恶性疟原虫基因文库构建及特异DNA探针的应用研究

将恶性疟原虫Ｆｃｃ－１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ用ＨｉｎｄⅢＤＮＡ用ＨｉｎｄⅢ消化与ｐＢＲ３２２重组后导入大肠杆菌ＨＢ１０１,转化效率为１．５×１０＾６转化子／μｇ ＤＮＡ,建成基因库。用Ｐ．ｆ基因组ＤＮＡ原位杂交,证明了该库的有效性,又筛出特异克隆。克隆之一ｐＢＦ２ ＤＮＡ用＾３２Ｐ和光敏生物素标记作探针,可分别从间日疟原虫,恶疟原虫,伯氏疟原虫,食蟹猴疟原虫和人白细胞ＤＮＡ样本中特异地检出Ｐ,ｆ     

恶性疟原虫DNA探针检测血内恶性疟原虫的初步研究

从培养恶性疟原虫(Fcc-1)中分离纯化基因组DNA,用~(32)P标记,作为探针,按DNA斑点杂交法,检测血样。结果表明:该探针可检出9个恶性疟原虫感染红细胞/10_6红细胞;在现场应用时,与13例恶性疟阳性标本镜检符合率为92％:与1例间日疟原虫病例和正常人血、白细胞之间,未发现非特异性杂交。     

恶性疟原虫的甲氟喹抗性

作者综述了影响恶性疟原虫对甲氟喹产生抗性的因素、机制与地理学分布。     

聚合酶链反应用于鉴别恶性疟原虫不同分离株的研究

用恶性疟原虫主要裂殖子表面抗原基因序列（ＭＳＡ－１）为引物的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测恶性疟原虫感染。用此方法扩增实验室体外培养的ＦＣＣ１／ＨＮ株恶性疟原虫，显示１条３００ｂｐ的ＤＮＡ片断，而对实验室培养的巴布亚新内内亚ＦＣＱ－２７株则显示１条４４０ｂｐＤＮＡ条带。用此方法检测１５份采自云南缅边界的恶性疟血样均能扩增出ＤＮＡ条带，但不同血样的ＤＮＡ条带的分子量不同，部分血样还存在１条以上的ＤＮ     

恶性疟原虫海南株cDNA克隆FMPf01分析

目的 对我室构建恶性疟原虫海南株（ＦＣＣ／ＨＮ）红内期ｃＤＮＡ表达文库阳性克隆（ＦＭＰｆ０１）进行分析研究,确定其性质,方法 通过计算机软件和免疫印迹法分析ＦＭＰｆ０１的碱基构成,同源性及编码多肽的免疫反应性。结果 核苷酸序列分析显示其Ａ＋Ｔ构成比高于Ｇ＋Ｃ为３．１４：１,与基因资料库中疟原虫基因的同源性较低,其最高值为６３．８％,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实其编码多肽可被抗疟原虫免疫血清识别,     

结核分枝杆菌基因文库的构建

分枝杆菌基因及抗原的鉴定分析是评估它们在诊断，预防，耐药及致病性等方面的作用关键。为此作者以λｇｔｌｌ为载体构建了结核菌基因文库。结核菌Ｈ３７Ｒａ染色体ＤＮＡ经ＤＮａｓｅＩ部分消化后从凝胶中加收４－８ｋｂ片段，两端接以ＥｃｏＲＩ接头，并将其连接λｇｔｌｌ臂，用噬菌体包装蛋白“包装”，再进行连续稀释，然后将不同稀释度的噬萝体转染宿主菌Ｙ１０９０。     

几种不同方法制备恶性疟原虫基因组DNA的比较

目的　比较３ 种不同的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取方法制备恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ 的效果。方法　分别采用酚－ 氯仿－ 异戊醇抽提法、 Ｗｉｚａｒｄ 基因组 Ｄ Ｎ Ａ 纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液, 分离提取恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ, 通过 Ｄ Ｎ Ａ 含量测定和 Ｐ Ｃ Ｒ 鉴定, 比较它们的提取效果。结果　前两种方法制备恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ 的效果相仿, 纯度较高; 第三种方法最为简便, 所得的 Ｄ Ｎ Ａ 含量明显高于前两种方法, 但其纯度较低, 蛋白质含量最高。结论　３ 种方法各有优缺点, 第３ 种方法简便、快捷、经济, 更有实用价值。     

一九九一年全国疟疾形势

1991年6、7月间,我国有10多个省遭受不同程度的水灾,并在有些地区疟防经费缩减、基层卫生组织不健全、流动人口继续增多、抗疟药供应困难等不利于疟防工作的情况下,各省卫生行政部门和广大疟防专业人员以及基层卫生人员,在各级政府领导和支持下,克服各种困难,疟防工作仍取得较好成绩,大部分地区疟疾发病率下降,未发生大范围的暴发流行。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

PCR-ELISA检测疟原虫DNA的研究

目的：介绍一种诊断疟疾的新方法ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ。方法：根据业已报道的疟原虫ＳＳＵｒ－ＲＮＡ基因保守序列，设计并合成一对通用于恶性疟原虫和间日疟原虫的引物，其中一引物的５’端加以生物素标记。经ＰＣＲ扩增后，携带有生物素的扩增产物与先期包被于ＥＬＩＳＡ板上的亲和素结合，再经与恶性疟原虫、间日疟原虫特异、荧光素标记的寡核苷酸探针分别杂交，底物显色等步骤，使ＰＣＲ产物得以半定量地检出。结果：对于恶性疟原虫和间日疟原虫，本法检出最低原虫密度阈值分别为４和１０个原虫／μｌ血（取血２０μｌ），本法检测两种疟原虫未发现交叉反应。结论：本试验具有较高的敏感度和特异性，可望用于疟疾流行病学调查     

生物素探针在疟疾基因监测中的应用研究

本文报道了用光敏生物素标记恶性疟原虫特异克隆 p BF2 DNA片断作探针 ,以斑点杂交试验检测不同疟区疟疾病人血样和蚊体内的疟原虫。探针检测蚊媒时 ,在 2 0只蚊虫中有 1只感染蚊虫即可被检出 ,也可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测 ;探针检测血样亦取得良好结果 ,与镜检的符合率 ,恶性疟 96 .6 % ,正常人对照 99.7% ,检测的敏感度为 90个原虫 /μl血。表明该探针在疟防后期的监测中具有较好的实用性     

CHARACTERISATION OF THE HOST RESPONSE TO PLASMODIUM FALCIPARUM INFECTION. I. CEREBRAL MALARIA

Abstract Cerebral malaria is a major form of complicated malaria consequent upon cerebral damage associated with endothelial cell necrosis. We have used assays of Plasmodium falciparum growth inhibition in vitro to study serum inhibitory factors in patients with cerebral malaria. Serum from children with cerebral malaria inhibited parasite growth in a non-synchronised 72-hour assay to a greater extent than did sera from immune adults or asymptomatic children (p < 0.001). The high level of non-specific inhibition of parasite growth was particularly evident when sera were tested against three P. falciparum isolates, and contrasted with the inhibitory effect of sera from non-malaria febrile controls. In this study, serum from patients with cerebral malaria was more inhibitory than serum from the other groups (p < 0.001) and its between-isolate variation, when tested against a panel of P. falciparum isolates in growth assays, was significantly less than that of the other groups tested (p < 0.005). These results are consistent with the hypothesis of toxin-induced endothelial cell damage, with the sequence of pathogenic events involving host-derived serum factors capable of damaging P. falciparum.     

恶性疟原虫复合抗原DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫及体液免疫应答

目的　观察用恶性疟原虫复合抗原基因 HGFSP构建的 DNA疫苗 pc- HGFSP免疫小鼠诱导的细胞及体液免疫应答。　方法　用 pc- HGFSP肌注免疫 C5 7BL/6小鼠并加强免疫 2次 ,取小鼠脾淋巴细胞及血清测定 :脾淋巴细胞增殖活性 (MTT法 ) ;NK细胞活性和 CTL活性 (L DH法 ) ;脾脏 CD4 +及 CD8+ T细胞亚群 (免疫荧光法 ) ;血清 pc- HGFSP抗原特异性抗体 (EL ISA法 )及一氧化氮 (NO)含量。　　结果　与 pc DNA3对照比较 ,pc- HGFSP免疫小鼠脾淋巴细胞增殖活性增高 2 4 %～ 37% ;NK细胞活性增高 38%～ 90 % ;CTL 活性增高 6 5 %～ 15 3% ;CD8+ T细胞亚群增加。免疫血清产生HGFSP抗原特异性 Ig G抗体 ;NO含量也有所增高。　结论　恶性疟 DNA疫苗 pc- HGFSP有一定的诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答的作用。     

苯芴醇与青蒿琥酯伍用治疗抗药性恶性疟疗效观察

苯芴醇１６００ｍｇ与青蒿琥酯４００ｍｇ３ｄ分服治疗抗药性恶性疟５６例，退热时间３３．３±１４．５ｈ，原虫无性体转阴时间３４．１±９．７ｈ，２８ｄ根治率１００％，无明显不良反应，对配子体形成和原虫孢子增殖有一定抑制效果，疗程和剂量均低于单方组，疗效也较单方组为优，是治疗抗药性恶性疟的适宜方案。     

疟原虫DNA模板制备用于PCR诊断方法的研究

为确立一种快速、敏感、特异的疟原虫检测方法，根据红内期疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因序列，设计合成引物３条，采用微量全血和滤纸干血滴标本快速制备疟原虫ＤＮＡ模板的９种方法，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）并比较。结果显示有５种方法的实验效果最佳，其中，全血ＰＣＲ仪预热及滤纸干血滴Ｃｈｅｌｅｘ煮沸两法操作简单、所需试剂较少。采用该两法对深圳地区２０２份和湖北地区１６份镜检阳性的全血和深圳地区１２９份滤纸干血滴标本进行检测，结果与镜检的符合率分别为９８．５％和９９．２％。表明本研究筛选出的两种方法制备ＤＮＡ模板的ＰＣＲ检测体系，适用于临床快速准确诊断间日疟、恶性疟或两者混合感染，尤其适用于流行病学调查，值得推广。