白藜芦醇影响OVCAR3细胞生长并通过活化caspase-3诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞生长及细胞周期的影响,并研究白藜芦醇诱导卵巢癌细胞凋亡及其途径.方法 MTT比色法检测白藜芦醇对细胞生长的影响,Ho33342染色荧光显微镜观察白藜芦醇对细胞核浓缩及片段化的影响,TUNEL检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响,流式细胞术分析白藜芦醇对细胞周期分布和caspase-3活性的影响.结果 低浓度(＜30 μmol/L)的白藜芦醇促进细胞增殖,而高浓度(＞30μmol/L)抑制细胞增殖;白藜芦醇能够引起S/G2阻滞,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇增加caspase-3活性具有时间和浓度效应.结论 白藜芦醇促进或抑制细胞生长具有浓度依赖性;并通过增加caspase-3活性而诱导卵巢癌细胞凋亡.     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

全反式维甲酸对PC12细胞AchE和ChAT活性的影响

目的观察不同浓度全反式维甲酸(RA)诱导PC12细胞呈现拟胆碱能神经元表型，以及不同RA浓度对PC12细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法利用1～50μmol／L浓度RA诱导PC12细胞，MTT法、流式细胞仪、TUNEL法、分光光度法和放射酶学法检测细胞生长曲线和细胞生长周期的变化、细胞凋亡情况、乙酰胆碱酯酶(AchE)和胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性变化。结果①1，5，10，20μmol／L浓度RA均明显增加ChAT活性，以10μmol／L浓度时ChAT活性最高，超过该浓度后chAT活性呈下降趋势。RA对AchE活性无明显诱导作用。②当浓度大于10μmol／L后RA诱导PC12细胞凋亡的作用明显增强。③1～50μmol／L浓度RA均能抑制PC12细胞增殖，RA浓度越高，抑制作用越明显，呈明显的剂量依赖效应。④RA对细胞周期的抑制作用主要表现于G→1S期。结论RA具有诱导PC12细胞呈现拟胆碱能神经元表型的作用，10μmol／L是最佳诱导浓度。     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与凋亡的关系

目的探讨β-淀粉样肽25-35(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化与凋亡的关系。方法用常规的去血清培养使细胞同步于G0期,采用终浓度为0~45μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带(DNA-Ladder);流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系。结果随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);用25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞12、24h,荧光染色结果显示24h出现典型的凋亡,表现为核固缩、核碎裂;DNA电泳结果显示凋亡特异性梯状条带;流式细胞仪分析表明去血清培养24h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24h与对照组比较,S期细胞比例增加(P<0.01),16h后细胞凋亡率增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰)。结论Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期并随之出现凋亡,提示Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡可能与细胞周期紊乱有关。     

紫杉醇对卵巢癌细胞作用的浓度依赖性及其机制探讨

目的 探讨不同浓度紫杉醇对卵巢癌细胞发挥抗癌效应的内在机制.方法 以0.01、0.1、1、10、50 μmol/L紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系A2780,采用碘化丙啶(PI)单染法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用下细胞周期的变化情况.进而对细胞进行同步化处理,采用PI单染法流式细胞术分析低浓度(0.01 μmol/L)紫杉醇对细胞周期的影响;Annexin Ⅴ/PI双染法流式细胞术分析高浓度(50 μmol/L)紫杉醇对A2780细胞坏死的影响.结果 ①紫杉醇浓度为0.1、1、10 μmol/L时,G2/M期细胞比例明显高于0.01 μmol/L组(P<0.01)和50 μmol/L组(P<0.01).②A2780细胞经同步化处理后给予0.01 μmol/L紫杉醇,经过一个细胞倍增时间未观察到G0/G1期阻滞.③0.01 μmol/L组,1 μmol/L组坏死细胞比例明显低于50 μmol/L组(P<0.01).结论 在0.1～10 μmol/L 的浓度范围内,紫杉醇可能通过诱导G2/M期阻滞使卵巢癌细胞发生凋亡,浓度为0.01 μmol/L时紫杉醇诱导凋亡与G0/G1期或G2/M期阻滞均无关,浓度为50 μmol/L时紫杉醇可能主要通过诱导细胞坏死发挥抗癌效应.     

虎杖白藜芦醇对人结肠癌HCT-15细胞增殖及凋亡的影响

目的观察虎杖白藜芦醇对人结肠癌HCT-15细胞增殖及凋亡的影响。方法以0、25、50、100、200μmol/L白藜芦醇作用人结肠癌HCT-15细胞24h以及50μmol/L白藜芦醇处理HCT-15细胞0、12、24、48、72h。采用噻唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对HCT-15细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期的分布以及细胞凋亡率,免疫印迹方法以及聚合酶链反应法观察主要的细胞周期蛋白以及基因的表达情况。结果虎杖白藜芦醇能显著抑制HCT-15细胞生长,并呈现时间-浓度依赖性。细胞形态学检测显示随着药物浓度升高,细胞明显皱缩。流式细胞检测显示,随着白藜芦醇浓度的增加以及作用时间的延长,G0/G1期细胞比例明显增加,其中0、50、100、200μmol/L白藜芦醇处理24h后分别为(42.81±1.21)%、(49.25±0.92)%、(54.67±1.03)%、(64.24±1.17)%,50μmol/L白藜芦醇作用0、24、48、72h后分别为(32.41±1.09)%,(48.35±1.03)%,(55.61±1.33)%,(70.24±1.43)%,各组数据差异均有统计学意义(P0.05)。0、50、100、200μmol/L白藜芦醇组S期细胞比例随着浓度增大而减小,分别为(34.89±0.66)%、(31.07±1.75)%,(28.66±1.71)%,(23.65±0.62)%,各组数据差异均有统计学意义(P0.05)。免疫印迹法检测显示,白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白cyclin D1表达,上调p21cip1蛋白以及细胞凋亡相关蛋白剪切行Caspase-3和PRAP表达。结论白藜芦醇能明显抑制HCT-15细胞增殖,并诱导其细胞凋亡,可引起HCT-15细胞的S期阻滞。     

薯蓣皂苷元对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨薯蓣皂苷元(diosgenin,DG)对H2O2诱导损伤的PC12细胞的保护作用。方法:用H2O2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤细胞模型,在电子显微镜下观察其细胞形态学特征,并通过MTT法检测不同浓度DG对正常PC12细胞和模型细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测DG对模型细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果:与正常组比较,不同浓度H2O2(100、200、400μmol/L)损伤组PC12细胞生存率均显著下降(P0.01),DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P0.01)。与模型组比较,DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P0.01);2.5μmol/L的DG可显著抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡(P0.01),在细胞周期上表现为G0~G1期细胞减少,同时S期增多。结论:DG能促进PC12细胞增殖,对H2O2氧化损伤的PC12细胞具有保护作用。     

白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 MTT法测定细胞增殖;流式细胞术和DAPI染色法检测细胞凋亡.结果 白藜芦醇浓度≥25μmol/L时,对增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.01).12.5、25.0、50.0、100.0和200.0μmol/L的白藜芦醇作用12h后,荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学改变,流式细胞术检测凋亡率分别为(10.86±0.29)%、(17.36±1.20)%、(28.80±1.34)%、(38.78±1.19)%及(58.96±1.26)%,与对照组凋亡率(3.53±0.25)%比较及组间比较差异有显著性(P<0.01),存在浓度依赖关系.100μmol/L白藜芦醇作用12、24及48h,凋亡率由(38.78±1.19)%增加至(70.32±0.99)%,组间比较差异有显著性(P<0.01),存在时间依赖关系.结论 白藜芦醇以时间和浓度依赖方式抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖;并能诱导其凋亡.白藜芦醇可能通过诱导凋亡作用抑制MDA-MB-231细胞的增殖.     

白藜芦醇对卵巢癌细胞株SKOV-3细胞周期的影响及诱导其凋亡的机制观察研讨

目的分析白藜芦醇对卵巢癌细胞株SKOV-3细胞周期的影响及诱导其凋亡的机制。方法设置不同浓度(20、40、80)μmol/L的白藜芦醇作为观察组以及细胞对照组。碘化丙啶单染流式检测细胞周期变化,应用Annexin/碘化丙啶双标记法流式细胞术检测,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能够将SKOV-3细胞周期阻滞在S期,并且其能够诱导SKOV-3细胞早期凋亡的增加;白藜芦醇能够增加人卵巢癌SKOV-3细胞中的Caspase-3的表达。结论白藜芦醇能够有效的阻断SKOV-3细胞周期,并且能够诱导其早期凋亡。