HCMV患者提供依据。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中HCMVIgM抗体,结合收集的相关临床资料进行回顾性分析。结果该院住院患儿HCMV-IgM阳性率为18.5%(214/1 157),其中新生儿为44.4%(59/133),婴幼儿15.1%(141/936),儿童15.9%(14/88)。结论对高度疑诊HCMV感染的婴幼儿应检测HCMV-IgM和IgG抗体,并同时检测血和尿液中巨细胞病毒HCMV-DNA,有利于临床早期诊断,减少并发症发生,降低婴幼儿病死率和致残率。     

胞膜和胞浆分化抗原联合检测在儿童白血病免疫分型中的意义

目的 探讨胞膜和胞浆分化抗原联合检测在儿童白血病免疫分型检测中的意义。方法 采用流式细胞术,运用三色和四色荧光标记技术,检测44例儿童初诊急性白血病病例。结果 44例急性白血病病例中,采用胞膜抗体即可确诊急性B淋巴细胞白血病20例,急性T淋巴细胞白血病1例,急性非淋巴细胞自血病10例,其余13例病例进一步进行胞浆抗原染色,最后确诊为双表型白血病病例7例（1例为T／髓双表型,6例为B／髓双表型）,6例为伴有髓系标记的急性B淋巴细胞白血病。结论 对于跨系表达的急性白血病病例以及形态学难以区分是淋系还是髓系的急性白血病病例,流式免疫分型的胞浆抗原检测起着关键作用,对临床诊疗意义重大。     

骨髓移植患者血及尿中巨细胞病毒感染核酸标志物的检测

目的　为骨髓移植患者寻找较好的诊断和治疗巨细胞病毒（ＣＭＶ） 感染的分子生物学依据。方法　用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 方法测尿中ＣＭＶＤＮＡ,逆转录（ＲＴ）ＰＣＲ 法测血中ＣＭＶ即刻早期抗原（ＩＥ）ｍＲＮＡ。结果　在被测的２７ 例患者１０３ 份标本中,发现１０ 例ＣＭＶ 感染者的尿ＣＭＶＤＮＡ 及血ＩＥ ｍＲＮＡ 几乎同时阳转。在连续使用抗病毒药甘昔洛瓦（ＤＨＰＧ） 治疗的６ 例患者中,ＩＥ ｍＲＮＡ 约一周左右阴转,而ＤＮＡ 约２０ 天左右阴转。结论　ＣＭＶＩＥｍＲＮＡ 可能反映病毒即刻早期转录的停止,对临床抗病毒治疗可能是一个较好的参考指标。     

Feasibility of flow cytometry for the detection of bacteria from body fluid samples

The detection of microorganisms in body fluids is indispensable for identifying the source of infection and is one of the important examinations that influence subsequent treatment. In order to quickly detect bacteria in body fluid samples, a flow cytometry-based experimental automated bacteria counter (BF-FCM), was tested to determine its clinical value. The results for detectability obtained with the BF-FCM were compared with those obtained by conventional culture and Gram-staining techniques. We evaluated a total of 318 body fluid samples, excluding bile samples from which fungus alone was isolated. The samples consisted of 176 bile, 64 ascites, 42 pleural fluid, and 36 cerebrospinal fluid samples. Among the 318 samples, 154 (48.4%) were culture-positive. Of these 154, the BF-FCM identified 130 as positive (sensitivity, 84.4%). Of the 164 samples that were culture-negative, 141 were negative by the BF-FCM (specificity, 86.0%). Based on the culture results, the BF-FCM detected bacteria with a positive predictive value of 85.0% (130 of 153 samples), a negative predictive value of 85.5% (141 of 165 samples), and percent agreement of 85.2%. Although there were 23/164 (14.0%) false-positive samples, we consider that the BF-FCM, in combination with Gram staining and conventional cultures, would be helpful in the diagnosis and management of patients with diseases such as bacterial meningitis that present emergently.     

流式细胞仪检测肾小球疾病患者尿巨噬细胞的应用研究

目的　研究尿巨噬细胞计数与肾小球肾炎细胞增生程度的关系。方法　用流式细胞仪 (FCM )测定 36例肾小球肾炎患者尿巨噬细胞计数和尿巨噬细胞 /T淋巴细胞比值 ,并与肾活检结果进行对照。结果　 2 2例增生性肾炎患者尿巨噬细胞计数为 5 6 1 7± 185 7个 /ml,尿巨噬细胞 /T淋巴细胞比值为 4 8± 1 7;14例非增生性肾炎患者尿巨噬细胞计数为 2 8 5± 15 3个 /ml,尿巨噬细胞 /T淋巴细胞比值为 0 6± 0 2。增生性肾炎患者的两项指标均明显高于非增生性肾炎组 (P <0 0 1) ,且在IgA肾病中随系膜细胞增生程度的加重 ,尿巨噬细胞计数则明显升高 (P <0 0 5 )。结论　尿巨噬细胞计数和尿巨噬细胞 /T淋巴细胞比值可作为判断肾小球细胞增生程度的指标之一。     

四色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病残留细胞

目的探讨利用多参数流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病(BALL)残留细胞的方法和意义。方法采用四色流式细胞术,以4～6组四色抗体组合检测213例BALL患者免疫分型;以CD34、CD10、CD45、CD19为主的2种四色荧光标记抗体组合监测50例297份BALL患者骨髓标本微量残留白血病细胞,同时检测分析26份化疗后处于再生期骨髓标本中B祖细胞的免疫表型特点,并以相对定量方法比较了再生期B祖细胞与B系白血病细胞CD10、CD19和CD34表达量的差异。结果213例BALL患者中,71.8%患者存在CD45、CD34、CD19、CD10表达量的异常,只存在CD38弱阳性及髓系标志患者占8.1%。微量残留白血病细胞监测的50例患者中,12例患者存在0.06%～7.73%的白血病细胞,其中11例残留白血病细胞以CD45、CD34、CD19、CD10异常表达为主。50例患者中5例临床复发,4例在复发前7～17周微量残留病(MRD)检测阳性,且均>0.1%,1例MRD检测阴性。再生期B祖细胞依据CD45、CD34、CD19、CD10、CD22和CD20表达不同可分为3期。结论多参数流式细胞术检测MRD具有快速、敏感可定量的优势,对白血病复发有更强的预测性。     

流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素探讨

目的 探讨流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素。方法45名健康产妇脐血样本分别用同血型健康人外周血调整为5种浓度,使用抗胎儿血红蛋白（HbF）单克隆抗体,用直接标记和间接标记2种方法分别测定HbF阳性细胞比例．将样本放置24h、48h和7211后再次测定。结果以Fetal Cell Count TM Kit Ⅱ双色标记碳酸酐酶和HbF抗体[碳酸酐酶-异硫氰酸荧光素（CA-FITC）、HbF-藻红蛋白（PE）]为标准,5种浓度的直接标记结果均高于间接标记（P〈0．05）,阳性细胞数低时差异有统计学意义（P〈0．01）。样本放置48h直接标记结果未见明显下降,间接标记结果下降明显,放置72h直接标记结果也有明显下降（P〈0．05）。结论利用流式细胞仪检测母血中胎儿红细胞含量受到标记方法、样本放置时间等因素的影响。较好的方法是采用直接标记法,染色完毕立即检测,最好不要超过3d,样本必须避光保存。     

应用流式细胞仪检测强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原的表达及临床应用价值

目的:探讨人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的表达对强直性脊柱炎(AS)患者的临床诊断价值。方法:应用流式细胞仪法对328例AS患者1、113例腰背腿疼患者和40例健康体检人员进行了HLA-B27抗原检测。结果AS患者、腰背腿疼患者和健康体检人员HLA-B27抗原阳性率分别为90.2%(296/328)、12.5%(139/1113)和7.5%(3/40);AS患者中男性患者阳性率95.9%,女性患者阳性率77.8%,两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论AS与HLA-B27抗原有高度的疾病相关性,检测HLA-B27对AS的早期诊断、鉴别诊断和治疗都具有重要的临床价值。     

强直性脊柱炎患者应用流式细胞术检测HLA—B27的临床意义

目的分析强直性脊柱炎与人类白细胞相关抗原B27（HLA—B27）的相关性,为临床诊断提供参考。方法应用流式细胞术检测强直性脊柱炎患者的HLA—B27阳性率,并与正常对照组比较。结果强直性脊柱炎患者的HLA—B27阳性率为91．1％（其中男性93．9％,女性85．7％）,而健康对照组为4．2％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA—B27与强直性脊柱炎强相关,检测HLA—B27对于强直性脊柱炎的早期诊断、鉴别诊断具有重要的临床价值。     

流式细胞分析在阿霉素耐药性研究中的重要作用

目的探讨流式细胞仪（ＦＣＭ）在肿瘤耐药细胞系（Ｓ－１８０Ｒ与ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ）阿霉素耐药性检测中的应用价值。方法应用细胞药物毒性分析（ＭＴＴ）、ＤＮＡ分子杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ）、逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、免疫组化、ＦＣＭ的检测方法，在ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质水平以及耐药倍数、细胞内药物含量等方面对肿瘤耐药细胞系进行分析。结果Ｓ－１８０Ｒ耐药倍数６６；耐药细胞多药耐药基因出现ＤＮＡ扩增、ＲＮＡ转录、蛋白水平的过度表达，亲本细胞为阴性。亲本细胞与耐药细胞药物荧光含量为２５９２．９，耐药培养２年后，耐药细胞峰半峰宽／峰高比值由０．５６变为０．２３。ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ耐药倍数为６．４倍；耐药和亲本细胞均有多药耐药基因ＤＮＡ扩增、ＲＮＡ转录、蛋白过度表达；亲本与耐药细胞药物荧光含量为６３８．５３２６．１。结论ＦＣＭ可以直观地检测阿霉素耐药细胞，具有灵敏、准确、定量的特点，是肿瘤耐药性灵敏的、功能性检测方法     

流式细胞术检测抗中性粒细胞抗体方法的建立及临床初步应用

目的建立适用于临床的流式细胞术（FCM）检测抗中性粒细胞抗体（ANA）的方法,并作临床初步应用。方法采用FCM,以前向散射和侧向散射参数区分全血标本中的淋巴细胞和粒细胞,设定粒细胞门,用CD16b-藻红蛋白（PE）和CD177-别藻蓝蛋白（APC）单克隆抗体分别检测中性粒细胞中表面表达CD16b和CD177抗原细胞的百分率。用所建方法检测健康对照32名,确定参考范围,以此作为判断受检者血液中抗CD16b或CD177抗体存在与否的依据。检测外周血白细胞（WBC）总数〈4.0×109/L且中性粒细胞绝对计数（ANC）〈2.8×109/L的59例患者的CD16b和CD177百分率,并对其中中性粒细胞表达CD16b和/或CD177百分率低于参考范围（即判为相应抗体阳性）的患者给予激素治疗,观察疗效。结果健康人群中性粒细胞中表达CD16b和CD177的百分率分别为98.36%±1.53%和74.95%±11.07%,据此分别确定了健康人群中性粒细胞表达CD16b和CD177的参考范围分别为CD16b〉95.36%、CD177〉53.25%（即〉x珋-1.96s）。59例患者中有23例（39.0%）ANA阳性,其中ANC〈2.0×109/L患者的ANA阳性率（50.0%）远高于ANC〉2.0×109/L患者（27.6%）。ANA阳性患者经激素治疗后,WBC和ANC上升。结论 FCM检测抗中性粒细胞CD16b和CD177抗体是自身免疫性中性粒细胞减少症（AIN）实验简便、快捷的诊断方法,有助于AIN的诊断、鉴别诊断和疗效判断。