MML-1细胞G_1期阻断对Fas诱导细胞凋亡的抑制作用

目的分析Fas诱导的B淋巴瘤细胞株MML-1凋亡过程中,PMA阻断MML-1进入细胞周期后细胞凋亡敏感性降低的原因。方法采用10 nmol/L PMA预处理MML-1细胞24 h,用流式细胞仪检测PMA阻断细胞周期前后50 ng/mL抗Fas抗体诱导的MML-1细胞凋亡率的变化。采用PI-Triton X和active caspase-3/8双染色、Western blotting技术分析PMA处理前后,经抗Fas抗体诱导的MML-1细胞内活化caspase-3/8的表达。通过Western blotting技术检测G1期细胞的凋亡相关蛋白caspase-3/8、Bcl-2、FLIP和Akt的表达。结果 PMA预处理MML-1细胞24 h后,G1期细胞比例显著升高,达93.77%。PMA预处理前,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为56%;经PMA预处理,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为14%。流式细胞术和Western blotting检测发现经PMA预处理,抗Fas抗体诱导后活化caspase-3和caspase-8蛋白的表达受到显著抑制。Westernblotting检测显示...     

冬凌草甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡及对G2/M细胞周期的阻滞作用

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌PANC-1细胞生长抑制以及促进凋亡的机制.方法 采用MTT还原法检测冬凌草甲素对PANC-1细胞生长的抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和Hoechst 33342染色法观察细胞形态学的变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期分布;膜联蛋白V(Annexin V)/pI双标流式细胞术测定凋亡细胞比...     

康莱特诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨康莱特(KLT)对人胰腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用MTT法观察KLT对人胰腺癌细胞株8988细胞增殖的抑制作用。采用TUNEL染色、DNA梯度电泳法和流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR和Western blot检测凋亡调节基因p53和bcl-2的表达。结果 KLT能明显抑制人胰腺癌8988细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性。KLT作用后8988细胞呈现凋亡特征,TUNEL染色可见发黄绿色荧光的凋亡细胞,DNA电泳可见典型梯形条带,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高。RT-PCR和Western blot检测可见p53基因表达显著增加,而bcl-2基因表达减少。结论 KLT能诱导人胰腺癌细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因p53的上调和bcl-2的下调有关。     

MML-1细胞G《,1》期阻断对Fas诱导细胞凋亡的抑制作用

目的 分析Fas诱导的B淋巴瘤细胞株MML-1凋亡过程中,PMA阻断MML-1进入细胞周期后细胞凋亡敏感性降低的原因.方法 采用10 nmol/L PMA预处理MML-1细胞24 h,用流式细胞仪检测PMA阻断细胞周期前后50 ng/mL抗Fas抗体诱导的MML-1细胞凋亡率的变化.采用PI-Triton X和active caspase-3/8双染色、Western blotting技术分析PMA处理前后,经抗Fas抗体诱导的MML-1细胞内活化caspase-3/8的表达.通过Western blotting技术检测G1期细胞的凋亡相关蛋白caspase-3/8、Bcl-2、FLIP和Akt的表达.结果 PMA预处理MML-1细胞24 h后,G1期细胞比例显著升高,达93.77%.PMA预处理前,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为56%;经PMA预处理,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为14%.流式细胞术和Western blotting检测发现经PMA预处理,抗Fas抗体诱导后活化caspase-3和caspase-8蛋白的表达受到显著抑制.Westernblotting检测显示G1期细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达上调.结论 将MML-1细胞阻断在G1期能够抑制Fas诱导的细胞凋亡,可能与凋亡抑制分子Bcl-2在G1期的表达上调有关.     

γ射线诱导HL—60细胞凋亡与G2期阻滞的研究

用形态学，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察了γ射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡和细胞周期改变的关系。结果：γ射线照后６ｈ，细胞开始出现Ｇ２期阻滞，１２ｈ阻滞达高峰，细胞凋亡比例随作用时间和照射剂量的增加而增加，凋亡特有的梯状图谱分别在１，５，１０，Ｇｙ照后７２，２４，１２ｈ出现。     

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

γ射线诱导HL-60细胞凋亡与G_2期阻滞的研究

用形态学、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察了γ射线诱导ＨＬ６０细胞凋亡和细胞周期改变的关系。结果：γ射线照后６ｈ，细胞开始出现Ｇ２期阻滞，１２ｈ阻滞达高峰；细胞凋亡比例随作用时间和照射剂量的增加而增加，凋亡特有的梯状图谱分别在１、５、１０Ｇｙ照后７２、２４、１２ｈ出现。提示：辐射诱导的细胞凋亡与从辐射引起的Ｇ２期阻滞的退出有关     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导胰腺癌细胞凋亡通路的实验研究

目的:探讨白藜芦醇对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用及其凋亡通路.方法:运用细胞培养、Western blot分析、MTT方法和流式细胞仪,对一系列胰腺癌细胞株进行白藜芦醇敏感性筛选,同时对其毒性进行评估.结果:白藜芦醇并不能有效地诱导人胰腺癌细胞capan-1、Bxpc-3、Miapaca-2细胞凋亡,但能够有效地诱导colo357及capan-2细胞的凋亡,其机制是通过诱导caspase-3的激活而促进capan-2和colo357凋亡.白藜芦醇对colo357及capan-2细胞株的增殖有抑制效应.白藜芦醇对正常胰腺导管上皮细胞HPDE无明显毒性作用.结论:白藜芦醇通过诱导细胞周期抑制性的蛋白上调和细胞周期的阻滞而在细胞水平上有效地诱导特定胰腺癌肿瘤细胞的凋亡.     

多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP凋亡的研究

目的探讨凋亡在多西紫杉醇对人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP作用中的地位及其机制。方法应用透射电镜、流式细胞术、Annexin V／PI和免疫细胞化学等方法，观察多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞形态学、细胞周期、凋亡以及Fas等蛋白表达的影响。结果多西紫杉醇作用后，A549及A549／CDDP细胞内空泡明显增多，可见少数凋亡小体和脱落的不舍细胞器成分的细胞质，后者还出现大量多微核化细胞。多西紫杉醇具有显著的G2期阻滞作用。可同时诱导细胞凋亡、坏死和胞质自切。并以后两者为主。Fas蛋白在多西紫杉醇作用后表达明显增强。结论多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞均具有显著的G2／M期阻滞作用，能同时诱导其凋亡、坏死和胞质自切。以后两者为主。Fas基因可能在多西紫杉醇抗肿瘤作用中具有重要作用。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究FasL在此过程中的作用．方法：流感病毒以20m．o．i．感染Hela、Raji、SMMC-7721和SPC-A-1等肿瘤细胞,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带,PI染色流式细胞仪检测细胞DNA含量,Annexin-V FITC／PI流式细胞仪进行凋亡定量分析,并用生物素-亲和素ELISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中sFasL浓度的变化。结果：经流感病毒诱导后,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变,细胞DNA电泳出现梯状条带,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高,且显示一定的时间效应;在上述过程中,细胞培养上清中sFasL浓度有明显增高。结论：流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡,其发生机制可能与FasL表达增加有关。     

氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

【目的】 探讨氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞的凋亡作用及其相关作用机制。 【方法】 MTT实验检测氧化苏木素对MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF 10A的细胞毒作用;Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;荧光染料DiOC6染色,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化;Western blot实验检测细胞浆细胞色素C及细胞内caspase-9和survivin蛋白的变化。 【结果】 氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞具有高效的细胞毒作用,而对正常乳腺上皮MCF 10A细胞毒性较弱,IC50值分别为(7.15 ± 0.43)μmol/L 和(33.56 ± 2.87) μmol/L;0、7.5、15、30 μmol/L的氧化苏木素处理MCF-7细胞48 h后,细胞的凋亡率从(3.37 ± 0.66)%依次升高到(16.8 ± 1.27)%、(31.31 ± 4.22)%、(51.23 ± 5.55)%;DiOC6染色流式细胞仪检测结果显示氧化苏木素可以剂量依赖性地降低线粒体膜电位;Western blot结果显示氧化苏木素诱发了线粒体内细胞色素C的释放和细胞内caspase-9蛋白的剪切激活,同时氧化苏木素也可剂量依赖性地降低survivin蛋白的表达。 【结论】 氧化苏木素可通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡,下调survivin蛋白可能是其诱导细胞凋亡的主要机制。     

外源性p16基因对人原发性肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨导入外源性p16cDNA真核表达载体对人原发性肝癌细胞系SMMC- 772 1生物学行为的影响及其分子机制。方法:构建外源性p16基因真核表达载体并转染SMMC- 772 1细胞,经G4 18抗性筛选和扩增,得到稳定的表达株,并经RT -PCR及免疫细胞化学鉴定。通过生长曲线,流式细胞术,免疫细胞化学及Western -Blot等实验方法,对转基因后肿瘤细胞生物学行为及细胞周期调控因子CDK4 ,CyclinD1及pRb进行观察。结果:转染外源性p16基因的SMMC- 772 1细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,G1期细胞明显多于转基因前(P <0 .0 5 ) ;免疫细胞化学显示外源性p16表达可下调CDK4及cylinD1的表达(P <0 .0 5 ) ,Western -Blot提示转染外源性p16基因后细胞中磷酸化pRb表达明显降低。结论:外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC -772 1中可稳定表达并使细胞停滞在G1期,抑制细胞生长,其机制可能为下调CDK4、cyclinD1的表达和抑制pRb磷酸化有关。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人肝癌细胞生长抑制和凋亡

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肝癌(SMMC-7721)细胞生长和凋亡的影响.方法:平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色荧光显微镜观察凋细胞亡形态,计数细胞凋亡;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡率.结果:平皿克隆形成法显示:ADFMChR抑制人肝癌(SMMC-7721)细胞生长,且呈浓度依赖性.AO/EB染色荧光显微镜观察发现随着ADFMChR浓度的增加SMMC-7721细胞凋亡率依次增加.PI染色FCM结果表明ADFMChR以浓度依赖方式诱导SMMC-7721细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期.结论:ADFMChR具有诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关.     

Ilexgenin A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及机制研究

目的：探讨Ilexgenin A诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其相关机制.方法：采用4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）进行核染色观察细胞凋亡形态学变化,Apo-ONE Homogeneous均质蛋白酶-3/7检测试剂盒用于测量Caspase-3/7活性,通过测定宫颈癌细胞核提取物NF-κB p65 与DNA结合活性来衡量NF-κB的激活水平.结果：DAPI荧光染色发现,IA作用24h后,细胞核浓缩染色质凝聚,凋亡小体出现;IA以剂量依赖的方式显著增加了Caspase-3/7的活性;IA对NF-κB的p65亚基的活化有显著的抑制作用,并且呈一定程度的剂量依赖性.结论：IA可明显诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并呈浓度依赖性.     

Bax对人卵巢癌细胞的凋亡诱导作用及其机制研究

目的 观察Bax对人卵巢癌A2780细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法 构建重组质粒pcDNA-Bax,将重组质粒pcDNA-Bax转染A2780细胞,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡、MTT法检测细胞活力,采用Western blot法检测Bax基因的过表达、线粒体细胞色素C的释放及Caspase-9和Caspase-3的激活。 结果 经酶切和测序鉴定,重组质粒pcDNA-Bax构建成功。转染质粒pcDNA-Bax能明显诱导A2780细胞凋亡,Hoechst染色显示凋亡的细胞出现细胞核形态学改变;MTT结果显示转染质粒pcDNA3.1-Bax后,细胞活力明显下降;Western blot结果表明转染质粒pcDNA-Bax后的A2780细胞线粒体释放细胞色素C,激活了Caspase-9和Caspase-3。 结论 Bax能促进卵巢癌细胞线粒体细胞色素C释放,从而诱导细胞凋亡。     

丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度丁酸钠对BxPC-3细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞仪检测丁酸钠作用于BxPC-3细胞后的凋亡情况;TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR技术分析人端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA的表达水平。结果:丁酸钠作用BxPC-3细胞能明显抑制细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性。丁酸钠处理72 h的BxPC-3细胞凋亡率明显提高(P<0.01),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05)。经丁酸钠处理的实验组端粒酶活性为0.96±0.12,未经丁酸钠处理的对照组端粒酶活性为4.18±0.34,二者之间差异有显著性(P<0.05)。丁酸钠处理的实验组hTERT mRNA水平为0.168±0.045,与对照组0.685±0.141比较差异有统计学意义(P<0.01),bcl-2实验组水平为0.138±0.034,与对照组0.715±0.026比较有统计学差异。结论:丁酸钠具有强烈诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用,其发生机制与丁酸钠下调hTERT Bcl-2 mRNA表达水平直接相关。     

Ethanol Extract of Ilex Hainanensis Merr. Exhibits Anti-Melanoma Activity by Induction of G1/S Cell-Cycle Arrest and Apoptosis

Objective: To evaluate anti-melanoma effect of ethanol extract of Ilex hainanensis Merr. (IME) and elucidate its underlying mechanism. Methods: Thirty-six tumor-bearing mice were randomized into 6 groups (n=6) as follows: model group, IME 25, 50, 100, and 200 mg/kg groups and dacarbazine (DTIC) 70 mg/kg group. The mice in the IME treatment groups were intragastrically administered with IME 25, 50, 100 or 200 mg/kg per day, respectively. The mice in the DTIC group were intraperitoneally injected with DTIC 70 mg/kg every 2 days. The drug administration was lasting for 14 days. The cell viability was evaluated by 3-(4,5-dime-thylthylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. Flow cytometry was employed to detect cell cycle and apoptosis. The gene and protein expressions of nuclear factor κB-p65 (NF-κB-p65), Bcl-2, B-cell lymphoma-extra large (Bcl-xL) and Bax were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blot analyses. Caspases-3, -8, and -9 activities were detected using the colorimetric method. In addition, a B16-F10 melanoma xenograft mouse model was used to evaluate the anti-cancer activity of IME in vivo. Furthermore, a survival experiment of tumor-bearing mice was also performed to evaluate the possible toxicity of IME. Results: IME significantly inhibited the proliferation of B16-F10 cells (P<0.01). Flow cytometric analysis showed that IME induced G1/S cell cycle arrest and apoptosis (both P<0.01). IME inhibited activation of NF-κB, decreased the gene and protein expressions of Bcl-2, Bcl-xL, and increased the gene and protein expressions of Bax (all P<0.01). In addition, IME induced the activation of Caspases-3, -8, and -9 in B16-F10 cells. The study in vivo showed that IME significantly reduced tumor volume (P<0.01), and the inhibitory rate came up to 68.62%. IME also induced large areas of necrosis and intra-tumoral apoptosis that correlated with a reduction in tumor volume. Survival experiment showed that treatment with IME for 14 days significantly prolonged survival time and 20% of mice in the IME 200 mg/kg group were still alive until the 50th day. Notably, IME showed no apparent side-effects during the treatment period. Conclusion: IME exhibited significant anti-melanoma activity in vitro and in vivo, suggesting that IME might be a promising effective candidate with lower toxic for malignant melanoma therapy.     

高强度聚焦超声对人乳腺癌细胞的生长抑制作用及机理研究

目的　研究高强度聚焦超声 (HIFU)对人肿瘤细胞的杀伤作用 ,并探索其作用机理。方法　用不同强度HIFU处理人乳腺癌细胞 MCF- 7,用台盼蓝排斥法染色、细胞增殖试验 (MTT法 )、克隆形成实验研究 HIFU对癌细胞的杀伤和生长抑制作用 ;用流式细胞术检测 HIFU对癌细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响。结果　用 HIFU处理后 ,癌细胞死亡率升高 ,增殖活性降低 (P<0 .0 5 ) ,克隆形成下降 (P<0 .0 0 1) ,G0 /G1 期细胞数增加 (P<0 .0 5 ) ,S期细胞数减少 (P<0 .0 1) ,凋亡指数升高 (P<0 .0 1) ,热休克蛋白表达升高 (P<0 .0 5 ) ,P5 3、BCL- 2、FAS表达阳性细胞数与对照组比 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论　 HIFU对人乳腺癌细胞有明显的杀伤及抑制生长和克隆形成作用 ,其机理与抑制 DNA合成有关 ;HIFU具有诱导癌细胞凋亡作用 ,可能与 P5 3、BCL- 2、FAS的介导和调控无关。     

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂诱导的A549细胞生物学行为的影响

目的观察顺铂作用下A549细胞的细胞周期变化规律和Chk1、Chk2（Chk1／2）反义寡核苷酸（As0DN）对顺铂（DDP）诱导的A549细胞生物学行为的影响。方法流式细胞术SubG,法检测DDP作用下A549细胞周期和凋亡的动力学变化;蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测转染Chk1／2AsODN后Chk1／2蛋白的表达;流式细胞仪Annexin V-FITC法和SubG,法检测转染Chk1／2AsODN后DDP作用下的细胞周期和凋亡变化。结果10μmol／LDDP作用12h后A549细胞出现明显的S期阻滞,Chk1／2AsODN对A549细胞中Chk1／2蛋白表达有明显抑制作用,转染Chk1／2AsODN可显著增加DDP诱导下A549细胞的凋亡率约200％～300％,而联合转染Chk1／2AsODN与单转染相比,凋亡无明显增加（P〉0．05）。转染Chk1／2AsODN引起化疗增敏的机制是通过解除s期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的。结论Chk1／2可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点,灭活Chk1／2基因可以显著增强肿瘤细胞化疗的敏感性。