一种IFN-γ ELISPOT检测方法的建立

目的:建立检测一种融合蛋白疫苗诱导特异性细胞免疫的ELISPOT实验方法,通过分析免疫小鼠分泌IFN-γ的水平,评价疫苗诱导的细胞免疫应答效应.方法:以融合蛋白疫苗免疫C57BL/6小鼠,14天后加强免疫一次,于第28天无菌取脾,分离脾淋巴细胞,计数并调整细胞浓度,在已包被好的ELISPOT板中分别加入细胞悬液和刺激肽进行刺激培养.裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,在ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析.结果:ELISPOT检测结果与动物免疫途径、细胞培养时间、细胞密度、肽浓度等条件密切相关.实验结果证明:采用皮下注射的免疫途径,免疫效果最佳;小鼠脾淋巴细胞浓度为4×105个/孔,加入1 μg/孔的刺激肽刺激培养24～48小时的条件下,产生的特异性斑点数最多,本底干扰小,有利于结果判断.结论:实验建立了IFN-γ ELISPOT检测方法,可用于该融合蛋白疫苗细胞免疫研究.     

结核抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测技术用于诊断HIV感染者人群中结核潜伏感染的研究

目的 探讨结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ酶联免疫斑点(ELISPOT)检测技术在HIV感染者中用于诊断结核潜伏感染的应用价值.方法 运用自行研发的结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测方法对110例确诊的HIV感染者及205例HIV阴性健康志愿者的外周血结核特异性IFN-γ释放水平进行检测,并同时进行结核菌素皮肤试验(研).结果 ELISPOT在HIV感染和HIV/AIDS正在接受抗病毒治疗人群中的阳性率分别为24.5%和29.8%,明显高于HIV阴性健康人群7.3%(P＜0.001);对多种不同部位多肽抗原刺激以P8.10的敏感性最高,但与其他抗原的差异无统计学意义(P＞0.05);不同CD4细胞计数水平对ELISPOT检测结果尤影响(P＞0.05);PPD试验在HIV感染人群中的阳性率远远低于ELISPOT检测方法,其差异有统计学意义(P＜0.0001).结论 结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测技术在艾滋病合并结核潜伏感染的早期诊断中有很大的应用价值,推荐用于艾滋病合并结核潜伏感染的辅助诊断.     

ELISPOT检测技术在儿童结核病诊断中的应用

为了评价ELISPOT试验在儿童结核病诊断中的应用价值,采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10(culture filtrate protein-10)为抗原的ELISPOT试验技术,检测了42例非结核性肺疾病患儿和27例活动性结核病患儿体内特异性T淋巴细胞分泌的γ-干扰素水平,评价其在儿童活动性结核病和潜伏结核感染中的敏感性和特异性,并将结果与结核菌素皮试结果(PPD)进行比较;同时分析了该试验的各影响因素.结果显示,ELISPOT试验的敏感性为88.9%,特异性(97.6%)高于PPD(81%,P﹤0.05);与PPD试验结果结合分析,其诊断阳性率为96.3%.此外,ELISPOT试验结果与性别、年龄、BCG接种史、结核病接触史、机体免疫状态、PPD直径和感染部位等影响因素之间的相关性进行了初步探讨.实验结果提示ELISPOT试验适宜作为儿童PPD试验初筛后结核病诊断的重要辅助工具.     

结核分枝杆菌多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值

目的探讨结核分枝杆菌（MTB）多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值。方法选取2005年4月至2006年4月在首都医科大学附属北京儿童医院诊断为结核病的住院患儿作为结核病组。选取同期住院，患感染性疾病，同时除外结核病的患儿作为非结核病组；选取体检纯化蛋白衍生物（PPD）试验阳性，既往无结核病史，无明显结核中毒症状，胸部影像学及腹部B超检查未见结核病灶的儿童作为结核感染组；选取同期行健康体检，卡疤试验阳性，无基础疾病，无结核接触史的儿童为健康对照组。各组留取血清标本。计算结核病组PPD试验阳性率及细菌学检查阳性率。应用MTB多抗原蛋白芯片同时检测标本中脂阿拉伯甘露糖（LAM）、相对分子质量16000和38000蛋白IgG抗体，通过蛋白芯片阅读仪判断结果，其中任意1种或1种以上抗体检测阳性，即判为蛋白芯片检测阳性。分别计算各组抗体检测阳性率，并计算该方法检测儿童结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标。应用Logistic回归及，检验分析蛋白芯片检测阳性率与患儿年龄、病程、抗结核治疗时间、激素使用以及结核病类型的关系。结果研究期间共纳入结核病组79例，非结核病组33例，结核感染组15例，健康对照组30例。蛋白芯片检测结核病组的阳性率为34．2％（27／79），低于PPD试验阳性率（84．8％，67／79），高于细菌学检查阳性率（12．7％，10／79）。在非结核病组阳性率为6．1％（2／33），结核感染组和健康对照组阳性率为0。蛋白芯片检测结核病组的灵敏度为34．2％，特异度为97．4％。阳性预测值93．1％，阴性预测值58．5％。Logistic回归发现蛋白芯片检测阳性率仅与病程相关，且随病程延长而阳性率升高。病程〈1个月，蛋白芯片检测阳性率为18．8％（6／32），病程在～3个月，蛋?     

结核分枝杆菌相关IFN-γ释放试验在结核病诊断及疗效监测中的应用

目的：目的：探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素释放试验（TB-IGRA）在结核病诊断及临床抗结核治疗效果评价中的应用价值。方法：对196例临床确诊结核患者进行相关病史收集,同时进行TB-IGRA、结核菌素皮肤试验、结核杆菌培养、涂片镜检、结核抗体检测,结核患者的治疗过程中按用药疗程（初治患者第2、5、6个月,复治患者第2、5、8个月）对其进行随访,在治疗结束后6个月和1年后各随访一次,比较TB-IGRA与结核菌素皮肤试验在治疗过程中的变化。结果：确诊结核病例196例,其中肺结核158例,肺外结核38例,TB-IGRA在结核诊断中灵敏度为82．1％,特异性为91．7％,阳性预测值为93．1％,阴性预测值为79．3％,与传统实验室检查方法相比有显著性差异（P〈0．01）。在结核患者的抗结核治疗过程中,TB-IGRA阳性率及浓度水平治疗前与治疗后2、6月以及复治后2、5、8月比较显著下降（P〈0．01）,TB—IGRA水平与结核分枝杆菌数量存在较好相关性,与传统的TST方法评估疗效相比有显著性差异（P〈0．01）。结论：TB-IGRA在结核诊断中敏感性和阳性预测值较高,可作为较好的结核诊断的依据,同时TB-IGRA对肺外结核的灵敏度较高,为肺外结核患者的诊断提供了较为可靠的依据,通过治疗过程TB—IGRA检测分析,外周血TB-IGRA的变化随着抗结核治疗的进程下降的趋势明显,与结核涂片镜检结果符合率较高,是临床疗效评估较为理想的指标。     

检测NDV诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法建立

目的：建立检测新城疫病毒（NDV）诱导特异性细胞免疫的ELISPOT试验方法,实时分析NDV免疫鼠的IFN-γ水平。方法：用NDV单克隆抗体包被96孔混纤板,在反应孔中加入小鼠脾淋巴细胞和NDV刺激抗原,37℃,5%CO2培养7小时。裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,倒置显微镜下计数ELISPOT斑点。结果：ELISPOT试验的特异性与培养时间和刺激抗原浓度密切相关。在106/孔的脾淋巴细胞浓度下,培养时间越长、刺激抗原越多,试验的特异性越低;当培养时间为7小时,抗原量为5μg/孔时,试验的特异性最强。ELISPOT斑点数,随细胞浓度的增加而增加,当小鼠的脾淋巴细胞浓度为106/孔时,最有利于斑点的计数,试验误差最小。结论：试验成功建立了检测NDV细胞免疫的ELISPOT方法,可用于NDV细胞免疫的研究。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素在结核病免疫应答中的研究

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素(HBHA)的免疫应答作用及其在结核病诊断中的应用价值.方法 选取PPD(-)健康对照、PPD(+)潜伏感染者、肺结核患者,分离外周血单个核细胞,用大然HBHA刺激,培养4 d后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的IFN-γ.同时用ELISA方法检测各组血清中的HBHA特异的ISG型抗体.结果 HBHA刺激后3组产生的lFN-γ中位数分别为49.5 PS/ml、781.9 pg/ml、341.8 pg/ml,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于健康对照,略高于肺结核患者.三组血清抗HBHA的IgG抗体浓度吸光度(A)的均值分别为0.212±0.066、0.224±0.076和0.285±0.078.肺结核患者的HBHA特异的IgG抗体远高于健康对照及潜伏感染者.结论 HBHA有较好的免疫原性,可以刺激潜伏感染者产生高水平的IFN-γ,HBHA特异的IFN-γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者.HBHA的抗体水平在结核病的诊断中有一定的辅助应用价值.     

ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c辅助诊断结核病的初探

用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)评估新型复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c在活动性肺结核病诊断中的临床价值。选取初治肺结核患者血常规标本50例和健康体检者血常规标本40例,分别作为结核组和健康对照组,分离PBMC,应用新型复合ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c与ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为抗原对受试者标本进行ELISPOT实验,检测两者斑点形成的细胞数量并进行比较。结果显示,复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c与ESAT-6/CFP-10融合蛋白检测结核分枝杆菌感染的阳性率依次为86%(43/50)、82%(41/50),特异度依次为82.5%(33/40)、85%(34/40)。研究表明,应用新型复合蛋白ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c作为抗原建立的ELISPOT法辅助诊断结核病具有较高的潜在应用价值。     

IFN-γ和TNF-α协同对MIN6细胞凋亡的影响

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α协同对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察比较了IFN-γ、TNF-α单独及其组合对MIN6细胞活性的影响,并进一步通过光学显微镜和激光共聚焦显微镜从形态学上对其毒性作用进行了验证,最后通过流式细胞术区分了其对MIN6细胞的凋亡和坏死的作用。结果 IFN-γ和TNF-α单独作用对MIN6细胞活性有轻微影响,但两者组合对MIN6细胞的活性具有显著的抑制作用,并且早期凋亡的细胞百分率明显高于IFN-γ单独处理组(69.91%&13.03%),而坏死或晚期凋亡细胞的百分率两组之间没有差异(2.14%&2.41%)。结论IFN-γ和TNF-α协同可促进MIN6细胞的凋亡。     

碘化钠对人甲状腺细胞IL-6、IFN-γ和TNF-Q基因表达的影响

本研究以l0-4M碘化钠(NaI)刺激单层培养的人Graves病(GD)甲状腺滤泡上皮细胞(TEC),采用定性及半定量PCR技术检测刺激前后白介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)在细胞中的表达水平。结果表明：(1)3例GD组织均含有IL-6及IFN-γ mRNA,2例检测到TNF-a基因表达;(2)基础状态下,3例TEC均表达IL-6基因,2例表达TNF-a,而所有样本均无IFN-γ mRNA;(3)Nal不能诱导TEC产生IFN-γ mRNA,对IL-6 mRNA的表达亦无明显影响;(4)1例TNF-a阴性的TEC样本,经NaI刺激后,可表达mRNA,2例原含有TNF-a的TEC经刺激后,其mRNA的表达水平显著增加。提示碘可通过诱导或增强TEC表达TNF-a,导致自身免疫性甲状腺疾病的发生与发展。     

碘化钠对人甲状腺细胞IL-6、IFN-γ和TNF-α基因表达的影响

本研究以 10 4 M碘化钠 (NaI)刺激单层培养的人Graves病 (GD )甲状腺滤泡上皮细胞 (TEC ) ,采用定性及半定量PCR技术检测刺激前后白介素 6 (IL 6 )、γ 干扰素 (IFN γ )和肿瘤坏死因子 α(TNF α )在细胞中的表达水平。结果表明 :(1) 3例GD组织均含有IL 6及IFN γmRNA ,2例检测到TNF α基因表达 ;(2 )基础状态下 ,3例TEC均表达IL 6基因 ,2例表达TNF α ,而所有样本均无IFN γmRNA ;(3)NaI不能诱导TEC产生IFN γmRNA ,对IL 6mRNA的表达亦无明显影响 ;(4 ) 1例TNF α阴性的TEC样本 ,经NaI刺激后 ,可表达mRNA ,2例原含有TNF α的TEC经刺激后 ,其mRNA的表达水平显著增加。提示碘可通过诱导或增强TEC表达TNF α ,导致自身免疫性甲状腺疾病的发生与发展。     

Graves′病患者IL-6、TNF-α、IFN-γ水平治疗前后的变化及其临床意义

对Graves′病患者, 用放射免疫分析法(RIA)测定了IL-6和TNF-α, 用双抗体夹心ELISA法测定了IFN-γ.Graves′病患者的IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均高于对照者.治疗后, IL-6水平降至正常, 而TNF-α、IFN-γ水平仍高于对照者.提示: IL-6水平与病情变化相平行, 而TNF-α、IFN-γ水平仍较高.     

抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答

目的 评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法 分别用AE、 AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、 IL-2、 IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果 AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-...     

检测结核分枝杆菌蛋白抗原b夹心ELISA的建立及其应用

目的 建立定量检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原b的夹心ELISA,以便用于诊断结核性脑膜炎.方法 制备抗结核分枝杆菌蛋白抗原b鼠源性单克隆抗体(mAb)及兔多克隆抗体;以单克隆抗体为包被抗体,多克隆抗体为检测抗体,建立检测结核分枝杆菌蛋白抗原b的双抗体夹心ELISA;应用此方法检测正常人(n=6)、非结核性脑膜炎患者(n=26)及临床确诊结核性脑膜炎患者(n=42)的脑脊液标本中蛋白抗原b的含量,并分析其与结核性脑膜炎活动性感染的相关性.结果 成功建立了检测蛋白抗原b的夹心ELISA,敏感度可达0.4 μg/L.应用该方法在正常人及非结核性脑膜炎患者脑脊液中未检测到蛋白抗原b;在结核性脑膜炎患者脑脊液中蛋白抗原b含量显著升高.结论 建立了敏感、特异检测结核分枝杆菌蛋白抗原b含量的ELISA,为活动性结核性脑膜炎的诊断提供一种有效手段.     

脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6的检测及其早期诊断价值

目的探讨免疫荧光染色法检测脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)对结核性脑膜炎诊断的价值。方法收集36例确诊结核性脑膜炎患者的脑脊液为病例组,45例非结核性脑膜炎患者脑脊液为对照组。用双盲法对2组脑脊液细胞进行ESAT-6免疫荧光染色,统计分析灵敏度和特异度等。结果病例组ESAT-6存在于中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞中,对照组脑脊液细胞中无ESAT-6表达。灵敏度为88.89%、特异度为93.33%;阳性预测值为91.43%、阴性预测值为91.30%;阳性似然比为13.33、阴性似然比为0.12;Youden指数为82.22%,ROC曲线下面积为0.94。结论免疫荧光染色检测脑脊液细胞中ESAT-6的灵敏度及特异度均较高,是结核性脑膜炎诊断的有效方法。     

Xpert结核分枝杆菌/利福平试验对结核病及耐多药结核病诊断价值的Meta分析

目的 评估Xpert结核分枝杆菌/利福平（MTB/RIF）试验对结核病的诊断价值.方法 检索PubMed、Medline、中国知网、万方数据库等,收集Xpert MTB/RIF试验对结核病诊断价值的文献,检索起止时间均为建库至2012年6月.2名研究者独立进行资料提取和文献质量评估.采用Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析.结果 共纳入26篇文献,其中2篇文献涉及儿童病例,包含了13 270例来自临床患者的检测标本.Meta分析结果显示,Xpert MTB/RIF试验诊断结核病的汇总敏感度为87%（95%CI：86%～88%）、特异度为97%（95%CI：97%～97%）.按照结核病的类型和患者年龄进行亚组分析,Xpert MTB/RIF试验诊断肺结核的敏感度高于肺外结核病,90%（95%CI：89%～91%） vs 76%（95%CI：72%～79%）;诊断涂阴菌阳性和涂阳菌阳性结核病的敏感度分别为74%（95%CI：71%～76%）和99%（95%CI：98%～99%）;对儿童肺结核的诊断敏感度比成人肺结核低,74%（95%CI：65%～83%） vs 90%（95%CI：89%～92%）.Xpert MTB/RIF试验诊断耐多药结核病的敏感度为96%（95%CI：94%～97%）,特异度为98%（95%CI：98%～99%）.结论 Xpert MTB/RIF试验诊断结核病的价值较高,尤其是成人结核病及耐多药结核病.Xpert MTB/RIF试验在儿童结核病中的诊断价值由于纳入文献较少,尚待进一步研究.     

抗原诱发的γ干扰素测定在结核诊断中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌特异性抗原早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)体外诱发的γ干扰素反应在结核感染和结核病诊断中的价值.方法 外周全血中加入ESAT-6抗原,诱导产生γ干扰素,以酶联免疫吸附法测定γ干扰素浓度,以增加的百分率为ESAT-6抗原诱发的γ干扰素反应值.进行下列研究:对比结核密切接触者(60例)、痰培养证实的结核患者(46例)以及健康人(55例);追踪调查儿童(68例)、青少年(52例)、老年(45例);治疗过程中动态观察20例结核患者;比较HIV(+)TB(+)者(78例)和HIV(+)TB(-)者(60例).结果 结核密切接触者与痰培养证实的结核患者ESAT-6反应具有很高的敏感性;儿童与青少年ESAT-6反应与临床诊断和预后具有很高的一致性;65%的结核患者在治疗过程中ESAT-6反应呈下降趋势;ESAT-6反应在HIV(+)TB(+)的诊断中敏感度为87.2%.结论 体外ESAT-6诱发的γ干扰素测定对活动性结核病尤其是儿童和青少年结核病的诊断有一定意义,也可用于鉴别HIV阳性者合并结核.     

抗原诱发的γ干扰素测定在结核诊断中的应用

Objective To evaluate the value of early secreted antigen terget 6000(ESAT-6)-induced interferon-gamma(IFN-γ)response in vitro in diagnosis of tuberculosis and mycobacterium tuberculosis infections.Methods ESAT-6 was added into peripheral whole blood to induce IFN-γ,and concentration of IFN-γ was detected by ELISA.Comparing with saline control,the percentage of increase was regarded as the value of ESAT-6 induced IFN-γ response.ESAT-6-induced IFN-γ response was analysed in the following four aspects:to compare with the people intimate contact to tuberculosis(60 cases),the sputum culture confirmed active tuberculosis patients(46 eases)and healthy people(55 cases);to compare with children(68 cases),adolescents(52 cases)and elder people(45 cases)by follow up;dynamically observe 20 tuberculosis patients during long-time treatment;to compare HIV(+)and TB(+)people(78 cases)with HIV(+)and TB(-)people(60 cases).Results Between people intimate contacts to tuberculosis and active tuberculosis patients,ESAT-6 response has high sensitivity;ESAT-6 response in children and adolescents was completely consistent with the following clinical diagnosis and prognosis;ESAT-6 response decreased during treatment duration in 65%tuberculosis patients;in HIV(+)and TB(+)cases,the sensitivity of tuberculosis diagnosis by ESAT-6 response was 87.2%.Conclusion In vitro IFN-γ response induced by ESAT-6 is helpful in diagnosis of tuberculosis,especially for children and adolescents.And it is also available for differential diagnosis of HIV(+)patients with tuberculosis.     

重组CFP-10/ESAT-6抗原ELISA法对活动性肺结核诊断的评估

目的 以rCFP-10/ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素(PHA)、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞,测定同一标本IFN-γ释放水平,探讨其对结核感染与发病的诊断意义.方法 病例组111例为临床确诊肺结核患者,对照组292例为经胸部透视和结核菌素试验(FeD)筛选的大学生.入选对象取血3.0 ml,均分为3份,每管1.0 ml,分别加入rCFP-10/ESAT-6融合蛋白、PHA和生理盐水,孵育后ELISA法测定IFN-γ的吸光度(A)值及其抗体.结果 rCFP-10/ESAT-6融合蛋白处理:IFN-γ测定值病例组x=1.3885±0.6236,对照组x=0.2944±0.0917,组间t'=16.4259,P90%,且无论特异性或非特异性处理,活动性肺结核患者IFN-γ释放水平均明显升高,血清抗体阳性率也高于对照组.     

抗原诱发的γ干扰素测定在结核诊断中的应用

Objective To evaluate the value of early secreted antigen terget 6000(ESAT-6)-induced interferon-gamma(IFN-γ)response in vitro in diagnosis of tuberculosis and mycobacterium tuberculosis infections.Methods ESAT-6 was added into peripheral whole blood to induce IFN-γ,and concentration of IFN-γ was detected by ELISA.Comparing with saline control,the percentage of increase was regarded as the value of ESAT-6 induced IFN-γ response.ESAT-6-induced IFN-γ response was analysed in the following four aspects:to compare with the people intimate contact to tuberculosis(60 cases),the sputum culture confirmed active tuberculosis patients(46 eases)and healthy people(55 cases);to compare with children(68 cases),adolescents(52 cases)and elder people(45 cases)by follow up;dynamically observe 20 tuberculosis patients during long-time treatment;to compare HIV(+)and TB(+)people(78 cases)with HIV(+)and TB(-)people(60 cases).Results Between people intimate contacts to tuberculosis and active tuberculosis patients,ESAT-6 response has high sensitivity;ESAT-6 response in children and adolescents was completely consistent with the following clinical diagnosis and prognosis;ESAT-6 response decreased during treatment duration in 65%tuberculosis patients;in HIV(+)and TB(+)cases,the sensitivity of tuberculosis diagnosis by ESAT-6 response was 87.2%.Conclusion In vitro IFN-γ response induced by ESAT-6 is helpful in diagnosis of tuberculosis,especially for children and adolescents.And it is also available for differential diagnosis of HIV(+)patients with tuberculosis.